细胞的抗原表位研究方法

牛羊乳α-酪蛋白的B细胞抗原表位预测及免疫反应性分析薛海燕;韩波;李珊;操歌【摘要】牛羊乳的α-酪蛋白营养功能相似,但蛋白质亚类结构和含量不同,可能是造成其过敏性差异的原因.本文旨在利用生物信息学DNAStar Protean软件、SOPMA以及the Bepi Pred 1.0服务器对牛羊乳主要过敏蛋白αs1-酪蛋白（Casein,CN）的二级结构、亲水性、抗原指数、表面可及性和柔韧性进行预测,分析鉴定主要B细胞抗原表位.合成相应表位肽段序列,制备酪蛋白抗体,采用间接ELISA法分析验证合成多肽的免疫反应性.结果表明：牛羊乳αs1-CN的氨基酸序列同源性89%,但抗原表位存在差异,与牛乳αs1-CN相比,羊乳抗原表位数目相差不大,但两者抗原表位区域存在一定的包含重叠关系.且羊乳αs1-CN合成肽段P-1037（26-31,LSPEVP）、P-1040（140-142,EGN）和牛乳αs1-CN合成肽段P-1038（189-208,TDAPSFSDIPNPIGSENSEK）、P-1039（99-102,EDVP）都具有免疫反应性,该结果为过敏原表位的选择提供基础,为牛羊乳过敏原性比较及改性加工提供理论依据.【期刊名称】《陕西科技大学学报》【年(卷),期】2017(035)005【总页数】6页(P133-138)【关键词】牛羊乳;αs1-酪蛋白;二级结构;抗原表位【作者】薛海燕;韩波;李珊;操歌【作者单位】陕西科技大学食品与生物工程学院,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】Q518.1Abstract:Bovine and goat milk α-casein were very similar in the aspect of nutrition and function,but they induced different allergen reaction in consumers because of the differences in protein subclass structure and content.The purpose of this paper was to analyze and identify the B cell epitopes by predicting the secondary structure,hydrophilicity,antigenicity index,surface accessibility and flexibility of major allergic protein αs1-casein from cow and goat milk using DNAStar Protean software,SOPMA and the BepiPred 1.0 server.Prepared the casein antibody by synthesizing the corresponding epitope peptide sequence and then used an indirect ELISA method to identify the immunoreactivity of the synthetic polypeptide.The results showed that the amino acid sequence homology of cow and goat milk αs1-CN was 89%,but the epitopes were different.The number of epitopes of goat milk was similar compared with cow milk αs1-CN,but there was a certain overlap between the two epitope regions.The peptide fragment P-1037 (26～31,LSPEVP),P-1040 (140～142,EGN) synthesized by the goat milk αs1-CN and the peptide P-1038 (189～208,TDAPSFSDIPNPIGSENSEK),P-1039(99～102,EDVP) synthesized by the cow milk αs1-CN had the immunoreactivity,which provided the basis for the selection of the allergen epitope,and provided the theoretical basis for the comparison of sensitization and modification of cow and goat milk. Key words:cow and goat milk; αs1-CN; the secondary structure; epitopes牛乳中富含多种蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质，是人体优质的营养来源，但同时也是联合国粮食及农业组织FAO (1995)报告的八大类过敏食物之一[1].