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酸奶制作及乳酸菌的分离计数1、实验目的1、学习自制酸奶的方法。
2、熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法。
3、掌握用浇注平板法分离微生物纯种。
4、了解简便、快速厌氧菌菌落计数法的基本原理。
5、学习用简便、快速厌氧菌菌落计数法对乳酸菌进行活菌计数。
二、实验原理酸奶又称酸乳，是以牛奶为主要原料，经乳酸菌发酵而制成的一种营养丰富、风味独特、国际流行的保健饮料。
酸奶发酵中的主要生物化学变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其pH降至酪蛋白等电点附件从而使牛奶形成凝固状；其次，乳酸菌还会触使部分酪蛋白降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和定二酮等风味物质。
酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。
其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽，由此促进球菌的生长，而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量的乳酸和部分乙醛，由此链球菌还产生了双乙酰这类风味的物质，因此，达到了稳定状态的混合发酵。
根据高层半固体培养基具有良好厌氧性能的原理，我们设计了一种适用于乳酸菌等不产气的厌氧菌进行简便快速菌落计数的方法。
此法把稀释（在半固体培养基凝固前）和（在半固体培养基凝固后）集中在同一支试管中内，以不易透氧、装有高层半固体培养基的试管代替常规的培养皿平板进行菌落计数，从而使活菌计数操作简化成“试样分散----逐级稀释+常规培养---菌落计数”3步，而传统的方法则需“试样分散----逐级稀释---涂布或浇注平板---厌氧培养---菌落计数”5步。
因此，本法不仅有简化操作步骤的优点，还有省略专用厌氧培养装置、缩短培养时间以及节约试剂和材料等优点。
3、实验器材1、菌种：德氏乳杆菌保加利亚亚种、唾液链球菌嗜热亚菌（可从品牌酸奶商品中自行分离）2、培养基：（1）LAB半固体培养基100ml（2）MRS琼脂培养基200ml(3)MRS液体培养基10ml3、材料：优质全脂牛奶或奶粉（内含脂肪28%，蛋白石27%，乳糖37%，矿物质6%，水分2%），蔗糖：市售优质酸奶（1瓶）4、器皿：锥形瓶（3个）、空试管（14支）、无菌移液管（1ml*15根，10ml*2根）、培养皿（6套）、涂布棒、量筒、酒精灯、恒温水浴锅，恒温箱，冰箱4、实验步骤1、实验的准备（1）配制LAB半固体培养基100ml，MRS琼脂培养基200ml，MRS液体培养基10ml（2）用量筒各量取自来水225ml至2锥形瓶中，用移液管移取4.5ml至4支试管中（3）将培养基进行分装，用无菌移液管吸取9mlLAB半固体培养至6支试管中，用无菌移液管吸取5mlMRS液体培养基至2根试管中，用无菌移液管吸取10mlMRS琼脂培养基至2根试管中制作两个斜面（4）用报纸进行包扎试管，移液管，锥形瓶，培养皿，然后放入灭菌锅进行灭菌2、酸奶的制作（1）配奶：在牛奶中添加6%~10%蔗糖后搅匀。
都要求无菌操作菌种的分离取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C 恒温下培养48h。
挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜检，茵体一致)。
结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。
再分别转移到试管斜面上进行保存。
分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2；保存用斜面培养基：酵母膏1％，碳酸钙2％，葡萄糖1％，琼脂2％，pH 7．0。
培养条件将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，在30℃恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。
