诱导多能干细胞
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IPS细胞,即诱导性多能干细胞,是一种由普通体细胞转化而来的多功能干细胞。
IPS细胞的制备方法主要有以下几种:
1.传统方法:基因转导:利用基因转导技术,将特定的转录因子(如Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc)
导入到成体细胞中,使其重新获得多能干细胞的特性。
这些转录因子能够重新激活胚胎发育过程中的基因网络,使成体细胞回退到多能状态。
然而,这种方法存在基因插入位点的不确定性、细胞易受损等问题,限制了其应用。
2.新兴方法:化学物质诱导:通过添加一系列特定的化学物质(如小分子化合物、生长因子和细胞
外基质等)来诱导成体细胞向多能干细胞转化。
这种方法更加安全、高效,并且不会引入外源基因。
3.瞬时表达重编程因子法:使用腺病毒载体或质粒载体瞬时表达Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4
这四个基因进行细胞重编程。
这种方法避免了逆转录病毒整合入细胞基因组可能导致的肿瘤发生或iPS细
胞嵌合小鼠围产期死亡的问题。
诱导多功能干细胞的构建与应用
多功能干细胞是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞,具有非常广泛的应用前景。
本文将从诱导多功能干细胞的构建和应用两个方面进行分析。
首先,诱导多功能干细胞的构建是非常重要的。
传统上,多功能干细胞的获取需要从胚胎中提取干细胞,但这种方法存在一些伦理和法律问题。
因此,研究人员开始探索利用诱导因子来将非干细胞转化为多功能干细胞的方法。
这一技术被称为iPS技术,即诱导性多能干细胞技术。
iPS技术的主要原理是通过转染一组特定的因子,使成体细胞重新获得干细胞的特性。
这种技术在研究上已经被广泛应用,也为临床治疗提供了可能。
其次,多功能干细胞的应用也是非常重要的。
多功能干细胞可以用于治疗许多疾病,如心脏病、糖尿病和帕金森病等。
例如,将多功能干细胞移植到心脏病患者的心脏中,可以促进心肌细胞的再生,从而恢复心脏功能。
此外,多功能干细胞也可以用于疾病建模和药物筛选。
通过将多功能干细胞转化为疾病特定的细胞类型,可以方便地进行疾病模拟和药物筛选。
综上所述,诱导多功能干细胞的构建和应用都有着非常重要的意义。
随着相关技术的不断发展和进步,相信多功能干细胞的应用前景会变得更加广泛。
- 1 -。
人诱导干细胞ipsc检测标准概述说明以及解释1. 引言1.1 概述人诱导干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)是一种在体细胞经过基因重编程而得到的多能干细胞,在医学和生物学领域引起了广泛的兴趣和研究。
iPSC具有与胚胎干细胞相似的自我更新和分化潜能,同时又避免了使用胚胎来源的争议。
这使得它们成为研究人类发育、疾病机制以及药物筛选与治疗等方面的理想模型。
1.2 文章结构本文旨在对人诱导干细胞检测标准进行全面、系统性的概述和解释。
文章分为五个部分:引言、人诱导干细胞的概述、人诱导干细胞检测的重要性与挑战、已有的人诱导干细胞检测标准概述与解释以及结论与展望。
在第二部分中,我们将介绍人诱导干细胞(iPSC)的定义、背景、特点和应用,以及制备方法和技术发展历程。
这将为后续对其检测标准进行分析和评估提供必要的背景知识。
第三部分将讨论人诱导干细胞检测的重要性和意义,以及当前面临的问题和挑战。
我们还会对未来人诱导干细胞检测标准的发展进行展望,探讨可能出现的改进方向和趋势。
在第四部分中,我们将概述已有的国际标准和相关文献,并介绍主流实验方法和技术指南。
