原花青素值的测定

四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。

其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。

本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。

通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。

二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。

由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。

目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。

这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。

高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。

但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。

紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。

然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。

薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。

原花色素的提取及测定一、实验原理原花色素，也称原花青素，是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。

也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。

原花色素属于生物类黄酮,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。

依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。

从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。

其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（OPC）。

原花色素具有很强的抗氧化作用，能清除人体内过剩的自由基，提高人体的免疫力，可作为新型的抗氧化剂用于医药、保健、食品等领域。

利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附、洗脱得到原花色素。

D101树脂是一种球状、非极性交联聚合物吸附剂，具有相当大的比表面和适当的孔径，对皂甙类、黄酮类、生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取类似性质的有机物质。

原花色素（I）的4~8连接键很不稳定，易在酸作用下打开。

反应过程（以二聚原花色素为例）是：在质子进攻下单元C8（D）生成碳正离子（II），4~8键裂开，下部单元形成（-）-表儿茶素（III），上部单元成为碳正离子（IV），失去一个质子成为黄-3-烯-醇（V），在有氧条件下失去C2上的氢，被氧化成花色素（VI），反应还生成相应的醚（VII）。

若采用正丁醇溶剂可防止醚的形成。

（如下图所示）在一定浓度范围内，原花色素的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的原花色素含量。

但盐酸-正丁醇法受原花色素的结构影响较大，对于低聚度原花色素及儿茶素等单体反应不灵敏。

二、实验器材新鲜山楂，烧杯，玻璃层析柱，大孔吸附树脂D-101，具塞试管*9，移液枪，紫外分光光度计，水浴锅；三、实验试剂60%乙醇，95%乙醇，原花色素标准品(1.0mg/mL)，HCl-正丁醇，2%硫酸铁铵，2.0mol/L HCl；四、实验步骤Ⅰ原花色素的制备1、称取新鲜山楂10.0g，剪成块状，置入锥形瓶中，加入40.0mL蒸馏水，沸水浴30min，间期混匀。

花青素检测内容和方法花青素检测是一项重要的化学分析技术，用于测定植物和食品中的花青素含量。

花青素是一类常见的天然色素，具有抗氧化和抗炎作用，因此对其含量进行快速和准确的测定具有重要的科学和应用意义。

以下为50条关于花青素检测内容和方法的详细描述：1. 花青素是一类具有紫、蓝、红等颜色的天然色素，主要存在于植物的花朵、果实和叶子中。

2. 花青素的主要类型包括花色素苷、原花青素和异花青素等，它们在植物中起着色素和抗氧化作用。

3. 花青素检测的方法包括分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等，常用的是分光光度法和高效液相色谱法。

4. 分光光度法是利用物质吸收特定波长的光线进行测定，通过比色法或比浊法来测定花青素的含量。

5. 高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪进行测定，通过分离和检测样品中的花青素成分来计算含量。

6. 质谱法是利用质谱仪进行测定，通过记录花青素分子的质荷比来确定其含量。

7. 花青素检测常用的标准曲线方法是通过不同浓度的标准品制备标准曲线，再根据待测样品吸光度的测定值来计算含量。

8. 花青素的提取方法包括有机溶剂提取、酸碱水提取、超声波提取等，不同样品可选择合适的提取方法。

9. 有机溶剂提取是利用乙醇、丙酮等有机溶剂将花青素从植物组织中提取出来，然后通过浓缩和干燥得到提取物。

10. 酸碱水提取是利用酸性或碱性水溶液将花青素从植物组织中提取出来，可以有效保留花青素的天然结构。

11. 超声波提取是利用超声波功率促使样品中的花青素溶解在有机溶剂或水中，提高了提取效率。

12. 花青素的测定结果可根据测定方法的不同而有所差异，因此需要在同一实验条件下进行多次重复测定来确保结果的准确性。

13. 在花青素检测过程中，可能会受到样品中其他化合物的干扰，因此需要进行干扰检查和修正。

14. 花青素检测结果可以用于评价植物的品质、食品的营养价值和天然色素的应用价值。

15. 花青素检测在食品工业中具有重要的应用，如在果汁、酒类、饮料等产品中进行质量控制。

红米原花青素的测定方法红米原花青素的提取及测定方法1、标准曲线的配置标准溶液的配制，用甲醇配制原花青素母液2mg/mL标准液配制：母液：2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 7ml 8ml甲醇：8ml 7ml 6ml 5ml 4ml 3ml 2ml2、试剂试剂a：10g/L香草醛甲醇溶液，10g香草醛溶于1L甲醇溶液试剂b：245ml浓硫酸（18.4mol/L）溶于500ml甲醇溶液，并用甲醇定容直1L。

