《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》

瘦肉精检测中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名盐酸克伦特罗；是一种平喘药。

该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。

盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。

英文名：Clenbuterol; Spiropent; Planipart; NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha-(((1,1-dimethylethyl)amino)methyl)benzene m e t h a n o l CAS号：37148-27-9分子式：C12-H18-Cl2-N2-O理化特性白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

编辑本段瘦肉精检测方法GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定气相色谱-质谱法（GC-MS）GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。

Fente C. A 等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。

另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。

因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法（NY/T468~2001）。

高效液相色谱法（HPLC）HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。

广西地方标准《尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定》（征求意见稿）编制说明1．任务来源根据广西壮族自治区质量技术监督局桂质监函[2010]342号文件，关于下达2010年第二批广西地方标准制定（修订）项目计划的通知，由广西兽药监察所承担《尿液中盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定—胶体金免疫层析法》（编号：2010-2032）地方标准制定工作，起草了征求意见稿，已完成大量的实验研究和验证工作。

现将征求意见稿的说明汇报如下。

2. 本标准制定的目的和意义盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇快速筛选检测常用的酶联免疫法（ELISA方法）由于对检测设备、环境条件、操作技能要求高，同时受检测周期长、小批量检测成本高等因素的限制，在基层推广应用较为困难。

快速检测卡（以下简称检测卡），是以胶体金技术和免疫层析技术相结合生产的一种简便、快速、准确，可进行现场操作的快速检测方法。

它利用抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇单克隆抗体、胶体金技术和免疫层析技术，不需要仪器和设备，在10 min内就能检测出结果，可以为畜产品质量安全监管提供方便、快速、低成本的检测方法。

3. 制定本标准的依据本标准编写格式上依据以下标准：GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》GB/T2001.4-2001《标准编写规则第四部分：化学分析方法》4. 本标准主要技术内容盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇都属于ß-2兴奋剂，易溶于水。

本方法采用胶体金技术和免疫层析技术进行检测。

我们通过大量实验对检测卡的检测限，重现性，影响因素进行了实验, 盐酸克伦特罗检测限为3μg/L, 莱克多巴胺检测限为3μg/L, 沙丁胺醇检测限为5μg/L。

4.1检测卡最低检测限试验将不同浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准液分为5组，每组10个样，各组浓度分别为2、3、4、5、6、7 ng/ml，分别用检测卡检测，实验室温度为24 ℃，相对湿度60%，10 min内观察结果（见表）。

酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法作者：张清超来源：《现代食品》 2017年第11期盐酸克伦特罗俗称瘦肉精，是人工合成类的β- 肾上腺素兴奋剂的一种，在治疗支气管扩张方面有显著效果，用量适当时，是防治哮喘、肺气肿等肺部疾病的有效物质；但当其用量为正常治疗量的5 ～ 10 倍时，在能量重分配的作用下，将导致脂肪沉积异常减少、肌肉合成异常增加，部分非法使用者往往将其添加到动物饲料中，用以改善动物胴体品质。

当动物食用盐酸克伦特罗后，其体内将残留不同程度的盐酸克伦特罗，用其制作的食品一旦被人们食用，将引发一系列中毒症状，严重危害人体生命安全。

调查显示，盐酸克伦特罗一次摄入量过大，人体将产生呕吐、心跳骤然加速等异常生理反应，严重者甚至直接死亡，因此被世界上大多数国家禁用。

近年来，在我国的严厉打击下，非法生产销售添加盐酸克伦特罗食品的现象显著减少，但畜产品抽检的实际工作显示，瘦肉精仍时有检出，加强对畜产品中盐酸克伦特罗的检测势在必行。

在多种检测方法中，胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法较为常见，广泛应用于畜牧业中，具有准确率高、操作简便、耗时短等优点。

下面本文将就酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法进行进一步分析和总结。

1 原料与方法1.1 原料到附近市场随机抽取一批剔除杂质、脂肪的无皮精肉，使用高速捣碎机对无皮精肉进行处理，彻底捣碎后将所有精肉混合均匀并置于冰箱冷冻备用。

检测时，从冰箱冷冻室抽取5 g 捣碎样品，将25 mL 的50 mmol/L HCl与样品混合，持续摇动至均质。

在离心管中加入5 g 均质物，以10 000 r/min 的速度高速离心15 min，分离血清，提取上清液，在上清液中加入300μL 的1 mol/L NaOH，混匀并静置15 min。