牛乳过敏是指机体对牛乳蛋白的高反应性(hypersensitivity)，是婴幼儿最常见的食物过敏之一，在欧美发达国家，婴儿牛乳过敏症状发生率达0.3%～7.5%[2].目前普遍认为，牛乳蛋白中的酪蛋白(Casein，CN)、β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，β-LG)和α-乳白蛋白(α-lactalbumin，α-LA)是最主要的过敏原，其中酪蛋白主要由αs1、αS2、β和κ酪蛋白组成，约80%是由αs1-酪蛋白(αs1-CN)组成，对酪蛋白过敏的患者一般都对αs1-CN过敏[3,4].羊乳总热量、干物质、蛋白质、脂肪以及矿物质含量均高于牛乳，具有较高的营养价值，且易被人体消化吸收利用，在国际营养学界被誉为“乳中之王”[5].以羊乳替代牛乳作为婴幼儿主要的营养来源被广泛认可.羊乳和牛乳中酪蛋白所占比例相似，但羊乳中以β和κ-酪蛋白为主，αs1-CN含量(18.9%)远低于牛乳中的含量 (30.8%)[6].羊乳中αs1-CN含量较低，理论上具有较低的致敏性，Hodgkinson等[7]也证实了低αs1-CN含量的山羊乳可以减少抗原摄入量，降低致敏性.然而Muraro等[8]认为山羊乳与牛乳具有相同的致敏性.所以，就目前山羊乳的低致敏性及其在预防婴幼儿牛乳过敏中的应用仍存在争议.食物蛋白质引起机体致敏的主要原因是消化道内未水解的蛋白质抗原表位被免疫系统识别.抗原表位预测中，B细胞线性表位预测是目前研究的重点，它是研究抗原表位与已知氨基酸序列在蛋白质上的某些结构特征之间的关系，从氨基酸序列的二级结构，亲水性，表面可及性，柔韧性等方面，进行序列的分析预测[6,9].常用的分析软件有ABCpred[10]，BepiPred[11]，SOPMA[12]，DNAStar[13]，其中BepiPred，SOPMA，DNAStar这三种软件较为常用，其基本原理是结合抗原蛋白的结构特点，统计显著性度量，理化性质等指标进行简单预测，操作简单，只需输入蛋白质氨基酸序列，即可得出结果.该研究采用BepiPred，SOPMA和DNAStar这三种预测软件对牛羊乳过敏原αs1-CN B细胞线性抗原表位进行预测分析，并通过实验验证合成的抗原表位是否具有免疫反应性，为进一步对比验证牛乳和羊乳之间的抗原关系提供一定的理论基础.1.1 材料与仪器(1)主要材料：兔抗牛α-CN多克隆抗体(α-CN-IgG，效价1∶204800)，本室制备；HRP-羊抗兔Ig G抗体，北京博奥森生物技术有限公司；碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、明胶等常规试剂均为进口或国产分析纯.(2)主要仪器：MULTISKANmk3型酶标仪，赛默飞世尔上海仪器有限公司；隔水式电热恒温培养箱，上海岛析实业有限公司.1.2 试验方法1.2.1 牛羊乳αs1-CN氨基酸序列通过NCBI数据库检索牛羊乳αs1-CN氨基酸序列，该序列在NCBI的基因登录号分别为NP_851372、P18626.1.2.2 牛羊乳αs1-CN二级结构预测利用DNAStar Protean软件(Gamier-Robson方法)和SOPMA网络服务器输入检索到的牛羊乳αs1-CN氨基酸序列分析预测两者的二级结构.1.2.3 牛羊乳αs1-CN亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性预测应用DNAStar Protean软件，采用Kyte-Doolittle法、Jameson-Wolf法、Emini法和Karplus-Schulz法分别对检索到的牛羊乳αs1-CN氨基酸序列进行亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性预测.1.2.4 B细胞线性抗原表位确定利用the BepiPred 1.0服务器，直接输入牛羊乳αs1-CN氨基酸序列，抗原指数高于1即为可能表位区域[14].并与牛羊乳αs1-CN二级结构预测结果和亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性预测结果相结合，综合分析得到B细胞线性抗原表位.1.2.5 牛羊乳αs1-CN多肽合成及鉴定选择牛羊乳差异较大的抗原表位肽段，由杭州丹港生物科技有限公司，应用全自动多肽合成仪，采用固相合成法从肽链C端向N端依次合成.经反高效液相色谱(RP-HPLC)以及质谱对其进行纯度鉴定，纯度大于98%，符合实验室要求.1.2.6 多肽免疫反应性鉴定采用间接ELISA检测合成多肽的免疫反应性.将上述合成的多肽用包被缓冲液稀释至10 μg/mL，每孔加入100 μL，以α-CN、β-LG蛋白分别作为阳性、阴性对照，4 ℃包被过夜[15].