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1．葡萄糖代谢类型鉴别试验（O/F或Hugh－Leifson，HL）下层：蛋白胨 1克氯化钠 0．5克葡萄糖 0.2克水 100毫升 1.6%溴甲酚紫(Bromo cresol purple)乙醇溶液0.1-0.2mLPH=7.6 注意: 调完pH值后再加葡萄糖.(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。
本试验又称氧化发酵（O/F 或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。
(2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。
置30℃孵箱孵育48h以上。
(3)结果：两管培养基均不产酸（颜色不变）为产碱型；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。
(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。
肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。
也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。
2.氧化酶试验(1)原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。
此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。
(2)方法：取洁净滤纸条，沾取菌落少许，加氧化酶试剂（10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液或10g/L盐酸二甲基对苯二胺水溶液）1滴，1min内观察结果。
也可将试剂滴加到菌落上进行试验。
(3)结果：阳性者立即变粉红色，5-10s内呈深紫色。
无色为阴性。
(4)应用：用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌均阳性。
此外，也用于气单胞菌和假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别，气单胞菌和假单胞菌属为阳性，而肠杆菌科细菌阴性。
微生物学技术
微生物学技术是一门利用微生物进行实验研究和应用的技术学科。
该技术包括多种方法和实验技术，如细胞培养、分离纯化、鉴定和分类、基因工程、发酵工艺等。
这些技术能够在医药、农业、环保等领域发挥重要作用。
在医药领域，微生物学技术可用于筛选新药和生产药品。
其中，革兰氏阴性菌和放线菌是常用的微生物菌株。
通过基因工程技术，已经成功地生产了多种人类蛋白质和抗体。
在农业领域，微生物学技术可用于控制植物病害和改善土壤质量。
其中，植物生长促进剂、生物除草剂和生物农药等产品已经得到广泛应用。
在环保领域，微生物学技术可用于处理废水和废气、降解有机物等。
例如，利用微生物菌群对水体进行处理，可以达到净化水质的目的。
总的来说，微生物学技术是一门应用广泛、具有重要意义的学科，其在各个领域的应用还将继续扩展和深入，对人类的福祉和生态环境的保护都将起到积极的作用。
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微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。
（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂：1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型：●根据培养基的物理状态来区分：1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
●根据培养基的用途来区分：➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。
微生物学实验技术
微生物学实验技术是研究和发掘微生物的重要方法，也是一门多种实验技术和方法的
综合。
它既可以应用于生物体内，对微生物调查，可以使用培养基或特定介质进行鉴定，
也可以用来通过遗传工程分离、改造微生物，了解不同微生物的全部 trait 特性。
一、培养微生物
培养微生物是一种最常用的微生物实验技术，需要使用特定的培养基，通过控制温度、湿度等变量的变化来培养不同的微生物。
