下载文档原格式
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
实验目的：对黄酮类物质进行分离和纯化，以获得高纯度的黄酮类化合物。
实验步骤：
1.将黄酮类植物材料加入适量的乙醇中，进行浸提。
2.过滤浸提液，得到植物材料的提取液。
3.将提取液转入蒸发器中，进行蒸发浓缩。
4.将浓缩液溶解于适量的无水乙醚中，进行萃取。
5.分取有色相的有机相液体。
6.用饱和盐酸溶液，使有机相与无水乙醚中的黄酮类物质发生转化反应。
7.经过酸化反应后，形成无色的无机酸盐。
8.用横向冷冻离心机进行冷冻离心，分离提取的黄酮类物质。
9.将离心沉淀物重新溶解于适量的去离子水中。
10.通过制备薄层层析法或者柱层析法对黄酮类物质进行进一步的分离和纯化。
11.通过紫外可见分光光度计检测黄酮类物质的纯度。
实验结果：
根据实验结果，我们成功地得到了一种高纯度的黄酮类化合物。
该化合物的纯度通过紫外可见分光光度计检测，纯度较高。
讨论和结论：
通过本次实验，我们成功地分离纯化了黄酮类物质。
该实验证明了所使用的方法在分离黄酮类物质方面的有效性。
此外，我们还可以利用其他分离纯化方法，如色谱法或逆流法等，进一步提高黄酮类物质的纯度。
然而，尽管我们得到了高纯度的黄酮类化合物，但该实验结果仅表示特定工作条件下的实验结果，并不能保证在不同条件下得到相同的结果。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的方法和条件进行黄酮类物质的分离纯化。
总之，本次实验成功地分离纯化了黄酮类物质，并得到了高纯度的黄酮类化合物。
该实验结果将有助于我们进一步研究和应用黄酮类物质。
黄酮含量测定的方法
黄酮是一类天然的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗癌等作用。
因此，测定黄酮含量是对植物提取物、草药或食物中黄酮类化合物进行研究和评价的重要手段。
目前常用的黄酮含量测定方法包括色谱法、分光光度法和高效液相色谱法等。
1. 色谱法：色谱法常用的分离技术有薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（GC）。
其中TLC常用于初步筛选和分离样品中的黄酮类化合物，GC常用于定量分析。
2. 分光光度法：分光光度法是通过黄酮类化合物吸收特定波长处的紫外光来间接测定其含量。
这种方法简单、快速，但对样品的成分和色素的影响较大。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是目前最常用的分析方法。
通过选择合适的柱型、流动相和检测波长，可以实现对不同黄酮类化合物的分离和定量。
此外，还可以结合质谱（MS）等技术，用于黄酮类化合物的结构鉴定和定量分析。
需要注意的是，不同的黄酮类化合物在不同的测定方法中可能表现出不同的灵敏度和选择性，因此在选择测定方法时需要考虑到样品中的主要成分和相关性质。
同时，还应注意样品的前处理、提取和色谱条件等因素，以获得准确可靠的测定结果。
一、溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。
溶剂系统主要有乙醇，水溶液、丙酮-水溶液、NaOH-水溶液、NaOH-乙醇等。
精提物常在粗提物制备基础上精制，常用液-液提取法、沉淀法和吸附．洗脱法。
以60％丙酮为起始溶剂粗提取，再脱脂、去银杏酚酸等15道工艺制成提取物。
NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之，正丁醇萃取水溶液中银杏黄酮苷，获得最佳萃取条件为萃取5 min温度60℃4次，萃取物中黄酮苷含量为57％。
V水：V正丙醇=1:25最佳。
银杏叶精提物树脂吸附纯化法以石油醚回流提取，再以80％乙醇回流提取，减压浓缩，新型澄清剂沉降，树脂分级吸附，pH值为3—4酸水和酸性25％乙醇洗涤，75％乙醇洗脱，喷雾干燥将银杏叶洗净，于60℃烘干至恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中恒重，粉碎，过50目筛。
称取粉末25 g，置于索氏提取器中加入60％乙醇至250．0 ml，80℃下回流提取3．0 h，蒸馏回收乙醇，并用活性炭脱色，得银杏叶黄酮提取物。
乙醇浓度为50％一70％时,提取率随浓度增加提高，当浓度70％时提取率达最大。
随水浴温度升高总黄酮提取率快速增加。
当温度80℃时提取率达最大。
提取时间为三小时为佳。
黄酮类化合物（英语：Flavonoid，又称类黄酮[1]）是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，现在则泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接的一系列化合物。
他们来自于水果、蔬菜、茶、葡萄酒、种子或是植物根。
虽然他们不被认为是维生素，但是在生物体内的反应里，被认为有营养功能，曾被称为“维生素P”：黄酮类（英语：Flavones）是一类基于2-苯基色原酮-4-酮（2-苯基-1-苯并吡喃-4-酮）骨架的黄酮类化合物，如右图所示。
银杏叶黄酮的研究程序溶剂提取法：国内外使用最广泛的方法，步骤多、周期长、产率低、产品中有机溶剂易残留。
黄酮类化合物的提取黄酮类化合物是一类具有重要药用价值的天然产物，其具有抗氧化、抗炎、降血压、降血脂等多种生物活性。
因此，黄酮类化合物的提取和分离一直是天然药物研究领域的热点之一。
本文将从黄酮类化合物的来源、提取方法以及提取过程中的优化等方面进行详细介绍。
一、黄酮类化合物的来源黄酮类化合物广泛存在于植物中，包括花、果实、叶子等部位。
其中，柑橘属植物中含有较为丰富的黄酮类化合物，如柚皮中含有丰富的柚皮素和橙皮素等。
