酚类化合物的测定----液相色谱分析法 1 范围 1.1 本法规定了液相色谱法测定水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚。 1.2 本法适用于生活饮用水、地下水和地表水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚的测定。 1.3 本法的最低检测质量浓度：取水样1.0L，固相萃取后溶剂洗脱，定容1.0mL，进样体积40μL，最低检测质量浓度（μg/L）见下表。 最低检测质量浓度 酚类 苯酚 4-硝基酚 3-甲基酚 2，4-二氯酚 2，4，6-三氯酚 五氯酚S pi，μg/L 0.16 0.032 0.15 0.093 0.14 0.072 0.61 0.12 0.56 0.35 0.54 0.27 2 原理 用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。 3 试剂 3.1 流动相 3.1.1 甲醇：HPLC级，经0.22μm滤膜过滤。 3.1.2 高纯水：经0.22μm滤膜过滤。 3.2 标准物 酚类标准储备液各组分浓度（μg/mL） 苯酚 200 4-硝基酚 50 3-甲基酚 200 2，4-二氯酚 200 2，4，6-三氯酚 200 五氯酚 200 3.3 四氢呋喃：重蒸馏。 3.4 正己烷：重蒸馏。 3.5 硫酸：0.5mol/L。 3.6 冰乙酸。 3.7 无水亚硫酸钠。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：可编程紫外检测器。 4.2 微量注射器：50μL、100μL。 4.3 色谱柱：C18或C8柱。 4.4 化学工作站。 4.5 尖底浓缩瓶：10ml具刻度。 4.6 富集柱。 5 样品 5.1 水样采集及贮存方法：样品应贮于棕色玻璃瓶中避光，用硫酸调pH至＜2，冷冻保存，应尽快过柱，检测。 5.2 样品的预处理 5.2.1 富集柱的活化：首先用10~15ml甲醇活化，再用30ml纯水活化，然后浸在纯水。 5.2.2 样品富集：取1.0L水样，加入0.5mol/L硫酸使pH达到1.5~2，然后以5~10ml/min的流速使水样通过富集柱。若样品是饮用水，先用无水硫酸钠脱氯，若是地面水则用快速定量滤纸过滤后过柱。样品富集完毕后将小柱在空气中干燥10min，再用2ml四氢呋喃洗脱置于尖底浓缩瓶内。若有杂峰影响苯酚等的测定，可先用正己烷2ml洗脱后，再用四氢呋喃洗脱，定容体积均为1.0ml，分别贮存。 5.2.3 样品测定时，抽取洗脱液进样，可平行测定三次。若用正己烷洗脱，则分别测定，将定量结果相加。 6 步骤 6.1 调整仪器 6.1.1 化学工作站：选择各种色谱条件。 6.1.2 柱箱温度：35℃~40℃。 6.1.3 流动相：A—甲醇/ϕ(CH3COOH)=1%；B—纯水/ϕ(CH3COOH)=1%。 6.1.4 流速：0.6~1.2ml/min(微径柱0.2~0.4ml/min)。 6.1.5 梯度：根据各自仪器分离情况确定，以下条件供参考。 7.5min A：B=45：55 0.6ml/min 9.5min A=90 1.2ml/min 4.0min B=90 1.2ml/min 9.0min A：B=45：55 0.6ml/min 6.1.6 检测器：在柱压稳定后开启检测器设立波长变换程序表。 各酚类特征波长 酚类 苯酚 4-硝基酚 3-甲基酚 2，4-二氯酚 2，4，6-三氯酚 五氯酚 波长，nm 275 320 275 295 295 305 6.2 定量方法：外标法。 6.3 标准样品 6.3.1 标准样品的制备：取50μL储备液+950μL甲醇混合后为使用液。标准样品每个样品进样三次，相对标准偏差小于7%即可认为仪器稳定。每批样品必须同时制备标准曲线。 6.3.2 标准曲线制作：按下表配制标准溶液。 使用液进样体积，μL 苯酚 4-硝基酚 3-甲基酚 2，4-二氯酚 2，4，6-三氯酚 五氯酚5.0 10 20 40 50 12.5 50 50 50 50 100 25 100 100 100 100 200 50 200 200 200 200 400 100 400 400 400 400 6.4 进样操作 6.4.1 进样方式：微量注射器手工进样。 6.4.2 进样量：20~40μL。 6.5 定性分析 6.5.1 各组分出峰顺序：苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚。 6.5.2 保留时间：以苯酚出峰时间为1的相对保留时间见下表。 各酚类相对保留时间 酚类 苯酚 4-硝基酚 3-甲基酚 2，4-二氯酚 2，4，6-三氯酚 五氯酚相对保留时间 275 320 275 295 295 305 6.6 定量分析 6.6.1 色谱峰的测量：测量峰高或峰面积，根据标准曲线计算定量，或由化学工作站根据标准曲线计算定量。 6.6.2 计算：被测样浓度按下式计算： ρi=(ρis×hi×V1×V2)/(his×V3×V4) 式中： ρi—试样中酚类质量浓度，μg/L； ρis—标样中酚类质量浓度，μg/μL； hi—样品峰高，mm； his—标样峰高，mm； V1—标样进样体积，μL； V2—样品浓缩液体积，μL； V3—样品浓缩液进样体积，μL； V4—被提取的样品体积，L。 7 注意事项 7.1 使用标准样品条件 7.1.1 标准样品进样体积与试样体积相同，标准样品浓度应接近试样的浓度。 7.1.2 标准样品尽可能同时分析，直接与单个标样比较以测定浓度。 7.2 安全 7.2.1 所用有机溶剂甲醇有毒性，四氢呋喃、正己烷易燃，均为易挥发性试剂，操作时必须遵守有关规定，重蒸馏有机溶剂必须在通风柜中进行，严禁明火。 7.2.2 分析的酚类化合物有毒，操作时必须小心谨慎，戴上一次性手套等防护措施。 7.2.3 用过的废液集中处理后排放。