通过检测培养基中的微生物数量及某些代表性特征，可确定微生物的分类特征，来鉴定微生物的种类和形式。
二、基因组测序
基因组测序是一种实验技术，是分析一个微生物种类全部 genetic 的方法。
主要利
用高通量DNA测序技术，对样品中贮藏的 DNA 进行范围检测，得到 DNA 的测定序列，从
而确定微生物的遗传结构、物种种类，以及特定物种生态和功能特征。
三、共价法抗菌药敏试验
共价法抗菌药敏试验是研究微生物对一类药物或多类药物的抗性程度的重要方法之一。
通过检测药物剂量的不同，在药物浓度相同的情况下微生物在某种时间内生长情况不同，
来确定微生物对某种药物或多类药物的抗性情况。
四、特异性提取
特异性提取是一种以特定方法从微生物中提取出特定“ biomolecule ”，比如 DNA、蛋白质等，分离和纯化微生物某功能元件或特征分子的实验技术。
这种技术既可以提取大
量的基因片段，也可提取微量的特异性物质。
五、遗传修饰
遗传修饰是一种利用遗传工程改造或添加微生物特定遗传物质来改变微生物的特性的
实验技术，常用来进行分子育种和改良育种，以提高产品的质量和性能。
常用的基本操作技术（一）消毒和灭菌技术消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。
消毒一般是指利用物理或化学方法消灭病原菌或有害微生物的营养体，而灭菌则是指利用强烈的物理或化学方法杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。
但日常生活中两者常常通用。
灭菌的方法很多，一般可分为物理灭菌和化学灭菌两大类。
1. 物理灭菌物理灭菌是最常用的灭菌方法。
主要包括热力学灭菌、过滤除菌和紫外线灭菌等。
（1）热力学灭菌又可分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。
①干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质的凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快；含水量越小，凝固减慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度更高（160~170℃），时间更长（1~2h）。
进行干热灭菌时最高温度不能超过180℃，否则，包扎器皿的纸或棉塞就会被烤焦，甚至引起燃烧。
通常所说的干热灭菌是指利用干燥箱（或称烘箱）进行灭菌，主要用于玻璃器皿如培养皿、移液管和接种工具等的灭菌。
灭菌时将被灭菌的物体用双层报纸包好或装入特制的灭菌筒内，装入箱中，不要摆的太挤，以免妨碍热空气流通。
逐渐加温，使温度上升至160～170℃后保持2h。
灭菌结束后，切断电源，自然降温，待箱内温度降至70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。
注意在温度降至70℃以前切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。
另外，灼烧灭菌也属于干热灭菌。
在进行无菌操作时，接种工具如接种环、接种钩、接种铲、镊子等要在酒精灯火焰上充分灼烧，试管口、菌种瓶口在火焰上作短暂灼烧灭菌等。
②湿热灭菌a.高压蒸汽灭菌此法是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性达到灭菌的目的。
微生物四大基本技术
微生物学是生物学的重要学科之一，其主要研究微生物的生物学特性及其对环境的影响，包括微生物的生理、生态、遗传、进化及其应用等方面。
微生物学中的四大基本技术是鉴定、分离、培养和纯化，下面将详细介绍四个技术及其在微生物学中的应用。
一、鉴定技术
鉴别和分类微生物的目的是确定微生物种属的名称和系统学位置，并集成有关微生物的生物学、生态学、遗传学、生化学与人类学等知识。
鉴定技术在微生物分类鉴定和研究中发挥十分重要的作用，如确定食品污染中的病原菌、确定土壤中的益生菌、确定自然生态系统中的微生物群等。
二、分离技术
分离技术是将混合物中的微生物单元分开，主要包括单菌分离和纯菌培养两个步骤。
单菌分离利用对微生物的生长特点，通过变形培养、酶切和物理分离等手段提取单个菌单元；纯菌培养是将分离出的单个微生物菌单元在合适的培养基上培育，从而获得单一的纯菌培养物。
分离技术是微生物学中最基础、最原始的技术，主要用于检测、分离和鉴定微生物的种类和数量。
采用分离技术对微生物进行分离和纯化，可以排除影响微生物研究的干扰因素，从而帮助研究人员更准确地刻画微生物的特性和生态功能。
三、培养技术
培养技术是指将微生物体系移植至特定的培养基中进行培育的过程，可分为常规培养和特殊培养两种。