此外，苦楝属植物也是黄酮类化合物的重要来源之一，如苦楝素和芦丁等。
二、黄酮类化合物的提取方法1.传统提取方法传统提取方法主要包括水浸提法、乙醇浸提法和超声波辅助浸提法等。
（1）水浸提法水浸提法是最为简单的提取方法之一，其操作简单、成本低廉。
但是，由于黄酮类化合物在水中的溶解度较低，因此水浸提法提取效率较低。
（2）乙醇浸提法乙醇浸提法是常用的黄酮类化合物提取方法之一。
乙醇具有良好的溶解性和挥发性，可有效地溶解黄酮类化合物。
但是，乙醇浸提法存在一定的毒性和燃爆风险。
（3）超声波辅助浸提法超声波辅助浸提法是一种新型的黄酮类化合物提取方法。
其利用超声波对植物细胞壁进行破碎，从而促进黄酮类化合物的释放和溶解。
该方法具有操作简单、高效快捷等优点。
2.现代提取方法现代提取方法主要包括超临界流体萃取法、微波辅助萃取法和固相萃取法等。
（1）超临界流体萃取法超临界流体萃取法是目前最为先进的黄酮类化合物提取方法之一。
其利用超临界流体对植物组织进行萃取，具有高效、环保等特点。
（2）微波辅助萃取法微波辅助萃取法是一种快速高效的黄酮类化合物提取方法。
其利用微波加热对植物组织进行破碎和溶解，具有操作简单、高效快捷等优点。
（3）固相萃取法固相萃取法是一种基于化学吸附原理的黄酮类化合物提取方法。
其利用具有亲和力的固相材料对黄酮类化合物进行选择性吸附，从而实现分离和提纯。
三、黄酮类化合物提取过程中的优化1.影响因素影响黄酮类化合物提取效率的因素主要包括原料质量、溶剂种类、浸提时间、浸提温度等。
收稿日期:2007205225作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药.第24卷第5期周口师范学院学报2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007黄酮类化合物提取和分离方法研究进展梁 丹1,张保东2(1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001)摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高.1 黄酮类化合物提取方法的研究进展1.1 按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取.(3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟基,易溶于碱水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简便易行,橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2 按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7].(2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.超声提取法具有提取时间短、效率高、无需加热等优点[4].刘海鹏等[11]用超声波提取银杏叶总黄酮比回流法提取率高,且操作简便,节省时间,其最佳条件为:提取时间25min,温度10℃,连续提取3次,总黄酮提取率达96%.霍丹群等[12]在综合考虑成本等可行性因素下,提取山楂中黄酮类物质,提取时间大大缩短,产率较高,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便.(5)超滤法.该法是一种膜分离法,而且是唯一能用于分子分离的过滤方法,能从周围的介质中分离出100～1000nm的微粒.因此,超滤既可应用于除去溶液中胶体悬浮微粒,又能分离出溶液中的溶质.超滤的工作原理是:凡含有两种或两种以上溶质的溶液,通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留[13].超滤法以多孔薄膜为分离介质,依靠薄膜两侧压力差作为推力来分离溶液中不同分子量的物质,从而起到提纯的作用.它具有不需加热,操作条件温和,不必添加化学试剂,不损坏黄酮类化合物,不存在相的转换,耗能低,分离率高,超滤装置可反复使用等优点.控制超滤膜孔径大小能有效除去溶液中大分子物质,选用适宜孔径的超滤膜是提高产品收率和质量的关键.20世纪80年代后期,采用超滤技术提取黄芩苷,收到了较好的效果.在溶液温度为14℃, p H=1.5时,提取黄酮类化合物的收率较高[14].(6)酶提取法.植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内,提取时细胞壁造成传质阻力,使提取效果受到很大的限制.酶的作用可使细胞壁疏松、破裂,因此需要减小传质阻力,加速有效成分的释放,从而提高提取效率[15].毕会敏等[6]用纤维素酶法提取红景天总黄酮,最佳工艺条件为:加酶量1.95%(以原料干重计),液料比70∶1(体积质量比,mL∶g),p H 值5.5,酶解温度40℃,酶解时间5h,红景天总黄酮的浸出率为4.385%.研究表明,采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率,且粗提物产率高,DPP H清除活性强.(7)超临界流体提取法.该法(Supercritical Flu2 ids Ext raction,SFE)是20世纪80年代发展起来的一项提取分离技术,利用超临界流体(Supercritical Fluids,SCE)为萃取剂,从液体或固体中萃取出待测组分,其中超临界二氧化碳最为常用(SCF2 CO2)[16].SFE具有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点,同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,达到选择性提取和分离化合物的目的.2 黄酮类化合物分离方法的研究进展由于黄酮化合物的性质不同,其分离原理有: (1)极性大小不同,利用吸附能力或分配原理进行分离;(2)酸性强弱不同,利用p H梯度萃取进行分离;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝胶分子筛进行分离;(4)分子中某些特殊结构,利用与金属盐络合能力的不同进行分离[17].2.1 p H梯度萃取p H梯度萃取适合分离酸性强弱不同的游离黄酮类化合物.