同时,我们也会分析这些检测标准在实际应用中存在的局限性,并提出改进措施建议。
最后,在结论与展望部分,我们将对人诱导干细胞检测标准进行总结和评价,并展望其未来的研究方向与发展趋势。
同时,我们还将讨论人诱导干细胞检测标准对相关领域的影响和应用前景。
1.3 目的本文旨在全面了解并解释人诱导干细胞(iPSC)的概念、特点及其制备方法,并重点关注目前人诱导干细胞检测所面临的挑战和问题。
通过梳理已有的检测标准,分析其在实际应用中的限制,并提出改进措施建议。
最后,对人诱导干细胞检测标准未来的发展方向和应用前景进行展望,为相关研究领域提供指导与参考。
2. 人诱导干细胞(iPSC)的概述2.1 iPSC的定义和背景人诱导干细胞(induced pluripotent stem cells,简称iPSC)是一种通过重编程成体细胞回退到多能性状态而获得的多潜能干细胞。
《人诱导多能干细胞系的建立》篇一一、引言人诱导多能干细胞(Human Induced Pluripotent Stem Cells,简称hiPSC)的发现与建立,是现代生物学领域的一大突破。
这种干细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能,为疾病模型构建、药物研发以及再生医学等领域提供了新的研究工具和治疗方法。
本文将详细介绍人诱导多能干细胞系的建立过程、方法及其在科研和临床上的应用前景。
二、人诱导多能干细胞的建立1. 背景与原理人诱导多能干细胞技术的原理主要是通过特定基因的过表达和转录因子的激活,将成熟的人体细胞重编程为多能性干细胞。
这种方法在技术层面上克服了传统胚胎干细胞研究的伦理问题,同时也为疾病模型构建、药物研发等领域提供了新的研究工具。
2. 实验方法人诱导多能干细胞的建立主要涉及细胞培养、基因编辑和细胞分化等步骤。
首先,从人体获取成熟的体细胞,如皮肤成纤维细胞或外周血细胞等;然后通过基因编辑技术,将特定的转录因子导入细胞中;最后,通过体外培养和分化,诱导这些细胞成为多能性干细胞。
三、人诱导多能干细胞系的应用1. 疾病模型构建人诱导多能干细胞可模拟各种疾病的发病过程,为研究疾病的发生机制和寻找治疗方法提供了有力工具。
例如,通过建立帕金森病、糖尿病等疾病的模型,可以研究疾病的发病机制,并筛选出潜在的治疗药物。
2. 药物研发人诱导多能干细胞可用于药物研发过程中的毒性和药效评估。
通过分析药物对干细胞的影响,可以预测药物在人体内的疗效和潜在副作用,为新药研发提供有力支持。
3. 再生医学人诱导多能干细胞具有分化成多种组织细胞的能力,为再生医学提供了新的治疗手段。
例如,通过诱导干细胞分化成神经元、心肌细胞等,可以用于治疗帕金森病、心肌梗死等疾病。
此外,还可以通过基因编辑技术修复干细胞的基因缺陷,从而治疗遗传性疾病。
四、未来展望随着人诱导多能干细胞技术的不断发展,其在科研和临床上的应用前景将更加广阔。
未来,我们可以期待以下几个方面的发展:1. 技术的进一步完善:随着基因编辑和细胞培养技术的不断进步,人诱导多能干细胞的建立过程将更加高效和稳定。
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诱导型多能干细胞的诱导和应用多能干细胞是可以分化成多种细胞类型的细胞,因此在医学领域中具有很大的应用价值。
从最初的胚胎干细胞到现在的诱导型多能干细胞,细胞技术的发展给医学带来了许多新的治疗和治疗方法。
本文将重点介绍诱导型多能干细胞的诱导和应用。
一、诱导型多能干细胞的诱导诱导型多能干细胞是指在体细胞中引入能够编程的基因,重编程体细胞使其回到多能干细胞的状态。
通过高度重组的DNA序列,可以前向编程成人类多能干细胞。
