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山东大学实验报告2012年 12 月 4日姓名系年级 2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。
3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
一、实验目的1. 了解肠道细菌的生理生化特性。
2. 掌握肠道细菌生化实验的基本原理和方法。
3. 通过实验，鉴别肠道细菌的种类。
二、实验原理肠道细菌生化实验是通过观察细菌对特定底物的代谢反应，如糖类、蛋白质、脂肪等的分解能力，以及产生某些特定代谢产物的能力，来鉴别细菌种类的一种方法。
实验中常用的生化反应包括糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养24小时，观察菌落周围是否出现红色圈，红色圈表示该菌能够发酵该糖类。
2. 吲哚试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
4. V-P试验：将待测菌接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察是否产生红色沉淀。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；产气肠杆菌发酵乳糖，产酸产气；普通变形杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌产生吲哚，呈阳性；产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌不产生吲哚，呈阴性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
4. V-P试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
根据实验结果，可以初步判断待测菌为大肠杆菌。
六、实验结论通过肠道细菌生化实验，我们掌握了肠道细菌生化实验的基本原理和方法，成功鉴别了待测菌为大肠杆菌。
细菌生理生化试验—小木虫微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。
因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一,微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:(一)糖、醇发酵试验原理:不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验、有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:＋)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:－),培养基仍为紫(蓝)色、培养基配制:一般细菌常用休与李夫森二氏培养基:蛋白胨:2g,Ｋ2ＨPO4 :0.2ｇ,NaCl:5g,糖(醇、糖苷):1％,水洗琼脂:5～６g,蒸馏水:1０0０mL,PＨ:6、８～７.0,溴百里酚蓝:1％水溶液３mL(先用少量得9５％乙醇溶解后,再加水配成1％水溶液)。
先调PH后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:(NH４)2ＨＰO4:１g ,ＭｇＳO4:０.2g ,KCl:0。
２ｇ,酵母膏:０.２g ,糖(醇、糖苷):1％水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:100０mL ,溴甲酚紫:0、４％乙醇液2mL,ＰH:６、8~7。
0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为４～5cｍ,115℃灭菌20min、测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(１、5%)、半乳糖(１.５％)、D—山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意:以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:用18～２4h得幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,３d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
结果记录:产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。
(二)淀粉水解试验原理:某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
细菌生理生化鉴定技术讲义实验一糖（醇、苷）类发酵试验(安排至少六种糖的发酵实验，包括单糖、双糖、三糖、醇类和非糖类各一种)（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。
检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
(2)方法：在基础培养基中（如肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。
所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。
若用微量发酵管（杜氏管），或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。
(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，使培养基中的指示剂发生变色反应，产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。
