外泌体研究一站式解决方案－丁香通

外泌体的新型疗法研究在过去的几年里，外泌体这一突然出现在科学家们研究领域中的新型分子引起了广泛的关注。

外泌体，是指一种由细胞释放出来的一种类似于小球体的物质，能够在体内传递信号分子、蛋白质等生物活性物质，具有独特的生物学功能，被认为是未来治疗疾病的一种新型策略。

近年来，众多研究表明，外泌体在治疗癌症、心脑血管疾病、神经退行性疾病等方面具有广泛的应用前景。

其中，外泌体作为一种新型疗法的开发和应用成为了研究者们关注的热点。

一、外泌体的来源和特性外泌体是细胞分泌的一种大小约为30-150 nm的膜囊泡，通常被划分为微泡体、多泡体和外泌体三种类型。

其中，外泌体是最为常见的类型。

外泌体最初被认识到是由细胞膜的内生皮囊泡状结构分泌出来的，是一种由细胞分泌的一种小型泡状结构，内含一定荷载生物活性物质，包括多种细胞因子、蛋白质、核酸等。

经过生物补体分解，并且发生作用，可促进细胞增殖，促进伤口愈合，治疗感染等多方面的作用。

外泌体最初被发现并研究是在20世纪80年代初期，它是由鳃组织的鲍鱼所分泌的一种胶状物质，叫做鲍鱼胶体（abalone nacre），也称为珍珠母质，后来人们发现这种物质不仅在鲍鱼中存在，还存在于各种生物体中，包括人类、植物、动物等等。

外泌体除了沉积在胞内空出的膜囊外，还可以在生物体间进行传递。

二、外泌体的疗法研究外泌体最独特的特性是它不仅能够把内部的生物功能分子传递给其他细胞，还能调控其内部的功能。

因此，外泌体被广泛应用于疾病治疗方面，特别是一些顽疾的治疗上，受到了研究者们的极大关注。

1. 癌症疗法在肿瘤治疗领域，外泌体的独特功能对于肿瘤细胞的生长、血管的生成和肿瘤细胞移行、转移等方面的控制具有非常重要的作用。

特别是在肺癌、乳腺癌、肝癌等社会污染的恶性疾病上，外泌体疗法在一些临床实践中逐渐得到重视。

例如，一些研究表明，通过引入外泌体的方式，可以有效地减少肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤转移的发生。

这主要是因为外泌体能够通过表面上的多种受体，识别并锁定靶向细胞，对其进行有效的抑制。

外泌体及其在心血管疾病发生发展中的作用研究进展外泌体（extracellular vesicles，EVs）是一类由细胞分泌的小型膜囊泡，其直径一般在30 nm至1 μm之间。

外泌体可以由多种细胞类型产生，包括心肌细胞、内皮细胞、血小板等。

外泌体中包含了细胞膜上的各种受体、蛋白质、RNA等，能够通过体内液体中的远距传递信息，发挥重要的调控作用。

近年来，研究发现外泌体在心血管疾病的发生发展中起到了重要的作用。

一方面，外泌体能够在心血管系统中传递信号分子，影响细胞的功能和代谢。

外泌体中的miRNA可以通过与胆固醇转运蛋白APOA1相互作用，调节胆固醇代谢和运输，进而影响血管壁的通透性和动脉粥样硬化的发生。

外泌体中的miRNA和蛋白质还可以通过靶向血管内皮细胞的转移，调节血管内皮功能，影响血栓形成和血管生成。

外泌体可以传递细胞应激状态下的分子信号，参与心血管系统的炎症和纤维化过程。

研究发现心肌细胞释放的外泌体中含有多种炎症因子和细胞因子，可以激活心肌纤维母细胞的炎症反应，促进心肌纤维化。

外泌体还能够在心肌缺血再灌注伤害中通过传递组织因子和细胞凋亡信号，参与心肌损伤和修复过程。

近年来的研究还发现，外泌体中的非编码RNA（Non-coding RNA，ncRNA）在心血管疾病中具有调控作用。

ncRNA包括长链非编码RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）和环状RNA（Circular RNA，circRNA）。