第３５卷第９期 ２０１０年９月 环境科学与管理 ＥＮＶ氓０ＮＭＥＮＴＡＬ ＳＣⅡ ｉｃ＝Ｅ ＡＮＤ ＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴ Ｖ０Ｌ ３５ Ｎｏ．９ Ｓｅｐ．２０１０ 文章编号：１６７４—６１３９（２０１０）０９—０１４５—０３ 分光光度法快速测定水中苯酚 朱薇 （重庆大学化学化工学院，重庆４ｏｏｏ４４） 摘要：建立了简单、快速的测定水中苯酚的分光光度法。方法基于苯酚与硝普钠在有氨基的试剂盐酸羟胺存 在下发生Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ颜色反应，生成靛酚染料，从而对苯酚进行光谱测定。考察了测定波长，ｐＨ值、Ｎａ：ＨＰＯ４一 ＮａＯＨ缓冲溶液用量，硝普钠的用量、盐酸羟胺的用量，反应时问对苯酚检测的影响。在优化的实验条件下，线 性范围为０．ｏ５—０．５ ｍｇ・ＬＩ１（ｒ＝Ｏ．９９９ ６）。检出限为０．００５ ｍｇ・Ｌ～，对浓度为０．３ ｎａｇ・Ｌ 的苯酚样品溶 液平行测定５次，ＲＳＤ为１．３２％。以上结果表明，此方法具有线性范围较宽，灵敏度和精密度较高，操作简便， 易实现水质在线监测等特点。 关键词：苯酚；Ｂｅｒｔｈｄｏｔ颜色反应：分光光度法 中图分类号：Ｘ８３２ 文献标识码：Ａ Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｌ ｂｙ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ Ｚｈｕ Ｗｅｉ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４ＯＯ０４４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｌ ｗａｓ ｐｍｐ０ｓｅｄ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ＷＳｔ．ｑ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ￣ｄｉｕｌｎ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｅｈｌｏｒｉｄｅ，ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａ ｉｎｄｏｐｈｅｎｏｌ ｄｙｅ．ｔｈｕｓ ｔｌｌｅ ｐｈｅｎｏｌ ｉｎ ｗａｔｅｒ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃａｌｌｙ．Ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍ ａｌｉｃｅ，ｓｅｖｅｒａｌｍａｉｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐＨ，ａｍｏｕｎｔ ｏｆＮａ：ＨＰＯ４一ＮａＯＨ ｂｕｆｆｅｒ，ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｐｍｓｓｉｄｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏ－ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｒｅ ０．０５－０．５ ｍｇ・Ｌ （ｒ＝０．９９９６）．Ａｎｄ ｔｈｅ ｈｍｉｔｓ ｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｓ０．００５ ｒａｇ－Ｌ～，ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ，ｎ＝５） ｉｓ １．３２％ｆｏｒ０．３ ｍｇ・Ｌ～ｐｈｅｎｏ１．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｏｆｇｏｏｄ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄ ｉｓ ａｌｓｏ ｅａｓｙ ｔｏ ｂｅ ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ ａｎｄ Ｃａｎ ｂｅ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｆｏｒ ｏｎｌｉｎｅ ｍｏｎｉｔｏｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｈｅｎｏｌ；Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ ｃｏｌｏｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ 苯酚是一种重要的化工原料，同时也是一种高 毒有机物，对环境和人体的危害极大，因此，对环境 水中苯酚进行检测具有重要的意义。