实验一溶菌酶的溶菌作用
实验目的：
1、掌握溶菌酶对革兰氏阳性菌溶解的原理及应用。
2、证实体液中溶菌酶的存在观察溶菌酶的溶菌现象。
基本原理：
正常情况下，机体的唾液、泪液、痰、鼻腔分泌物以及白细胞和血清等均含有丰富的溶菌酶。测定分泌物和体液中的溶菌酶含量及其变动情况，可作为评价机体非特异性免疫功能的指标之一。
溶菌酶的杀菌机理是其作用于细菌细胞壁的粘肽层，粘肽是细菌的细胞壁主要成分。溶菌酶能切断粘肽结构中的N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β- 1,4糖苷键，破坏粘肽支架，使细胞壁破坏。由于细菌细胞壁的重要功能之一是保护细菌，即抗低渗，故细菌失去细胞壁的保护作用后，在低渗环境中可发生溶解。溶菌酶的主要作用对象是革兰氏阳性菌。革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构，故在一般情况下溶菌酶不易发挥直接作用。
实验材料：
1、葡萄球菌：本菌是一种革兰氏阳性菌，普通琼脂培养基生长良好。
2、标准溶菌酶：称取溶菌酶标准纯品，用蒸馏水配制为1000ug/ml原液，
并稀释为100、50、10 ug/ml标准液，用前保存在冰箱中。
3、唾液：用无菌平皿收集唾液，可在同学间收集。（于饭后两小时，清水漱口3次，10分钟后，收集唾液于清洁烧杯中）；
4、其它：无菌打孔器（孔径 2mm），无菌毛细吸管、毫米尺等。
实验方法：
1、制备含葡萄球菌的琼脂平板加热融化3%琼脂，冷至60℃~70℃时，加入1ml葡萄球菌菌液，混合均匀，倾注于无菌平皿内。
2、用无菌打孔器在葡萄球菌琼脂平板上打孔，孔径 2mm左右，孔距5-20mm。用针头挑出孔内琼脂，
3、用毛细吸管取新鲜收集的唾液加入琼脂孔内，每孔加满唾液,同时加标准溶菌酶作阳性对照。
4、置 24-28℃下12-18h观察结果。观察各孔周围溶菌情况，测量溶菌环直径。
实验结果：
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