3、提取方法将红米磨粉后称0.5g，放入15ml试管中，加入8ml的80%甲醇溶液，至于黑暗的地方，每隔2h左右振荡一次，一直浸泡提取8小时。

4、测定方法吸取1ml提取液或标准液，加入10ml离心管中，然后依次加入2.5ml试剂a和2.5ml试剂b，混匀后35℃下水浴20min，水浴结束后8000rm离心10min，用移液器取上清液测定其在500nm下的吸光值。

5、参考文献：1、Sun B, Ricardo-da-Silva JM, Spranger I Critical Factors of Vanillin Assay for Catechins and Proanthocyanidins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46: 4267-42742、Gunaratne A, Wu K, Li D, et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins. Food Chemistry, 2013, 138: 1153-1161。

原花青素含量的测定方法
采用盐酸-香草醛法，以儿茶素为标准物。
HPLC-MS色谱及质谱条件
1.2.6.1色谱条件
色谱柱:Pinnade ⅡC18分析柱,Agilent公司,5μm , 4.6 ×250 mm。流动相:A:水-体积分数为2 %甲酸;B:甲醇。梯度洗脱:0～5 min , 95 %A+5 %B ;5～25 min , 95 %A +5 %B ※100 %B ;25～30 min ,100 % B。流速1mL/min,进样量20 μL,柱温:30 ℃,检测波长280 nm。
DMACA（P-DimethylaminocinnamalCA盐酸-甲醇溶液
DMACA盐酸-乙醇溶液中，DMACA的浓度为0.5-2%，盐酸浓度为10-15%，乙醇浓度为45-55%
DMACA盐酸-甲醇溶液中，DMACA的浓度为0.5-2%，盐酸浓度为8-14%，甲醇浓度为50-55%
1.2.6.2质谱条件
ESI离子源，一级质谱；扫描方式：负离子扫描；扫描范围：m/z为100～1500范围内扫描。毛细管电压4.2kV，锥孔电压50V，毛细管温度350 ℃。
UV检测(ultraviolet detection)
在用HPLC分析鉴定原花青素用时，UV检测器是最常用的。但是由于许多酚类化合物在UV区都有吸收,因此用UV检测器从酚类化合物中专一检测原花青素很困难,为了克服这一问题,Lazarus等报道有学者提出一种通过原花青素与DMACA柱后进行反应,其生成的产物在640 nm处有特征吸收的方法鉴定原花青素

花青素含量。通过在特定的波长或某一范围的波长下，
测定待测物品的吸光度，近而对原花青素进行定量分
析。
原花青素(procyanidins，简称 PC)是植物中广泛存在的一类属于双黄 酮衍生物的天然多化合物，原花青素具有极强的抗氧化特性，一般存在 于植物的果实、种子、花和皮中，在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、 松树等植物中的含量都很丰富。在原花青素各种不同聚合体中以二聚体 的抗氧化能力最强．原花青素具有多种生物活性，能防治多种疾病，具 有高效、低毒、高生物利用率等特点，在植物中的主要作用是保护植物
NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇溶液，盖塞，摇匀，于95℃的水
浴中加热反应40min 取出，于冷水中迅速冷却，溶液显红色，以0mL
溶液作为空白对照，于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作
原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。
结果见表
取得标样体 积（/ml）
0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
对应标样浓
度（mg/ml)
测的吸光度
值A
b. 样品测定 分别精确吸取10mL 样品，用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样 品待测液3mL 于25mL 具塞试管中，按标准曲线制作项下的操作步骤， 依次分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液（注 释：NH4Fe(SO4)2 溶液， 盐酸正丁醇溶液在这里都是分析纯。是大孔 树脂对原花青素的纯化食盐中的分析纯部分）加热，测其吸光度。根据 标准曲线计算出结果，按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。 4. 结果与分析
中易被氧化的成分，在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是 V-E50 倍，并且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及 美容等作用． 1. 实验原理 朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律， 是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸 光度 A 是吸光物质的浓度 C 及吸收介质厚度 l(吸收光程)的函数。 比耳的结论是，当用适当波长的单色光照射一固定液层厚度的均匀溶液 时，A 与 C 成正比，其数学表达式为:

