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美国CLSI M52商品化微生物鉴定及药敏试验系统的验证过程黄钰竹;王薇;赵海建;王治国【摘要】Before performing patient testing with commercial microbial test systems,each laboratory must verify that it can obtain performance specifications comparable to those of the manufacturer.This includes trueness,precision (reproducibility),and reportable range of test results,and verifying that the manufacturer's reference ranges are appropriate for the laboratory's patient population.American Clinical and Laboratory Standards Institute has set up a committeeto develop a verification process and a quality assurance program for commercial microbial identification system and antimicrobial susceptibility testing system,in order to provide recommendations for US Food and Drug Administration (FDA).This guidance is applicable to instrument systems widely used in clinical laboratories and can also be used for manual testing of microbiological identification and antimicrobial susceptibility testing.The aim of this article is to provide advice for the microbial identification system and antimicrobial susceptibility testing system verification process,based on principles of microbiological identification and antimicrobial susceptibility and CLSI M52 guideline.%应用商品化微生物检测系统检测患者样本前,每个实验室须确定其是否能达到厂商规定的性能规范,包括正确度、精密度(重复性)、检测结果的报告范围,以及厂商参考范围是否适用于实验室患者.对此,美国临床和实验室标准化研究院成立了委员会以制定商品化微生物鉴定和药敏试验系统的验证过程及质量保证计划,为美国食品药品管理局的商品化检测提供建议.该指导方针聚焦于临床实验室广泛应用的仪器系统,也可用于微生物鉴定和药敏试验的手工检测方法.现根据微生物鉴定及药敏试验系统的原理及CLSI M52为商品化微生物鉴定和药敏试验系统的验证过程提供一些参考.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2017(032)004【总页数】4页(P148-151)【关键词】微生物鉴定系统;药敏试验系统;商品化;验证【作者】黄钰竹;王薇;赵海建;王治国【作者单位】北京医院国家老年医学中心,卫生部临床检验中心/北京市临床检验工程技术研究中心,北京100730;北京协和医学院研究生院,北京100730;北京医院国家老年医学中心,卫生部临床检验中心/北京市临床检验工程技术研究中心,北京100730;北京医院国家老年医学中心,卫生部临床检验中心/北京市临床检验工程技术研究中心,北京100730;北京医院国家老年医学中心,卫生部临床检验中心/北京市临床检验工程技术研究中心,北京100730;北京协和医学院研究生院,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R446.5在CLSI M52[1]中，术语“验证”被用于描述当实验室引进新系统时，或采用新的鉴定培养基、药敏试剂、数据库、软件或硬件而造成系统更新时执行的过程和研究。
VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析标准操作规程1.目的规范VITEK2 COMPACT全自动鉴定药敏分析仪的操作规程，确保微生物鉴定药敏分析的准确性。
2.授权操作人经培训并通过考核的检验科微生物检验实验室工作人员。
3.工作原理细菌理化性质不同，分解底物导致PH改变而产生不同颜色。