不分解糖则无变化。
溴百里香酚蓝的变色范围为pH6.7(黄)~7.5(蓝)，通过指示剂颜色变化可以判断是否产酸，从杜氏管中是否又气泡可以判断利用各种糖时是否产气。
(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。
即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。
一般非致病菌能发酵多种糖，产生多种有机酸和各种气体如CO2、、H2和CH4。
如大肠杆菌能分解葡萄糖有乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气，以“⊕”表示。
微生物鉴定中常用的生理生化试验郭森09级生命基地200900140029周二下午第五排摘要：本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后基本上观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词：微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言：不同种类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
1 材料和方法1.1材料1.1.1菌种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，大肠杆菌（Esherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），普通变形菌（Proteus vulgaris），铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)。
1.1.2培养基固体淀粉培养基，固体油脂培养基，葡萄糖发酵培养基，乳糖培养基，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基。
1.1.3溶液和试剂卢戈式碘液，甲基红指示剂，乙醚和吲哚试剂等。
1.1.4仪器和其他用品无菌平板，无菌试管，接种环，接种针和试管架等。
1.2方法1.2.1制作培养基1.2.1.1淀粉培养基分别取3g蛋白胨、1.5g NaCl、1.5g牛肉膏、0.76g可溶性淀粉和5~6.7g琼脂放入300ml蒸馏水中加热融化，最后总体积在250ml左右，121℃灭菌20min。
请预览后下载！ 实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应 一、实验目的。 1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 1. 糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2. 甲基红试验（M.R试验） 甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 3. Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验） 伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。 4. 靛基质试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。 5. 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 6. 明胶液化实验 明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4度仍能保持液化状态。 7. 柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂pH6.0(黄)～7.6(蓝)，由绿色变为深蓝色。 8. 淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
三、实验仪器、材料和用具 请预览后下载！
实验仪器：32度恒温培养箱、4度冰箱； 微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、待鉴定的未知菌的平板单菌落； 试剂：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂，KOH溶液； 实验用具： 试管：每个试验3根试验管，1根对照管，8个试验，共32管； 杜氏小管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、试管架、记号笔。
四、实验步骤。
1. 配制培养基（上次实验完成） 2. 鉴别实验 1）．糖(醇)类发酵试验 编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。 接种：取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。 将已接种好的培养基置32℃温箱中培养24h。 2）. 甲基红试验(M.R.试验) 将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养 24h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。 3）. 伏一普试验(V．P．试验) 将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，32℃培养24h，取出，加入40％KOH 7滴，然后再加入等量的5％a-萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度。若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。 4)．