原花青素含量检测的概述原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。

【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。

自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。

研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。

且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。

目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。

1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。

正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。

1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。

在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。

而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。

在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。

对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。

此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。

随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。

沙棘及其提取物中原花青素含量的分析测定沙棘（HippophaerhamnoidesL.）是一种难得的野生果实，其可食的果实具有极强的营养价值，从根、叶和果实中提取的植物提取物中蕴含着大量药用和营养成分，其中原花青素也是其中重要的成分之一。

近年来，原花青素对抗自由基、抗衰老、抗癌、促进肠道菌群平衡等作用引起了科学研究者的重视，因此，正确测定沙棘及其提取物中原花青素的含量具有重要的意义。

一、原花青素的特点原花青素（Proanthocyanidins）是一种葡萄糖丝氨酸糖基化产物，它由维生素C和黄酮类物质组成。

由于原花青素具有抗氧化、抗自由基、抗衰老、促进肠道健康、抗癌等作用，野生沙棘中其含量较高，因此受到学者们的广泛关注。

二、沙棘中原花青素的测定沙棘中原花青素的测试主要分为两种，即HPLC和核磁共振氢谱法。

最常用的测定方法为HPLC法。

该方法可以对原花青素的含量进行精确测定，从而获得准确的数据。

此外，核磁共振氢谱法也常用于测定沙棘中原花青素的含量。

值得注意的是，由于原花青素的性质和结构特征十分复杂，在测定过程中必须采用一定的标准和质量保证措施，以确保测定结果的准确性。

三、沙棘及其提取物中原花青素测定方法的优点1、有效率高：HPLC测定方法有效率高，可以很快的获得沙棘及其提取物中原花青素的测定结果，为下一步应用提供了有效的帮助。

2、精度高：核磁共振氢谱法测定准确度高，可以更精准的测量沙棘及其提取物中原花青素的含量，这对于后续研究具有重要的参考价值。

3、结果可靠： HPLC和核磁共振氢谱法有较高的精度和准确度，可以提供可靠的测定结果，获取准确有效的药效信息，为临床药物的选择和使用提供科学依据。

结论测定沙棘及其提取物中原花青素含量具有重要意义，HPLC和核磁共振氢谱法是最常用的测试方法。

根据研究表明，HPLC和核磁共振氢谱法具有能够提供可靠、准确、有效的测定结果的优点，可以为药物研究提供有效的数据支持，使药效更好地体现出来。

葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。

也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。

葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。

一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。

【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。

【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。

从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。

原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。

因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。

（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。

的 加 热 能使 原 花 青 素 的提 取 更 充 分 。
关键词 ： 原花青素 ； 提取 ； 测定
Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｎａ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｏ ｏ ｎｔ ｏ ｙ ｎ ｄｉｓｉ ｇ ｔ ｌｓｏ ｅＭ ａ ｋ ｔ ｔ ａ ｔｏ ｎｄ Ｄｅ ｅ ｍ ｎａ ｉｎ ｆＰｒ ａ ｈ ｃ ａ ｉ ｎ ｎ Ｖｅ ｅａｂｅ ｆｔ ｒ ｅ ｈ ＹＡＮＧ ａ － ｕ ， ＡＮＧ ｉ ｇ ＭＡ ｎ Ｘｉ ｏ ｈ ｉ Ｗ Ｌｎ ， Ｙａ
菜 中原 花 青 素含 量 高 低 的规 律 ， 比较 了 ２ 提 取 方 法 的提 取 效 果 。 用 ７ 并 种 ５％的 乙醇溶 液 作 为 提 取 剂 ， 照 料 液 比 为 按
ｌ． ：１ ９ ４的比值 分别在室温和 ７ ℃的恒温水浴 中提取 ３ ｒｉ后 ， Ｏ ０ ｎ 采用紫外分光光度 法测定提取液 中原花 青素的含量。 ａ
ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉｓａ ｄ ｏ ｔ ｉｅ ｏ ｄ ｒｓ ｌ． ｅｒ ｌ ｆｔ ｅｃ ｎｅ ｔ ｆｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｓｗａ “ ｏｏ ｇ ｔ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ｎ ｂａｎ ｄａｇ ｏ ｅ ｕｔ Ｔｈ ｅｏ ｏ ｔｎ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ｓ ｃ ｌｒｉ ｌ ｈ ， ｕ ｈ ｏ ｓｉ ｔ ｅ ｌｗｅ ｅ ｅｓ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｕ ｐ ｅ ｏ ｔｎ ｓｈ ｇ ｅ ” ｈ ｏ ｒｌｖ ｌ， ｈ ａ ｋ ｒｐ ｒ ｌ，ｃ ｎ ｅ ｔｉ ｉｈ ｒ ．Ａｎ ｔｗａ ｒ ｖ ｄ ｔ ａ ｅ ｔｎ ｏ ｌ ｋ ｘｒ ｃ ｉｎ ｄｉ ｓｐ ｏ ｅ ｈ ｔｈ ａｉ ｇ ｃ ｕｄ ｍａ ｅ ｅ ｔａ ｔ ｏ ｍｏ ｅｆ ｌ ． ｒ ｕｌ ｙ Ｋ ｅ ｒ ｓ ｐ ｏ ｎｈ ｃ ａ ｉ ｉｓ ｘｒ ｃｉｎ；ｄ ｔ ｒ ｉ ａｉｎ ｙｗｏ ｄ ： ｒａ ｔｏ ｙ ｎ ｄｎ ；ｅ ｔａ ｔ ｏ ｅｅ ｍ ｎｔ ｏ