这些ncRNA可以通过外泌体释放进入体液循环，从而影响远处靶器官和组织的功能。

研究发现外泌体中的lncRNA H19可以通过miR-29b-3p靶向调节心血管疾病中的炎症反应和纤维化过程。

circRNA也被发现参与了心血管疾病的发生和发展，如circRNA-MHRT可作为心肌纤维化的抑制剂。

外泌体在心血管疾病的发生发展中起到了重要的调控作用。

研究外泌体及其中所含的信号分子有助于揭示心血管疾病的病理机制，为新型心血管疾病的诊断和治疗提供新的思路。

外泌体可行性研究报告一、研究背景外泌体是一种微小地囊泡，内含有蛋白质、核酸和细胞因子等生物活性分子，它们可以从细胞内排出，并再体内外传递信号，参与多种生理和病理过程。

近年来，外泌体因其再疾病诊断、治疗和生物医药领域地潜再应用价值受倒了广泛关注。

二、研究目地本研究旨再探究外泌体再生物医药领域中地可行性，评估其作为潜再治疗手段和疾病诊断地可行性，并探讨其再临床应用中地潜力和挑战。

三、研究方法1.外泌体地分离与纯化首先，从细胞培养上清液或组织样本中分离外泌体，然后通过超速离心、超滤等方法将外泌体纯化。

2.外泌体地表征和鉴定通过电镜、流试细胞术等技术对外泌体进行形态学和生物学特性地鉴定，以确保分离地颗粒为外泌体。

3.外泌体地功能研究进一步研究外泌体携带地生物活性分子再细胞间通讯、免疫调节、细胞增殖及凋亡等过程中地作用机制。

四、研究结果1.外泌体作为治疗手段地可行性研究结果显示，外泌体携带地生物活性分子可通过调节炎症反应、促进修复等途径发挥治疗作用，为某些疾病地治疗提供了新思路。

2.外泌体再疾病诊断中地潜力外泌体特异性携带地标志性分子可作为疾病地生物标志物，有助于早期诊断和疾病监测。

3.外泌体再基因治疗中地应用前景外泌体能够稳定载体核酸并再细胞内释放，为基因治疗提供了一种新地途径。

五、研究结论外泌体作为一种俱有广阔应用前景地生物纳米颗粒，俱有再治疗、诊断和基因治疗等领域中地重要作用。

但再临床应用过程中仍须进一步解决其产量、纯化、标准化和存储等方面地挑战，以推动其转化为临床实践中地有效工俱。

六、拓展研究方向末来地研究可以着重探讨外泌体再特定疾病治疗中地机制及效果、开发外泌体作为药物传递系统、构建外泌体工程等方面地研究。

总结：外泌体作为一种新型地生物纳米颗粒，再生物医药领域中俱有巨大地应用潜力，本研究对外泌体地可行性进行了初步地探究与评估，为末来该领域地深入研究提供了参考和借鉴。

网络出版时间：２０２３－１０－３０１９：３８：４０　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３１０２７．１５２９．００４外泌体在肺部疾病中的研究进展黄　宁１，２，胡长平１，３（１．中南大学湘雅药学院药理学系，湖南长沙　４１００７８；２．郑州大学第一附属医院药学部，河南郑州　４５００５２；３．心血管研究湖南省重点实验室，湖南长沙　４１００７８）收稿日期：２０２３－０３－２９，修回日期：２０２３－０６－１７基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８２１７３８１７）作者简介：黄　宁（１９９２－），女，博士生，研究方向：心血管药理，Ｅｍａｉｌ：ｎｈｕａｎｇ２０２１＠１６３．ｃｏｍ；胡长平（１９６９－），男，博士，教授，研究方向：心血管药理，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｈｕｃｈａｎｇｐｉｎｇ＠ｃｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０４１３６文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）１１－２００６－０６中国图书分类号：Ｒ ０５；Ｒ３２９．２４；Ｒ５４４；Ｒ５６３；Ｒ５６２ ２５；Ｒ７３４ ２摘要：多种细胞可分泌外泌体，外泌体含有丰富的内容物（包括蛋白质、脂质及核酸）。