15 min 后，在混合上清液中加入4 mL 的500 mmol/L KH2PO4，混匀静置，保存在温度为4 ℃左右的环境中。

90 min 后，取出混合液，以10 000 r/min的速度高速离心15 min，分离上清液，待检，待检标本共10 份[1]。

应用酶联免疫吸附法(ELISA)结合胶体金试纸法快速筛选猪尿中的盐酸克伦特罗残留刘子芝;尹望中;杜永平;阳积文【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2005(22)11【摘要】猪尿中盐酸克伦特罗（Clenbuterol．简称CL）的残留检测，目前的检测方法．主要有高效液相色谱法（HPLC）．气相色谱-质谱法（GC/MS）．毛细管区带电泳法（CE）和酶联免疫吸附法（ELISA）等。

其中GC／MS法是农业部规定的动物组织中CL确证检测方法（NY/T468-2001）．ELISA法是农业部规定的猪尿中CL筛选检测方法。

GC/MS法具有灵敏、准确、特异的优点，但存在仪器贵重、操作烦琐、费用昂贵、耗费时间等问题．限制其在基层日常工作中的应用。

【总页数】2页(P23-24)【作者】刘子芝;尹望中;杜永平;阳积文【作者单位】天津市动物检疫站,300211;天津市动物检疫站,300211;天津市动物检疫站,300211;天津市大港区动物检疫站,300270【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.分散液相微萃取/液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中的盐酸克伦特罗与氯霉素[J], 钱鸣蓉;吴俐勤;章虎;刘飞;李锐;陈志民;李婷;方丽珍2.酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪肉中盐酸克伦特罗 [J], 薛金英3.应用ELISA检测商品肉猪尿样中盐酸克伦特罗残留 [J], 张素梅;杨明凡;班付国;周红霞;李智丽4.猪尿液中盐酸克伦特罗残留的ELISA法和GC-MS法检测 [J], 杨艳艳;王选年;魏红;邢广旭;赵东;柴书军;张改平5.胶体金免疫层析法快速检测盐酸克伦特罗残留 [J], 张慧嫦;张少恩;吴忠华;罗鹏;游雄;吴丽燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。

GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。

本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。

本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。

本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。

线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。

GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。

GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。

GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。

GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。

本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。

GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom- chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。

对胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗的几点分析
杨旭
【期刊名称】《饮食科学》
【年(卷),期】2017(000)10X
【摘要】克伦特罗是常见β-肾上腺素受体激动剂成分,在畜牧生产中常作为饲料添加剂使用,对动物体内代谢途径产生调节作用,具有加速肌肉生长的效果。

但人长期
使用含克伦特罗食品,可能出现乏力、头晕、心悸等中毒症状,严重时可能危及生命。

目前,欧盟各国以及我国等国家地区已经明确禁止克伦特罗用于动物饲料添加剂,规
定在动物类食品中不得检出克伦特罗残留。

在有关动物组织样品克伦特罗添加检测方法中,胶体金免疫层析法具有检测速度快、操作简单的优势,且抗基质干扰能力强,在基层现场筛查中有较好的应用价值。

本文即尝试应用胶体金免疫层析法对猪肉中克伦特罗进行定量检测,对检测方法以及具体结果进行分析,通过试验结果验证了胶
体金免疫层析定量检测猪肉中克伦特罗残留的可行性。

【总页数】2页(P17-18)
【作者】杨旭
【作者单位】山东银宝食品有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R155.5
【相关文献】
1.胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗 [J], 李超辉;陈雪岚;郭亮;许恒毅;刘文娟;赖卫华;熊勇华
2.猪肉中克伦特罗的检测——猪肉中的瘦肉精检测整体解决方案 [J], 莱伯泰科有限公司
3.质谱快速分析猪肉中痕量沙丁胺醇及克伦特罗 [J], 肖义坡;卢海艳;吕邵军;谢少贤;王兆征;陈焕文
4.液相色谱串联质谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗不确定度分析 [J], 骆晓敏;阮征;李汴生;梁兰兰;戚平
5.猪饲料和猪肉制品中盐酸克伦特罗残留检测分析 [J], 庞苏纳
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2021年第10期畜禽养殖业为避免发生各类疾病造成减量的问题,需要采用相应药物进行治疗,畜禽产品的体内就会残留相应的药物,储存在体内,如果兽药残留超标,畜禽产品被人所食用之后,会对人的身体健康造成影响。

所以加强对畜禽产品的兽药残留检测就显得比较重要,通过应用胶体金免疫层析法检测兽药残留,这对保障检测的准确性有着积极意义。

1畜禽产品兽药残留胶体金免疫层析法检测原理和方法畜禽产品兽药残留的检测中应用胶体金免疫层析法是提高兽药残留检测质量的重要方法,应用过程中要按照相应的方法要求执行。

