鱼类多倍体育种的研究
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多倍体技术在水产动物育种中的应用摘要多倍体是指生物体的体细胞中含有超过2个染色体组的个体。
多倍体育种是通过增加染色体组的方法来改造生物的遗传基础,从而培育出符合需要的优良品种。
相对于同种的二倍体,多倍体具有个体大、产量高、抗病力强等特点。
多倍体诱导及其特性研究是水产养殖研究领域的一个热点,目前在鱼类、贝类等水产动物的育种中已经取得了一定的成就,具有广阔的发展前景。
本文主要介绍多倍体育种的基本原理和方法,以及在几种水产动物育种中的应用。
关键词多倍体;育种;水产动物;应用前景1.多倍体产生的基本原理多倍体是由于细胞内染色体加倍而形成的,即通过卵子第二极体的保留或受精卵早期有丝分裂的抑制而实现。
对于二倍体动物,成熟卵处于第二次成熟分裂中期,当具有一组染色体的精子入卵后,刺激卵子继续完成第二次分裂,卵中原有的二组染色体中一组作为第二极体排出,受精卵成为正常的二倍体。
如果在精子入卵时,第二极体不能正常排出,则精卵原核结合成为三倍体受精卵。
如果卵子受精后正常排出第二极体,并与单倍体精子结合形成二倍体受精卵,而受精卵的第一次卵裂受到抑制,则产生四倍体。
2.人工诱导多倍体的方法人工诱导多倍体的方法主要有物理学、化学和生物学三种。
2.1物理学方法2.1.1.温度休克法温度休克法包括冷休克法(0- 5℃)和热休克法(30℃左右)两种,即用略高于或略低于致死温度的冷休克或热休克来诱导三倍体或四倍体的方法。
进行温度处理最重要的必须确定处理的开始时间、持续时间以及温度高低。
如果阻止第二极体外排,应该在受精后马上进行处理。
如果抑制第一次卵裂,应该在第一次有丝分裂中期进行处理。
2.1.2静水压法静水压法就是利用水压机产生较高的静水压来抑制第二极体的放出或第一次卵裂而产生多倍体。
它是进行鱼类染色体组操作的有效方法,休克的最佳条件易于掌握,处理程序易于标准化。
静水压法的优点在于:①诱导率较高,一般能达到90%以上。
②处理时间短,一般为3-5分钟。
鱼类遗传与育种学鱼类是一类广泛分布于水生环境中的脊椎动物,其多样性和适应能力使其成为遗传学研究的重要对象。
鱼类遗传与育种学是研究鱼类遗传变异及其利用的学科,通过对鱼类遗传特征的分析和改良,可以促进鱼类的生产和保护。
一、鱼类的遗传特征鱼类的遗传特征与其他动物有很大的区别。
首先,鱼类的繁殖方式多样,有性繁殖和无性繁殖两种。
其中,性繁殖是主要方式,鱼类的性别分化主要通过性染色体决定。
其次,鱼类的染色体结构和数量也存在差异,有些鱼类具有多倍体染色体,例如鲤鱼具有4倍体和8倍体染色体。
此外,鱼类的基因组中还存在着许多特殊基因家族,如鱼类嗅觉受体基因家族、鱼类抗病基因家族等。
二、鱼类遗传变异的来源鱼类遗传变异的来源主要有三个方面:自然变异、人工选择和突变。
自然变异是指鱼类在自然环境中由于基因重组、基因突变等原因产生的遗传变异。
人工选择是指人类通过有意识地选择和配对,培育出具有特定遗传特征的鱼类品种。
突变是指由于基因突变而导致的遗传变异,突变可以是自然发生的,也可以是通过诱变剂等手段诱发的。
三、鱼类育种技术鱼类育种技术是指通过人工干预,以达到改良和繁育鱼类的目的。
常见的鱼类育种技术包括选择育种、杂交育种和基因工程育种等。
选择育种是利用鱼类的遗传变异,选择具有优良性状的个体进行繁殖,逐渐改良和固定这些性状。