测定方法菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性及含量测定依据食品检验技术1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序自然发酵酸菜汁液一稀释一培养一挑起单菌落染色、镜检一挑选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优良菌株一试管穿刺低温保存。
1．2 1．2 乳酸菌的鉴定用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。
生理生化特征鉴定：产乳酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应、硫化氢反应、乳酸菌发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。
1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯采用定期移植低温保藏法。
培养基配方：葡萄糖1％、蛋白胨0 2％、l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。
c灭菌30min。
将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。
1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度计上，用最大吸收光波长=6001RIifl测定。
一、实验目的1、学习掌握食品中乳酸杆菌的常规分离方法并作初步的鉴别。
2、学会十倍系列稀释和倒平板的方法。
二、实验原理乳酸杆菌为厌氧和微好氧菌，革兰氏染色阳性，可以发酵葡萄糖或乳糖产生乳酸，并将培养基中的碳酸钙溶解。
有些菌如保加利亚乳杆菌在15℃时不生长，在45℃甚至50℃时生长，最适生长温度为40—43℃；而有些菌如植物乳杆菌在15℃生长，45℃时一般不生长，最适生长温度为30℃左右。
通常我们利用这些特点可作初步的鉴别。
二、实验原理三、实验材料和仪器1、酸牛奶1瓶，泡菜汁1管，9ml生理盐水5管，MRS培养基100ml，灭菌CaCO3 3克（用纸包）。
2、40℃和30℃恒温箱，振荡器，超净工作台，1ml 无菌吸管5支，培养皿6套，革兰氏染色液1套。
四、实验方法与步骤1. 将酸奶和泡菜汁分别制成10倍系列稀释液。
2. 取适当稀释度之稀释液0．5或1ml于培养皿中。
3. 以无菌操作把无菌CaCO3 加入融化了的MRS培养基中，于自来水中迅速冷却培养基至45℃左右。
轻摇使CaCO3混均，但不得产生气泡。
立即倒入培养皿中，摇匀。
4. 待培养基凝固后，倒置放于40℃和30℃恒温箱中培养（酸牛乳样品在40℃下培养；酸泡菜汁样品在30℃下培养）五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（1）泡菜汁样品中，菌落周围产生CaCO3圈，菌落直径为1～3mm，乳白色偶有浓色或暗黄色。
用接种环挑少许涂片。
革兰氏染色镜检为G+，菌体大小约0.9～1.2×3～8μm，单生，成对或短链。
五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（2）酸牛奶样品中菌落直径1～3mm，无色素，呈白色至淡灰色。
通常菌落表面粗糙，革兰氏染色镜检为G+，细胞宽2μm，细胞较长有时呈线形，幼龄培养物中单生或成对。
五、实验结果观察六、思考题1、融化后的培养基为什么要迅速冷却到50℃左右倒平板？2、培养基中加入CaCO3的目的是什么？谢谢。
酸奶中乳酸菌的检测与酸奶的制作综合性实验报告组员：摘要：以奶粉为原料，蒙牛酸奶为接种剂自制酸奶并进行感官评价。
用稀释倒平皿法和划线分离法分离出蒙牛酸奶中的乳酸菌。
分别用改良MC培养基和改良TJA培养基培养一段时间后观察菌落形态并进行菌落计数。
再挑取少许不同培养基上的菌落用革兰氏染色法染色，观察乳酸菌的个体形态。
关键词：酸奶制作、乳酸菌菌落形态及总数、MC培养基、TJA培养基、革兰氏染色、乳酸菌个体形态1 前言酸奶是以新鲜的牛奶为原料经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌（发酵剂），经发醇后，再冷却灌装的一种牛奶制品。