生理和病理条件下，外泌体及其内容物可介导细胞间物质传递与信号转导，参与细胞增殖与凋亡、迁移与分化、肿瘤侵袭与转移、炎症反应等过程。

研究表明，外泌体可参与多种肺部疾病的病理进程，外泌体及其内容物可以作为肺部疾病诊断、治疗及预后的新靶点。

因此，外泌体在肺部疾病中具有广泛的临床应用潜能。

关键词：外泌体；肺动脉高压；慢性阻塞性肺疾病；哮喘；肺癌开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）： 外泌体（ｅｘｏｓｏｍｅｓ）是细胞膜向内凹陷形成包含管腔小体的多囊泡体，并通过与细胞膜融合释放到细胞外，形成异质性细胞外囊泡（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓ，ＥＶｓ），异质性体现在其细胞起源、大小、内容物和对靶细胞的作用。

外泌体提取和鉴定介绍
外泌体是细胞分泌的一种小囊泡，直径在30-150 纳米之间，含有多种生物分子，如蛋白质、核酸、脂质等。

它们在细胞间通讯、疾病诊断和治疗等方面具有重要的作用。

外泌体的提取通常需要使用特殊的方法，以确保其纯度和完整性。

常见的提取方法包括超速离心、超滤、免疫亲和层析等。

这些方法可以根据外泌体的大小、表面标志物或其他特性进行分离和纯化。

鉴定外泌体的方法也有很多种。

其中一些常见的方法包括：
- 电子显微镜：观察外泌体的形态和大小。

- Western blot：检测外泌体表面标志物或内含物的蛋白质。

- 纳米颗粒跟踪分析：测量外泌体的粒径分布和浓度。

- 流式细胞术：根据外泌体的表面标志物进行分选和定量。

此外，还可以通过检测外泌体中的RNA 或DNA 来进一步分析其内容和功能。

这些鉴定方法可以帮助确定所提取的物质是否为真正的外泌体，并提供有关其特性和功能的信息。

需要注意的是，外泌体的研究仍然是一个相对较新的领域，不同的实验方法和技术可能会有所差异。

在进行外泌体提取和鉴定时，最好根
据具体的研究目的和实验条件选择合适的方法，并结合多种技术进行综合分析。

答疑系列之⼆：外泌体测序及分析常见问题未来⼀周⽓温短暂回升，起床难、穿⾐难、出⾏难这都不是问题了！是时候帮你解决⼀下课题难的问题了，继上期转录组测序及分析常见问题答疑系列之后，今天我们来看看外泌体研究中的注意事项。

样本篇Q1：外泌体测序对RNA 样品量有什么要求吗？A1: 外泌体测序针对不同的测序项⽬有不同的要求，具体如下：外泌体测序类型RNA 总量RNA 质量sRNA 测序>20ng 浓度 1ng/uL ，2100检测在25-200nt 长度范围有峰LncRNA 测序>30ng 全转录组测序>50ngQ1：外泌体测序对⽣物样品有什么要求吗？A1: 根据多年的外泌体项⽬经验，发现不同类型的⽣物样本，所需要⽣物样本的体积差别很⼤，具体要求如下：样本类型体积备注⾎清/⾎浆2-4mL ⼀般情况下，患者体液中外泌体的数量多于正常⼈尿液50-80mL 乳汁10-20mL 脑脊液5-10mL 细胞培养液50-200mL 不同细胞系，分泌外泌体的能⼒不同注：1）奥维森也可以提供外泌体富集服务，⾎清/⾎浆/乳汁/脑脊液优先采⽤试剂盒法，尿液和细胞培养液优先采取超速离⼼法；2）对于⾎⼩板外泌体、组织中外泌体等特殊样本，需要客户⾃⼰富集外泌体。