诱导型多能干细胞具有多能性和自我更新能力,可以用于体外的细胞培养以及治疗。
1.重编程技术诱导型多能干细胞的重编程技术,也称为“基因修饰技术”。
该技术主要通过引入四个转录因子(Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc)来引起干细胞的重编程。
重编程让细胞回到胚胎干细胞的状态,即在若干个基因的表达被抑制的情况下,可以使一般的细胞具有分化成多种细胞类型的能力。
2.邻居细胞(贡献)在重编程时,主要包括两个步骤:将体细胞极度重组为多能干细胞前体状态,并通过紫外线照射或钙离子刺激等方法转化为体外诱导型多能干细胞。
我们认为,主要原因是邻居细胞的影响,使某些基因表达模式被抑制,给它们的细胞成为多能干细胞留下了适合的基因表达模式。
3.对诱导型多能干细胞的诱导对诱导型多能干细胞的培养,我们可以使用多种细胞培养技术。
其中包括基本的细胞生物学、分子生物学技术和诱导生物学技术等。
我们可以通过半固体培养技术、3D细胞培养技术以及微流控芯片技术等方法进行培养。
可以在合适的营养条件和合适的环境中让多能干细胞成熟和分化。
二、诱导型多能干细胞的应用诱导型多能干细胞有着广泛的应用:从治疗一系列疾病到治疗其他疾病。
已经有许多疾病使用多能干细胞疗法治疗,包括心脏病、血液病、神经退行性疾病、糖尿病以及肝脏病等。
1.心脏病的治疗使用诱导型多能干细胞进行心脏病治疗的方法,主要有三种:起搏器、心肌移植和心肌细胞移植。
这些方法都可以直接将多能干细胞移植到心脏或患处进行治疗,可成为心脏疾病的有效治疗方法,改善心肌缺血、心功能障碍,甚至实现心肌再生。
多能干细胞的诱导及其应用多能干细胞是指具有不限定分化潜能的细胞,能够分化为各种细胞类型。
目前,广泛应用于干细胞研究和临床治疗的多能干细胞主要包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞。
其中,胚胎干细胞来源于早期胚胎发育阶段的内细胞群,而诱导多能干细胞则是通过人工方式引导某些具有特殊能力的细胞转化为多能干细胞。
多能干细胞的诱导方法主要有六种,包括套袋法、蛋白质转化法、基因转染法、小分子化合物法、直接转化法和克隆法。
其中,基因转染法是最早被使用和经典的方法,它通过基因转染来使细胞发生转化。
但是,基因操纵会对细胞的基因组结构和稳定性产生影响,从而可能引发细胞发生不正常的生长和分化;而且基因转染技术需要使用病毒载体,易受到时间、成本和效率的限制。
因此,近年来,小分子化合物法更加受到重视,它通过添加一些生物活性小分子引导细胞转化为多能干细胞,具有简便、高效、安全等优点。
多能干细胞的应用非常广泛,主要包括以下几个方面:1. 细胞治疗目前,多能干细胞已被广泛应用于临床治疗。
例如,在血液系统疾病治疗中,多能干细胞可以分化为骨髓细胞和造血细胞,被用于造血干细胞移植治疗。
在视网膜疾病治疗中,多能干细胞可以分化为视网膜细胞,被用于治疗各种眼疾病。
此外,在神经系统、心血管系统、骨骼系统等疾病治疗中,多能干细胞也被广泛应用。
2. 器官修复多能干细胞可以分化为各种组织和器官,如皮肤、肝脏、肺部、心脏等。
目前,多能干细胞已被广泛应用于器官修复领域,例如用于肝脏疾病、肺疾病、心血管疾病等的修复和重建。
3. 新药研发多能干细胞可以用于药物筛选和药理学研究,以加速新药的研发和上市。
例如,多能干细胞可以分化为肝细胞,通过药物筛选和药理学研究,可以快速筛选出具有治疗肝疾病作用的药物。
4. 替代动物实验多能干细胞可以用于替代动物实验,以减少对动物的伤害和滥杀。
例如,通过多能干细胞分化为肝细胞、心肌细胞等,可以进行更加精准、安全、有效的药物毒性测试和药效评估,以取代常规的动物实验。