经光电比色法测定来判断反应结果，不同种类的鉴定卡上有不同数量和类别的生化反应，采用连续检测法，每隔一段时间仪器会自动判读结果，最后结合仪器内部微生物数据库得出鉴定及药敏结果。
4.工作环境相对湿度:20%-80%无凝集水;室温:15-30度，避免日光直射。
5.操作程序5.1卡片选择5.1.1鉴定卡GN 革兰阴性杆菌鉴定卡GP 革兰阳性菌鉴定卡NH 奈瑟菌嗜血杆菌鉴定卡YST 酵母菌鉴定卡ANC 厌氧菌鉴定卡5.1.2 药敏卡AST-GN 革兰阴性菌药敏卡AST-GP 革兰阳性菌药敏卡AST-YST 真菌药敏卡5.2菌悬液配置及稀释5.2.1悬浮液：0.45% NaCL液，PH 4.5-7.25.2.2.菌悬液浓度：鉴定卡GN 0.5 - 0.63 麦氏单位GP 0.5 - 0.63 麦氏单位NH 2.7 - 3.3 麦氏单位YST 1.8 - 2.2 麦氏单位ANC 2.7-3.3 麦氏单位药敏卡AST-GN 3.0ml 盐水+ 145µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-GP 3.0ml 盐水+ 280µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-YST 3.0ml 盐水+ 280µl 1.8 –2.2 麦氏单位菌悬液5.2.3药敏卡稀释方法-按上述浓度手工进行稀释VITEK 2 COMPACT上机前的细菌培养要求(表一) 菌种卡片注：TSA：胰酶大豆琼脂TSAB：胰酶大豆琼脂+5%羊血CBA：哥伦比亚羊血琼脂CHBA：哥伦比亚马血琼脂MAC：麦康凯琼脂CPS ID 3：尿标本产色鉴定平板SDA：沙保弱葡萄糖琼脂CAN: 哥伦比亚CAN琼脂+5%羊血CDC: CDC厌氧琼脂+5%羊血BRU: Brucella布氏琼脂+5%羊血，血红素，维生素K5.3操作流程5.3.1 18-24小时分纯细菌（新鲜菌）；5.3.2根据细菌选卡片（参照表一）；5.3.3使用前将卡片和盐水瓶从冰箱取出，放室温15-20分钟，充分复温；5.3.4在载卡架上放一次性塑料试管（注意：必须使用厂家配套提供的塑料管），每管中加入3ml 0.45% NaCl溶液；5.3.5用比浊仪校正管（Ref 93059）校正比浊仪，测定的数值应在规定范围内；5.3.6按表一建议配制菌悬液，并用比浊仪测定菌液浓度；如同时做药敏试验时，应按二（2）建议进行稀释并混匀；5.3.7将卡片按顺序放在载卡架上，输样管插入到菌液管中。
微生物CLSI文件集锦（你想要的都在这里）说起临床微生物的CLSI文件，大家首先想到的就是CLSI M100S——《抗微生物药物敏感性试验的执行标准》。
但是其实，与临床微生物相关的CLSI文件很多，截至2017年7月，已多达43个。
下面，小编就给您简单介绍一下吧。
1、M02-A12:Approved Standard中文：抗菌药敏试验的性能标准英文：Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests内容与解释：介绍药物纸片扩散法的质量控制标准和最新折点标准。
2、M06-A2: Approved Standard中文：脱水MH琼脂的评估程序英文：Protocols for Evaluating Dehydrated Mueller-Hinton Agar内容与解释：略3、M07-A10:Approved Standard中文：需氧菌稀释法抗菌药物敏感性试验英文：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility T ests for Bacteria That Grow Aerobically内容与解释：描述了肉汤稀释法和琼脂稀释法，而且还包含这些方法的标准化操作流程和CLSI推荐方法的性能，局限性，适应性。
4、M11-A8:Approved Standard中文：厌氧菌抗菌药物敏感性试验英文：Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria内容与解释：在过去的几年内，大部分厌氧菌的耐药表型都发生了很大的改变，导致了许多菌种的经验用药的面临很大的挑战。
对于厌氧菌，琼脂稀释法仍然是参考方法，对于调查研究和科研同样都适用。
而且其他的方法的对比标准也进行了说明，肉汤稀释法也应用于临床实验室，但是现在对脆弱拟杆菌和一些抗生素没有标准。
WS/T 807—2022 临床微生物培养、鉴定和药敏检测系统的性能验证1 范围本标准规定了临床微生物形态学检查、培养、鉴定、药敏、分子即时检测等系统性能验证的要求。
本标准适用于开展临床微生物检验的医学实验室。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB 19489 实验室生物安全通用要求WS/T 442 临床实验室生物安全指南WS/T 639 抗菌药物敏感性试验的技术要求WS/T 640 临床微生物学检验标本的采集和转运3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1参考方法 reference method一种无系统误差，随机误差可控，且准确清晰地描述了测定一个或多个性能参数的检测方法，可用于评估其他检测方法的性能。