杂交育种是指利用不同品系或种类的鱼类进行杂交,获得具有优良性状的杂种。
基因工程育种是指通过基因编辑技术等手段,直接改变鱼类的遗传信息,以获得具有特定性状的鱼类。
四、鱼类育种的应用鱼类育种在农业、水产养殖和生态保护等领域具有广泛应用。
在农业方面,鱼类育种可以提高鱼类的生产性能和抗逆性,提高鱼类的经济效益。
在水产养殖方面,鱼类育种可以培育出具有高产和高品质的优良品种,提高水产养殖业的竞争力。
在生态保护方面,鱼类育种可以通过增殖和放流等手段,保护和恢复鱼类的种群数量和多样性。
鱼类遗传与育种学是研究鱼类遗传变异及其利用的学科,通过对鱼类遗传特征的分析和改良,可以促进鱼类的生产和保护。
多倍体育种在园艺作物中的应用多倍体育种是一种通过人工诱导或自然杂交等方式,使植物细胞染色体数目加倍,从而获得具有优良性状的新品种的方法。
在园艺作物中,多倍体育种具有广泛的应用价值,为作物品种的改良、病虫害防治及花卉、果树等的栽培提供了重要的技术手段。
在植物学和农业领域,多倍体育种已被广泛应用于各种作物。
例如,通过对马铃薯、小麦和水稻等作物的多倍体育种,成功地获得了抗病、抗逆、高产的新品种。
然而,多倍体育种也存在一些挑战,如技术难度大、育种周期长、投入成本高等。
多倍体育种技术包括诱导、杂交和自交等操作步骤。
诱导是指在细胞分裂时期使用化学物质或物理方法来抑制纺锤体的形成,以促进染色体数目加倍。
杂交是指将不同品种的染色体组进行结合,以实现基因重组和优势互补。
自交是指让亲本植株自行交配,以产生染色体数目加倍的后代。
各种技术的适用范围和存在的问题因作物和育种目标而异。
作物品种的改良:通过多倍体育种,可以获得具有优良性状的新品种,如大果、高产、抗病、抗逆等。
这些新品种可以显著提高作物的产量和质量,增强作物的适应性和抗逆性,从而提高农业生产的效益。
农作物病虫害的防治:多倍体育种可以获得具有抗病虫害的新品种,从而有效地降低农药的使用量和防治成本,减少环境污染。
花卉、果树等的栽培:多倍体育种可以获得具有优良性状的花卉、果树新品种,如大花、重瓣、多季开花、高产、抗病等。
这些新品种可以显著提高观赏价值和产量,满足市场需求。
随着科技的不断发展和应用,多倍体育种在园艺作物中的应用前景十分广阔。
未来,多倍体育种将更加注重分子生物学和基因工程等技术的应用,实现更为精细和高效的育种。
随着人们对园艺作物品质和种类需求的不断提高,多倍体育种将更加注重创新和多样化,为农业生产带来更多的经济效益和社会效益。
多倍体育种在园艺作物中具有重要的应用价值和广阔的发展前景。
尽管该领域仍存在一些技术和应用方面的问题需要进一步探讨和解决,但随着科技的不断进步和应用,相信这些问题将逐渐得到解决,多倍体育种在园艺作物中的应用将更加广泛和深入。
S h u i c h a n y u y e多倍体育种技术可以通过改变鱼类染色体组数量来实现对鱼类品种改良的遗传工程技术,通过该技术可以培育出更加优良的鱼类品种,进而满足人来对鱼类水产品的消费需求。
该技术的操作难度较低,具有较高的可控性,通过该技术改良的鱼类品种,其生长速度能够显著提升,同时具有较强的抗病能力,养殖这些经过改良的优质品种,可以大幅提高鱼类产品产量,促进我国渔业的发展。
目前,我国在鱼类多倍体鱼种技术的研究工作中,已经取得了较明显的研究成果,研究中心对草鱼、鲤鱼、鳙鱼、鲢鱼等鱼类品种都进行的多倍体育种研究,其中异育银鲫、湘云鲤都已经应用在了实际生产之中。