弃去蛋白包被液，每孔加入300 μL PBST洗涤液洗涤3次，每次4 min，拍干，除去残留气泡和液体.每孔加入200 μL明胶封闭液，37 ℃温箱封闭1.5 h，洗涤，拍干.每孔加入浓度为5μg/mL的α-CN-Ig G 100 μL(实验室制备，抗牛乳α-CN多克隆抗体兔血清)，同时设置阴性血清对照，37 ℃温箱温育1.5 h，使抗原抗体充分反应，洗涤拍干.用PBS稀释液将羊抗兔HRP-Ig G以1∶4000的比例稀释作为二抗，每孔加入100 μL，37 ℃温箱温育1 h，洗涤，拍干.每孔加入50 μL TMB显色液，37 ℃温箱避光显色15 min，显色后每孔加入50 μL终止液2 mol/L H2SO4终止反应，450 nm测定吸光值.检测时以P/N值>2.1(即多克隆抗体上清的吸光值大于阴性血清值的2.1倍)判定检测结果为阳性，P/N值<2.1(即多克隆抗体上清的吸光值小于阴性血清值的2.1倍)判定检测结果为阴性[15].2.1 牛羊乳αs1-CN所对应的氨基酸序列MKLLILTCLVAVALARPKHPIKHQGLPQEV LNENLLRFFVAPFPEVFGKEKVNELSKDIGS ESTEDQAMEDIKQMEAESISSSEEIVPNSVEQ KHIQKEDVPSERYLGYLEQLLRLKKYKVPQLEIVPNSAEERLHSMKEGIHAQQKEPMIGV NQELAYFYPELFRQFYQLDAYPSGAWYYVP LGTQYTDAPSFSDIPNPIGSENSEKTTMPLW MKLLILTCLVAVALARPKHPINHRGLSPEV PNENLLRFVVAPFPEVFRKENINELSKDIGS ESTEDQAMEDAKQMKAGSSSSSEEIVPNSA EQKYIQKEDVPSERYLGYLEQLLRLKKYNV PQLEIVPKSAEEQLHSMKEGNPAHQKQPMI AVNQELAYFYPQLFRQFYQLDAYPSGAWY YLPLGTQYTDAPSFSDIPNPIGSENSGKTTMPLW对比分析牛羊乳αs1-CN氨基酸序列，将不同差异位点标出，其同源性达到89%，且牛乳αs1-CN氨基酸序列相比羊乳氨基酸差异位点大多为一些极性亲水性氨基酸.2.2 牛羊乳αs1-CN的二级结构利用SOPMA网络服务器对牛羊乳αs1-CN二级结构预测，结果如图1所示.利用DNAStar Protean软件对牛羊乳αs1-CN二级结构预测，结果如图2所示.蛋白质的二级结构是抗原表位预测的重要参数之一.β-转角和无规则卷曲由于其松散的结构，易发生扭曲、盘旋，并展示在蛋白质的表面，因此该区域常含有优势抗原表位而α-螺旋和β-折叠化学键能比较高，结构规则不易变形，较难结合抗体，一般不作为抗原表位[16-18].综合上述两者的预测结果可推出牛乳αs1-CN可能抗原表位区域为19～27，41～43，60～62，99～102，118～120，127～129，148～150，185～186，189～210；羊乳αs1-CN可能抗原表位区域为18～31，41～42，59～62，78～83，99～103，119～121，128，140～142，172～178，183～186，189～210.对比分析预测出的牛羊乳αs1-CN抗原表位区域，从二级结构预测结果显示羊乳可能抗原区域数目高于牛乳，且它们具有相同抗原区域189～210.2.3 牛羊乳αs1-CN亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性预测结果利用DNAStar Protean软件对αs1-CN(bovine、capra hircus)亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性进行预测，结果如图3所示.蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性和柔韧性在抗原形成方面起着主要作用，当亲水性>0、抗原指数>0和表面可及性>1时，形成表位的可能性较大[19-21].综合预测结果推出牛乳αs1-CN可能抗原表位区域为17～19，22～26，50～52，63～67，70～74，77～83，85～105，117～122，129～134，145～149，185～210；羊乳αs1-CN可能抗原表位区域为17～19，27，30～31，35，48～52，55，62～67，70～76，81～84，90～105，117～119，129～134，139～149，205～219.对比分析两者抗原表位差异得出羊乳αs1-CN抗原表位区域与牛乳相比，其大多分布在αs1-CN氨基酸序列的C端，且羊乳αs1-CN表位区域于牛乳表位区域存在一定的包含重叠关系.2.4 B细胞线性抗原表位综合预测蛋白质的二级结构和氨基酸残基的亲水性、抗原指数、表面可及性和柔韧性都是影响B细胞线性抗原表位的重要因素[22].