无菌检验操作方法验证

无菌检查方法学验证1. 概述将规定量的供试品按无菌检查法中的薄膜过滤法进行操作,并接种小于100cfu 的试验菌,同时设置阳性对照,按规定温度培养3~5 天,与各相应的阳性对照管比较: 如含供试品各管中的试验菌均生长良好,则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用,可按此法进行供试品的无菌检查;如含供试品的任一管中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量或使用中和剂等方法消除供试品的抑菌作用,并再重新进行验证试验。

2. 验证前提条件供试品的选择原则:相同配方,不同规格的制品,选择其中装量最大的制品进行验证。

种类相同,含量不同的制品,选择含量最高的制品进行验证。

照此原则,多规格制品按下表选择供试品进行验证。

3. 验证方法3.1菌液制备3.1.1细菌菌液制备程序①取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的冻干菌种管各一支，分别在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后，吸出滴入营养琼脂斜面上,使均匀分布，置30~35C培养18h~24h。

用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于营养琼脂培养基斜面上，于30~35C培养18h~24h o 同法操作,培养得第3代培养物。

②取生抱梭菌的冻干菌种管一支,在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入胃酶肉肝疱斜面上,使均匀分布,置30~35C培养18h~24h o用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于胃酶肉肝疱斜面上，于30~ 35°C培养18h~24h。

取生抱梭菌的第二代新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35C培养18h~24h,得第3代培养物。

③分别取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的第3代营养琼脂斜面新鲜培养物，用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。

无菌检验 方法学验证方案辽宁爱母医疗科技有限公司 辽宁爱母医疗科技有限公司 2010 年 9 月1文件名称无菌检验方法学验证方案总页数文件编号起草部门起草人起草日期备注审核部门审核人审核意见审核日期生产技术部主管起草部门主管审批部门审批人审批意见审批日期总工办负责人质量部主管2目录 1、验证对象、范围及时间 2、目的 3、实施验证的人员分工及职责 4、可接受标准 5、验证操作方法 6、验证结论 7、结果分析与评价 8、漏项与偏差表 9、再验证周期 10、最终批准 11、附录31、验证对象及范围 本实验是关于产品无菌检查试验的验证。

参照《中国药典2005年版》二 部附录无菌检查方法进行试验。

结果采用直接接种法对人工污染的六种菌株 进行试验，产品对枯草芽孢杆菌、生孢梭菌有不同程度的抑菌作用。

采用薄 膜过滤法用0.9%氯化钠100mL进行样品稀释，然后用500mL的pH7.0氯化钠缓冲 液分几次冲洗，可消除其抑菌成分。

验证结果应显示对产品无菌试验方法。

2、目的 本方案的目的在于为分析评价无菌检验方法，以确认采用适宜的检验 方法。

3、实施验证的人员分工及职责表 1 无菌检验方法学验证小组职责分工验证职责 起草验证方案 起草验证报告 无菌检验方法学验证实施 检 验负责部门负责人审核验证方案和验证报告 批准验证方案和验证报告 4、接受标准 已对生化检验人员进行专业培训。

5、验证操作方法 5、1 概述 本产品为三类医疗器械无菌产品。

无菌检查法是对该产品质量控制的重要 检查项目，《2005年版药典》要求建立产品的无菌检查法时要进行方法学的 验证，来确认所采用的方法适用。

按照《中国药典2005年版》要求，以金葡4球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌，黑曲霉菌作 为实验菌种，对甲磺酸罗哌卡因注射液无菌检查方法进行了验证实验。

5、2 验证主要文件 文件名称 《无菌工作服管理规程》 《初始污染菌检验》 编号AM·SMP·De23-05-I实际情况5、3 无菌服洗衣消毒灭菌程序 适量 纯化水浸泡2 分钟加洗涤剂15 分钟 洗涤脱水0.1 新洁尔灭浸泡 15 分钟纯化水漂洗5 分钟 3 分钟消毒纯化水漂洗脱水121℃，30min晾干放入无菌袋灭菌放入传递窗 5、4 取样缓冲区指定地点将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在无菌服的门衣襟、袖上来回涂抹 10 次 （往返为一次）采样面积为 5cm×5cm，将棉拭子放入 10ml 灭菌生理盐水的试 管中。