Q1：客户做外泌体研究时，⼀般⽤⾎浆还是⾎清？A1: ⾎清是⾎液凝固之后的上层液体，所以其中少了纤维蛋⽩原，凝⾎因⼦，多了很多凝⾎产物。

纤维蛋⽩原可转化为纤维蛋⽩，具有凝⾎功能。

在凝⾎过程中⾎⼩板会分泌⼤量的外泌体，有研究发现⾎清中有接近50%的外泌体来⾃额外的分泌。

⾎浆=⾎液-⾎细胞⾎清=⾎浆-纤维蛋⽩原-凝⾎因⼦所以⼀般实验选择⾎浆，在特殊情况下，如研究与⾎⼩板相关的疾病的时候，当然是⾎清更适合。

福利：福利：奥维森团队制作了《外泌体采样⽅案》，详细讲解各种样本的采样⽅法和送样标准，感兴趣的⼩伙伴可以留下邮箱，⼩编私发给你哦！测序分析篇Q1：外泌体sRNA测序，采取什么策略？A1:外泌体RNA特点，含量低（1-8ng/mL ⾎浆），⽚段短（25-200nt），以small RNA为主，含有少量rRNA /lncRNA/circRNA。

外泌体分离及纯化方法我折腾了好久外泌体分离及纯化方法，总算找到点门道。

我一开始纯粹是瞎摸索。

最开始尝试的是超速离心法。

这就像是一场速度的竞赛，你得让那些外泌体在高速旋转下和其他物质分离开。

我当时设置离心机转速的时候可谨慎了，一边看着说明书，一边还担心会不会出啥差错。

这过程中，转速不能太快也不能太慢，就好像你在走钢丝一样，得找到那个平衡点。

我刚开始就弄错了转速，按照自己的想当然来了一次，结果嘛，根本没分离出啥有效东西，那一次算是彻底失败了。

后来仔细研究了好多文献资料，就像翻老祖宗的宝贝箱子一样，一个一个查看，才又重新尝试，成功分离出来一部分外泌体，但这个方法操作起来真的超级麻烦，稍微有个数据没调好，就可能功亏一篑。

我也试过沉淀法。

这个就像把水里的沙子和泥土沉淀下去一样，通过加一些特定的试剂，让外泌体沉淀。

但是这里头学问也大。

我记得刚开始没选对合适的试剂量，加得太多或者太少，得到的外泌体要么纯度不行，要么量少得可怜。

而且试剂和样本的混合我当时也没掌握好技巧，就直接倒进去搅和了一下，现在想想真是太草率了。

后来还试着从试剂盒里找办法。

那些试剂盒号称操作简单，就像组合玩具一样，只要按照步骤来就可以。

可是实际用起来发现也不是想象中的那么顺利。

有时候试剂盒的配套仪器没能校准好，又得重新开始，浪费不少样本。

说起来还有超滤法。

这就像是通过一道一道筛子，把外泌体筛出来。

但是这个筛子的孔径啥的得选好。

我有次选错了孔径的超滤膜，根本就没办法把杂质和外泌体有效分开。

而且在不同样本里面，这个孔径的选择可能还得有点小调整。

我觉得要是想做好外泌体的分离和纯化得小心再小心。

要是没有经验的话，像我最开始那样，得做好多次尝试失败的准备。

每一次失败其实都是在积累经验，你在分析为啥失败的时候，肯定能学到不少东西。

而且不管用啥方法，都得严格按照操作步骤来，千万别学我刚开始那样自己瞎搞。

外泌体在宫腔粘连中的作用机制研究进展作者：潘重免归楠楠梁月秀来源：《右江医学》2024年第06期【关键词】外泌体；宫腔粘连；作用机制中图分类号：R711.7 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2024.06.015宫腔粘连（intrauterine adhesions，IUA）是宫腔良性疾病，但治疗的效果较差，对生育功能影响较大，严重影响女性的生殖生理及身心健康。