胶体金免疫层析法应用中,主要是通过胶体金这一分散相,粒径1~100m m 的金溶胶,在静电以及疏水的作用下,把蛋白质等相应的高分子吸附以及结合在金溶胶表面,通过纳米金颗粒在对抗体标记,金标抗体聚集相应量的过程中能形成肉眼可以看到的紫红色,对抗体以及反应结果就能直接性测定。

兽药残留检测中应用胶体金免疫层析法有着不同的方法,如竞争抑制法以及夹心法,采用不同的方法检测的范围有所不同,如在对竞争抑制法的应用主要是对类固醇以及兽药残留检测,而采用夹心法是对病毒细菌等残留检测,所以在实际应用过程中就要能和实际的需要相结合。

胶体金免疫层析法在畜禽产品兽药残留的检测过程中,应用操作比较简单,也有着经济性的特征,这就需要把被检测样品溶液滴加到试纸上,观察颜色变化的状况来确定检测最终结果。

在检测应用的过程中,把样品溶液滴加到样品垫上,样品溶液在层次作用下通过胶体金标记抗体结合垫,在经过包被抗原以及二抗检测线和控制线,溶液中如果有兽药成分,药物成分和金标抗体结合,T 线不显色,反之会显色。

2畜禽产品兽药残留胶体金免疫层析法的检测应用应用胶体金免疫层析法检测畜禽产品兽药残留,要注意根本不同的兽药残留类型进行检测。

由于抗生素对人体健康产生的危害较大,所以胶体金免疫层析法对畜禽产品中抗生素兽药残留的检测显得非常重要。

胶体金免疫层析法在实际应用中,可对猪肉以及鸡肉中的氯霉素残留检测,检测极限值达0.3μg/kg ,采用该检测方法的应用效果和液相色谱串联质谱法相同。

盐酸克伦特罗的残留及检测
王选年;康晓迪;潘耀谦;张改平
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2002(023)003
【摘要】本文回顾了盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CL)作为生长促进剂在肉食动物体内的吸收、分布、代谢和残留状况,以及人们食用残留CL的肉品后引起的中毒事件.同时介绍了FDA,WHO及我国政府规定的CL在肉品中的最大残留限量标准和常用检测技术.指出CL在动物体内具有吸收快、分布广,残留性积累和半衰期长等生物学特性.应用以酶免疫分析技术为基础的筛选法和以色谱技术为基础的确证法相结合的残留检测体系是防止CL非法使用和保障肉品安全的有效手段.
【总页数】6页(P41-46)
【作者】王选年;康晓迪;潘耀谦;张改平
【作者单位】河南职业技术师范学院动科系,河南新乡,453003;河南百奥生物工程有限公司,河南郑州,450002;解放军军需大学动科系,吉林长春,130062;河南省农业科学院生物技术研究所,河南郑州,450002
【正文语种】中文
【中图分类】S8569;S857.84
【相关文献】
1.快速检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术评价 [J], 叶雪珠;王强;赵首萍;张永志;王钢军
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3.盐酸克伦特罗残留检测研究进展 [J], 孙来玉;尹莉;姚婷;杨金田;邵朝纲;钱坤
4.液相色谱质谱联用方法对盐酸克伦特罗残留检测的研究进展 [J], 伍晓红;聂婉;陈秋玲;周柳;王琤(韦华)
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GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。

本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。

本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。

本方法检出限：第一法气相色谱一质谱法为0.5pg/kg第二法高效液相色谱法为0.5pg/kg；第三法酶联免疫法为0.5pg/kg。

线性范围：第一法气相色谱一质谱法为0.025ng〜2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng〜4ng；第三法酶联免疫法为0. 004ng〜0.054ng。

GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。

GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。

GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中P -激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。

GB/T21313-2007动物源性食品中6-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了P -受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/ 质谱确证方法。

本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种P -受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。

GB/T22286-2008动物源性食品中多种B -受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、塞曼特罗(cimat-erol)、塞布特罗(cimbuterol)、莱克多巴胺(ractompamine)、克仑特罗(clenbuterol)、漠布特罗(brombu-terol)、苯氧丙酚胺(isoxsuprine)、马布特罗(mabuterol)、马贲特罗(mapenterol)、漠代克仑特罗(brom- chlorbuterol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。

克罗特伦快速检测实验报告盐酸克伦特罗 (Clenbuterol,CLB) ,又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O•HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。

当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。

当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。

国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。

实验步骤（1）使用前将待测样本溶液恢复至室温（2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时（3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。

阴性(-): 两条紫红色条带出现。

表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL,或不含有。

阳性(+): 检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL。

无效:未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

结果与讨论若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线);测试端多余的金标盐酸克伦特罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。