医疗器械无菌检验方法验证方案一、背景医疗器械无菌检验是确保医疗器械在使用前不会引起感染的关键步骤之一。

为了保证无菌检验方法的准确性和有效性，需要进行方法验证。

本文将介绍医疗器械无菌检验方法验证的方案。

二、目的本方案的目的是验证所采用的无菌检验方法对医疗器械的适用性和可靠性。

通过验证，确保该无菌检验方法能够准确判断医疗器械是否符合无菌要求。

三、验证内容1. 确定验证属性：根据实际需求，确定无菌检验方法的验证属性，例如检测灵敏度、特异性、准确性、重复性等。

2. 样品选择：选择符合验证属性需求的医疗器械样品，确保样本具有代表性。

3. 测试方案设计：根据所选验证属性，设计相应的测试方案。

包括实验组和对照组的划分、对照方法选择、实验参数设定等。

4. 实验组和对照组：按照测试方案进行实验组和对照组的划分。

实验组使用待验证的无菌检验方法，对照组使用已经验证过的或国际标准的无菌检验方法。

5. 检测过程：按照测试方案进行样品的无菌检验。

确保检测过程中的操作规范和环境条件符合要求。

6. 数据分析：将实验结果进行分析，包括验证属性的计算和对比分析等。

使用合适的统计分析方法，评估无菌检验方法的准确性和可靠性。

7. 结果评估：根据数据分析的结果，对无菌检验方法进行评估。

判断该方法是否符合验证属性的要求。

8. 结论和建议：根据评估结果，给出无菌检验方法的结论和改进建议。

如发现验证方法存在不足之处，建议进行进一步的优化和改进。

四、质量控制在验证过程中，需要进行严格的质量控制。

包括实验设备的校准、环境条件的监测、操作流程的标准化等。

同时，还需要使用合格的正、负对照进行比对，确保验证结果的准确性和可靠性。

五、参考文献[1] 国家药品监督管理局.医疗器械无菌检验方法验证指导原则[S].2015.[2] International Organization for Standardization. ISO 11137-1:2006, Sterilization of health care products - Radiation - Part 1: Requirements for development, validation and routine control of a sterilization process for medical devices[S].六、结语医疗器械无菌检验方法验证是确保医疗器械安全使用的重要环节。

无菌检查方法验证：取本品，分别加灭菌注射用水 1ml 溶解，采用薄膜过滤法依法检查(中国药典 2022 年版二部附录Ⅺ H )，应符合规定。

菌液制备： 10 倍稀释法培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂斜面 培养基菌悬液制备计数结果菌种 代数 稀释级 菌落数(cfu/ml )枯草芽孢杆菌 4 10-6 61金黄色葡萄球菌 4 10-7 89大肠埃希菌 4 10-6 78生孢梭菌 4 10-6 67白色念珠菌 4 10-7 83黑曲霉菌 4 10-4 401、供试品处理将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注 入 1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。

2、检查阳性对照： 将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液 体培养基管中，在相应的温度下培养。

液体硫乙醇酸盐培养基管在 30-35℃下培菌种枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌 CMCC(B)44102生孢梭菌 CMCC(B)64941白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉菌 CMCC(F)98003菌悬液制备用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌少于 100cfu (菌落行程单 位)的菌悬液加入 5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将 孢子洗脱，再同上制成每 ml 含菌 小于 100cfu 的菌悬液养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。

观察记录。

阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。

液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。

观察记录。

样品 (薄膜过滤法)：每种实验菌取10 支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3 等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。