一、产品简介：原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。

在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值可计算原花青素的含量。

二、试剂盒组分与配制：三、需自备的仪器和用品：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、甲醇和蒸馏水。

四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备①组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行匀浆，用超声法进行提取（功率300W，温度25℃，时间30min），12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用提取液稀释成1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL 的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：①酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm。

②操作表：4、正式实验：①若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D 代入公式计算；②确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；③正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

香草醛法测定原花青素的含量说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。

通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。

以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。

一、器材/试剂紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。

二、实验步骤1.配制试剂( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液；( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％；( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。

（4）样品溶液：原花青素溶液以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。

浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。

2、扫描最大吸收波长取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。

以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。

确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。

3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度）浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095A（儿茶素）0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175A（儿茶素）0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245A（儿茶素）测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。

花青素检测内容和方法花青素是一类具有强烈吸收红外光的化合物，广泛存在于植物中。

它们赋予了许多植物花朵、水果和蔬菜明亮的颜色。

花青素不仅可以提供视觉上的吸引力，还具有抗氧化和抗炎症等生物活性。

因此，检测花青素的含量和质量对食品、药物和其他相关领域的研究非常重要。

花青素含量的检测方法有许多种，下面将介绍一些常用的方法：1. 分光光度法：分光光度法是一种常见且简便的检测花青素含量的方法。

它基于花青素对特定波长的光有很强的吸收能力。

通过将样品溶解在适合的溶剂中，使用紫外-可见光谱仪测量吸光度，然后根据不同波长下的吸光度值来计算花青素的含量。

这种方法可以测量花青素的总含量。

2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法（HPLC）是一种准确测定花青素含量的常用方法。

它基于为花青素分离和检测提供了高分辨能力的高效液相色谱仪。

首先，样品中的花青素会被分离出来，然后通过波长选择性检测器进行定量分析。

这种方法可以同时测量多种不同类型的花青素，并且具有高灵敏度和高选择性。

3. 液相色谱质谱联用法：液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种更为精确的花青素检测方法。

它将高效液相色谱与质谱技术结合起来，可以通过质谱仪的高分辨率和灵敏度来确定花青素的结构和含量。

这种方法对于复杂的样品和低浓度的花青素分析非常有用。

4. 薄层色谱法：薄层色谱法是一种简单快速的花青素分析方法。

它基于花青素在薄层色谱板上迁移的性质，并通过与特定试剂反应形成具有色素的斑点来检测花青素。

该方法不需要复杂的仪器设备，适用于初步评估样品的花青素含量。

5. 酶联免疫吸附测定法：酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于抗体-抗原反应的花青素检测方法。

通过使用特异性的抗体来检测花青素，可以实现高灵敏度和高选择性的分析。

这种方法对于复杂样品和低浓度花青素的检测非常有效。

总之，准确测定花青素含量对于食品、药物和化妆品等行业至关重要。

上述介绍的不同方法可以根据实际需要选择合适的进行花青素的检测。

原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。

【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。

自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。

研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。

且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。

目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。

1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。

正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。

1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。

在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。

而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。

在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。

对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。

此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。

随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。

香草醛法测定原花青素的含量说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。

通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。

以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。

一、器材/试剂紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。

二、实验步骤1.配制试剂( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液；( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％；( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。