将混合物溶于有机溶剂(如乙醚),依次用5%碳酸氢钠(萃取7,4′2二羟基黄酮)、5%的碳酸钠(萃取72羟基黄酮或4′2羟基黄酮)、0.2%氢氧化钠(萃取一般酚羟基黄酮)、4%氢氧化钠(萃取52羟基黄酮)萃取而使其分离[3].2.2 高效液相色谱分析(HPL C)法运用H PL C法分离黄酮类化合物的报道很多.有人对18种黄酮及黄酮苷类化合物在C8、C18和CN3种固定相上洗脱的RP2H PL C法分离做了研究,结果表明C18基本可以使植物黄酮苷元和配基实现分离,但它对极性大的苷部分洗脱出峰快,分离效果不大理想.而C8介于C18和CN之间,因而对黄酮苷的分离比较理想,峰形和分离也最好[18].H PL C 也可以用来测定黄酮的含量[19].2.3 高速逆流色谱分离法高速逆流色谱分离法(high speed co untercur2 rent chro matograp hy,HSCCC)是一种新的分离技术.其具有两大突出特点:(1)线圈中固定相不需要载体,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别运用于制备性分离,每次进样体积较大,进样量也较多[16].李彩侠等[20]提取荷叶中黄酮类化合物,经HSCCC分离纯化的效果很好,结合TL C分析、颜色反应鉴定得到两种纯度很高的黄酮醇类化合物.HSCCC对分离和制备黄酮类化合物有很大的优势,其应用前景越来越受到人们的关注.2.4 柱色谱法(1)硅胶柱色谱[17,18].此法应用范围最广,非极性与极性化合物都能用,适用于分离黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄酮苷元类.少数情况下,在加水活化后也可以用于分离极性较大的化合物,如羟基黄酮醇类及其苷类等.与硅胶88 周口师范学院学报2007年9月混存的微量金属离子,应预先用浓盐酸处理,以免干扰分离效果.(2)聚酰胺柱色谱[17,18].分离黄酮类化合物,聚酰胺是较为理想的吸附剂.其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小.由己内酰胺聚合而成的尼龙-66及由己二酸与己二胺聚合而成的尼龙-66,最早应用于黄酮类化合物的分离.此法是目前最有效而简便的方法.(3)葡聚糖凝胶(Sep hadex gel)柱色谱[18].黄酮类化合物的分离,主要使用两种型号的凝胶:Sep ha2 dex G型和Sep hadex L H220型.其原理主要是吸附作用.凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离羟基的数目.但分离黄酮苷时,分子筛的性质起主导作用.在洗脱时,黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体.(4)大孔吸附树脂分离法.该法是以大孔吸附树脂为吸附剂和分子筛的柱色谱分离形式.其原理是吸附性和分子筛性.吸附性主要来源于范德华力和氢键作用力;分子筛性来源于大孔树脂的多孔性结构产生的渗透和过滤作用.被分离的成分根据其分子的大小不同和吸附能力的差异而分离[3].近年来大孔吸附树脂在中药成分(如黄酮、生物碱等)精制纯化等领域中应用越来越广泛[21223].刘健伟等[22]对D101型(非极性)、Hz2806型(中等极性)和AB28型(弱极性)3种大孔吸附树脂进行了筛选,并对甘草中总黄酮分离纯化工艺进行了研究;王雅君等[23]则用D101大孔树脂进行了制备菟丝子总黄酮的研究.这些研究表明,大孔吸附树脂对于黄酮类化合物具有良好的分离纯化效果,与传统的分离方法相比,具有操作简便、树脂再生容易、耗费有机溶剂少、提取率高等优点.3 展望近几年来,科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究,发现了黄酮不少令人感兴趣的新用途,黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类健康产品研究开发的热点.从药用植物和经济植物中提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保健品和化妆品等行业的原料,已日益引起重视,其应用前景无限广阔.随着科学技术的不断进步和发展,黄酮类化合物的独特效能将得到不断的发掘及应用.因此,黄酮类化合物的提取和分离方法也将得到更加深层的研究和开发,已有的方法将会日趋成熟和完善,各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现.参考文献:[1]黄锁义,黎海妮,余美料.益母草总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(5):3982399.[2]姚小敏,覃成箭,羊金梅.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学院学报,2005,27(6):7792 781.[3]郭京波,王向东,张燕,等.不同提取方法对苦荞类黄酮提纯得率的影响分析[J].食品科学,2006,27(10):4332 436.[4]杨红.中药化学实用技术[M].北京:化学工业出版社,2004:9.[5]胡福良,李英华,朱威,等.