诱导性多潜能干细胞现状及前景展望一、本文概述随着生物科技的飞速发展,诱导性多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,简称iPSCs)的研究已经成为当代生物医学领域的一个热点。
作为一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型,iPSCs的出现在很大程度上颠覆了我们对细胞命运的认知,为疾病治疗、药物筛选、再生医学等领域提供了新的可能性。
本文旨在全面概述诱导性多潜能干细胞的研究现状,深入剖析其潜在的应用价值,并展望未来的发展前景。
我们将从iPSCs的诱导技术、分化机制、临床应用等方面展开讨论,以期为读者提供一个清晰、深入的iPSCs研究全貌。
我们也将关注当前面临的挑战与问题,以期推动iPSCs技术的进一步发展。
二、诱导性多潜能干细胞的研究现状诱导性多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells, iPSCs)是近年来生物医学领域的一个重大突破。
自从2006年日本科学家山中伸弥首次成功地将成体细胞诱导为具有类似胚胎干细胞特性的多潜能干细胞以来,iPSCs的研究已经取得了长足的进展。
在研究现状方面,iPSCs的制备方法已经从最初的病毒载体法发展到现在的非整合型质粒法、mRNA法以及蛋白法,显著提高了诱导过程的安全性和效率。
同时,关于iPSCs的分化机制也取得了重要突破,研究人员已经能够控制iPSCs向特定细胞类型分化,如心肌细胞、神经细胞、胰岛细胞等,这为再生医学和疾病治疗提供了可能。
在疾病模型方面,iPSCs技术的出现使得研究者能够利用患者自身的细胞诱导出iPSCs,进而分化为疾病相关的细胞类型,为研究疾病的发生机制和开发新的治疗方法提供了独特的工具。
例如,利用iPSCs技术,研究人员已经成功模拟了多种遗传性疾病和退行性疾病,如帕金森病、阿尔茨海默症等。
在临床应用方面,虽然目前iPSCs技术还面临诸多挑战,如分化效率、安全性等问题,但已经有一些初步的临床试验在进行。
多能干细胞化学试剂诱导分化法随着干细胞研究的不断深入,多能干细胞化学试剂诱导分化法成为一种常见的干细胞分化方法。
本文将对多能干细胞化学试剂诱导分化法进行系统的介绍,包括其原理、方法和应用。
一、多能干细胞的概念多能干细胞是指具有分化为各种组织和器官细胞的潜能的干细胞。
它们可以分化为内胚层、外胚层和中胚层的细胞以及生殖细胞。
多能干细胞有着广泛的应用前景,可以用于组织修复、再生医学以及药物筛选等领域。
二、化学试剂诱导分化的原理化学试剂诱导分化法是通过添加特定的化学试剂来诱导多能干细胞向特定细胞类型分化的一种方法。
这些化学试剂可以影响细胞内的信号通路,促进特定基因的表达,从而引导多能干细胞朝着特定的分化方向发展。
三、多能干细胞化学试剂诱导分化的方法多能干细胞化学试剂诱导分化的方法一般包括以下几个步骤:1.多能干细胞培养和扩增:首先需要将多能干细胞培养并扩增至足够数量,以满足后续实验的需求。
2.诱导分化试剂的选择:根据所需要的分化方向,选择合适的化学试剂进行诱导分化。
不同的细胞类型需要不同的诱导试剂,例如,要诱导多能干细胞分化为心肌细胞可以使用CHIR99021和IWP-2等试剂。
3.试剂处理:将选择的化学试剂加入培养基中,将多能干细胞暴露在试剂中一定时间,通常需要连续培养数天到数周。
4.分化细胞的鉴定:通过形态学观察、特定标记蛋白的免疫荧光染色等方法,对分化细胞进行鉴定和鉴定。
四、多能干细胞化学试剂诱导分化的应用多能干细胞化学试剂诱导分化法在干细胞研究和应用中有着广泛的应用前景。
首先,它可以为组织修复和再生医学提供大量的细胞原料,为患者提供更多的治疗选择。
其次,它可以用于药物筛选和毒性测试,帮助发现更多的药物和防止有害物质的使用。