中国２００２年 颁布的《地表水环境质量标准》¨ 中，也将挥发酚作 为常规监测项目，地表水环境二类、三类水的挥发酚 标准限值分别为０．０２ ｍｇ／Ｌ、０．０５ ｍｇ／Ｌ，测定苯酚 的方法主要有分光光度法［２ 】、电化学法 】、色谱 法 、荧光分析法 】、传感器法 等。现行国家标 准测定酚类物质采用４一氨基安替比林分光光度 法 。这种方法可以比较准确地测定出酚类化学物 的含量，但同时也存在测定过程中有毒试剂氯仿进 收稿日期：２０１０—０３—１９ 作者简介：朱薇（１９８４一），女，云南省建水县人，硕士。重庆大学，研究 方向为水质分析。 行萃取，操作不便的缺点；高效液相色谱法使用仪器 较贵；荧光分析法如使用比较贵的荧光试剂会使其 应用受到限制；传感器法多采用酶生物传感器，酶极 易失活且价格昂贵，给实验及应用带来诸多不便。 这些方法都具有操作不便、耗时、耗物等缺点，且需 依赖大型仪器测定，不能满足当前对水质在线、远程 监测的新要求。 本文基于文献报道 ０Ｊ Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ反应的原理， 采用苯酚与硝普钠在有氨基的试剂盐酸羟胺存在 下，并在一定缓冲体系中发生Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ反应，氧化 剂硝普钠催化将氨与苯酚反应，生成靛酚染料，这 一染料可进行光谱测定，从而对苯酚进行测定。此 法操作简单方便，具有对苯酚选择性好，灵敏度高， 回收率高的优点，可用于对环境水中的苯酚进行快 速测定。 ．１４５・
水中挥发酚的测定
实验二 水中挥发酚的测定
一、实验目的
1、了解酚污染对水环境的影响。
2、 掌握用萃取比色法和直接光度法测定酚的原理和操作技术。
二、实验原理
酚是水体中的重要污染物，会影响水生生物的正常生长，使水产品发臭。水中酚含量超过0.3毫克/升时，可引起鱼类的回避。水体中酚的种类较多，部分酚可以挥发，本实验仅测定可被蒸馏的挥发酚。
在碱性条件和氧化剂铁氰化钾作用下，酚类与4-氨基安替比林反应，生成桔红色的吲哚酚安替比林染料，在510nm处有最大吸收。若用氯仿萃取此染料，可以增加颜色的稳定性，提高灵敏度，在460nm处有最大吸收。
该方法可测定苯酚及邻、间位取代的酚，但不能测定对位有取代基的酚。由于样品中各种酚的相对含量不同，因而不能提供一个含混合酚的通用标准。通常选用苯酚作标准，任何其它酚在反应中产生的颜色都看作苯酚的结果。取代酚一般会降低响应值，因此，用该方法测出的值仅代表水样中挥发酚的最低浓度。
三、仪器和试剂
1(721型分光光度计及1厘米和3厘米比色皿
2(500毫升全玻璃蒸馏器
3(无酚水
本实验均用无酚水，制备方法如下:
(1)置水于全玻璃磨口蒸馏器内，加氢氧化钠溶液至强碱性，滴加高锰酸钾溶液至深紫色，加热蒸馏，馏出液贮于硬质玻璃瓶中。 (2)于每升重蒸馏水中加入 0.2克活性炭，充分振摇，放置过夜，过滤，贮于硬质玻璃瓶中。
4(硫酸铜溶液
称取100克硫酸铜(CuSO?5HO)溶解于1升水中。 42
5(磷酸溶液
量取10.0毫升85%的磷酸溶液用水稀释至100毫升。
6(0.02M 溴酸钾-溴化钾溶液
称取3.2克无水溴酸钾溶于水中，加入10克溴化钾，溶解后移入1000毫升容量瓶内，稀释至刻度。
7(0.0250M硫代硫酸钠标准溶液
称取6.2克硫代硫酸钠，溶于1升煮沸后冷却的水中，加入0.4克氢氧化钠，贮于棕色瓶内，标定方法如下:
HJ744-2015⽔质酚类化合物的测定⽓相⾊谱-质谱法
中华⼈民共和国国家环境保护标准HJ744-2015⽔质酚类化合物的测定⽓相⾊谱-质谱法Waterquality—Determinationofphenolscompounds—Gaschromatographymassspectrometry
本电⼦版为发布稿。请以中国环境科学出版社出版的正式标准⽂本为准。2015-05-04发布2015-07-01实施
（发布稿）
环境保护部发布
i
⽬次前
⾔.......................................................................................................................................................................II1
适⽤范
围.............................................................................................................................................................12规范
性引⽤⽂件................................................................................................................................................13⽅
法原理.............................................................................................................................................................14