按是否加糖，酸奶可分为淡酸奶和加糖酸奶两种，我国常见的酸奶制品是加糖酸奶，即在制作酸奶的原料乳中加入一定量的白糖进行发酵得到的酸奶产品。
酸奶营养丰富，其蛋白质和钙质较鲜乳更易消化吸收，抑制腐败细菌的繁殖，降低肠道内毒素浓度。
酸奶内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及族维生素等,能增强消化，促进肠道蠕动和机体物质的代谢，提高人的免疫力, 长期饮用即可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 是一种对人体肠胃非常有益的保健食品。
2 材料与方法2.1 仪器与器材温箱：47℃、冰箱： 4℃、电磁炉、锅吸管：容量为1，10和25mL、广口瓶或三角瓶：容量为500mL、平皿：直径为9cm、试管（带试管塞）：18×180mm、显微镜、带玻璃珠的三角瓶、移液枪、移液管、恒温箱、电磁炉、平底锅、2个奶瓶、保鲜膜、接种环、酒精灯。
2.2 培养基和试剂培养基：改良MC 培养基,改良TJA培养基。
材料：番茄汁、革兰氏染色液、蒙牛酸奶、脱脂奶粉、白砂糖。
2.3 方法2.3.1 无菌水和培养基的制备(1)无菌水：将20支试管分别用移液枪注入9ml的自来水，塞上试管塞，分10支捆成一扎并用牛皮纸包好。
将2个三角瓶分别注入150ml的自来水，塞上瓶塞，分别用牛皮纸封好。
将上述的试管以及三角瓶一起高压蒸汽灭菌。
(2)培养基：MC培养基:称取16g改良MC培养基粉末加200mL水置于电炉上小火加热溶解；TJA培养基:称取12g改良TJA培养基粉末加10mL茄汁和200mL水置于电炉上小火加热溶解，分别制得。
乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究一、本文概述本文旨在对乳酸菌的分离鉴定进行深入研究，并探讨其抗菌肽与发酵性能。
乳酸菌是一类重要的微生物，广泛存在于自然界中，包括人类肠道、乳制品、植物表面等。
它们具有多种生理功能，如促进消化、增强免疫力、改善肠道微生物平衡等，因此在食品、医药和农业等领域具有广泛的应用前景。
本研究首先通过适当的分离方法从各种样品中分离出乳酸菌，并运用分子生物学技术对其进行鉴定，明确其种类和遗传背景。
随后，对分离得到的乳酸菌进行抗菌肽的提取和纯化，通过生物活性测定等方法，研究其抗菌肽的抗菌效果和作用机制。
还将对乳酸菌的发酵性能进行评估，包括其在不同条件下的生长情况、发酵产物的种类和产量等，以期为乳酸菌在食品和生物制品生产中的应用提供理论依据和技术支持。
本研究的意义在于，一方面，通过深入了解乳酸菌的生物学特性，为乳酸菌的开发和利用提供科学依据；另一方面，通过研究乳酸菌的抗菌肽和发酵性能，为开发新型抗菌药物和生物制品提供候选菌株和活性物质。
本研究也有助于推动微生物学、生物化学和发酵工程等相关领域的发展，为相关领域的研究人员提供有价值的参考和借鉴。
二、乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌的分离是本研究的基础工作，我们采用了严格的无菌操作技术，从多种自然发酵食品中，如酸奶、泡菜、乳酪等，采集乳酸菌样本。
通过选择性培养基，如MRS培养基，在厌氧条件下进行乳酸菌的初步分离。
随后，对分离得到的菌落进行形态学观察，如菌落颜色、形状、边缘整齐度等特征，初步筛选出具有乳酸发酵特性的菌株。
为了对分离得到的乳酸菌进行精确鉴定，我们采用了分子生物学方法。
提取各菌株的基因组DNA，利用PCR技术扩增其16S rRNA基因序列。
通过对扩增得到的序列进行测序和比对分析，我们确定了各菌株的种属信息。
我们还利用生理生化试验，如糖发酵试验、明胶液化试验等，对分离得到的乳酸菌进行了进一步的鉴定和特性分析。
经过上述步骤，我们成功从自然发酵食品中分离并鉴定了多株乳酸菌。
乳酸菌的分离及酸奶的制作乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，常见于发酵食品中，特别是酸奶中。
乳酸菌通过产酸作用，可以改变食品的酸碱度，增强味道和保存食品的能力。
因此乳酸菌的分离和酸奶的制作具有重要的实际意义。
1.选择合适的发酵食品作为样品，如酸奶或发酵乳。
2.将样品进行稀释，然后分别接种在适宜的培养基上，如牛乳琼脂培养基或MRS培养基。
3.培养基应保持在适宜的温度，通常是37°C，促使细菌的生长。