此外,它还可以为基础研究提供更多的实验模型,帮助科学家们更好地理解生命的奥秘。
五、多能干细胞化学试剂诱导分化法的发展趋势随着干细胞研究的不断深入,多能干细胞化学试剂诱导分化法将会迎来更多的发展机遇。
胚胎干细胞和诱导多能性干细胞的研究随着生物技术的发展,人们对于干细胞的研究越来越深入。
在干细胞中,胚胎干细胞和诱导多能性干细胞是两种备受关注的类型。
它们具有不同的来源和应用场景,本文将分别从这两方面进行探讨。
胚胎干细胞胚胎干细胞是从早期胚胎中分离出来的细胞。
这些细胞能够自我更新并分化为几乎任何种类的细胞,例如神经元、心肌细胞和肝细胞等。
由于这种多样化的分化潜能,胚胎干细胞在医学研究领域中具有重大作用。
确认获得胚胎干细胞的源自一个不断发展的胚胎,这让一些人对于胚胎干细胞的研究表示了担心。
另外,由于胚胎干细胞可以产生人类组织和器官,一些人甚至将其视为某种形式的“人类工厂”,从而提出了道德和法律方面的考虑。
不过我们也不能否认该研究领域的巨大医学潜能。
胚胎干细胞有着广泛的应用前景,如生殖医学、再生医学等领域。
在这些领域,科学家们已经成功地利用胚胎干细胞来修复骨骼问题、肝脏疾病等疾病。
胚胎干细胞的这些应用,对于患者的生活质量产生了长远的积极影响。
诱导多能性干细胞相对于胚胎干细胞的争议,诱导多能性干细胞则具有更多发展的可能性。
2012年诺贝尔医学奖得主山中伸弥所发现的“iPS细胞”,就是最有代表性的一种诱导多能性干细胞。
诱导多能性干细胞源于从成年体细胞中重新激活成为干细胞。
不需要胚胎,而是使用人体成年细胞,进行体外培养直到获得干细胞。
诱导多能性干细胞具有与胚胎干细胞类似的分化潜能,可以分化成多种不同的细胞类型。
同时,iPS技术使科学家们可以利用人体自身的细胞进行研究和治疗。
不只是医学领域,诱导多能性干细胞还具有广泛的应用前景。
火箭科学家周建民带领的天宫实验室利用诱导多能性干细胞在太空中进行核心细胞的多能性评估,为未来在太空中进行疾病治疗提供了新思路。
在未来的研究中,诱导多能性干细胞极有可能成为胚胎干细胞的替代品,这样不仅可以避免众多以医学界为代表的道德困惑,同时还有着更广泛的应用前景。
结语综上所述,干细胞的研究对于人类的健康产生了深远的影响。
诱导性多能干细胞【关键词】干细胞; 细胞分化; 转录因子诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS)是通过基因转染技术(gene transfection)将某些转录因子导入动物或人的体细胞, 使体细胞直接重构成为胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES)细胞样的多潜能细胞。
iPS细胞不仅在细胞形态、生长特性、干细胞标志物表达等方面与ES细胞非常相似, 而且在DNA甲基化方式、基因表达谱、染色质状态、形成嵌合体动物等方面也与ES细胞几乎完全相同。
iPS细胞的研究受到人们广泛的关注, 是目前细胞生物学和分子生物学领域的研究热点。
iPS细胞技术诞生还不到2年, 却为干细胞的基础研究和临床疾病治疗研究带来了前所未有的希望, iPS细胞技术的出现使人们从ES细胞和治疗性克隆等激烈的伦理学争论中解脱出来。
但是, 目前制备iPS细胞的方法在安全性方面还存在一定问题, 因此探索一种高效、安全的iPS细胞的制备方法显得十分必要。
1 iPS细胞的制备方法2006年T akahashi等[1]研究小组利用分别携带Oct4、Sox2、Myc和Klf4转录因子的4种逆转录病毒载体感染小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs), 经过G418药物筛选成功获得第1批iPS细胞。