（4）样品溶液：原花青素溶液以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。

浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。

2、扫描最大吸收波长取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。

以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。

确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。

3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度）浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095A（儿茶素）0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175A（儿茶素）0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245A（儿茶素）测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。

硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量一、本文概述本文旨在探讨硫酸香草醛法在测定葡萄籽原花青素含量中的应用。

原花青素作为一种重要的天然抗氧化剂，在葡萄籽等植物中含量丰富，具有显著的生物活性，对人体健康具有积极作用。

因此，准确测定葡萄籽中原花青素的含量对于评估其营养价值和开发相关健康产品具有重要意义。

硫酸香草醛法作为一种常用的原花青素测定方法，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，在食品、药品等领域得到了广泛应用。

本文将详细介绍硫酸香草醛法的原理、操作步骤、影响因素及注意事项，并通过实验验证该方法的准确性和可靠性，为葡萄籽原花青素含量的测定提供科学依据。

二、材料与方法硫酸香草醛、葡萄籽提取物、原花青素标准品（纯度≥98%）、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸等均为分析纯，购自国内外知名试剂公司。

紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。

准确称取葡萄籽粉末适量，加入一定比例的甲醇-水-盐酸混合溶液，置于恒温水浴锅中进行回流提取。

提取液经过离心、过滤后，得到原花青素提取液。

精确称取原花青素标准品，用甲醇溶解并定容，得到不同浓度的标准溶液。

分别取各浓度标准溶液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在一定温度下反应一定时间，测定其吸光度。

以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取适量葡萄籽原花青素提取液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在相同条件下进行反应，测定其吸光度。

根据标准曲线计算样品中原花青素的含量。

所有数据均以平均值±标准差表示，采用SPSS等统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同处理组之间的差异，显著性水平设为P<05。

通过以上方法和步骤，可以准确测定葡萄籽中原花青素的含量，为进一步研究葡萄籽的营养价值和开发利用提供依据。

三、实验结果与分析在本次研究中，我们采用硫酸香草醛法测定了葡萄籽原花青素含量。

此方法基于原花青素在特定条件下与硫酸香草醛发生显色反应，通过测定反应后溶液的光密度值，可推算出原花青素含量。

原花青素测定方法1.电化学法原理:原花青素易以氢供体的形式捕捉其它开朗的自由基构成多酚自由基。

邻苯三酚在碱性水溶液中快速出现自水解链式反应，产生中间产物超氧阴离子自由基-(o2)。

分子量大的多酚所形成的自由基较为稳定，可以发生偶合，形成聚合的多酚分子，同时出现竟之争反应，并使稳步引起邻苯三酚自由基链式反应的趋势弱化或消失，整体表现为具备较强的去除自由基能力，且去除能力在一定的条件下与原花青素的重新加入量存有线性关系，并随体系碱度的减小，羟基氢离子电离而减小。

超氧阴离子自由基(o2-)被去除，自水解链式反应被切断，反应中止，使邻苯三酚在-0.96v(vs.sce)的自水解峰电流增大，故可以作为原花青素的定量测定方法。

试验方法：于5ml比色管中，加入适量浓度的原花青素鞭叶液，0.5ml0.5mol/l的tris-hci(ph=8.33)缓冲溶液，1.0ml5.00mmol/l邻苯三酚，定容刻度，容器。

在1min-6min内，记录读取电位在(-0.8)―(-1.2v)范围内-0.96±0.02v处的二阶导数极谱波。

2.定量核磁共振法原理:定量核磁共振法以被测成分的特征氢核的共振吸收信号为目标进行分析，分析结果直观且准确性好。

原花青素通常就是由表中儿茶素及儿茶素通过4→8位或4→6位的碳-碳键连接，分解成聚合度相同、空间结构十分复杂的混合物。

但每个原花青素分子中只有一个末端单元，并且它的h-4加速度变化不显著，因此可以用它去表观样品中原花青素分子的数量。

试验方法：用微量天平高精度称取内标物邻苯二甲酸氢钾约10mg、样品约40mg，重新加入dmso-d6为溶剂1ml并使其充份熔化，迁移至核磁管中展开1h五音nmr分析。

检测条件：5mmbbo接收器，600.192mhz，五音阔为12335.5hz，脉冲宽度为13μs，取样时间为17s，延迟时间为6s，取样次数为16次。

3.高效液相色谱串联质谱法原理:以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统，经纯化后的样品在液相色谱和质谱部分经过分离和离子化，经由检测器得到质谱图，利用多重反应监测模式对原花青素组分进行定性和定量分析。