4.观察培养基上的菌落形态，标记明显异于其他菌落的菌落。
5.使用无菌技术，将单独的菌落分离到新的培养基上。
6.对新培养的乳酸菌菌株进行纯化和鉴定，如形态学观察、生理生化特性检测等。
酸奶的制作主要是通过乳酸菌进行发酵来实现的，以下是一种常见的酸奶制作方法：1.选择新鲜的牛乳作为原料，最好使用全脂牛乳，因为全脂牛乳中的脂肪能够提供乳酸菌生长所需的营养。
2.将牛乳煮沸并冷却至40-45°C，这是乳酸菌生长的最适温度。
3.加入适量的酸奶发酵剂，这可以是商业化的酸奶菌干粉或者是之前分离得到的纯化乳酸菌菌株。
4.用搅拌器均匀地搅拌牛乳，以确保发酵剂充分混合。
5.将搅拌均匀的牛乳倒入适宜的容器中，并加盖保温。
可以使用保温箱或温暖的地方来保持发酵温度。
6.将容器放置在温暖的地方，保持温度在37-43°C之间，使乳酸菌进行发酵。
发酵时间通常为6-8小时，但可以根据个人口味和偏好进行调整。
7.发酵完成后，将酸奶放入冰箱冷藏，以停止乳酸菌的发酵过程。
8.酸奶制作完成后，可以根据个人口味添加适量的糖、水果、坚果等作为调味品。
通过乳酸菌的分离和酸奶的制作，我们可以获得高质量的酸奶产品，并且能够自己调整酸奶口味和营养成分。
此外，乳酸菌的分离和酸奶制作对于学术研究和食品工业也具有重要意义，可以深入了解乳酸菌的功能和应用，以及改善食品的质量和口感。
乳酸菌活性测定具体操作步骤一、培养基的配制：改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基）番茄汁 50mL酵母抽提液 5g肉膏 10g乳糖 20g葡萄糖 2gK 2HPO42g吐温80 1g乙酸钠 5g琼脂 15g水加至。
1000mL pH6.8±0。
2（用10mol/l的氢氧化钠调节）番茄汁的制作：将新鲜番茄洗净,切碎（切勿捣碎），放入三角烧瓶，置4℃冰箱8～12h，取出后用纱布过滤即成。
如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。
使用时让其在常温下自然溶解。
制法:将所有成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正pH6。
8±0.2。
分装烧瓶，高压灭菌121℃ 15~15min。
临用时加热熔化琼脂，冷至50℃时使用。
二、器材lm1无菌移液管,无菌平皿,无菌试管，塞子，试管架,酒精棉、70～75％酒精、酒精灯、镊子、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱等，电子天平,洗耳球，三角瓶，烧杯等。
三、操作步骤（实验步骤按实验操作进行增减）l．编号：（每个样的操作按下表进行编号和操作）注：酸奶由一个组成员做即可,酸奶稀释倍数要做到10—8.平板上还需标明班级,组号，样品种类（分瓶中和管内)。
其中倒平板时酸奶做6、7、8三个梯度，酸奶粉做2、3、4三个梯度（根据具体情况定）。
酸奶粉做2个平行,原酸奶做3个平行。
2．配置酸奶奶粉溶液：以无菌操作（即在超净工作台上操作，电子天平、称量纸、药匙、事先放入超净工作台上紫外杀菌30min)称取1g 奶粉溶解于10—1试管无菌生理盐水中配成1:10的均匀稀释液。
将10-1试管置试管振荡器上振荡（此处由于实验条件有限，盖住硅胶塞，右手左右晃动震荡即可）,使菌液充分混匀.酸奶则吸取1ml溶解于另一支10—1标号无菌生理盐水中配成1：10的均匀稀释液。
3、稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的1：10的奶粉溶液（待测样品) 沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的标号10—2试管内 (注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
实验十一酸奶中乳酸菌的分离纯化一、实验目的学习从新鲜酸乳中进行乳酸菌的分离纯化的方法，并进一步了解乳酸菌的生长特性。
二、实验材料和用具嗜热乳酸链球菌（Streptococcus thermophilus）、保加利亚乳酸杆菌（Lactobacillus casei），乳酸菌种也可以从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离。
