蛹虫草子实体抗肿瘤作用的实验研究_孙科峰

蛹虫草子实体抗肿瘤作用的实验研究孙科峰1,石伟2,刘丽1,李爽1(11辽宁中医学院,辽宁沈阳110032;21铁岭市药品检验所,辽宁铁岭112000)摘要:本实验以S180小鼠肉瘤为动物模型,对沈阳地区培育的蛹虫草子实体的抗肿瘤作用进行了药效学研究。

结果显示,该药可明显延长S180腹水型小鼠的生存率,对S180实体瘤小鼠的肿块生长有一定的抑制作用;对S180荷瘤小鼠的肿瘤免疫活性因子T N F-B和IL-2有明显的促进作用,并优于中药复方制剂对照药强力康免疫升白冲剂(P<0101)。

关键词:蛹虫草;小鼠肉瘤(S180);肿瘤坏死因子(T NF-B);白细胞介素Ò(I L-2)中图分类号:R28515文献标识码:B文章编号:1000-1719(2004)06-0520-02蛹虫草子实体(Cordyceps militaris)是从天然蛹虫草[Cordyceps militaris(L1er1F r)]Link中分离的菌种拟青霉Paecilomyces militaris经人工培养获得的子实体部分,具有/益肺肾,补精髓0的功效。

笔者以S180小鼠肉瘤为动物模型,以抑瘤率和生命延长率及荷瘤动物的肿瘤坏死因子(T N F-B)与白细胞介素Ò(I L-2)为指标,对蛹虫草子实体的抗肿瘤作用进行了药效学观察,现将结果报道如下。

1材料与方法111材料11111药品蛹虫草子实体,呈黄色粉末状,由沈阳中天生物工程有限公司提供。

环磷酰胺,上海十二制药厂生产。

强力康免疫升白冲剂,白求恩医科大学制药厂生产(以下简称强力康)。

其它试剂为国产分析纯产品,按常规方法配制使用。

11112动物昆明种小鼠,6~8周龄,体重(20?2)g,雌雄兼用,由沈阳医学院动物室提供。

BA LB/c鼠,体重(20?2) g,雌雄兼用。

由沈阳军区总医院医学动物实验科提供。

11113瘤株小鼠肉瘤180(S180)瘤株由中国医科大学肿瘤研究所提供。

112方法11211预处理实体瘤动物模型每只昆明小鼠右腋皮下接种2@107/ml S180细胞悬液012ml。

腹水型动物模型每只BALB/c小鼠腹腔接种4@107/ml S180细胞悬液012ml。

11212分组与给药将接种后的动物按体重随机分成荷瘤对照组、蛹虫草子实体1组、蛹虫草子实体2组、西药环磷酰胺对照组及中药强力康对照组,另设一组空白对照。

于接种次日给药,蛹虫草子实体组和强力康组采用灌胃(IG)给药方式,环磷酰胺组采用皮下(SG)或腹腔注射(IP)给药方式,空白及荷瘤对照组灌服同或体积生理盐水,每日1次。

观察抑瘤率及免疫指标的各组动物连续给药10天,于给药结束次日处死动物,解剖取瘤称重计算抑瘤率,或取脾检测各项免疫指标。

观察生命延长率各组动物给药至动物死亡,计算生命延长率。

抑瘤率与生命延长率试验各重复3次。

11213肿瘤环死因子(T N F-B)的测定[1]末次给药后处死小鼠,取脾并制成5@106/ml脾细胞悬液,取015ml加入ConA(5L g/ml)015ml,37e5%CO2孵箱中培养30h,取上清液-20e保存备用。

T NF-B的测定用L929细胞杀伤法,加入M T T后,测其A值并计算杀伤率。

11214白细胞介素-Ò(I L-2)活性的测定[7]待测鼠脾细胞悬液加ConA使成3L g/ml,于37e5%CO2孵箱中刺激培养48h,吸取上清液即为待测IL-2活性样品。