1、人工诱导鱼类多倍体育种技术的概述人工诱导鱼类多倍体育种技术是通过理化因子来刺激鱼类卵子,在不排除第二极体的基础上,实现与单倍体精子的结合,进而形成三倍体品种。
通过鱼类远缘杂交,让其变异出三倍体,甚至四倍体,该技术的具体育种方式如下:(1)温度休克法温度休克法是一种通过温度的调节对鱼类卵子进行处理的方法,具体包括热休克及冷休克。
采取冷休克方法进行育种时,需要在卵子受精后的5min开始冷休克处理,处理时间控制在50~60min,冷休克的温度标准为0~0.1℃,该方式获得三倍体的几率为90%左右。
如果卵子受精后>5min,在处理时间不变的条件之下,三倍体的发生几率就会出现明显降低,发生率具体会降低至60%~70%之间,由此可见,温度休克法的敏感性会受到遗传背景与卵子成熟度的影响。
而采取热休克的方法进行育种时,同样要在卵子受精后的5min开始进行热休克处理,热休克的具体温度在40~40.5℃之间,处理时长为2min,热处理获取三倍体的几率为90%~100%。
在相关研究中得出,温度休克法下,影响三倍体发生率的主要因素为处理开始时间、处理温度以及处理操作的持续时间,过晚处理、温度达不到标准,都会造成三倍体诱导几率的下降。
(2)静水压休克法静水压休克法也是一种诱导鱼类三倍体或四倍体的主要处理方法,采用静水压休克法处理受精卵时,静水压应控制在600kg/cm2,处理开始时间应在鱼类卵子授精后的3min时进行。
鱼类遗传育种的理论与实践研究鱼类育种是一门重要的学科,在农业和渔业中都有着重要的应用价值。
随着遗传学和分子生物学的发展,鱼类遗传育种研究也迎来了一个新的时期。
本文将从理论与实践两方面来探讨鱼类遗传育种的研究现状与前景。
一、理论研究1. 遗传多样性研究遗传多样性研究是鱼类遗传育种的基础。
通过对不同种群、不同品系间遗传变异的比较分析,可以筛选出优异的基因性状,为育种提供素材。
目前,对一些经济上重要的鱼类,如鲤鱼、鲢鱼等,进行了大量的遗传多样性研究。
不过由于鱼类种类繁多,现有研究仍然无法涵盖所有鱼类。
2. 基因组学研究基因组学研究是鱼类遗传育种领域中一个十分热门的话题。
通过对鱼类基因组的深入研究,可以揭示鱼类生长发育、抗病能力、耐逆性等重要性状的基因调控机制,为鱼类育种提供更为精确的基因选择工具。
现在,欧洲褐鳕和斑节鲆的基因组组装工作已经基本完成,而其他一些经济上重要的鱼类,如大马哈鱼、草鱼、青鱼等,也都有了初步的基因组序列资料。
3. 遗传改良理论研究鱼类遗传改良理论研究主要包括配套育种选择方法、定量遗传分析、遗传效应分析等方面。
这些理论研究对于鱼类种质改良和良种选育具有重要意义。
近年来,越来越多的遗传改良理论研究成果被应用在实践中,取得了不俗的成绩,如对多个品系鲤鱼进行了选代,产生了多个高生长速度的品系。
二、实践研究1. 选育优良鱼类品系选育优良鱼类品系是鱼类遗传育种的核心任务之一。
通过对经济上重要的鱼类进行长期、系统、细致的育种选择,可以培育出高生长速度、高产、高抗病性的高效鱼种,提高养殖效益。
目前,鲤鱼、鲢鱼、青鱼、鳙鱼、马鲅鱼等品种在优良品系选育方面研究较为深入,并取得了不错的效果。
2. 适应性育种研究适应性育种研究是应对气候变化等逆境环境的有效方式之一。
通过对鱼类的耐高温、耐酸碱度、耐盐碱性等逆境能力的研究,可以培育出具有高适应性的优良品系,提高养殖的稳定性和可持续性。