不同方法提取的蜂胶液中总黄酮含量的测定及抗肿瘤与抗炎作用研究[J].2005,5(3):11215.[6]毕会敏,张守勤,刘长姣.纤维素酶提取红景天总黄酮的研究[J].天然产物研究与开发,2006,18:8182821. [7]陈燕清,颜流水,黄智敏.醇溶剂回流法提取藜蒿中黄酮类化合物方法研究[J].南昌航空工业学院学报,2004, 18(3):61264.[8]徐洁昕,周方钦.白花败酱中总黄酮的提取研究[J].广州食品工业科技,2004,82(4):42243.[9]刘峙嵘,俞自由,方裕勋.微波萃取银杏叶黄酮类化合物[J].东华理工学院学报,2005,128(12):1512154. [10]唐课文,易健民,张跃超.微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物的研究[J].天然产物研究与开发,2005, 117(5):6622664.[11]刘海鹏,刘延成,马东升,等.超声波/回流法银杏叶总黄酮提取的研究[J].化学工程师,2005,119(8):49250.[12]霍丹群,张文.超声波法与热提取法提取山楂总黄酮的比较研究[J].中成药,2004,26(12):106321065. [13]李毓群,施顺清.采用先进的提取方法促进中药制剂现代化[J].中草药,2002,33(6):5722574.[14]李苑,张敏.中草药中黄酮类化合物提取工艺的研究概况[J].广东药学,1999,9(2):426.[15]Wu M L,Zhou C S,Chen L S,et al.Study on the ex2traction of total flavonoids f rom G inkgoleaves by en2 zyme hydrolysis[J].Nat Prod Res Dev,2004,16: 5572560.[16]周文华,杨辉荣,岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展[J].当代化工,2003,32(2):1112113. [17]刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2005:3.[18]宋晓凯.天然药物化学[M].北京:化学工业出版社,2004:8.[19]董文庚,邓晓丽.HPL C法测定银杏叶中黄酮的含量[J].理化检验:化学分册,200541(8):5632565. [20]李彩侠,张赟彬,黄国纲.荷叶提取物的分离和纯化[J].食品工业,2006(1):40241. (下转第97页)98第24卷第5期梁 丹,等:黄酮类化合物提取和分离方法研究进展 Hereditas ,1997,126(3):2112217.[18]Jiang J M ,G ill B S ,Wang G L ,et al.Metaphase andinterphase fluorescence in situ hybridization mapping of thericegenomewithbacterialartificialchromosome[J ].Proceedings of the National Academy of Science of USA ,1995,92:448724491.[19]Wei W H ,Qin R ,Song Y C ,et parativeanalyses to diseases resistant and nonresistant linesf rom maize ×Zea diploperennis by GISH[J ].Botanical Bulletin of Academia Sinica ,2001,42:1092114.[20]Li C B ,Zhang D M ,Ge S ,et al.Identification ofgenome constitution of Oryza malampuzhaen Οsis ,O.minuta ,and O.punctata by multicolor genomic in situ hybridization[J ].Theor ApplGenet ,2001,103:2042211.Analysis of ti f olia and O.alt a with genomic in situ hybridizationGUAN Ni 1,Q IU Xiao Οfen 1,SON G Fa Οjun 1,Q IN Rui 1,2(1.College of Life Science ,South ΟCentral University For Nationalities ,Wuhan 430074;2.College of Life Science ,Wuhan University ,Wuhan 430072,China )Abstract :Genomic in situ hybridization (GISH )method was used to study differentiation and relationship s between the ti f olia and O.alta genomes in the officinalis complex of the genus Ory z a .The chromosomes of ti f olia (CCDDgenomes )were hybridized with labelled probes of two CCDD genome f rom ti f olia and O.alta separating.The GISH results indicate that the homology between these two CCDD genomes is very close and differentiation is also clearly.Karyotype analysis is made based on the similar band patterns of the hybridization signal.K ey w ords :ti f olia ;O.alta ;GISH(上接第89页)[21]米靖宇,宋纯清.