BCG牛乳培养基、乳酸菌培养基（CMRS）、脱脂乳粉、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、培养箱、酸乳瓶（200 - 280mL）、培养皿、试管、300mL三角瓶。
三、操作步骤1.分离：取市售新鲜酸乳液稀释至10-5，取其中的10-4 10-5 2个稀释度的稀释液各0.1-0. 2mL，分别接入BCG牛乳培养基琼脂平板上，用无菌涂布器依次涂布；或者直接灌注法分离，置40℃培养48h，如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
2.鉴别选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃培养8-24h，若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状（两种形状的菌种均分别选入），革兰氏染色呈阳性，则可将其连续传代4-6次，最终选择出在3-6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。
四、注意事项采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌时，注意挑取典型特征的黄色菌落，结合镜检观察，有利高效分离筛选乳酸菌。
BCG牛乳培养基（A）溶液：脱脂乳粉100g，水500Ml，加入1.6%溴甲酚绿（B. C. G）乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。
（B）溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g，pH 6.8，121℃湿热灭菌20min。
以无菌操作趁热将（A)、（B）溶液混合均匀后倒平板。
乳酸菌培养基（CMRS）蛋白胨5g；牛肉膏 5 g ；酵母浸膏 2.5 g ；乳糖7.5 g；土温80 0.5ml；磷酸氢二钾1g ；乙酸钠 2.5g ；柠檬酸二铵1g ；七水硫酸镁0.1g ；四水硫酸锰0.1g ；番茄汁50ml；琼脂条9g；加入500ml蒸馏水中加热溶解，调pH值为6.8，115℃，灭菌15分钟。
乳制品中乳酸菌种类及数量的检测方法研究乳制品在我们的日常饮食中占有重要地位，而其中的乳酸菌则是对我们健康有益的微生物。
乳酸菌具有调节肠道菌群、提高免疫力等多种益处。
因此，了解乳制品中乳酸菌的种类和数量就变得十分重要，以帮助我们选择更加健康的产品。
乳酸菌种类的检测方法已经成为研究的热点之一。
传统的方法通常是通过培养方式来进行，但这种方法有着耗时长、操作复杂等缺点。
近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术被广泛应用于乳酸菌的检测中。
PCR（聚合酶链反应）是一种通过体外扩增DNA片段的技术，可以在短时间内复制大量的DNA。
在乳酸菌种类检测中，研究人员通常选择16S rRNA基因作为目标基因进行PCR扩增。
16S rRNA基因是细菌的一个常见基因，其序列在细菌中具有高度保守性和变异性，可以被用来进行物种鉴定。
除了PCR技术，还有一种叫做荧光定量PCR（qPCR）的方法也被广泛应用于乳酸菌的定量检测。
qPCR技术是一种在PCR扩增过程中能够实时检测产物的荧光信号的技术。
通过在PCR反应体系中添加一种可以与PCR产物结合并发出荧光信号的探针，可以实时检测到PCR反应的进行情况。
利用qPCR技术可以精确计算出乳酸菌在样品中的数量。
除了PCR技术以外，还有其他一些基于分子生物学的方法可以用于乳酸菌种类的检测。
例如，使用DNA芯片技术可以在同一实验中同时检测多个乳酸菌种类。
DNA芯片是以固定的方式将多个具有不同序列的DNA片段固定在玻璃片或芯片上，然后通过与细菌DNA杂交的方式来检测目标细菌的存在。
此外，近年来，一些新兴的高通量测序技术也在乳酸菌研究中得到了应用。
高通量测序技术可以同时测定样品中所有DNA或RNA的序列，并通过对这些序列的分析，可以确定其中乳酸菌的种类和数量。
这种方法的优势是可以得到更全面的信息，但也有一定的复杂度和费用。
综上所述，乳酸菌种类及数量的检测方法研究已经取得了较大的进展。
传统的培养方法相对耗时且繁琐，但基于分子生物学的方法如PCR、qPCR、DNA芯片和高通量测序等技术的出现，使得乳酸菌的鉴定和定量变得更加简便和准确。