但是这批iPS细胞系中DNA甲基化的方式与自然存在的ES细胞不同, 而且这批iPS细胞不能形成畸胎瘤。
Okita等[2]研究小组报道了第2批iPS细胞的产生。
他们采用与制备首批iPS细胞相同的方法, 但是采用了不同的筛选基因。
第2批iPS细胞系DNA甲基化的方式与自然存在的ES细胞的甲基化方式相同, 并且能形成畸胎瘤。
2007年末, Takahashi和Yu等[3, 4]两研究小组分别在细胞和科学杂志上报道关于iPS研究里程碑的实验结果, 他们都成功获得了人的iPS细胞系。
诱导多能干细胞:过去,现在和未来介绍在2006年,我们发现,干细胞与胚胎干细胞相似的属性,可以同时引入四种基因(高桥和Yamanaka,2006年)从小鼠成纤维细胞产生。
我们指定了这些细胞的iPS细胞。
在2007年,我们报道了类似的方法适用于人类成纤维细胞,并通过因素引入了一把,人类iPS细胞可以生成(Takahashi等,2007)。
就在同一天,詹姆斯·汤姆森的研究小组还报告了人类iPS细胞的生成,使用不同组合的因素(Yu等人,2007)。
合并三个科学流LED iPSCs的生产像任何其他科学的进步,过去和现在的科学家在相关领域众多研究结果的基础上,建立了IPSC的技术。
有三个主要的数据流的研究导致我们生产的iPS细胞(图1)。
第一个数据流进行重新编程核移植。
1962年,约翰·格登报道,他的实验室已经收到了成年青蛙肠细胞的细胞核(格登,1962)的未受精的卵子产生的蝌蚪。
超过三十年后,伊恩·威尔莫特及其同事报道多莉诞生的第一只哺乳动物体细胞克隆产生的乳腺上皮细胞(威尔莫特等人,1997)。
在这些成功的体细胞克隆显示出,即使是分化的细胞中含有的所有的发展所需要的整个生物体的遗传信息,而卵母细胞包含体细胞核重新编程的因素,可以。
2001年,田田隆的研究小组发现,胚胎干细胞也含有因素,可以重编程体细胞(田田等人,2001)。
第二个流是“大师”的转录因子的发现。
在1987年,果蝇的转录因子,触角,异位表达时(Schneuwly等人,1987)表明,诱导形成的腿代替触角。
在同一年,哺乳动物转录因子,调节因子MyoD ,显示转换成纤维细胞,成肌细胞(Davis等人,1987)。
这些结果导致“主调节器,”一个给定的血统的命运决定和诱导的转录因子的概念。
许多研究人员开始寻找各种谱系单主监管。
尝试失败,也有少数例外(Yamanaka和布劳,2010)。
第三,同样重要的是,流是涉及胚胎干细胞的研究。
自第一代在1981年小鼠胚胎干细胞(埃文斯和考夫曼,1981年,1981年,马丁),奥斯汀·史密斯和其他人已经建立了培养条件,使长期维持多能性(史密斯等人,1988)。
维持小鼠胚胎干细胞的一个关键因素是白血病抑制因子(LIF )。
同样地,由于第一代的人胚胎干细胞(Thomson等人,1998年),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF )的最佳培养条件已经成立。
组合第一两个流的研究使我们假设,这是在卵母细胞或胚胎干细胞,体细胞重新编程到胚胎状态,设计实验,以确定该组合的多个因素的组合。
使用信息所需要的文化多能干细胞的培养条件,我们就能够识别四个因素可以产生iPS细胞。
IPSC的技术成熟和理解后不久,其他各组小鼠iPSCs的初次报告,概括了基于因子重编程的小鼠(Maherali等,2007年,Wernig等人,2007)和人类(Lowry等,2008年,公园等。
2008B )。
iPS细胞技术的优点之一是它的简单性和重现性。
许多实验室开始探索相关机制和修改程序。
尽管iPSCs的重复性,可以生成过程中的效率仍然很低,通常小于1 %转成纤维细胞成为iPS细胞。