目前,一些适应性育种研究成果已成功应用于生产实践中,如南方红鲤鱼抗低氧适应性育种。
鱼类多倍体育种的研究
鱼类多倍体育种是指通过诱导使鱼类个体细胞染色体数量翻倍,以获得多倍体鱼种的育种技术。
多倍体鱼类具有一些独特的优点,如增加生长速度、提高抗病能力、改善肉质品质等,因此在鱼类育种领域具有广阔的应用前景。
鱼类多倍体育种的研究主要包括以下几个方面:
1. 诱导多倍体的方法研究:目前常用的诱导多倍体的方法包括温度处理、压力处理、化学物质介入等。
研究人员通过调整这些因素来提高多倍体形成的效率和成功率。
2. 多倍体鱼的性腺发育研究:多倍体对性腺的发育有一定的影响,因此研究人员需要进一步探索多倍体鱼的生殖特性和性腺发育过程,为其正常繁殖提供科学依据。
3. 多倍体鱼的生长性能研究:多倍体鱼在生长性能上通常具有一定的优势,但也可能出现某些副作用,如生长慢、生命力低等。
研究人员需要评估多倍体鱼的生长性能,并通过优化饲养管理以提高其产量和经济效益。
4. 多倍体鱼的遗传稳定性研究:多倍体对遗传稳定性有一定的影响,可能导致某些遗传异常和不良表型的出现。
因此,研究人员需要对多倍体鱼的遗传稳定性进行检测和评估,并采取相应的措施保障种质资源的稳定和可持续利用。
鱼类多倍体育种的研究对于提高鱼类养殖的经济效益和质量水平具有重要意义,同时也为遗传育种、种质资源保护和基因工程等领域提供了重要的科学基础。
鱼类多倍体育种技术及其在水产养殖中的应用一、概述鱼类多倍体育种技术是指通过化学和物理方法,使鱼类染色体数目增加,形成多倍体个体。
这种技术可以提高鱼类生长速度、抗病能力和产量等方面的性能,被广泛应用于水产养殖领域。
二、多倍体育种技术的原理多倍体育种技术主要有两种方法:化学处理法和温度处理法。
1. 化学处理法化学处理法是将鱼卵或早期胚胎暴露在化学药剂中,使其染色体数目翻倍。
常用的药剂有:冷冻保护剂(如DMSO)、孪晶诱导剂(如Colchicine)等。
这些药剂可以阻止细胞分裂过程中的染色体分离,从而形成多倍体个体。
2. 温度处理法温度处理法是将鱼卵或早期胚胎暴露在特定的温度下,使其染色体数目翻倍。
具体来说,将受精卵放置在高温水中(30℃左右),可促进染色体复制和合并,从而形成多倍体个体。
三、多倍体育种技术的应用1. 提高鱼类生长速度多倍体鱼的细胞内含有更多的基因组,因此其代谢能力更强,生长速度更快。
例如,经过多倍体处理的鲤鱼、草鱼等品种,其生长速度可比普通个体提高20%以上。
2. 增强鱼类抗病能力多倍体个体细胞内含有更多的抗病基因和免疫基因,因此具有更强的抗病能力。
例如,经过多倍体处理的虹鳟、罗非鱼等品种,在感染某些疾病时,死亡率明显降低。
3. 提高水产养殖产量多倍体育种技术可以提高养殖物种的产量。
例如,经过多倍体处理的草鱼、黄颡鱼等品种,在同样条件下可比普通个体增加10%以上的产量。
4. 促进水产养殖业发展水产养殖是我国重要的支柱产业之一,而多倍体育种技术可以提高水产品质量和数量,促进水产养殖业发展。
同时,这种技术还可以为水产养殖业提供更多的品种选择,增加市场竞争力。
四、多倍体育种技术的发展前景随着科技的不断进步和人们对水产养殖品质的要求越来越高,多倍体育种技术在水产养殖领域的应用前景越来越广阔。
未来,这种技术将继续得到深入研究和开发,不断提高其应用效果和经济效益。
五、结语总之,多倍体育种技术是一项重要的水产养殖技术,具有广泛的应用前景。
