实验报告 - 医学免疫学

《医学免疫学》实验设计

期别：xxx 班级：xx 学号：xxxxxxxx 姓名：OOO

IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制

【立题依据】

自身免疫性疾病（Autoimmune diseases）是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识，也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员，在全球大约有2000万患者，中国至少有100万的患者，但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度（75%），表现为明显的家族遗传性。同时，Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症，如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制，并探索更加有效治疗及预防方案，对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。

Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞（APC）和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子，研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ，由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子，这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击，使其丧失胰岛素分泌活性，最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞（Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链（CD25）分子，胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。

白细胞介素-35（IL-35） 是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子，属于IL—12细胞因子家族，IL-35为异源二聚，主要由活化的Treg分泌，对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用，参与介导机体免疫耐受的形成。IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制，还不十分清楚，仍有待继续研究和解决。

《医学免疫学与微生物学》实验报告

第1页共6页 实验一

［实验名称］：沉淀反应

［实验目的］：通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig含量

［实验材料］：１％离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管

打孔器

［试验步骤］：（１）将溶解后的离子琼脂冷却到４５０Ｃ，加入适当浓度的抗原混合均匀，吸取３－４毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片而又不流失。

（２）琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。

（３）在孔内滴加待测可溶性抗体。

（４）将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置于３７０Ｃ恒温箱中２４小时，观察沉淀环。

［实验结果］：（沉淀环直径）

测量沉淀环直径：毫米 。

［实验分析］ 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球蛋白或补体成分的含量。

在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。

沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。

《医学免疫学与微生物学》实验报告

第2页共6页 实验二

［实验名称］：间接凝集抑制试验（妊娠试验）

［实验目的］：测定待检尿液中是否含ＨＣＧ（绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠

［实验材料］：孕妇尿液、非孕妇尿液、ＨＣＧ致敏乳胶抗原、抗ＨＣＧ血清、载玻片等

［试验步骤］：

（１）取一片载玻片，标记出左右。

（２）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。

（３）在两侧尿液中分别加一滴抗ＨＣＧ血清，摇动混匀２－３分钟。

（４）在两侧液滴中分别再加一滴ＨＣＧ致敏乳胶抗原，摇动混匀２－３分钟。

（５）观察判定结果。

［实验结果］： （凝集和非凝集的描述）

左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。

《医学免疫学》实验设计

期别:xxx 班级:xx 学号:xxxxxxxx 姓名:OOO

IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制

【立题依据】

自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识,也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员,在全球大约有2000万患者,中国至少有100万的患者,但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度(75%),表现为明显的家族遗传性。同时,Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症,如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制,并探索更加有效治疗及预防方案,对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。

Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞(APC)和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子,研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ,由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子,这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击,使其丧失胰岛素分泌活性,最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞(Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链(CD25)分子,胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell 和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。

白细胞介素-35(IL-35)是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子,属于IL—12细胞因子家族,IL-35为异源二聚,主要由活化的Treg分泌,对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用,参与介导机体免疫耐受的形成。IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制,还不十分清楚,仍有待继续研究和解决。

1 医学微生物学与医学免疫学实验大纲

第1次 细菌形态结构

1. 观察细菌的基本形态与特殊结构

2. 革兰染色（操作）

3. 显微镜观察细菌的动力

4. 油镜的使用与保护

第2次 细菌培养与代谢

1. 培养基的制备（录像）

2. 细菌接种方法（操作，平板、斜面、液体、半固体接种）

3. 细菌生长现象观察（示教）

4. 观察细菌代谢产物及生化反应（糖发酵、H2S、吲哚试验；色素）

第3次 外界因素对细菌的影响与细菌的变异

1. 热力灭菌（高压、干烤），紫外线杀菌作用（操作，每两人一个）

2. 碘酒酒精对皮肤的消毒作用，空气细菌培养（每室一套）

3. 药敏试验（操作，抗生素对细菌作用及耐药变异）

4. 观察噬菌体的特异溶菌现象，变形杆菌的迁徙现象及对照

5. 接种脓汁标本接种血平板（每组一个，下次实验用）

6. 病原性球菌分离、鉴定实验设计

第4次 病原性球菌

1. 病原性球菌的形态染色与培养（脓汁标本，革兰染色，操作）

2. 致病性葡萄球菌的分离和鉴定（甘露醇发酵（示教）、血浆凝固酶玻片法（操作，提供菌种）、血浆凝固酶试管法（示教））

3. 抗“O”试验（结果示教）

4. 粪便标本接种于SS培养基（每人一个，下次实验用）

5. 致病性肠道杆菌分离、鉴定实验设计

第5次 肠道杆菌（1）

1. 录像

2. 肠道杆菌生化反应（糖发酵、吲哚、H2S试验）与培养特点（SS培养基上菌落）（结果示教）

3. 粪便标本中肠道致病菌的分离鉴定（操作，接种双糖铁基）

第6次 肠道杆菌（2）

1. 肠道致病菌的进一步鉴定（生化反应结果与玻片凝集（操作））

2. 肥达反应（操作）

3. 吞噬细胞吞噬功能实验设计（下次实验前准备）

第7次 免疫学诊断，凝集反应，细胞免疫体外检测

1. 录像

2. 介绍免疫学诊断

3. 玻片凝集（操作，血型鉴定）

4. 白细胞的吞噬（操作）

第8次 凝集反应与沉淀反应

1. 录像

2. 双向扩散（操作）、对流免疫电泳（示教） 2 3. 抽血（每组一人，下次实验用）