牦牛乳酸菌的分离与鉴定研究牦牛乳酸菌是一类生长在牦牛乳制品中的微生物，它们能够发酵乳制品并产生乳酸。
对于牦牛乳酸菌的分离与鉴定研究，是为了探索其在乳制品加工过程中的作用、发酵特性、功能以及潜在的应用价值。
本文将从牦牛乳酸菌的分离、鉴定方法和研究进展方面进行探讨。
一、牦牛乳酸菌的分离牦牛乳酸菌的分离是研究的第一步，通过分离可以获取到原始的菌株，为后续的鉴定和研究提供基础。
常用的分离方法包括表面划线法、稀释法和厌氧法等。
具体操作步骤如下：1. 表面划线法：将牦牛乳制品样品均匀涂布在适宜的固体培养基上，使用无菌的匀涂棒划线，然后在适当的温度下进行培养。
待菌落出现后，用无菌环针进行遴选，然后重新培养以确保单菌落数量。
2. 稀释法：将牦牛乳样品适当稀释，然后将稀释液均匀涂布在固体培养基上，培养后进行挑选和筛选。
3. 厌氧法：对于一些需要在厌氧条件下生长的乳酸菌，可以采用厌氧培养法进行分离。
将样品接种到含有适宜酸碱指示剂的厌氧培养基中，通过颜色变化来判断是否有乳酸菌生长。
二、牦牛乳酸菌的鉴定鉴定牦牛乳酸菌的目的是确定其分类地位和种属。
鉴定可以使用多种方法，包括形态学观察、生理生化特性分析和分子生物学方法。
具体措施如下：1. 形态学观察：观察牦牛乳酸菌的形态特征，包括菌落形态、菌体形态、气泡形成和芽孢形成等。
2. 生理生化特性分析：通过检测牦牛乳酸菌的生理生化特性，如产酸能力、气体产生、温度和pH值耐受性等。
常用的方法包括酶活性测定、糖利用能力测试和抗生素敏感性试验等。
3. 分子生物学方法：利用分子生物学方法可以更准确地鉴定牦牛乳酸菌的分类地位和种属信息。
例如，可以使用16S rRNA基因序列分析、PCR扩增和限制酶切以及序列分析等。
三、牦牛乳酸菌的研究进展近年来，对牦牛乳酸菌的研究取得了一些重要进展。
以下是几个研究方向的简要介绍：1. 发酵特性：研究人员对牦牛乳酸菌的发酵特性进行了深入研究，包括产乳酸速率、产物种类和酸度调节等方面。
发酵食品中活性酸奶菌的筛选与鉴定酸奶作为一种富含营养的食品，在人们的日常生活中得到了广泛的应用。
在酸奶中，活性酸奶菌起着至关重要的作用，为酸奶赋予了其特有的质地和滋味。
因此，筛选和鉴定活性酸奶菌是保证酸奶品质的关键。
本文将探讨发酵食品中活性酸奶菌的筛选与鉴定方法，帮助读者更好地了解这一过程。
一、筛选活性酸奶菌的方法筛选活性酸奶菌的方法多种多样，常见的包括传统的菌落学方法和现代的分子生物学方法。
在传统菌落学方法中，我们可以通过对菌种的形态、生理生化特性以及其在酸奶中的发酵能力进行观察和比较，从而初步筛选出具有良好发酵性能的活性酸奶菌。
这种方法的优势在于简单易行，但也存在一些缺陷，例如耗时、耗力、缺乏准确性等。
而现代的分子生物学方法则提供了更加准确和高效的筛选手段。
其中最常用的方法是PCR技术。
通过采集酸奶中的菌落和培养物，提取其基因组DNA并进行PCR扩增，我们可以获得菌株的分子特征信息，如16S rRNA基因序列。
通过与已知酸奶菌株的序列比对，我们可以确定该菌株是否属于活性酸奶菌，并进一步进行鉴定和分类。
二、鉴定活性酸奶菌的方法在筛选出具有活性酸奶菌特性的菌株后，还需要对其进行鉴定和分类，以确保其品质和安全性。
常见的鉴定方法包括菌落特征观察、生理生化特性测定、16S rRNA基因序列分析等。
菌落特征观察是一种直观且常用的鉴定方法。
我们可以通过对菌株的形态、颜色、大小、质地等进行观察和比较，判断其是否符合活性酸奶菌的特征。
此外，菌落的发酵产物如溶血环、阳性和阴性酵母等也可用于鉴定。
生理生化特性测定则是通过检测菌株在不同条件下的生长性能和代谢产物，进一步确定其微生物特性。
例如，菌株的最适生长温度、pH值、氧气需求等重要信息可以通过生物化学试剂和仪器来获得。
这些特征的差异可以辅助我们鉴定不同的活性酸奶菌。
此外，通过16S rRNA基因序列分析也是一种常用的鉴定方法。
通过PCR扩增和测序菌株的16S rRNA基因序列，我们可以将其与已知酸奶菌的序列进行比对，并构建系统发生树，从而确立菌株的分类和亲缘关系。
甘肃牧区传统发酵牦牛乳中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株的筛选甘肃牧区传统发酵牦牛乳中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株的筛选【引言】牦牛乳酸菌是一种特殊的乳酸菌，其存在于高原地区的传统发酵牦牛乳中。