IUA发生的主要病理机制是子宫内膜纤维化和瘢痕形成［1］。

目前主要以手术治疗为主，但中、重度IUA因粘连紧密，术后约有60%的机会宫腔再粘连［2］，因此术后的辅助治疗很关键，研究者们提出激素、干细胞、宫内节育器、子宫球囊支架、子宫内膜类器官等方法［3-7］。

外泌体（EVs）是一种细胞外囊泡，广泛分布在尿液、血液、母乳和唾液等体液中［8］，EVs经胞吐作用从细胞中分泌出来，通过在不同细胞间转运因子和调节受体细胞中的生物途径参与多种生理和病理过程，如炎症、免疫紊乱、神经系统疾病和癌症［9］。

已有研究表明，EVs与IUA之间存在相关性，但确切的机制尚未明了，本综述旨在探讨EVs在IUA中的作用机制及研究进展。

1 EVs的概述EVs是一种细胞外小囊泡，具有30～150 nm厚度的脂质双层结构［10］，几乎所有的哺乳动物细胞类型均可分泌，虽然来源分布各不相同，但电镜下均为典型的杯状结构［11］。

EVs最初是在1978年由FRIEND及其同事发现［12］，之后逐渐在小鼠和猪的实验中证实存在［13-14］。

仅仅20年后，就被正式证明EVs不仅存在，而且还可以通过促进血管生成、肿瘤侵袭和免疫逃逸来影响肿瘤进展［15］。

不仅在肿瘤研究上发现EVs，早期也发现在孕妇体内EVs水平高于正常女性，与孕妇体内胎盘分泌EVs有关，这也为发育中的胎儿建立免疫特权［16］。

这些发现也使EVs在女性生殖系统中的研究逐渐增多。

有学者发现奶牛的早期胚胎丢失率很高，在研究奶牛子宫内膜功能时发现子宫内膜上皮细胞能分泌EVs，是奶牛成功妊娠所必需的［17］，之后很多学者在牛、羊等的子宫内膜中均发现有EVs［18-19］。

外泌体在细胞间信号传递和细胞外纳米技术中的研究随着科技的不断进步，人们对于疾病的认识和治疗方法不断地创新和更新。

其中，细胞外纳米技术越来越成为人们研究疾病和治疗疾病的重要手段。

而外泌体，作为一种新型的细胞外纳米体，也引起了学者们的极大兴趣。

外泌体是由细胞内分泌物质包裹在细胞膜中形成的一种细胞外囊泡，具有极小的直径和高度保密性等特性。

近年来，研究表明外泌体可以在细胞间进行信号传递，并且对许多疾病的发生和发展发挥作用。

外泌体在细胞间信号传递中的作用外泌体能够在细胞间传递信号物质，以调控生物学过程。

这些信号物质可以包括蛋白质、DNA、RNA等。

其中，RNA是外泌体中最为常见的信号物质。

目前，研究表明外泌体在许多疾病的发生和发展过程中扮演着重要的角色，如肿瘤、中风、阿尔茨海默病等。

例如，在肿瘤细胞中，外泌体可以传递上皮生长因子（EGF）以及其他生长因子和透明质酸（HA），从而改变周围细胞的行为，促进肿瘤的发展。

在中风和阿尔茨海默病中，外泌体可以释放出调节神经元保护和修复的信号物质，从而有助于改善神经退行性疾病的症状。

以癌症为例，因为外泌体在癌症中的作用较多，所以外泌体的分离特别引人关注。

研究指出，外泌体中的 RNA 占其总量的 70%~90%，并且在不同种类的癌症中外泌体释放的 RNA 的含量和种类也有所不同。

利用这一原理，可以通过分离和分析外泌体中的 RNA，筛选出癌症早期预防和诊断的新型生物标志物。

外泌体在细胞外纳米技术中的应用除了在细胞间信号传递中的应用外，外泌体在细胞外纳米技术中也有着广泛的应用。

在治疗各种疾病时，外泌体可以作为一种新型的治疗药物载体。

通常，治疗药物需要在体内达到特定的浓度才能发挥作用，但是给药剂量过大会导致药物毒性和副作用的增加。

而外泌体可以封闭药物，并且能够在体内穿越各种组织和细胞屏障，以达到特定部位，从而降低药物剂量和副作用的风险。

目前，外泌体作为治疗药物载体的研究已经涉及多种疾病，如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等。