最初这种低效率的提高iPS细胞的可能性,来自罕见的干或者未分化的细胞,成纤维细胞培养共存(山,2009A )。
然而,随后的研究表明,iPS细胞可以是来自于终末分化的淋巴细胞(罗等人,2009)和有丝分裂后的神经元(Kim等人,2011a的)。
因此,大部分的,如果不是全部,体细胞有可能成为iPS细胞,尽管有不同的效率。
怎能只是一小部分因素诱导体细胞重编程?这是超出了本文的范围,提供一个概述的许多研究已经解决了这个重要的问题。
从我的角度来看,许多科学家的共识似乎是重编程因子的启动重编程过程中有更多的不到1%的转染细胞,但该过程没有完成在大多数细胞中。
知之甚少的随机事件似乎需要完全重新编程的地方(Hanna等人,2009年,山中伸弥,2009年a)。
正如我在下面的讨论,培养条件似乎为动力,可以帮助促进全重编程功能。
最初的iPSCs可以使用逆转录病毒或慢病毒,这可能会造成插入突变,从而会带来风险转化应用,甚至可以造成不利影响,如看到那些在基因治疗(Hacein - BEY- Abina等一些尝试。
,2003)。
来自逆转录病毒衍生的iPS细胞的小鼠,显然是正常的,,只要c-Myc的基因表达被压抑(葵等,2008年,中川等人,2008年)。
然而,人类iPSCs的长期安全性不能保证通过小鼠研究孤单。
此外,逆转录病毒可能使,iPSCs的免疫原性(Zhao等,2011年)。
因此,对于细胞移植治疗的目的,我们将需要避免涉及载体整合到宿主基因组的诱导方法。
已经报道了许多方法来产生整合的iPSCs 。
这些方法包括质粒(冲田等人,2011A ,冲田等人,2008),仙台病毒(Fusaki等,2009),腺病毒(Stadtfeld等人,2008),合成的RNA (Warren等。
,2010 )和蛋白质(Kim等,2009)。
此外,已经尝试通过小分子诱导重新编程。
其中,质粒和仙台病毒经常使用的许多实验室。
在诱导多能干细胞(iPS 细胞)的研究与应用,京都大学的中心,我们看好的方法是使用游离质粒在体外研究为再生医学和两种逆转录病毒或游离质粒。
我们宁愿这些方法,因为他们的简单和可重复性。
科学家们现在在很大程度上改变他们的努力从技术本身的发展应用。
IPSC的技术已经出现新的科学流在科学上从来没有停止流动(图2)。
小鼠实验室鲁道夫詹尼士的(汉纳等人,2007 )的开创性工作后,科学家们现在做的进展对使用iPS细胞在再生医学,例如治疗帕金森氏病(Kriks等人,2011 ),血小板缺乏症(高山等人,2010)脊髓损伤(紫菜等,2011年,Tsuji等人,2010),和黄斑变性(冈本和高桥,2011)。
患者来源的iPS细胞已被证明是有用的建模疾病和筛选的候选药物的图书馆。
从开创性研究由乔治·戴利(Park 等人,2008年a )领导组,和凯文·埃根(DIMOS等,2008),发表超过100份报告在过去三年中使用特定疾病的iPS细胞。
我是惊讶,特定病人的iPS细胞可以被用来复述表型不仅单基因疾病,但也迟发性多基因遗传性疾病,如帕金森氏病(迪瓦恩等人,2011 ),阿尔茨海默氏病(以色列等。
,2012 ,Yagi等,2011年,八幡等,2011),精神分裂症(布雷南德等,2011)。
兴奋包围这些细胞的应用潜力,同时分析疾病的机制和调查潜在的新的治疗方法。
体细胞是来自于iPS细胞,特别是心肌细胞和肝细胞,也可以被用于毒物学测试作为替代现有的方法(山中,2009年b)。
此外,这些医疗应用,iPS细胞可用于在动物生物技术。
猴(Liu等人,2008),猪(West 等,2011)和犬(Shimada等人,2010年)的iPS细胞可用于基因工程在这些动物中,使产生的疾病模型和生产有用的物质,如酶,遗传性疾病的患者缺乏较大的动物。