大孔吸附树脂在中草药研究中的应用[J ].中草药,2001,23(1):911.[22]刘健伟,陈勇,熊富良,等.骨碎补总黄酮提取和大孔吸附树脂纯化的工艺研究[J ].中国药学杂志,2006,41(16):122221224.[23]王雅君,郭澄.应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菟丝子总黄酮的研究[J ].中药材,2004,27(11):8612862.The ne w extraction and isolation progress of flavonoidsL IAN G Dan 1,ZHAN G Bao Οdong 2(1.College of Agriculture ,Guizhou University ,Guiyang 550025;2.School of Continuing Education ,Zhoukou Normal University ,Zhoukou 466001,China )Abstract :Flavonoids have a wide variety of physiological activity ,and many valuable results had been made.How to ex 2tract and isolate of flavonoids f rom the natural product made widely concern and its extraction and isolation methods are im 2proving .This paper reviews the application and progress of flavonoids ′different extraction and isolation methods in the re 2cent years.With the advancement of technology ,extraction and isolation methods of flavonoids will be more rapid ,efficient and perfect.K ey w ords :flavonoid ;extraction ;isolation ;progress79第24卷第5期关 妮,等:两种CCDD 型野生稻的基因组原位杂交比较分析 。
一、实验目的本实验旨在通过溶剂萃取、柱层析等方法，从植物材料中提取和分离黄酮类化合物，并对其纯度和含量进行测定，以了解黄酮类化合物的提取和分离纯化过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物材料：某种富含黄酮类化合物的植物（如银杏叶、橙皮等）- 提取溶剂：乙醇、水、甲醇等- 分离材料：硅胶、氧化铝、大孔树脂等2. 实验仪器：- 热水浴锅- 烘箱- 漏斗- 筛子- 烧杯- 蒸馏装置- 分光光度计- 薄层层析装置三、实验步骤1. 提取：- 将植物材料干燥、粉碎，过筛后备用。
- 称取一定量的植物粉末，加入适量的提取溶剂，置于热水浴锅中加热回流提取。
- 提取结束后，将提取液过滤，收集滤液。
2. 溶剂萃取：- 将滤液分别用不同极性的有机溶剂（如石油醚、氯仿、乙酸乙酯等）进行萃取。
- 将有机溶剂层收集于烧杯中，水层用有机溶剂重复萃取，直至水层颜色不再变化。
3. 薄层层析：- 将分离后的有机溶剂层浓缩干燥，得到粗提物。
- 将粗提物用适当溶剂溶解，点样于薄层层析板上。
- 以不同极性的有机溶剂为展开剂，进行薄层层析。
- 观察并记录各化合物在薄层层析板上的位置。
4. 柱层析：- 将薄层层析中分离出的目标化合物，进行柱层析分离。
- 将柱层析柱装填好固定相，将目标化合物溶解于适当溶剂，进行上样。
- 用不同极性的有机溶剂梯度洗脱，收集各洗脱液。
- 对各洗脱液进行检测，确定目标化合物的位置。
5. 纯度测定：- 将分离出的目标化合物进行纯度测定，如紫外光谱法、红外光谱法等。
- 根据实验结果，确定目标化合物的纯度。
6. 含量测定：- 采用适当的方法测定目标化合物的含量，如分光光度法、高效液相色谱法等。
- 计算目标化合物的含量。
四、实验结果与分析1. 提取：- 实验结果表明，乙醇为较佳的提取溶剂，提取效率较高。
2. 溶剂萃取：- 实验结果表明，不同极性的有机溶剂对黄酮类化合物的萃取效果不同，可利用这一性质进行初步分离。
3. 薄层层析：- 实验结果表明，目标化合物在薄层层析板上的位置较明显，有助于进一步分离。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
金银花中黄酮类化合物的提取及其检测方法的研究进展
李杰;和素娜;杨晖;王学廷
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2015(036)017
【摘要】黄酮类化合物是金银花的有效成分之一,具有优良的抗氧化、清除自由基、抗炎及调节心血管系统等作用.目前金银花中黄酮类化合物的提取方法主要包括浸
提法、乙醇回流法、超声波法和微波法,但对其纯化方法的研究还比较欠缺.通常采
用紫外可见分光光度法、高效液相色谱法和毛细管电泳法来检测金银花提取液中的黄酮类化合物,相比较而言紫外可见分光光度法最为常用,接下来是高效液相色谱法,最后为毛细管电泳法.对金银花中黄酮类化合物的提取工艺及其检测方法做了简单
的综述,旨在为我国的金银花以及金银花中黄酮类化合物的开发、研究、利用提供
借鉴.