无菌检测操作方法
无菌检测是为了确定样品或设备是否受到污染，要求操作环境必须无菌。

以下是无菌检测的操作方法：
1. 操作环境准备：
- 洁净室或灭菌台上，配备必要的工具和试剂。

- 定期清洁操作环境，确保无菌状态。

- 使用无菌手套，操作前进行手部消毒。

2. 容器准备：
- 使用无菌器皿，如无菌培养皿或试管。

- 检查容器是否完整无损，无细菌生长。

3. 油门测试：
- 用无菌棉签蘸取试剂涂抹在试管内壁或培养皿表面。

- 打开灭菌台或安全柜的燃深度。

- 将试剂涂抹的试管或培养皿放入灭菌台或安全柜内，观察是否有细菌生长，如有则说明不符合无菌要求。

4. 空气检测：
- 使用无菌培养基或试剂，如无菌纱布。

- 打开灭菌台或安全柜的燃深度。

- 在工作区内垂直悬挂无菌纱布，晾晒一段时间。

- 观察无菌纱布是否有细菌生长，如有则说明不符合无菌要求。

5. 污染检测：
- 将待测样品或设备放入无菌培养皿或试管内。

- 加入无菌培养基或试剂。

- 将培养皿或试管加热灭菌，确保无菌状态。

- 在恰当的环境条件下，观察培养皿或试管内是否有细菌生长，如有则说明样品或设备受到污染。

注意事项：
- 执行无菌操作前，要确保自己已经经过培训并熟悉该操作。

- 操作要细致、准确，严格遵守操作规程。

- 每次操作之前、之中和之后都要进行无菌操作验证。

- 严禁将无菌操作用具与非无菌操作用具混放。

注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。

为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。

本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。

一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。

通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。

二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。

三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。

2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。

3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。

4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。

b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。

c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。

5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。

6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。

7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。

四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。

2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。

3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。

4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。

5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。

6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。

7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。

8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。

五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。

如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。

如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。

文件制修订记录1. 概述：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

本公司的无菌检查只是针对于灭菌注射用水的无菌检查。

灭菌注射用水灭菌工艺采用121℃30min过度杀菌法，按照2005年版《中国药典》的规定，注射剂的无菌检查应采用薄膜过滤法。

制定的《无菌检查法标准操作规程》（SOP4.14.038-B）应经过验证后，才能批准使用。

2. 验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。

即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。

3. 验证范围：适用于灭菌注射用水无菌检查法的验证。

4. 验证人员及职责质量部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质量部参与验证的实施及监督。

5. 文件准备和培训检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。

6.1. 无菌检查室空气净化系统已经过验证并合格，仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。

6.2. 供试品：3批，批号：批号：批号：6.3. 培养基及试剂：6.3.1. 试剂试液：氯化钠:临用前配成0.9%浓度的溶液，配制记录见附件1。

冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液，配制记录见附件2。

6.3.2. 培养基硫乙醇酸盐流体培养基生产厂家：批号：改良马丁培养基生产厂家：批号：营养肉汤培养基生产厂家：批号：改良马丁琼脂培养基生产厂家：批号：蛋白胨生产厂家：批号：培养基配制记录见附件3。

6.4. 验证用菌株：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】黑曲霉【CMCC（F）98003】购自：各验证用菌种传代记录见附件4。

6.5. 无菌检验仪器及相关设备：压力蒸汽灭菌器型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（细菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：生化培养箱（霉菌培养）型号：生产厂家：校验日期：有效期：7. 验证内容：7.1. 培养基无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。