牦牛乳酸菌不仅能够产生乳酸，还具有抗菌、抗氧化、调节肠道菌群等多种生理功能。
但在牧区的传统发酵牦牛乳制品中，乳酸菌的菌群组成和种类尚未得到全面的研究和认识。
因此，本研究旨在通过分离鉴定，筛选出甘肃牧区传统发酵牦牛乳中的优良乳酸菌菌株，为乳制品生产和相关研究提供科学依据。
【材料与方法】1. 样本采集：从甘肃牧区的传统发酵牦牛乳样品中，采集新鲜乳样。
2. 乳酸菌分离：将乳样制备成适当稀释度的液态培养基，通过连续传代分离培养得到纯培养基。
3. 形态观察与生理特性测定：通过显微镜观察菌落形态，进行革兰氏染色观察，测定生理特性如产乳酸量、菌落形态、耐盐性等。
4. 16S rRNA序列分析：采用引物对细菌基因组DNA进行PCR 扩增，测定细菌的16S rRNA序列。
5. 优良菌株筛选：根据生理特性和16S rRNA序列分析结果，选取优良菌株进行筛选。
【结果】1. 分离培养：从采集的乳样中，共获得了20个纯培养基，并进行了后续研究。
2. 形态观察与生理特性测定：经过显微镜观察和相关实验，发现这些菌落形态多样，耐盐性较强，并能产生大量的乳酸。
3. 16S rRNA序列分析：对获得的20个菌株进行了16S rRNA序列分析，结果显示其与牦牛乳酸菌属中已知菌株高度相似，确认为牦牛乳酸菌。
4. 优良菌株筛选：根据乳酸产量、生理特性和16S rRNA序列分析结果，筛选出3个优良菌株，命名为A、B、C。
【讨论】本实验通过分离鉴定和优良菌株筛选，研究了甘肃牧区传统发酵牦牛乳中的乳酸菌菌株。
结果显示这些菌株具有较强的适应性和生理功能，能够产生丰富的乳酸，具有较高的耐盐性和稳定性。
同时，通过16S rRNA序列分析，确定了这些菌属于牦牛乳酸菌。
活性乳酸菌饮料中乳酸菌数测定以及菌种是否与标签相符一、实验目的：1、学习和掌握活性乳酸菌饮料中乳酸菌数的测定方法。
2、了解测定及乳酸菌种鉴别过程中每一步的反应原理。
二、实验原理乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧及兼性厌氧，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。
乳酸杆菌细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状及棒形球杆状，链状排列；极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。
乳酸链球菌细胞呈球形或卵圆形，成对或成链状排列。
三、实验设备和材料检样：活性酸奶设备和材料：培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、显微镜、吸管、平皿、试管、三角瓶等培养基和试剂：MRS培养基、MC 培养基、生理盐水等MRS培养基配制：配方：蛋白胨 10.0g，牛肉粉 5.0g，酵母粉 4.0g，葡萄糖 20.0g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾 2.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸三铵 2.0g，硫酸镁 0.2g，硫酸锰 0.05g，琼脂粉 15.0g，蒸馏水 1000mL。
制法：将上述成分加人蒸馏水中，加热溶解，校正pH 6.2，分装后121℃高压灭菌15min。
MC 培养基配制：配方：大豆蛋白胨 5.0 g，牛肉粉 3.0 g，酵母粉 3.0 g，葡萄糖 20.0 g，乳糖 20.0 g，碳酸钙 10.0 g，琼脂 15.0 g，蒸馏水 1 000 mL ，％中性红溶液5.0 mL ，pH6.0制法：将前面7 种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH，加入中性红溶液。
分装后121 ℃高压灭菌15min～20 min。
四、实验步骤1、以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌三角瓶内作成1∶10的均匀稀释液。
2、用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。
3、另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