【总页数】4页(P175-178)
【作者】李杰;和素娜;杨晖;王学廷
【作者单位】河南科技大学医学院,河南洛阳471003;河南科技大学医学院,河南洛
阳471003;河南科技大学医学院,河南洛阳471003;河南科技大学医学院,河南洛阳471003
【正文语种】中文
【相关文献】
1.金银花中黄酮类化合物的提取工艺 [J], 贾霖;黄国清;肖军霞
2.金银花中黄酮类化合物的微波辅助提取及抗氧化性 [J], 刘梦星;王涛;马晶军
3.金银花和叶中黄酮类化合物提取工艺条件的探讨 [J], 李志明
4.金银花中黄酮类化合物的研究进展 [J], 朱国栋;陈云波;潘凤;王锦珍;盘炜
5.金银花中黄酮类化合物的提取分离纯化研究进展 [J], 田洋
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
化合物黄酮提取以及检测方法的研究黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在银杏叶、山楂、杜仲、山香圆叶、水芹、竹叶、黄芪、丹参等植物中均有检出。
到目前为止, 已经发现有5000 多种植物中含有黄酮类和异黄酮类化合物[1]。
黄酮类化合物的结构特点是具有C6- C3- C6 的基本骨架,根据中间三碳链的氧化程度、B 环( 苯基) 连接位置( 2-或3- 位) 以及三碳链是否呈环状等特点, 分为许多不同类型: 包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮等化合物[2]。
现代研究证明黄酮类化合物是重要的抗氧化剂, 其生理作用是多种多样的, 例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩; 杜鹃素具有止咳祛痰作用; 黄芩苷具有抗菌消炎、抑制肿瘤细胞作用; 水飞蓟素具有保肝作用等[3]; 此外, 黄酮类化合物还有降血脂、止血、抑制血小板聚集等多种药理作用。
正是其上述生物活性引起了人们的广泛重视, 对该类化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门课题, 是一类具有广泛开发前景的天然药物[4]。
黄酮类化合物在人体不能直接合成, 只能从食品中获得。
主要是作为食品添加剂或直接应用于食品中增加其保健作用。
例如茶多酚在功能食品中的应用主要是以茶叶及其提取物的形式添加到食品中。
茶多酚具有抗疲劳、抗辐射、抗衰老等功能特性, 茶叶具有独特的色、香、味、形, 能使食品增香、调味、着色, 因此茶多酚以茶叶的形式在食品中的应用十分广泛。
近年来科学家都积极关注从植物体中提取纯度高、活性强的天然黄酮成分, 并进一步将其加工成有特异功能的保健食品和药品等产品。
1 黄酮类化合物的提取方法1.1 有机溶剂提取法甲醇和乙醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂,高浓度的醇( 如90 %左右) 适宜于提取苷元, 60 %左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取苷类。
田呈瑞[5]采用索氏提取法, 利用乙醇提取银杏叶黄酮, 通过单因素试验和正交试验, 确定乙醇提取银杏叶总黄酮的最佳条件为: 银杏叶粉碎至50 目~60 目, 以70 %乙醇按照液固比6∶1 的比例, 于80 ℃条件下提取2 次, 每次1 h, 银杏叶总黄酮提取率可达87.6 %。
此外, 欧美国家采用的主要溶剂法工艺有: 醇(酮)浸提- 卤代烃萃取- 酮/铵盐萃取法、酮浸提- 氨水沉淀- 混合酮萃取法、酮浸提-综述154食品研究与开发2008 年1 月第29 卷第1 期卤代烃萃取- 铅化物沉淀法和醇(酮)浸提- 甲苯/丁醇萃取树脂法[6]。
该工艺采用中等温度50 ℃~60 ℃浸泡, 杂质较少, 经浓缩、水析可除去烷基酚等脂溶性物质, 用CCl4 等非极性溶剂萃取除去蜡质、叶绿素等脂溶性杂质; 调节pH8~9 或Pb( OH) 2 沉降, 可除去原花青素、蛋白质、高分子单宁等杂质, 加入( NH4) 2SO4 等盐, 增加相密度, 有利于C4- C6 酮和醇萃取有效成分和减少乳化现象, 改善分层, 提高有效成分的萃取率[7]。