无菌试验方法验证方案一、方案目的二、方案方法1.文献调研：通过查阅相关文献，了解无菌试验方法的原理、步骤和要求，确保验证方案与国际标准和法规相符合。

2.试验设计：根据文献调研结果，设计验证试验，包括试验目标、样品选择、试验参数和试验步骤等。

3.实验操作：按照试验设计的要求，进行实验操作。

包括准备无菌工作区、取样品、进行稀释等。

4.正负对照：设立正负对照组，以比较验证试验的准确性和可靠性。

正对照组应为已知无菌品，而负对照组为已知含有微生物的样品。

5.数据分析：对试验结果进行统计和分析，验证试验方法的灵敏度、特异性和重复性等指标。

6.结果判读：根据数据分析的结果，对试验方法的有效性进行判读，判断试验方法是否合格，进而确定是否需要对试验方法进行进一步优化或修改。

三、方案步骤以下是无菌试验方法验证的具体步骤：1.确定试验方法：根据国际标准和法规，选择适用的试验方法。

例如，可以选择滴定法、过滤法、涂布法等。

2.设计验证试验：根据试验方法的原理和要求，设计合适的试验方案。

包括样品的选择、试验参数的确定，以及试验步骤的规定等。

3.准备验证样品：准备无菌产品及相关样品，包括正对照组和负对照组。

正对照组为已知无菌产品，负对照组为已知微生物污染的样品。

4.实验操作：按照试验方案的要求，进行实验操作。

包括取样品、进行稀释、进行培养等。

5.结果分析：对试验结果进行统计和分析。

比较正对照组和负对照组的结果，计算验证试验的灵敏度、特异度、准确性等指标。

6.结果判读：根据结果分析的结果，判读试验方法的有效性。

如果验证试验结果与预期结果一致，并且达到规定的标准，则认为试验方法合格。

7.结果报告：将验证试验的结果进行记录和总结，并撰写验证报告。

报告中应包括试验方法的详细描述、试验步骤、结果数据和分析等内容。

四、方案要点1.样品选择：选择适当的样品进行验证，确保验证结果能够准确地反映真实情况。

2.试验参数：准确地确定试验方法的参数，包括培养时间、培养条件、培养基成分等。

无菌检查方法的验证无菌检查方法的验证无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要工程。

因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重要，而检查方法的验证是保证检查结果的公正、科学和准确的根底，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2022版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和容易发现问题的区域。

验证要求与方法无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。

前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。

如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。

再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。

通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。

这里，验证的重点环节包括：前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。

供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。

具体的验证方法如下：菌种的选择无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌 [CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。

无菌检查方法验证方案无菌检查是用来验证产品的无菌性的方法。

无菌性是指产品中不存在可繁殖的微生物。

无菌检查的目的是确保产品的安全性和质量，避免由于微生物污染而引起的感染或降低产品的有效性。

1.检测方法的选择：根据产品的特性和要求，选择合适的无菌检测方法。

常用的无菌检测方法包括微生物限度试验、膜过滤法、直接刨片法和填充法等。

2.样品准备：根据产品的特性和要求，合理选择样品的采集方法和数量。

样品的采集应在无菌条件下进行，以避免外部微生物的污染。

样品的存储和运输也需要符合无菌条件。

3.控制样品：准备一批已知无菌的样品作为正对照，以验证无菌检测方法的准确性和灵敏度。

正对照的准备应在无菌条件下进行，并进行相关记录。

4.负对照：准备一批已知含有可繁殖的微生物的样品作为负对照，以验证无菌检测方法的特异性和无菌性。

5.实验操作：根据选定的无菌检测方法，进行实验操作。

实验操作应在无菌条件下进行，包括无菌操作台、无菌培养基和无菌器具的使用。

所有操作人员都应接受相关的培训和认证。

6.试验结果的解释和判定：根据实验结果，判断样品是否无菌，并根据相应的标准和规范进行判定。

试验结果的解释和判定应由经过培训和认证的人员进行。

7.系统的记录和存档：对于每一次无菌检测，应记录实验过程、实验结果和相关的数据。

实验记录应具备可追溯性，便于审核和查找。

所有记录和相关数据应进行适当的存档，以备将来参考。

8.系统的验证：根据无菌检测方法验证方案的内容和要求，对整个无菌检测系统进行验证，包括设备、物料和人员。

验证应由专业的第三方机构进行，确保验证结果的客观性和可靠性。

验证结果和报告应进行适当的存档，以供将来参考。

以上就是一个完整的无菌检查方法验证方案。

通过合理的无菌检查方法验证方案的制定和实施，可以确保无菌检测的准确性和可靠性，保证产品的质量和安全性。

产品无菌检查方法验证方案无菌检查方法验证1.概述无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。

无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。

2.验证目的2.1确认所用的无菌检查方法适用于“本公司所有无菌产品”的无菌检查。

2.2确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。

2.3通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。

3.验证范围“本公司所有无菌产品”的无菌检查。

4.验证人员及职责验证委员会负责验证项目的确定；质控部负责该验证方案的起草及组织实施；验证小组负责验证方案的审批；质控部参与验证的实施及监督。

验证小组成员：5.文件准备和培训5.1检查验证所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。

5.2培训参加验证人员需进行本文件及下述内容的培训：微生物知识、无菌检查及微生物检验操作培训。

6.验证条件及验证时间安排6.1验证条件6.1.1检验公用系统验证及仪器安装完成；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。

6.1.2供试品3批①②③培养基及试剂：氯化钠：临用前配成0.9%浓度的溶液硫乙醇酸盐流体培养基批号：生产厂家：TSB 批号：生产厂家：6.1.3验证用菌株：微生物培养基质控品（来源：杭州微球科技有限公司）金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】菌种传代次数铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】生孢梭菌【CMCC（B）64941】白色念珠菌【CMCC（F）98001】6.1.4无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器型号：编号：生化培养箱型号：编号：霉菌培养箱型号：编号：超净工作台型号：编号：6.2验证时间验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。