3.2比对方法 comparator method用于评估新系统的方法，包括参考方法或已获得药监局批准的商品化方法。
3.3接种物浓度 inoculum接种于微生物检测系统的菌悬液中微生物的浓度，以每毫升菌落形成单位（colony-forming units per milliliter，CFU/mL）表示。
3.4标准菌株 reference strain由菌种保藏机构保藏，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。
3.5性能验证 verification通过提供客观证据，确认微生物检测系统在用于患者标本及标本分离株检测之前能达到与制造商说明书一致的性能。
3.6能力验证 proficiency testing；PT利用实验室室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力（ISO/IEC 17043, 3.7）。
注：能力验证活动包括获认可的能力验证提供者的能力验证计划，以及卫生系统权威机构提供的比对（实验室间质量评价）。
3.7准确度 accuracy测量值和真实值之间的一致性接近程度。
什么是HIS、PACS、LIS、RIS什么是his?医院信息系统的定义（HIS）医院信息系统(Hospital Information System,HIS)在国际学术界已公认为新兴的医学信息学(Medical Informatics)的重要分支。
美国该领域的著名教授Morris.Collen于1988年曾著文为医院信息系统下了如下定义：利用电子计算机和通讯设备，为医院所属各部门提供病人诊疗信息和行政管理信息的收集、存储、处理、提取和数据交换的能力，并满足所有授权用户的功能需求。
什么是PACSPACS（picture archiving and communication systems）全称为医学影像存档与通讯系统。
是近年来随着数字成像技术、计算机技术和网络技术的进步而迅速发展起来的、旨在全面解决医学图像的获取、显示、存贮、传送和管理的综合系统。
PACS在医院影像科室中迅速普及开来。
如同计算机与互联网日益深入地影响我们的日常生活，PACS也在改变着影像科室的运作方式，一种高效率、无胶片化影像系统正在悄然兴起。
在这些变化中，PACS的主要作用有：联接不同的影像设备（CT、MR、XRAY、超声、核医学等）；存储与管理图像；图像的调用与后处理。
不同的PACS在组织与结构上可以有很大的差别，但都必须能完成这三种类型的功能。
对于PACS的实施，各个部门根据各自所处地区和经济状况的不同而可能有各自的实施方式和实施范围。
不管是大型、中型或小型PACS，其建立不外乎由医学图像获取、大容量数据存储及数据库管理、图像显示和处理以及用于传输影像的网络等多个部分组成,保证PACS成为全开放式系统的重要的网络标准和协议DICOM3.0。
什么是lisLIS(laborary information system)是实验室自动化、现在化、正规化管理的必然要求，要求能够提供的功能有：检验单录入（病人信息、结果数据）质量控制（室内质控、室间质控）检验数据工具（数据合并、修改、历史数据的查询）不同用户的授权微生物药敏的专门软件什么是risRIS(Radioiogy information system),即放射信息管理系统.RIS是优化医院放射科工作流程管理的软件系统,一个典型的流程包括登记预约、就诊、产生影像、出片、报告、审核、发片等环节。
2.性能指标2.1外观与结构a）外观应端正、清洁，表面涂、镀层应无明显剥落、擦伤、露底及污垢；b）铭牌及标志应清晰、准确、牢固，所有紧固件不得松动；控制器件操作应灵活、可靠。
2.2功能要求2.2.1系统功能要求a)细菌鉴定及药敏分析系统（以下称：“系统”）可以自动读取试剂板细菌生化鉴定和抗菌药物 MIC 半定量测定的阴、阳性结果；b)应用程序经分析应可得出被鉴定菌株的名称和抗菌药物 MIC 结果；c)应能生成检验报告单；d)应能打印检验报告单。
2.2.2软件临床功能纲要2.2.2.1检测功能2.2.2.1.1标本资料录入提供输入或选择的方式录入标本的姓名、类型及来源等资料。
2.2.2.1.2出具细菌检测报告在软件的指引下，用户可选择出具无菌报告或者有菌报告，出具有菌报告时，软件支持自动对试剂板进行检测并生成相应的判读结果，也支持手工录入细菌检测结果，用户可根据实际情况选择。
2.2.2.2查询功能根据不同的查询条件，用户可对历史报告单及其相关信息进行查询。
2.2.2.3设置功能软件提供各种类型的参数设置，用户可根据实际情况进行预设。
2.2.2.4统计功能根据不同的统计条件，用户可对历史数据进行统计分析。
2.2.2.5WHONET 功能根据不同的 WHONET 数据要求，用户可将历史数据按要求导出。