鱼类多倍体育种的研究摘要:简述鱼类多倍体育种研究的简史和机制,重点介绍诱导多倍体鱼类的方法和鉴定多倍体鱼类的研究方法、步骤和原理,对多倍体鱼类的生长发育进行总结,综述多倍体鱼类在水产养殖上的应用和发展趋势。
关键词:三倍体诱导鉴定过度繁殖鱼肉品质多倍体是由于细胞内染色体加倍而形成的,染色体加倍通过卵子第二极体的保留或受精卵早期有丝分裂的抑制而实现。
从群体,细胞,和分子水平的研究中,越来越多的资料表明,自然发生的多倍体,在群体遗传学和物种形成中有着十分重要的作用,鱼类多倍体育种在水产养殖上的应用和发展前景十分重要。
1·鱼类多倍体产生的机制根据鱼类受精细胞学的研究,鱼类精子入卵的时间是在第二次成熟分裂的中期,受精后放出第二极体。
如果让卵子受精后,因受各种理化因子的刺激而不排出第二极体,亦即它们没有经过减数分裂而形成所谓的二倍体卵核,然后与单倍体精核结合形成三倍体受精卵,而受精卵的第一次有丝分裂受到抑制,则产生四倍体。
2·鱼类多倍体的育种的研究简史关于人工诱导鱼类多倍体的研究,再早可以追溯到20世纪40年代,Makino 和Ojima曾以鲤鱼为材料以了解人工诱导动物多倍体的机制。
他们提出:如果二倍体卵核与单倍体精核结合可能形成三倍体合子并进而产生三倍体个体。
不久,Svardson(1945)用接近0℃的冷水处理受精后10分钟的白鲑以及大西洋鲑与褐鳟杂种卵约26小时而得到了少数三倍体囊胚。
真正诱导鱼类三倍体成功的是Swarup,他不仅以低温诱导三棘刺鱼获得三倍体,而且饲养殖性成熟。
后来,Purdom(1972)报道人工诱导海水经济鱼类鲽与川鲽杂种三倍体获得成功。
到目前为止先后已在三棘刺鱼,鲽,川鲽,大菱鲆,菱鲆,鲤鱼,奥利亚罗非鱼,尼罗罗非鱼,草鱼,鳙鱼,等30多种鱼类诱导多倍体获得成功。
3·诱导多倍体鱼类的方法人工诱导多倍体的方法有三种:生物学方法,物理学方法,化学方法。
3·1 生物学方法生物学方法主要通过杂交方法尤其是种间杂交获得异源多倍体3·1·1远源杂交远源杂交,是指在分类学上物种(species)以上分类单位的个体之间交配。
不同种间、属间甚至亲缘关系更远的物种之间的杂交。
可以把不同种、属的特征、特性结合起来,突破种属界限,扩大遗传变异,从而创造新的变异类型或新物种。
鱼类远缘杂交中,尤其是鲤科不同亚种之间的杂交,往往可以产生多倍体。
Marian等(1978)最早发现草鱼♀×鳙♂之间的杂种是三倍体。
后来,Beck等(1980)对草鱼、鳙及其F1的染色体组型进行了分析研究,结果发现草鱼与鳙具有二倍染色体数(2n=48),而F1全部具有三倍染色体数(3n=72)。
以后,Beck等(1982)又发现,当草鱼♀与鳙♂杂交时,同时出现二倍体杂种与三倍体杂种,但35.1%的二倍体杂种畸形,而三倍体杂种的畸形率仅为5.1%。
吴维新等(1981)在兴国红鲤♀和草鱼♂的远缘杂交组合中获得过异源四倍体杂种鱼。
刘思阳(1987)也证实草鲂杂种(草鱼♀×三角鲂♂)是异源三倍体,其中草鱼提供了两套染色体,三角鲂供了一套染色体。
推测草鲂杂种染色体加倍的原因是受精过程中卵子核内有丝分裂或第二极体的保留。
3·1·2 核移植核移植是将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育,让核供体的基因得到完全复制。
陆仁厚等(1982)用四倍化的草鱼培养细胞(核)作为供体移植到泥鳅的会核卵内,曾获得心跳期的四倍体胚胎。