1.2 微波提取法微波加热是透入内部的能量被物料吸收置换成热能对物料的加热, 形成独特的物料受热方式, 具有均匀性的特点, 同时具有反应高效性和强选择性等特点, 而且操作简便, 副产物少, 提取率高及产物纯度高等优点。
本法多用在药材的浸出, 在黄酮类化合物的提取上取得了良好的效果。
段蕊[8]等人对微波法提取银杏叶中黄酮类物质进行研究, 用175 W 微波强度处理5 min后, 以体积分数80 %的乙醇, 在70 ℃提取1 h, 得到提取物的黄酮类物质质量浓度比未经微波处理的高出18.8 %。
此外李嵘与金美芳[9]在以水为介质的条件下,对银杏叶进行微波处理, 提取效果与传统方法对照, 表明此方法提取率高, 省溶剂, 大大提高了提取效率。
实验方法是称取100 g 银杏叶丝, 加160 mL 蒸馏水, 微波解冻处理5 min 及15 min, 提取液以440 mL60 %乙醇, 55 ℃回流提取。
结果表明, 微波处理后进行乙醇水浸提比同样方法未用微波处理可以提高银杏叶中有效成分的提取率达22.6%, 而且大大缩短了提取所需时间。
1.3 超临界萃取法超临界流体萃取是利用超临界流体在临界压力和临界温度附近具有的特殊性能作为溶剂进行萃取的一门科学, 最常用的超临界流体为CO2。
应用CO2- SPE 技术提取分离黄酮类物质, 具有萃取速度快, 效率高, 操作简单等特点, 产品中没有残留有机溶剂, 与传统的萃取分离工艺相比优势是明显的。
此外, 超临界CO2 萃取较易与其它先进技术联用, 成为新型而有效的分离分析技术。
孙婷[10]利用超临界CO2 萃取法从银杏叶中提取黄酮类化合物, 确定了超临界流体萃取的最佳条件: 压力为20MPa, 萃取罐的温度为40 ℃, 流量为14 mL/min, 萃取时间为2 h, 在此条件下测得总黄酮的含量为29.1 %, RSD 为3.1%。
张玉祥[11]通过正交试脸, 确定最优化的提取工艺是: 20 MPa 的压力下, 夹带剂15 %,50 ℃萃取40 min, 含量测定显示, CO2 超临界流体萃取法能有效萃取银杏叶中的总黄酮和总内酯, 含量高于欧洲( EGb761) 的质量标准。
游海等人[12]在提取银杏叶中的黄酮类化合物药用活性成分的实验中, 确定了实验最佳条件: 萃取压力12 665.6 kPa, 萃取温度为45 ℃, 萃取时间为30 min~45 min, 分离压力为6 586.1 kPa, 其中黄酮含量达28%以上。
1.4 酶浸渍萃取法最近几年, 随着酶技术的快速发展, 科学工作者充分利用了酶的特性发展了新的提取方法。
酶浸渍法是指在黄酮提取过程中, 通过加入恰当的酶发生转糖反应和酶解反应而使产品黄酮得率和含量大大提高的新兴技术。
传统的水提取只能提取水溶性黄酮, 致使类黄酮得率和含量过低; 此时如选用恰当的酶加入, 不仅可以将油溶性的类黄酮转化为易溶于水的糖苷类而利于提取, 而且还可通过酶反应将植物组织分解, 使提取传质阻力减小; 另外也可使提取液中的杂质分解去除, 从而简化后续分离纯化工序。
并且其提取条件温和, 有利于黄酮类活性保护, 且成本低、安全[4]。
1.5 超声波辅助提取法用超声波法提取黄酮类物质, 是目前比较新的方法。
其原理主要是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成份的浸出提取。
另外,还利用其次效应,如机械振动, 扩散, 击碎等, 使其加速被提取成份的扩散, 释放。
超声波提取法大大缩短了提取时间, 提高了有效成分的提取率、原料的利用率。
吴传茂[13]等用超声波振荡法提取大豆和豆豉中的大豆异黄酮苷元, 其提取方法最佳方案是: 样品中加入100 %乙醇300 mL, 超声振荡30 min, 通过检测得出大豆中大豆黄素的含量为106.5 μg/g, 染料木黄酮的含量为155.1 μg/g; 豆豉中大豆黄素的含量为312.8 μg/g, 染料木黄酮的含量为555.6 μg/g。