利用the BepiPred 1.0服务器对牛乳αs1-CN氨基酸序列的抗原指数进行预测得到的可能性抗原表位是21，60～68，80～81,85～86，99～102，142～152，173～179，187～208，羊乳αs1-CN可能性抗原表位是26～31，60～70，74～91，100～102， 140～146，187～208.将the BepiPred 1.0、SOPMA、和DNAStar这三种预测软件得到的抗原表位综合分析得出牛乳αs1-CN可能抗原表位为22～26，86～87，99～102，118～120，148～149，185～186，189～210，羊乳αs1-CN可能抗原表位为18～19，27，30～31，83～84，99～103，117～119，140～142，205～210.对比分析预测得到的牛羊乳αs1-CN抗原表位，较牛乳αs1-CN相比，羊乳αs1-CN同样具有较多区域的抗原表位，且二者存在一定的包含关系.2.5 牛羊乳αs1-CN合成肽的设计综合上述可能抗原表位，选择其长度不同的四条预测表位肽段采用固相合成法合成.分别来自于羊乳αs1-CN命名为：P-1037(26～31，LSPEVP)和P-1040(140～142，EGN)；来自于牛乳αs1-CN命名为：P-1038(189～208，TDAPSFSDIPNPIGSENSEK)和P-1039(99～102，EDVP).2.6 合成肽免疫反应性鉴定利用实验室制备的兔抗牛α-CN多克隆抗体作为一抗，间接ELISA法检测合成肽的免疫反应性，以P/N>2.1为判断标准，结果如图4示.由图4可知，合成的四种多肽和α-CN均与α-CN-Ig G呈阳性反应，且α-CN测出的吸光值高于合成的四种多肽；而β-LG与α-CN-IgG呈阴性反应，由此初步说明，合成多肽具有免疫反应性.其免疫原性还需进一步验证.关于牛乳主要过敏原抗原表位的预测研究报道较多.B Ruite等[23]利用重叠肽的方法发现牛乳αs1-CN的T细胞表位识别位点即43-66，73-96，91-114和127-180.Picariello G等[24]利用体外模拟胃肠消化后的牛乳蛋白水解液通过在Caco-2细胞的转运吸收研究发现β-Lg 40～60和125～135具有一定的致敏性.但目前从抗原位点出发研究羊乳过敏性的报道并不多见，Sanz C L等[25]利用豚鼠进行研究，发现豚鼠经口给予羊奶、牛奶和抗乳血清时，山羊奶的变应原性低于牛奶，其变应原性可能是由酪蛋白和抗乳血清不同蛋白质之间的特异性抗原决定簇引起.本研究对牛羊乳主要过敏原αs1-CN B细胞线性抗原表位进行预测，可为对目前山羊乳的低致敏性及其在预防婴幼儿牛乳过敏中的应用提供一定的理论和技术参考. 蛋白引起致敏的前提是它具有抗原性，而抗原表位是蛋白质具有抗原性的关键因素，是抗原与抗体特异性识别的基本单位.B细胞线性抗原表位是指抗原表面可被B细胞抗体识别的线性片段.所以，准确预测B细胞线性抗原表位，可为单克隆抗体的制备、羊乳抗原性的研究等奠定一定的基础.该研究首先采用SOPMA网络服务器，DNAStar软件对牛羊乳αs1-CN氨基酸序列进行对比分析，得出二者氨基酸序列同源性虽较高，但预测出二级结构仍存在差异，其中羊乳αs1-CN β-转角和无规则卷曲的数量较多，如上述利用SOPMA网络服务器对牛乳αs1-CN二级结构预测得到β-转角和无规则卷曲的数目为3.74%和38.32%，羊乳预测得到的数目为4.21%和44.39%，明显大于牛乳.这些差异同牛羊乳αs1-CN氨基酸序列上个别氨基酸的不同存在一定的关系.其次采用DNAStar软件对牛羊乳αs1-CN的亲水性、抗原指数、表面可及性和柔韧性预测，由于在肽段1～200位个别氨基酸的不同，预测出的抗原表位在该位存在部分差异且有一定的包含关系，而在200～214肽位间的氨基酸几乎无明显差异，使得此区段预测出的牛乳αs1-CN抗原表位羊乳αs1-CN也同样具有该表位.本研究仅采用了生物学软件对牛羊乳αs1-CN的二级结构，亲水性，抗原指数，表面可及性和柔韧性等预测并通过实验验证了所预测氨基酸序列的免疫反应性，为深入研究羊乳过敏原提供一定的理论依据.在乳过敏性差异方面，该结果还不能全面的说明羊乳是否可作为低致敏产品代替牛乳作为牛乳过敏患者的直接乳源，还有待对主要过敏原αs2-CN和β-LG等对比分析.但该结果可初步判定羊乳αs1-CN抗原表位合成多肽具有免疫反应性，后续进一步通过动物实验验证其多肽是否具有免疫原性产生抗体.该研究综合三种软件预测参数得到牛乳αs1-CN可能抗原表位为22～26，86～87，99～102，118～120，148～149，185～186，189～210，羊乳αs1-CN可能抗原表位为18～19，27，30～31，83～84，99～103，117～119，140～142，205～210.分析比较牛羊乳αs1-CN B细胞线性抗原表位差异，与牛乳αs1-CN抗原表位相比，羊乳αs1-CN同样具有相当的抗原表位区域.因此，可以初步确定羊乳中虽含有少量的αs1-CN但其仍具有一定的抗原性.通过间接ELISA检测合成多肽的免疫性，实验表明合成多肽呈阳性反应，与抗体发生反应，具有免疫反应性，其免疫原性及过敏原性有待验证.