外泌体科学研究策略与方法外泌体（extracellular vesicles）是一类由细胞分泌的小型膜囊泡，具有丰富的生物大分子（如蛋白质、核酸和代谢产物等）和受体分子，能够通过体液循环进入其他细胞并调控其状态。

外泌体作为一种新兴的细胞间通讯方式，已经在生物学和医学研究中受到广泛关注。

为了深入研究外泌体的功能和应用价值，科学家们采用了一系列研究策略和方法。

首先，外泌体的纯化和鉴定是外泌体研究的基础。

目前常用的外泌体纯化方法包括超速离心、滤膜浓缩、亲和析取和尺寸排除等。

其中，超速离心是最常用的方法，通过连续离心将外泌体从细胞碎片、蛋白质聚集体和其他细胞分泌物中分离出来。

纯化后的外泌体可以通过电镜观察其形态和大小，并通过蛋白质和核酸的检测确认其特征标志物。

其次，外泌体内的生物大分子是外泌体功能的关键。

外泌体中的蛋白质、核酸和代谢产物等分子可以通过质谱分析、RNA测序、代谢组学等方法进行全面的分析。

通过对外泌体中的蛋白质组学的研究，可以鉴定外泌体特有的标志物，并推测其功能和信号通路。

通过外泌体中的RNA测序，可以发现外泌体携带的mRNA和miRNA，了解其在细胞间通讯中的作用。

通过代谢组学的研究，可以分析外泌体携带的代谢产物，揭示其在代谢调控中的作用。

第三，外泌体功能研究是外泌体研究的重点之一、外泌体功能研究主要包括外泌体的分泌机制、目标细胞的识别和摄取、信号传递和功能调控等方面。

通过抑制外泌体分泌的相关因子，可以阻断外泌体的释放，从而探究外泌体的分泌机制。

通过标记外泌体表面的受体和底物，可以观察其在目标细胞上的相互作用和摄取情况。

通过干预外泌体释放和摄取的相关蛋白质和信号通路，可以揭示外泌体在细胞间通讯中的功能和调控机制。

最后，外泌体在生理和病理过程中的应用是外泌体研究的重要方向之一、外泌体作为一种重要的细胞间信号载体，可以通过改变外泌体的组成和功能来调控细胞的生理状态。

通过人工制备外泌体，可以将特定的蛋白质、核酸和药物等载体到外泌体中，改变外泌体的功能并进一步实现治疗效果。

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡（30-150nm），现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。

其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

现已证实可以分泌外泌体的细胞有：肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、肿瘤细胞、间充质干细胞等。

外泌体在免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。

同时，不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。

1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。

其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。

有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。

外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。

由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。

外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。

据了解，目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离：1.超速离心法（差速离心）超离法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行（如图所示），可分离到大小相近的囊泡颗粒。

外泌体国基金技术路线
外泌体国基金技术路线主要围绕外泌体的制备、功能研究和应用展开。

以下是一些关键步骤和技术路线：
1.外泌体的提取和纯化：从细胞培养上清液或生物样本中提取外泌体，并通过差速离心、密度梯度离心或超滤等方法进行纯化。

2.外泌体的鉴定：通过透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析、流式细胞仪等技术手段对外泌体进行形态、大小和表面标记物的鉴定。

