叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成与测定实验方案[1]

叶绿素提取实验步骤引言：叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和部分细菌中的绿色色素，具有光合作用的关键作用。

叶绿素的提取是研究光合作用和进行植物生物化学研究的基础实验之一。

本文将介绍叶绿素提取的实验步骤。

一、材料准备1. 鲜叶样品：从植物中选择新鲜、健康的叶片作为实验材料。

2. 丙酮、酒精和乙醚：用于叶绿素的溶剂。

3. 水浴锅和恒温器：用于控制溶剂的温度。

4. 研钵和研杵：用于研磨叶片。

5. 滤纸：用于过滤提取液。

二、叶片研磨1. 将新鲜的叶片取出，用清水洗净表面的尘土和杂质。

2. 将叶片剪碎或撕成小片，放入研钵中。

3. 用研杵将叶片研磨成细腻的绿色混合物。

三、叶绿素提取1. 将研磨后的叶片混合物转移到一个容器中。

2. 加入适量的丙酮，使其完全浸没叶片混合物。

3. 使用搅拌器或玻璃棒搅拌叶片混合物和丙酮，使其充分混合。

4. 将混合物放入水浴锅中，控制水浴锅的温度在60-70摄氏度之间，保持一定时间（一般为20-30分钟），以促进叶绿素的释放。

四、叶绿素溶解1. 将获得的叶绿素提取液放置在冰箱中冷却，使其保持低温。

2. 在低温下，加入少量的酒精，使叶绿素溶解。

3. 搅拌溶液，使叶绿素充分溶解。

五、叶绿素分离1. 将叶绿素溶液倒入一个漏斗中，放置在一个容器下。

2. 在漏斗中加入少量乙醚，与叶绿素溶液充分混合。

3. 静置一段时间，等待乙醚与叶绿素溶液分层。

4. 打开漏斗的龙头，将乙醚层取出，得到叶绿素。

六、过滤和保存1. 将提取的叶绿素溶液倒入一个干净的容器中。

2. 使用滤纸过滤溶液，去除其中的杂质。

3. 将滤液转移到一个干燥的玻璃瓶中，避免光照，可在冰箱中保存。

结论：通过上述步骤，我们成功地提取到了叶绿素。

叶绿素是一种重要的光合色素，具有广泛的应用价值。

在光合作用研究、植物生物化学研究和食品工业中都有重要的作用。

叶绿素提取实验为我们深入了解叶绿素的性质和功能提供了基础。

通过不断改进实验方法和技术手段，我们可以进一步提高叶绿素的提取效率和纯度，为相关领域的研究和应用提供更好的支持。

一、实验目的1. 了解叶绿素在植物光合作用中的作用。

2. 掌握叶绿素提取的方法和原理。

3. 学习使用有机溶剂提取植物中的叶绿素。

4. 了解叶绿素提取过程中可能遇到的问题及解决方法。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

这些色素不溶于水，但溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮等。

因此，我们可以利用有机溶剂提取植物中的叶绿素。

实验中，我们使用95%乙醇作为提取剂，通过研磨、过滤等步骤提取叶绿素。

提取液中的叶绿素可通过薄层色谱法进行分离和鉴定。

三、实验材料1. 新鲜植物叶片（如菠菜、卤地菊等）2. 95%乙醇3. 研钵、剪刀、石英砂、碳酸钙粉、漏斗、滤纸、烧杯、玻璃棒等四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片1克，洗净、擦干，去掉中脉剪碎，放入研钵中。