靛基质(吲哚)试验 将被检菌接种到胰蛋白胨水培养基中，32℃培养24h后，滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，轻轻摇动，观察结果。 出现红色者为阳性，出现黄色者为阴性。 5). 硫化氢试验： 将大肠杆菌和变形杆菌以接种针穿刺接种到醋酸铅或柠檬酸铁氨培养基中，32℃培养24h，观察结果，若有黑色出现者为阳性。 6)明胶液化试验 取大肠杆菌和枯草杆菌的纯培养物少许，以接种针分别穿刺接种到营养明胶培养基中，置32℃培养24小时。故观察结果时，应将明胶培养基轻轻放入4℃冰箱30min，此时明胶又凝固。若放置于冰箱30min仍不凝固者，说明明胶被试验细菌液化，是为阳性。 7） 柠檬酸盐利用试验 取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，32℃培养24h后，观察结果。培养基变深蓝色者为阳性。 8） 淀粉水解试验 在培养进表面滴加碘液，观察是否变紫。
五、实验结果及分析 1.观察结果如下表： 表1 实验结果 请预览后下载！
编号 大肠杆菌 枯草杆菌 产气杆菌 变形杆菌 未知菌 空白对照
葡萄糖发酵实验 变黄色，有气泡 / / 变黄色，无气泡 变黄色，无气泡 紫色，无气泡 乳糖发酵实验 变黄色，有气泡 / / 紫色，无气泡 紫色，无气泡 紫色，无气泡 甲基红试验 红色 / 黄色 / 桔红色 淡黄色
伏-普试验 黄色 红色 红色 淡黄色 吲哚试验 玫瑰红色 / 玫瑰红色 / 无色 淡黄色
硫化氢试验 黄色 / / 黑色从中间向外蔓延 黄色 黄色
明胶液化试验 无液体 / 无液体 / 液体 无液体
柠檬酸盐利用试验 下蓝上黄 / 下黄上蓝 / 下蓝上黄 绿色
淀粉试验 紫色 紫色 紫色 黄色 紫色 紫色
表2. 各项生理生化实验现象及意义 阳性 阴性（对照） 现象 意义 现象 意义
葡萄糖发酵实验 溶液变黄 细菌代谢产有机酸 溶液仍为紫色 细菌代谢不产酸 杜氏小管中有气体（>体积10% ） 细菌代谢产生气体 杜氏小管中无气体 细菌代谢不产生气体
乳糖发酵实验 溶液变黄 细菌代谢产有机酸 溶液仍为紫色 细菌代谢不产酸
杜氏小管中有气体（>体积10% ） 细菌代谢产生气体 杜氏小管中无气体 细菌代谢不产生气体
甲基红试验 加入甲基红，培养基呈现红色 pH下降到4.2以下 加入甲基红，培养基为黄色 pH值大于6
伏-普试验 培养基呈现红色 细菌代谢产生乙酰基甲醇 培养基为黄色 细菌代谢不产生乙酰基甲醇
吲哚试验 培养基呈现红色 细菌代谢可分解色氨酸 培养基为黄色 细菌代谢不能分解色氨酸
硫化氢试验 产生黑色固体 细菌代谢产生硫化氢 无黑色固体产生 细菌代谢不产生硫化氢
明胶液化试验 明胶在4℃仍能保持液化状态 细菌可产生明胶酶 明胶在25℃以下不能液化 细菌不能产生明胶酶 柠檬酸盐利用试验 培养基由绿色变为深蓝色 细菌可利用柠檬酸盐作为碳源 培养基仍为绿色 细菌不能利用柠檬酸盐作为碳源 淀粉水解试验 不变，黄色 细菌可利用淀粉 变紫 细胞无法利用淀粉 请预览后下载！
2.照片及分析： 1）．糖(醇)类发酵试验
图1 葡萄糖发酵（从左到右依次为对照、大肠杆菌、未知菌、变形杆菌） 图2 乳糖发酵（从左到右依次为对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌） 2）. 甲基红试验(M.R.试验)
图3 甲基红试验（从左到右依次为对照、大肠杆菌、产气杆菌、未知菌）
现象：葡萄糖发酵中，三个菌种的溶液都变黄，为阳性；仅大肠杆菌杜氏小管含气泡。
分析：大肠杆菌能分解葡萄糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气。而另外两种菌代谢产生了酸，但没有气体产生。 另外，未知菌溶液临近表面处有一层深色区域，不像指示剂的颜色，可能为某种代谢产物。
现象：乳糖发酵中，未知菌和变形杆菌都不变色，大肠杆菌的培养液变黄。只有大肠杆菌杜氏小管有气泡。
分析：变形杆菌无法利用乳糖，未知菌无法利用乳糖或在乳糖代谢途径中没有产生有机酸，大肠杆菌乳糖代谢途径产生了有机酸，且产生了气体
现象：甲基红试验中，大肠杆菌为深红色，说明其产生的酸最多；未知菌为桔红色，说明它产酸量中等；产气杆菌为黄色，说明它基本不产酸。
分析：大肠杆菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸等，使培养基的pH降低，培养基呈现红色。产气杆菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，，使pH升至大约6，培养基呈现黄色。 请预览后下载！
3）. 伏一普试验(V．P．试验) 图4 V.P试验（从左到右依次是大肠杆菌、产气杆菌、未知菌） 4)．靛基质(吲哚)试验
图5 吲哚试验（从左到右依次是对照、未知菌、产气杆菌、大肠杆菌） 5). 硫化氢试验：
图6 硫化氢试验（从左到右依次是对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌）
现象：大肠杆菌黄色（即无变化），产气杆菌稍有红色，未知菌为红色。
分析：，说明大肠杆菌在葡萄糖蛋白胨水中代谢不产生乙酰基甲醇；产气杆菌产生了少量乙酰基甲醇；未知菌产生了较多乙酰基甲醇 注：V.P.试验一开始是没有现象的，最后把其他的试管都洗了后(这也是没有对照的原因)，我们重新滴加了边台的NaOH，然后用a-萘酚溶液处理，所以估计一开始没有现象的原因可能和KOH失效有关。
现象：吲哚试验中，未知菌没有变化；产气杆菌和大肠杆菌溶液表面产生了少量玫瑰红。
分析：未知菌无法分解色氨酸，产气杆菌和大肠杆菌可以分解色氨酸。 另外，对照组也出现了玫瑰红，照理说里面没有微生物分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质的话，是不会反应产生红色化合物的，估计试剂有污染，比如有含色氨酸酶的杂菌引入。
图片不是很清晰，请见谅。 现象：硫化氢试验中，仅有变形杆菌产生了黑色物质。三只试管接种周围都有向外扩展现象。
分析：仅变形杆菌能分解含硫的氨基酸并产生硫化氢。三种菌均具有运动能力