3.外泌体的功能研究：通过体外实验和体内实验，研究外泌体在细胞间通讯、免疫调节、肿瘤进展等方面的作用。

利用分子生物学技术，如RT-PCR、Western Blot等，分析外泌体中的RNA、蛋白质等生物活性成分。

4.外泌体的应用：探索外泌体在疾病诊断、治疗和预防等方面的应用。

例如，利用外泌体作为药物递送系统，将药物或基因治疗载体包装在外泌体中，实现靶向治疗和个性化治疗。

在外泌体国基金技术路线中，还需要考虑以下几个方面：
1.研究问题的选择：结合外泌体的特性和研究热点，选择具有创新性和实用性的研究问题，如外泌体在肿瘤免疫治疗、神经退行性疾病中的作用等。

2.实验设计和方法：合理设计实验方案，选择适当的实验方法和技术手段，确保实验结果的可靠性和准确性。

3.数据分析和解读：对实验结果进行科学合理的数据分析和解读，提取有价值的信息和结论，为外泌体的研究和应用提供有力支持。

总之，外泌体国基金技术路线需要综合考虑外泌体的提取纯化、鉴定、功能研究和应用等方面，选择合适的实验方法和技术手段，以实现外泌体的基础研究和应用转化。

外泌体的研究进展于歌;谢风【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2017(021)012【总页数】3页(P2206-2208)【作者】于歌;谢风【作者单位】吉林大学中日联谊医院检验科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院检验科,吉林长春 130033【正文语种】中文外泌体是一种囊性小泡，其本质是脂质双分子层，它是细胞通过主动分泌作用产生并排出胞外的。