另取正常小鼠脾细胞5@106/ml,加入ConA使终浓度成3L g/ml,37e 5%CO2孵箱中培养68h,淋巴细胞分离液分离后,制成106/ ml细胞悬液。

将106/ml活化淋巴细胞加于96孔板中,每孔011ml,加待测样品011ml,设空白对照孔及标准品孔。

37e 5%CO2孵箱中培养48h,加M T T继续培养4h,加二甲基亚砜并充分混匀,于490nm测各孔A值,并根据标准品计算各样品I L-2单位。

2结果211蛹虫草子实体对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用结果,见表1。

表1蛹虫草对小鼠S180肉瘤生长的影响(X?s)剂量(mg/kg#d)动物数(只)瘤重(g)抑瘤率(%)荷瘤对照组生理盐水601192?0184环磷酰胺组20@10280194?015551104蛹虫草1组300@10301152?017220183蛹虫草2组600@10301133?0177*30172注:与荷瘤对照组比较,*P<0101。

212蛹虫草子实体对S180腹水型荷瘤小鼠生存期的延长作用结果,见表2。

表2蛹虫草对S180腹水型荷瘤小鼠生存期的影响(X?s)剂量(m g/kg#d)动物数(只)存活时间(天)生命延长率(%)荷瘤对照组生理盐水6012122?2168100环磷酰胺组20@103022150?1158180蛹虫草1组300@103023160?4179*193蛹虫草2组600@103022160?5106*185注:与荷瘤对照组比较,*P<0101。

213蛹虫草子实体对S180荷瘤小鼠T N F-B的促进作用结果,见表3。

表3蛹虫草对S180荷瘤小鼠TNF-B的影响(X?s)剂量(mg/kg#d)动物数(只)TNF-B(细胞溶解率%)正常对照组生理盐水1229158?9185荷瘤对照组生理盐水1220104?2189环磷酰胺组20@101217155?4174蛹虫草1组300@10122518?7186*$蛹虫草2组600@101230107?9182*$强力康组2000@101215151?6109注:与荷瘤对照组比较,*P<0105;与强力康组比较,$P< 0101。

214蛹虫草子实体对S180荷瘤小鼠I L-2活性的增强作用结果,见表4。

3讨论蛹虫草又称北冬虫夏草,为麦角科Claviceptaceae虫草属真菌Cordy ceps militaris的子实体及其寄生主天蛾科幼虫僵虫的复合体。

据5新华本草纲目6记载,其性平味甘,具有益肺肾,补精髓[3]之功效,近年来有报道该科属虫草人工培第31卷第6期2004年6月辽宁中医杂志LIAONING JOURNAL OF T RADITIONAL CHINESE M EDICINEVol.31No.6Jun.,2004DOI：10.13192/j.ljtcm.2004.06.80.sunkf.068影响中药有效性的另一因素)))制药机械潘英,任英杰,郭娟(辽宁华源本溪三药有限公司,辽宁本溪117004)关键词:中药;有效性;制药机械中图分类号:R283文献标识码:B文章编号:1000-1719(2004)06-0521-01影响中成药的临床有效性不外乎3个方面,一是合理的处方配伍,二是可靠的药材质量,三是优良的加工过程,在这三种因素中,合理的处方配伍是基础,可靠的药材质量和优良的加工过程是保证。

就一个固定的处方配伍及其药材而言,加工过程的变化,甚至是微小的变化都会影响中成药的有效性。

这是因为中药尤其是大的复方制剂,由于其本身的复杂性,即中药化学成分的复杂性,如有对热敏感的,有对酸碱度敏感的,有水溶醇不溶的,还有醇溶水不溶的等。

这些复杂的化学成分组成一起就很容易受提取过程中的微小变化所影响。

换言之,中药很容易因浸泡、加热、煎煮等过程时间的长短,温度的高低等诸多因素而发生吸附、沉淀、增溶等物理、化学变化,从而改变某种有效成分或有效部位的溶出度,稳定性,也很容易使其成分与成分之间发生氧化,还原等反应从而影响药物的有效成性,就目前我国中成药质量标准的检测现状看,很难通过检测手段来发现其加工过程的变化。