王延峰[14]等人研究了银杏叶黄酮的超声提取法, 并与连续热回流中的索氏提取作了比较研究, 最佳操作条作为∶超声波频率40 kHz, 处理时间10 min,静置时间12 h, 结果表明超声波法优于索式提取法。
2 黄酮类物质的测定方法2.1 分光光度法黄酮类化合物多采用硝酸铝比色法测定。
其基本原理是以芦丁为标准品, Al( NO3) 3 络合体系显色, 全波段扫描在510 nm 处有最大吸收峰, 测定其吸光度, 以此来计算含量。
罗宪堂[15]等人利用该法测定了山香圆叶中的黄酮类成分的含量, 但硝酸铝比色法专一性较差, 测定受处理过程颜色变化的影响。
研究人员对此法进行了多项改进以提高其准确度。
尉芹[16]等人在测定杜仲总黄酮的实验中认为绿原酸是主要干扰因素, 他们采用纸层析法将样品中的黄酮与绿原酸分离后, 再进行测定, 从而提高了测定的准确度。
刘佳佳[17]等用硼综述1552008 年1 月食品研究与开发第29 卷第1 期酸- 柠檬酸比色法测定了银杏叶黄酮的含量。
徐燕[18]以黄芩苷为对照品, 采用双波长分光光度法测定黄芩总黄酮含量。
另外, 周荣琪[19]将过滤法应用于竹叶黄酮测定中, 并对滤纸对于黄酮类物质的吸附进行了校对, 发现滤纸对黄酮类物质吸附甚微, 此方法应用于竹叶黄酮体系大大提高了测定稳定性, 且准确度较高, 重现性良好。
2.2 纸色谱法纸色谱用于黄酮类分析选择性和重现性较差, 一般作为定性检测。
余戟[20]采用高于临界胶束浓度( CMC) 的十二烷基硫酸钠( SDS) , 溴化十二烷基甲基卞胺水溶液作展开剂, 通过纸色谱法分离和检测桑色素、杨梅黄素等8 种黄酮苷和苷元, 发现了适宜于分离其黄酮苷类的展开体系。
2.3 薄层色谱法( TLC)薄层色谱又叫薄板层析, 是色谱法中的一种, 是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术, 属固- 液吸附色谱, 它兼备了柱色谱和纸色谱的优点, 一方面适用于少量样品( 1 μg, 甚至0.01 μg) 的分离; 另一方面在制作薄层板时, 把吸附层加厚加大, 因此, 又可用来精制样品。
此法具有设备简单、操作方便、分离速度快等特点, 但离线操作使分辩率和重现性等不如高效液相色谱法和气相色谱法, 常被作为定性和半定量的手段。
固定相一次性使用, 样品无需复杂处理, 分离物的性质不受限制, 应用广泛; 可同时平行分离多个样品, 测试速度快, 所需溶剂量少, 选择范围宽,并有不同展开方式, 有利于不同性质的物质分离; 此方法可以在同一色谱板上可根据组分性质选择不同显色剂或检测方法进行定性或定量; 薄层色谱图像可提供原始彩色图像, 不仅便于保存原始图像, 而且可以提供较多信息, 直观性、可比性均较好都是此法的独特之处[4]。
2.4 极谱法极谱分析是在特殊条件下进行电解分析, 其特殊性在于采用了一个面积很大的参比电极和一个面积很小的滴汞电极进行电解。
孙仕萍[21]等为了测定保健食品中的黄酮含量, 探讨用单扫示波极谱法测定总黄酮含量的快速方法, 以芦丁为对照品, 建立了良好的直线关系。
2.5 气相色谱法气相色谱法( GC) 具有进样量少、高灵敏度、高选择性、高特异性等优点; 但需样品需要衍生, 步骤较为复杂, 耗时长, 且仪器较为昂贵, 从而限制该法推广应用。
Liggins 等[22]采用毛细管- 质联法测定80 余种蔬菜和坚果中大豆黄素和染料木素, 其中36 种含有被测物质, 而大豆中大豆黄素和染料木素总含量达2 g/kg。
孙艳梅[23]选取SE- 30 毛细管柱, 在柱温为恒温260 ℃时,利用气相色谱法, 进行了大豆β- 葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的研究, 确定黄豆苷元含量工作曲线方程为Y=71 519X- 85 913, X 为黄豆苷元的含量( g/L) , 相关系数R2=0.993 7。