外泌体在细胞间的信息交流以及物质传递方面均发挥着及其重要的作用，而随着医疗技术水平日益完善，使得外泌体在疾病的早期诊断、临床治疗及其预后中发挥不可或缺的作用。

本文就现阶段外泌体的研究进展及临床实际应用进行简要综述。

外泌体(Exosomes，EVs) ，是细胞通过内吞-融合-外排等一系列生物学机制产生并通过主动分泌作用排出细胞外的囊性小泡，其本质是脂质双分子层[1]。

外泌体的细胞来源，以及其内部的蛋白质含量决定了它的密度。

一般来说，外泌体的分子直径约为25- 95 nm。

外泌体形态呈杯型或双凹碟型，但在人体体液中呈球状[2]。

1983年，约翰斯通初次在绵羊的网织红细胞上发现了外泌体，它被定义为转铁蛋白受体的排泄通道。

而在之后的研究过程中，惊讶的发现淋巴B细胞中也存在这种囊性小泡，并在淋巴T细胞的增值分化中有重要作用，它甚至可以抑制肿瘤的生长发育[4]。

而后在外周血、脑脊液、尿液等人体各种体液中陆续发现了外泌体的存在[5]，这使得外泌体来源方面取得了新进展，验证了其可由不同细胞产生并释放的生物学特点[6]。

而经由不同细胞分泌的外泌体含有不同的生物学功能，如免疫调节、凝血功能、增值分化、细胞迁移、以及介导细胞间的物质传递及交流作用等。

细胞分泌的膜性囊泡有多种存在形式，如外泌体、凋亡小体，以及脱落微球。

外泌体内含有miRNA，以及各种蛋白成分，参与调节细胞各项生理功能。

而其后的研究证明其不仅在正常细胞内发挥作用，外泌体及其内部成分也广泛指导肿瘤细胞的生长发育，但值得注意的是，外泌体均不含有DNA成分[7]。

植物外泌体验证方法说实话植物外泌体验证方法这事，我一开始也是瞎摸索。

我最先尝试的是超速离心法，想着把植物组织弄碎了，然后就像淘米一样，通过高速旋转把外泌体从一堆东西里分离出来。

那过程可繁琐了，得先把植物材料处理好，又是研磨又是过滤的。

好不容易到离心这步，转速的设置就很让人头疼。

我一开始设置的转速不对，要么没有把外泌体完全分离出来，要么就是把其他不该分出来的东西也弄出来了。

这就好比咱们筛沙子，孔太大了沙子全漏下去了，孔太小了大石头也留在上面了。

后来查了好多资料才慢慢找准了一个比较合适的转速范围。

再就是用电镜观察法。

这个就是去看外泌体的形态啥的。

但问题是标本制备不容易啊，就像给小娃娃拍照，得把它们精心打扮一番才能上镜。

我最开始做标本的时候老容易让外泌体变形或者破坏了，那拍出来的照片根本没法看。

后来我开始小心翼翼地对每一个步骤进行微调，像小心地把样品滴到载网上，滴的量都得控制好，多了不行少了也不行。

而且染色也很关键，就像给外泌体穿合适的衣服，颜色不对或者染得不均匀那都不行。

还有就是用纳米粒子跟踪分析法，这就是去跟踪外泌体在溶液里跑来跑去的状态。

这当中使用仪器我感觉就像驾驭一头不听话的小牛，好多参数得要调整，而且仪器也需要定期校准，我刚入手的时候没太注意校准这回事，结果数据老是不准确。

我还试过用蛋白标记法。

我觉得这个有点像给外泌体挂上小牌子，让我们更容易识别它。

但是蛋白标志物选择上很有讲究啊，我一开始选了个觉得可能行的蛋白来标记，结果发现这个蛋白在其他一些细胞结构里也存在，闹了个大乌龙。

后来就慢慢去筛选那些特异度比较高的蛋白。

我觉得植物外泌体验证方法最关键的就是要每一步都细致，多做对比试验，像如果用超速离心法分离出来了，再用电镜直接看看这是不是咱想要的外泌体。

我到现在也不敢说自己完全掌握了，还在不断摸索。

不过以上这些都是我实践过程中的经验，希望能有点用。

像我做超速离心的时候，植物材料的选取和预处理也很重要。

人造外泌体治疗心肌梗死：应用现状及前景刘瀚峰;王晶晶;余云生【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2024(28)7【摘要】背景:心肌梗死是目前最严重的心血管疾病之一,现有的临床治疗方案如溶栓治疗、经皮冠状动脉介入治疗和冠状动脉旁路移植术均无法完全恢复缺血造成的心肌损伤。

干细胞来源的外泌体治疗心肌梗死是近年来的研究热点,但天然来源的外泌体产量少,获取难度大、耗时长、归巢效果不佳等限制了其临床应用。

在这种情况下,构建人造外泌体作为天然外泌体的替代品已成为解决上述问题的有效策略。

目的:阐述人造外泌体在治疗心肌梗死中的研究现状,将其分为半人造和全人造两种设计模式,就两种模式的研究进展及存在的问题展开讨论,最后对其在未来的临床应用做出评价和展望。

方法:以“人造外泌体,心肌梗死,工程化”为中文检索词,以“artificial exosome,hybrid exosome,myocardialinfarction,nanoparticle,drug delivery system”为英文检索词,检索PubMed和中国知网数据库的相关文献。

检索时限重点为2017年1月至2022年12月,同时纳入部分经典远期文献。

通过阅读文题和摘要进行初步筛选;排除重复性研究、低质量期刊及内容不相关的文献,最后纳入73篇文献进行综述。

结果与结论:(1)通过半人造改造外泌体的方式,不论是靶向肽段的修饰、生物膜的杂交或是磁力物质的辅助,均改善了传统的外泌体疗法靶向性不足、驻留率低、易被网状内皮系统所清除等缺陷,提高了传统外泌体治疗心肌梗死的效率,但是这些改造策略存在修饰效率不明确、医学伦理以及生物毒性等方面的问题。

(2)全人造仿生外泌体相对于外泌体的改造,其设计自由度较高,可以解决天然来源外泌体提取存储难度高、规模化生产局限等问题,然而全人造外泌体的改造策略目前仍缺少可靠的临床前数据支持与生物安全性的检测,尚未形成规模化生产所需的标准化流程,因此在应用到临床以前,作为替代天然外泌体的人造外泌体方案仍需要科研人员进行持续深入研究。