2.3细菌鉴定及药敏分析系统性能要求2.3.1准确性2.3.1.1细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定准确性的符合率应≥95%；2.3.1.2细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物 MIC 半定量测定准确性的符合性应≥95%。
2.3.2重复性2.3.2.1细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株鉴定重复性的符合率应≥95%；2.3.2.2细菌鉴定及药敏分析系统对质控菌株抗菌药物 MIC 半定量测定重复性的符合率应≥95%。
2.4温育系统性能要求（适用 96A，不适用于 D2Mini/D2Plus）温度准确度及波动a)细菌鉴定及药敏分析系统温度稳定后，准确度偏差应不超过±1.5℃；b)细菌鉴定及药敏分析系统温度波动应不超过3.0℃。
梅里埃产品卖点一、3D培养系统产品卖点：1.能对血标本、痰标本及其他无菌体液进行培养、检测。
2.稳定的显色检测技术，确保检测稳定可靠。
3.先进的读数原理：加速度、速率、阈值，检测覆盖细菌生长周期中任何阶段，避免假阴性的出现。
4.任何培养瓶均支持延迟放入，不会漏检。
5.可查看每个瓶的读数曲线，了解细菌生长情况。
6.高度智能化，允许任意位置放瓶。
7.系统有LIS接口，可以直接联接LIS系统8.不碎的聚合碳纤维瓶，符合实验室生物安全的需要。
9.培养瓶可接受血液、脑脊液、胸水、腹水、关节腔积液等各种无菌体液以及痰液标本，且通过FDA认证。
10.广泛的培养基，包括标准需氧及厌氧瓶、儿童标本瓶、中和抗生素瓶、血标本分支杆菌培养瓶及痰标本分支杆菌培养瓶，满足不同标本的需求。
11.图形化操作界面，操作简单。
对手攻击：1. 显色法是血培养的第二代方法，而荧光法是第三代方法，灵敏度更高。
血培养的检测原理目前共有三种技术：气压感应、显示法、荧光法，而这三种方法均为欧加农公司发明，欧加农将气压感应法卖给了VersaTREK（先德）公司，将荧光法卖给了B-D公司，由于显色法的灵敏度和稳定性都较其它两种方法好，所以自己保留了显色法。
后来梅里埃收购了欧加农，将显色法应用于3D系列仪器。
2. 活性炭对抗生素的吸附能力没有树脂强。
应对解释：活性炭吸附技术和树脂吸附技术分别是各自的专利技术，从以下方面可以看出，血培养并非一定要使用中抗瓶。
①根据CLSI的要求，尽量避免使用含有添加剂的培养瓶，添加剂会促进污染菌的生长。
②抗生素的半衰期约为2.5小时，培养液和血标本的比例大于4：1，释放入血的抗生素不会对细菌生长产生抑制作用。
③CLSI要求的正确的采集方法是：采集2-3次，每次采集2-3套，通过多套次检测以提高阳性检出率。
3. 分枝杆菌和一般细菌生长的最佳温度不一致，同一台仪器不能实现分开控温。
应对解释：首先，不同的孵箱有各自的温控器，可以分开控温。
1 目的制定标准化的天地人TDR-300系列自动细菌鉴定及药敏测试仪操作规程，保证仪器的正常使用2 仪器简介天地人TDR-300系列自动细菌鉴定及药敏测试仪可用于细菌的鉴定和体外抗生素的药敏监测，测定采用天地人试验用的微量检测板，该板内含有培养基、生化试验及相应抗生素。
天地人TDR-300系列自动细菌鉴定及药敏测试仪重复性好、节省操作时间、结果稳定可靠，使实验室的操作达到标准化。
3 原理3.1、细菌鉴定原理TDR鉴定系统运用TDR专利（ZL97 107902.1）“双歧—矩阵法”精选试验组成最佳鉴定性状组合，采用新颖的不确定试验方法计算百分概率鉴定细菌结果，可鉴定葡萄球菌、肠球菌、链球菌、奈瑟菌/嗜血杆菌、肠杆菌科、弧菌科、芽孢杆菌、棒状杆菌、非发酵菌、酵母样真菌及厌氧菌在内的细菌。
3.2、药敏试验原理采用CLSI推荐的“微量肉汤稀释法”进行药敏试验，分别检测药物的敏感性及MIC值，并通过智能专家分析软件处理后得出报告结果，并提出合理的专家评价。
4 试剂4.1 生化反应试剂包括吲哚试剂、PD试剂、VP试剂、硝酸盐试剂、马尿酸盐试剂、淀粉酶试剂、糖氧化催化剂、同化试验稳定剂，均为天地人公司配套辅助试剂，0-4℃保存，有效期内使用4.2 试验卡及其配套试剂各类试验卡及其生化.药敏培养液等均为天地人公司辅助试剂，0-4℃保存，有效期内使用5 仪器操作步骤5.1 开机前检查5.1.1 电源是否连接好，主机、显示器电源是否连接。
5.1.2 检查打印机是否连接好，打印纸是否安装好。
5.1.3 仪器台面干净、无污物。
5.2 开机5.2.1 打开主机电源，启动操作系统；在显示器上打开显示器电源；5.2.2 打开仪器面板的分析判读电源开关；使判读装置自检复位。
5.2.3 打开打印机电源。
5.2.4 双击桌面“天地人微生物分析系统”，进入微生物分析系统。
6 患者信息录入6.1 在启动选择界面选择“细菌.酵母样真菌鉴定”进入“被检者资料”，点击“增加”，录入患者资料，输完后点“保存”；6.2如保存患者资料后，发现输入有误，可点“修改”，修改资料；6.3 注意送检日期以化验单上日期为准；6.4 如需查询以前患者的资料，在“被检者资料”的“搜索”处，可以任一条件查询。