2. 在研钵中加入少量石英砂和碳酸钙粉，加入2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状。

3. 再加入2-3 mL 95%乙醇，继续研磨，直至植物碎片充分溶解。

4. 将研磨好的混合物用漏斗过滤，收集滤液。

5. 将滤液置于烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。

6. 取一张滤纸，将滤液均匀涂在滤纸上，晾干。

7. 将晾干的滤纸置于紫外灯下，观察叶绿素荧光现象。

8. 将晾干的滤纸置于薄层色谱板上，用合适的溶剂进行层析。

9. 观察层析结果，确定叶绿素a和叶绿素b的位置。

五、实验结果与分析1. 植物叶片经过研磨、过滤后，滤液呈绿色，说明叶绿素已被提取。

2. 在紫外灯下观察，晾干的滤纸上有绿色荧光，证明叶绿素的存在。

3. 通过薄层色谱分离，叶绿素a和叶绿素b分别在色谱板上形成两个不同的斑点，证明叶绿素已被成功分离。

六、实验讨论1. 实验过程中，使用碳酸钙粉的目的是防止研磨过程中叶绿素被破坏。

2. 乙醇的浓度对叶绿素的提取效果有影响，实验中使用的95%乙醇提取效果较好。

3. 叶绿素提取过程中，温度、研磨时间等因素也会影响提取效果。

4. 薄层色谱分离叶绿素时，选择合适的溶剂和层析条件对分离效果至关重要。

植物叶片中色素的提取、分离和含量测定班级姓名学号；实验一：植物叶片中色素的提取、分离实验原理（1）提取色素的原理：叶绿体中的色素属于色素，不溶于水，易溶于溶剂，故可用等有机溶剂来提取。

绝大多数色素见光易分解，需要避光保存。

（2）法分离色素的原理：不同色素在层析液中的不同。

溶解度大的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度快；溶解度小的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度慢。

实验材料和器材实验步骤1、称量植物材料：用天平秤取植物材料（两人一组,每组一种植物材料）。

剪刀剪碎，放入研钵中。

2、提取色素：用药匙加入少许二氧化硅和碳酸钙，用移液枪吸取5ml无水乙醇，快速研磨。

加入如下试剂的作用：SiO2：___________；CaCO3_____________________酒精（或丙酮）：____________________________________。