常规培养主要是将微生物体系在营养丰富的培养基上进行培育，包括液体培养和固体培养；特殊培养则是指使用特定的培养基和条件对某些微生物进行培养。
培养技术可以帮助研究人员获得微生物样品，便于研究微生物的特性和生态功能。
不同类型的微生物需要在不同的营养基上进行培养，通过调整培养条件，可以影响微生物的生理生化特性，进而研究微生物对外界环境的响应机制。
四、纯化技术
纯化技术是指将杂质和其它污染物从分离出的微生物单元或培养物中去除，使其成为单一的微生物纯种。
纯化技术主要包括精细过滤、免疫沉淀、离心沉淀、磁珠分离和柱层析等，其中柱层析技术应用最为广泛。
纯化技术对于微生物研究至关重要，可大幅提高微生物的纯度和活性，从而更好地揭示微生物的功能和代谢途径。
微生物学的发展与应用十分广泛，涉及食品科学、农业、医
学、环境科学等众多领域。
微生物的应用越来越广泛，如利用微生物制药、微生物修复环境、微生物酿造和微生物肥料等。
通过四种基础技术，可以更好地了解微生物的特性，为
微生物资源的利用和开发提供支持。
鉴定技术在微生物分类和研究中扮演着重要的角色。
不同的微生物种类有着不同的代
谢和功能，鉴定技术可以帮助人们了解不同微生物在不同环境条件下的特征。
菌落形态和
颜色、生长温度和pH值的试验可根据对微生物的反应进行分类，从而确定微生物的种属。
在食品工业中，鉴定技术可用于检测食品中是否存在病原菌或致病菌，为食品安全提供保障。
分离技术可将混合物中的微生物单元分开，这有助于确定某个微生物与其他微生物之
间的差异以及其自身特性。
这种技术可以将微生物分为单个菌落并对其进行单独培养。
分
离技术也可以用于微生物的基因工程研究，可随意组合不同的微生物，以获得新的互补
性。
培养技术可帮助人们研究微生物在不同条件下的生理和生化特性。
培养技术也可以用
来获得大量的微生物，在微生物的工业化生产中广泛应用。
例如苏打杆菌的大量培养可用
于生产化学品，香菇的培养则可用于食品加工。
纯化技术可以将一个或多个微生物从分离产生的菌落或培养物中提取，从而获得纯净
的微生物。
纯化技术对于微生物研究和微生物制品生产十分重要。
对于研究人员来说，使
用纯净的微生物可减少可能会印象研究结果的外部变量。
在微生物产品的生产过程中，纯
净的微生物可使得产品更统一、更安全和更有效。
除去四大基础技术，微生物学在实践中
也应用了一系列其他技术来深入探索微生物学。
分子诊断技术可以通过基于微生物DNA的PCR技术来鉴定微生物物种以及确认其存在水或土壤中的数量；细胞荧光技术可以用来研
究微生物细胞组成结果和微生物代谢过程；代谢组学和蛋白组学技术可以用来分析微生物
代谢路径以及鉴定关键的代谢产物和酶系统。
除了基础技术和扩展技术，微生物在各领域中的应用范围也逐渐扩大。
现在，微生物
启发的材料、数码技术、太空科技、能源、医疗等领域都有着广泛应用。
现代微生物代谢
工程技术可以用来替代传统的化学反应来生产特定的化学品; 在食品生产中，酸奶、醋和
酵母等微生物也被广泛用来生产食品; 在医疗领域，微生物学被应用来研发新药物、抗微
生物菌剂以及疫苗等。
微生物學通過技術的不斷創新，展現出越來越多的應用價值。
微生物研究和運用在當
代生物技術中佔有十分重要的地位，將為人類社會的發展貢獻更多的力量。
微生物学在如
今的世界中扮演着非常重要的角色，微生物的应用已经无处不在。
一项非常重要的工作就
是微生物研究。
通过对微生物的研究，可以深入了解其结构和功能，以及它们所扮演的角
色和影响。
微生物的研究在农业、食品、医疗、环保等领域中都具有广泛的应用。
在农业领域中，微生物可通过其酵解过程为土壤提供有机物质和营养物。
微生物还能保护农作物免受病原
菌和有机化学物质的危害。
它们在食品领域中的应用则主要为生产酸奶、面包、啤酒等食品。
医疗领域中，微生物学可以用于诊断和治疗疾病。
肠道微生物可能会影响人体免疫系
统的健康，微生物学家可以通过分析微生物群及其代谢产物来帮助了解人体健康的状况。
微生物还可以发明新的药物来治疗疾病，如青霉素等。
在环保领域中，微生物学通过利用微生物菌株来分解废物和污染物，使环境得到清洁。
微生物的应用使得许多废弃物可以被转化为能源，如用微生物菌株制成的生物柴油。
微生
物还被广泛用来监测水和空气中的污染物，以及研究这些污染物对生态系统的影响。
不仅在生活技术中，微生物学也在生产技术方面得到了应用。
通过微生物的研究和应用，可以在工业生产中用代谢工程方法制备出替代化学反应的生物产品，如生物柴油、生
物基塑料等。
微生物学在许多方面都有着广泛的应用。
我们必须认识到，微生物对我们的生活以及
整个生态系统有着深远的影响。
通过不断的技术创新和应用，我们可以更好地了解、利用
和开发微生物资源。