如能对这种技术作进一步改善,它很可能是诱导鱼类四倍体较为有效的途径之一。
3·1·3 细胞融合是在自发或人工诱导下,两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。
应用这一技术,诱导鱼类囊胚细胞与囊胚细胞、囊胚细胞与未受精卵、囊胚细胞与受精卵或者受精卵与受精卵之间的细胞融合,在理论上应该产生三倍体或四倍体,但由于细胞内染色体发生重排,实际上得到的是含各种不同数量染色体的鱼类细胞群。
例如,金志军等(1988)进行草鱼囊胚细胞与团头鲂受精卵之间的电融合试验,共用卵98个,其中73个发育至原肠胚(79.49%),65个发育至心跳期(66.33%),49个发育至仔鱼期(50%),染色体数目在56~88之间,因此是嵌合体(chimera)。
利用这一技术可以用来研究鱼类外源染色体对发育的影响和探索改良品种的可能性。
3·2物理学方法物理学方法有三种:温度处理,静水压处理,电休克3·2·1 温度处理又叫温度休克,包括热休克(heat shock)和冷休克(cold shock)对每一种鱼类来说,进行温度处理最重要的是必须确定处理的开始时间、持续时间以及温度高低。
有证据表明,温度休克敏感性的差异既与遗传背景有关(Streisinger等,1981),也与卵子成熟度有关(Refstie等,1982),根据我们的经验,为了增加刺激强度,冷水性鱼类如鲑科鱼类,宜用热休克,温度范围为28~36℃,不能超过该种鱼类的致死温度;温水性鱼类如鲤科鱼类,宜用冷休克,温度范围为0℃左右。
3·2·2 静水压处理静水压处理是新近发展起来的一种诱导鱼类多倍体的方法。
最初,Streisinger等(1981)成功地用静水压阻止第二极体排出并用这种处理与乙醚相结合阻止第一次有丝分裂而产生纯合二倍体雌核发育斑马鱼。
后来,桂建芳等(1990、1991)采用静水压处理获得了批量三倍体和少数四倍体水晶彩鲫。
日本山口县外海水产试验场高山繁昭等(1992)应用静水压处理已成功地较大批量地诱导出四倍体牙鲆稚鱼生长正常。
其诱导条件是:水温180C受精后53min以650kg/cm2静水压处理6min和水温170C受精后60min以650kg/cm2静水压处理6min。
虽然应用静水压处理比温度休克复杂,需要专门的设备,如水压机(hydraulic press),但处理的最佳条件易于掌握,处理程序易于标准化,且对胚胎的损伤比温度休克小。
因此,静水压处理是进行鱼类染色体组操作的有效方法。
3·2·3电休克Teskeredjic等(1993)报道用热休克与电休克(electric shock)相结合的方法诱导银大麻哈鱼三倍体获得成功。
他们发现交流电(AC)诱导三倍体比直流电(DC)更有效。
将受精后40min的卵置于260C并给以10min的交流电休克可得到100%的三倍体,而直流电休克和只有热休克而无电流休克处理的对照组分别为70%和15%。
电休克装置是定做的,交流电与直流电的电压皆为10V3·3 化学方法3·3·1细胞松弛素细胞松弛素(cytochalasin)是真菌类半知菌纲某些菌种的代谢产物。
细胞松弛素对于活细胞具有干扰细胞质分裂的特殊效应。
Refstie等(1977、1981)以及Alien等(1979、1981)报道受精卵置于细胞松弛素B后产生了多倍体与二倍体嵌合体虹鳟和大西洋鲑。
根据他们的试验,其浓度以10Pyml(溶解于0.1%二甲亚机水溶液中)为最好,从受精后30~40h0(积温)开始处理直至4细胞期为止。