所以说中成药的有效性与加工过程即煎煮等过程息息相关,而这个加工过程又受制药机械设备的影响。

一个经过几百年临床实践验证过的处方及其煎煮过程,运用到目前的大生产过程中,由于受制药机械及其它因素的限制和影响,其大生产的煎煮过程很难做到与传统的煎煮过程同比例放大。

这其中的原因不能不说与制药机械设备的影响有较大的关系。

仅以中药提取为例。

1投料方式传统中药煎煮过程可通过人工搅拌使之药材之间、药材与水之间充分混合以达到最佳的提取效果,但我国目前的中药提取装置大都不具备搅拌装置,药材在煎煮过程中只能依靠药液的强制性循环起到微小的搅拌作用,所以,很难使提取罐内的药材,尤其是沸腾期间保持均匀一致。

那么就需要在投料前设置专门的搅拌装置把所需投入的药材混合均匀后再投入提取罐中,如果提取罐的容积较大如5m3,所用药材有300~400kg之多,那么,由于受混合设备所限,因此混合起来也相当困难。

2加水升温过程一般来说,药材在煎煮之前都有一个浸泡过程,原因是由于绝大部分药材经干燥后,组织内的水分被蒸发,所以要使药材中的有效成分完全被提取出,就必须要经过一个浸润、渗透过程即浸泡过程(通常为30min)在传统的中药煎煮或实验室煎煮中,由于药材量较少,加水、升温不需太长时间,那么就可遵循这样的工艺过程:加水y浸泡30min y升温至沸,但在大生产过程中,受中药提取罐中加水加热装置的限制,这个过程的时间较长(一般来说在2h左右,或更长的时间),如果在这个过程中再增加浸泡30min,无疑加水y 浸泡30min y升混至沸这个过程并非传统煎煮过程的平行放大。

换言之,增加了浸泡时间,笔者曾对我公司生产的主导品种进行考察,加水升温时间的变化,直接对此品种的出膏率,膏体的流动性等均有不同程度的影响,解决的方法,只能在加水浸泡、升温中找出一个最佳时间即在加水、升温中来平衡浸泡时间。

3静置过程中药材的提取液往往是一种固体(如药渣、沉淀物、泥沙等)和液体(含行可溶性成分的浸出溶液)的混合物,一般均要经过12h或24h的静置过程,让其固体物借自身重量自然下沉,静置过程中提取液逐渐冷却,在提取液中的无效大分子物质如淀粉即可析出。

然后借助虹吸现象将上清液吸出以达到分离除去杂质的目的。

这是一个省能源省人力物力的一个好方法。

但在大生产过程中,静置所用的罐体无法显示罐体内的沉淀物,操作人员只能凭感觉或经验去吸取上清液。

很显然不适应当今的生产状态。

此外还有醇沉装置、提取挥发油等装置都在影响着中药提取工艺的正常进行。

总之,中药走向现代化需要诸多方面的帮助与配合,制药机械水平的提高无疑能助中药走向世界一臂之力。

但愿我国的制药机械能与时俱进,开拓进取,成为中药的良师和益友。

编辑:覃芳植品具有一定的抗肿瘤及免疫促进作用[4]。

表4蛹虫草对S180荷瘤小鼠IL-2活性的影响(X?s)剂量(mg/kg#d)动物数(只)IL-2(@103)正常对照组生理盐水123114?0148荷瘤对照组生理盐水123123?0139环磷酰胺组20@10122164?0149蛹虫草1组300@10123145?0120$蛹虫草2组600@10123175?0129*$强力康组2000@10123118?0124注:与荷瘤对照组比较,*P<0105;与强力康组比较,$P< 0101。