3、画细线：在滤纸条的一端剪去两角。

在距离这一端1cm 处，折一条横线。

用尺子沾取少量滤液，在滤纸条上沿折横线，压出一条细而直的滤液细线。

待滤液干后，再在背面划线。

每种材料，制备两个滤纸条。

4、分离叶绿体中的色素将滤纸条（有滤液细线的一端朝下），分别轻轻插入到水层析液和石油醚丙酮的层析液中，盖上盖子。

注意：不能让滤液细线触及层析液，防止色素溶解在层析液中，影响扩散结果。

同心圆装置：用纸捻快速吸取滤液,放入同心圆装置中。

层析液为石油醚丙酮的层析液。

5、分析层析结果色色颜色。

实验二：色素的含量测定实验原理：用混合提取液（丙酮：乙醇：蒸馏水=：：1）浸提法测定。

实验步骤1、浸提色素。

分别称取菠菜叶、油菜叶、月季红色叶、月季绿色叶、银杏黄色叶、爬山虎红色叶，加入10ml提取液，放入37度恒温箱中浸提24小时。

2、读值。

分光光度计分别在波长440nm、645nm和663nm 处测定并记录光密度值，通过OD值计算叶绿素含量。

3计算。

根据以下公式计算叶绿素浓度：叶绿素a（Ca，mg·L-1）=×A663–×A645。

植物的秘密叶绿素提取实验植物的秘密：叶绿素提取实验植物是大自然中不可或缺的一部分，它们通过光合作用为我们提供氧气和养分。

而叶绿素则是植物进行光合作用的关键物质。

那么，叶绿素又是如何提取的呢？接下来，我们将通过一次叶绿素提取实验来揭开这个神秘的面纱。

首先，我们需要准备实验所需的材料和设备：新鲜的植物叶片、乙醇、研钵、研杵、滤纸、试管、橡胶塞、烧杯、移液管、乙酸乙酯等。

在实验室里，我们要确保操作台面整洁，安全措施到位。

接着，我们将新鲜的植物叶片放入研钵中，加入适量的乙醇。

然后用研杵将叶片研磨成绿色汁液，直至叶片完全破碎并释放出叶绿素。

这一步骤需要耐心和细心，确保叶片充分研磨，以便后续提取叶绿素。

接下来，我们需要进行离心分离。

将研磨后的混合液倒入试管中，然后用离心机进行离心分离，将混合液分为两层：上层是乙醇和叶绿素的溶液，下层是未破碎的叶片碎片。

将上层溶液倒入另一个试管中，准备进行下一步操作。

继续提取叶绿素。

将上层溶液加入适量的乙醇，并放入水浴中加热。

待乙醇揮发后，留下的是叶绿素的结晶。

将结晶用乙酸乙酯溶解，得到橙黄色的叶绿素溶液。

最后，我们需要对提取的叶绿素溶液进行验证。

可以利用分光光度计对叶绿素溶液进行吸光度测定，以确定叶绿素的浓度。

也可以进行色谱分析，进一步确认叶绿素的纯度和结构。

通过这次叶绿素提取实验，我们不仅了解了叶绿素的提取方法，还深入了解了植物光合作用的重要性。

叶绿素作为植物进行光合作用的“能量中心”，在维持地球生态平衡中起着至关重要的作用。

希望这次实验能让我们更加珍惜和理解植物这个美丽而神秘的生命。

通过这次实验，我们深入了解了叶绿素的提取方法，同时也加深了对植物这个美丽而神秘生命的理解。

植物不仅是我们生活的一部分，更是大自然中不可或缺的一环。

让我们共同珍惜和保护植物，为地球生态平衡贡献自己的一份力量。

叶绿体色素的提取、分离及含量测定一、实验原理叶绿体色素是植物进行光合作用吸收光能的重要物质基础。

叶绿体色素主要包含叶绿素a, 叶绿素b,叶黄素和胡萝卜素。

利用四种不同色素在流动相（扩展剂）和固定相（滤纸中吸附的水）中的分配系数不同而将其分开；叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。

因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度，根据经验公式即可计算出色素溶液中各色素浓度，不同溶剂所提取的色素吸收光谱有差异，因此，应使用不同的计算公式。

叶绿体色素80％丙酮提取液中叶绿素a和b分别在663nm、646nm波长下有最大吸收峰，据此所测得的吸光值代入不同的经验公式，计算出叶绿体色素丙酮提取液中叶绿素a和b的浓度及总浓度，并依据所使用的单位植物组织，求算出色素的含量。

二、实验目的掌握用纸层析法提取分离叶绿体色素的原理和方法；掌握叶绿体色素提取液中叶绿素a和b的浓度及其总含量的测定与计算方法。

三、器材和试剂1、植物材料：新鲜菠菜2、实验器材：电子天平、分光光度计3、实验试剂：丙酮、扩展剂四、操作步骤1、色素的提取1）称取新鲜的洗净擦干的植物叶片0.5g ，去中脉、剪碎后放入研钵中，加少量石英沙和碳酸钙，再加入2ml 丙酮，研磨成匀浆后再加入4ml 丙酮，放暗处静置萃取5min 后过滤（取滤液进行纸层析），再用4ml80％丙酮冲洗研钵和研棒后也一并进行过滤2、纸层析1）准备滤纸2）点样3）层析 时间40分钟左右4）层析结果3、含量测定1）去除残渣，取上清液，用80％丙酮定容至10ml 。

2）取1ml 稀释溶液，加4ml80％丙酮稀释5倍。

3）吸光度的测定以80％丙酮为对照，分别测定663nm、646nm 波长下的光吸收值五、结果计算80％丙酮提取液中色素浓度计算公式：C a =12.21A 663-2.81A 646C b =20.13A 646-5.03A 663C T =C a +C b =17.32A 646＋7.18A 663浓度单位：mg/L单位植物组织中叶绿体色素的含量：叶绿体色素的含量＝色素的浓度（mg/L）×提取液体积（L）×稀释倍数/样品鲜重。