国内虽有不少有关应用细胞松弛素B诱导软体动物(贝类)多倍体的研究报告,但还没有应用于鱼类的报道。
另外,尽管细胞松弛素B诱导效果较好,但价格昂贵,且新近发现它是一种致癌剂,因此影响它的使用推广。
3·3·2秋水仙素秋水仙素(colchicine)是从百合科秋水仙属水仙(Colchicum autumnale)的器官中提取的一种植物碱,性极毒,1934年开始应用于生物学研究,用它来抑制细胞分裂时纺锤丝的形成。
Smith等(1979)曾报道将第一次卵裂前的受精卵置于0.01%秋水仙素后产生了类似的多倍体与二倍体嵌合体美洲红点鲑。
目前,秋水仙素被广泛用来诱导植物多倍体,但动物细胞经过秋水仙素处理后,往往会失去分裂能力而趋向死亡,所以不常用。
3·3·3 聚乙二醇聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种常用的细胞融合剂。
Ueda 等(1986)用聚乙二醇处理过的虹鳟精子与卵子受精,结果得到高比例(1/3)的三倍体虹鳟胚胎。
染色体组型分析表明,三倍体细胞具有两套父本染色体组而只有一套母本染色体组,从而证实它是由双精受精所致。
造成双精受精的原因,据作者推测,可能是由于两个精子头部融合的结果,也可能是残留的聚乙二醇作用于卵膜,使得精子容许两个精子进入。
上野雄一等(1993)进一步用30%~50%PEG(分子量为4000)融合鱼类精子,结果发现最大融合率为18.5%(虹鳟)和15.9%(长背鲫)。
经PEG处理的精子,其运动时间与未处理的相比较,虹鳟减低至2/3,长背鲫减低至1/2。
3·3·4.6-二甲基氨基嘌呤6-二甲基氨基嘌呤(6-imethylaminopurine,6-DMAP)是一种蛋白激酶抑制剂,是影响磷酸激酶作用的嘌呤毒素类似物。
当6-DMAP与微管蛋白二聚体结合后,对微管的正常结构和功能起到了抗有丝分裂的作用,因此可以产生三倍体。
目前大有替代细胞松弛素B用来诱导贝类多倍体的趋势,但至今还没有应用于鱼类多倍体诱导的报道。
由于温度休克与静水压处理诱导鱼类多倍体效果较好,方法也较简便,成本亦低,因此化学处理不可能是被选中的方法。
不过,如能找出效果更好而且价格低廉的诱导剂,这种方法也是可以采用的。
4·鉴定多倍体鱼类的方法由于处理并不是百分之百成功,而且处理过的群体中也可能是由多倍体、二倍体或嵌合体等混合组成,因此采用一个准确而又简便的方法来确定其染色体的信性就显得格外重要。
根据文献报道,多倍体鱼可以用间接法(如核体积测量、蛋白质电泳、生化分析以及形态学检查等)和直接法(如染色体计数以及DNA含量测定等)加以鉴别,现分别介绍如下。
4·1核体积测量按照一般规律,细胞核大小与染色体数目成正比例增加,而且为了维持恒定的核质比率,随着细胞核的增大,细胞大小也按比例增加。
因此,组成多倍体的细胞及其细胞核通常要比二倍体大些。
但多倍体的器官或躯体并不一定都比二倍体大,因为随着细胞大小增加而细胞数目相应减少,从而保持器官或躯体大小大致相等。
目前,红细胞的测量被广泛用来鉴定多倍体鱼,其中以核体积之比最为常用。
总的来说,多倍体的红细胞要比二倍体的红细胞大得多。
鱼类红细胞及其核是椭圆形的,其计算公式是:核面积(nuclear area)=a2·b·π/4,核体积(nuclearvolume)=a2·b/1.91(Becak等,1967)。