在未来潜在的技术可能是有用的,用于保护濒危动物(奔嫩等人,2011年),虽然很多挑战需要克服。
其中最引人注目的应用程序的iPSCs的报道中内和他的同事们,谁产生了大鼠胰腺在小鼠,大鼠iPS细胞通过显微注射到小鼠囊胚(小林等人,2010年)胰腺发育至关重要的基因缺陷。
在将来,可能会成为可能生成人体移植的器官,使用了类似的策略。
IPSC的技术从出现的另一个科学流是“直接重新编程”从一个躯体传承到另一个。
正如上面所提到的,试图确定一个单一的“大师”的转录因子已经失败大多数体细胞谱系。
然而,在iPS细胞重编程的成功,科学家们转而寻找一个单一的因素,寻找结合。
梅尔顿和他的同事报道了小鼠胰腺内分泌细胞的外分泌细胞转化,使用相结合的三种转录因子(Zhou 等,2008)。
他们的开创性工作,不久之后,各种体细胞,如神经细胞(Vierbuchen等人,2010年),肝(Huang等,2011年),心肌细胞(家田等转换成纤维细胞在体外的例子很多。
2010年)和造血祖细胞(萨博等人,2010年)。
直接重新编程简单,快速。
剩下的一个障碍是如何获得足够量的靶细胞用于下游应用。
这个新的技术,最好的用法,可在现场直接重新编程(Qian等,2012 )。
大问题:iPS细胞与胚胎干细胞不同?关于iPS细胞的最重要的问题之一是他们是否是从胚胎干细胞不同,如果是这样,不存在任何差异,是否是功能相关的。
iPSCs的研究过程中的最初几年中,我们惊奇的胚胎干细胞非常相似。
然而,从2009年开始,科学家开始报告iPS细胞和胚胎干细胞之间的差异。
例如,Chin等人,2009年比较了三种人类胚胎线和五个iPSC的线的表达芯片,并确定了数百个基因的差异表达(Chin等人,2009)。
他们的结论是iPS细胞应被认为是独特的多能干细胞亚型。
两个其他的研究还比较了全球ESCs和iPSCs和确定持久的供体细胞的基因表达的iPS细胞(Ghosh等人,2010年,马尔凯托等,2009年)之间的基因表达。
这是邓小平等人,2009年首次报道有两种类型的多能干细胞系的DNA甲基化之间的差异后,他们进行了有针对性的亚硫酸氢盐测序三个人类胚胎克隆和四个iPSCs的线。
土井等人,2009年还报道有差异甲基化基因,如BMP3 ,胚胎干细胞和iPS细胞之间。
随后,三个研究报告供体细胞的表观遗传记忆人类诱导多能干细胞(Kim等,2011B ,李斯特等人,2011年,大井等人,2011年)。
然而,其他研究得出的结论,这是很难区分iPSCs的胚胎干细胞的基因表达或DNA甲基化。
两份报告显示IPSC的克隆和ESC克隆重叠的基因表达的变化,因此这两种类型的多能干细胞聚集在一起,通过这些分析(冈瑟等,2010年,纽曼和库珀,2010)。
他们认为,这些变化,至少在一部分,是来自于每个实验室所使用的不同的诱导和培养条件。
博克等人,2011表明iPS细胞和胚胎干细胞中的基因表达和DNA甲基化是非常相似的,一些iPS细胞克隆不能区分从胚胎干细胞。
通过检查多少的iPS和ES克隆进行比较,我们观察到一个明显的趋势(见表1)。
研究报告的差异无论是在基因表达或DNA甲基化相比数量相对较少(一般少于10 ),各组),而那些发现很难区分从胚胎干细胞的iPS细胞多克隆和克隆分析来自多个实验室。
一直讨论的另一个主要点的能力的细胞分化和iPS细胞是否在功能上是不同的胚胎干细胞(在这方面)。
胡锦涛等人,2010年在体外定向神经分化的五个人类胚胎克隆和12个iPS 细胞克隆。
他们发现,所有的ESC克隆分化成PAX6的阳性细胞,90%以上的疗效,但iPS 细胞克隆表明分化较差,约10%至50 %的疗效。
然而,博尔廷等人,2011年检查了16人的iPSC克隆他们的能力,分化成运动神经元,并发现有13个,这些iPS细胞克隆胚胎干细胞相媲美的功效区别。