实验1 叶绿素提取试验实验一绿色植物色素的提取及分离一、实验目的与要求1、通过绿色植物色素的提取与分离，了解天然物质分离提纯的方法。

本原理及操作技术，加深了解微量有机物色2、学习薄层色谱和柱色谱分离的基谱分离、鉴定的原理。

二、实验原理绿色植物(如菠菜)叶、茎中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。

叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(CHONMg)557254和叶绿素b(CHONMg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代而形成557064 了叶绿素b。

它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。

也是使用的绿色色素，可用于糕点、饮料水中，添加于胶姆糖中还可以消除口臭。

植物中叶绿素a的含量通常是叶绿素b的三倍。

尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。

胡萝卜素(CH)是具有长链结构的共轭多烯。

它有三种异构体，即α-胡4056 萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，约占胡萝卜素的78%，也最重要。

在生物体内，β-胡萝卜素受酶催化氧化可转化成维生素A。

目前，β-胡萝卜素已进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。

叶黄素(CHO)是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝40562 卜素的两倍。

与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。

本实验先根据各种植物色素的溶解度情况将胡萝卜素(橙)、叶黄素(黄)、叶绿素a和叶绿素b从菠菜叶中提取出来，然后根据各化合物物理性质的不同用色谱法进行分离和鉴定。

薄层层析时，上述化合物的展开速度不同;柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。

RNN 2+Mg NNCH 叶绿素a(R=CH) 32OCOOCHCH叶绿素b(R=CHO) 23COORRβ-胡萝卜素(R=H) 叶黄素(R=OH)CHOH2维生素A色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法。

从茶叶中提取咖啡因与叶绿素并制备叶绿素铜钠一、实验目的1、学习从茶叶和蚕沙中提取咖啡因与叶绿素的基本原理；2、通过从茶叶中提取咖啡因与叶绿素，掌握从天然有机物中提取纯有机物的一种方法。

3、进一步熟悉萃取、蒸馏、升华等基本操作。

4、通过实验提高综合能力及练习巩固各种相关操作。

二、实验原理咖啡因是弱碱性化合物, 可溶于氯仿、丙醇、乙醇和热水中, 难溶于乙醚和苯(冷)。

纯品熔点235～236℃, 含结晶水的咖啡因为无色针状晶体, 在100 ℃时失去结晶水, 并开始升华，120 ℃时显著升华，178℃时迅速升华。

利用这一性质可纯化咖啡因。

蚕沙中含有丰富的叶绿素，其纯含量达0.8—1.0%，居所有天然色素之首，故可用蚕沙来提取叶绿素，由于叶绿素易溶于乙醚、苯、丙酮、乙醇的脂性溶剂，故可用乙醇、丙酮混合液来提取。

所得的叶绿素由于遇热、光、酸、碱等易分解，且又不溶于水。

110度左右会分解，故把叶绿素制备成叶绿素铜钠，其性质更稳定溶解性也会有所提高。

叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被四所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐：C 55H 72MgN 4O 5 + 2 NaOH → C 34H 30O 5N 4MgNa 2 + CH 3OH + C 20H 39OH 在酸性介质中，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿素酸： C 34H 30O 5N 4MgNa 2 + 4 H +→ C 34H 34O 5N 4 + Mg 2++ 2 Na +叶绿素酸可与铜盐加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应就生成叶绿素铜钠盐：C 34H 34O 5N 4 + Cu 2+→ C 34H 34O 5N 4Cu + 2 H +C 34H 34O 5N 4Cu + 2 NaOH → C 34H 34O 5N 4CuNa 2 + 2 H 2O三、仪器与试剂仪器：索氏提取器，锥形瓶，冷凝管，分液漏斗，蒸发皿，纱布，水浴锅，温度计，721分光光度计，电子天平，玻璃棒，减压装置，蒸馏装置。