【相关文献】[1] Kattan J D,Cocco R R,Järvinen K k and soy allergy[J].Pediatric Clinics of North America,2011,58(2):407-426.[2] Yibin Wang,Sha Xu,Yanmei Hou,et al. Recent advances in digestion,absorption and allergenicity of goat′s mil k[J].Hans Journal of Food and Nutrition Science,2012,1(4):29-33.[3] Monaci L,Brohée M,Tregoat V,et al.Influence of baking time and matrix effects on the detection of milk allergens in cookie model food system by ELISA[J].FoodChemistry,2011,127(2):669-675.[4] Monaci L,Tregoat V,Hengel A J V,et k allergens,their characteristics and their detection in food:A review[J].European Food Research and Technology,2006,223(2):149-179.[5] 焦凌梅,袁唯.改善山羊乳风味的方法研究[J].中国乳业,2006,26(6):56-58.[6] Ceballos L S,Morales E R,Adarve G D L T,et position of goat and cow milk produced under similar conditions and analyzed by identical methodology[J].Journal of Food Composition and Analysis,2009,22(4):322-329.[7] Hodgkinson A J,Mcdonald N A,Kivits L J,et al.Allergic responses induced by goat milk αs1-casein in a murine model of gastrointestinal atopy[J].Journal of DairyScience,2012,95(1):83-90.[8] Muraro M A,Giampietro P G,Galli E.Soy formulas and nonbovine milk[J].Ann Allergy Asthma Immunol,2002,89(1):97-101.[9] Soria Guerra R E,Nieto Gomez R,Govea Alonso D O,et al.An overview of bioinformatics tools for epitope prediction: Implications on vaccine development[J].Journal of Biomedical Informatics,2015,53:405-414.[10] El Manzalawy Y,Dobbs D,Honavar V.Predicting linear B-cell epitopes using string kernels[J].Journal of Molecular Recognition,2008,21(4):243-255.[11] Gao J,Kurgan putational prediction of B cell epitopes from antigen sequences[J].Methods in Molecular Biology,2014,1184(5):197-215.[12] Yang X,Yu X.An introduction to epitope prediction methods and software[J].Reviews in Medical Virology,2009,19(2):77-96.[13] Burland T G.Dnastar′s lasergene sequence analysis software[J].Methods in Molecular Biology,2000,132(3):71-91.[14] 单晓红.大豆和牛奶致敏原表位预测及加工对其抗原性和结构的影响[D].无锡: 江南大学,2013.[15] 吴序栎.牛乳β-乳球蛋白的检测及茶多酚对其免疫反应性影响的研究[D].广州: 华南理工大学,2012.[16] Maeda K,Mizukoshi F,Hamano M,et al.Development of an equine herpesvirus type 4-specific enzyme-linked immunosorbent assay ssing a B-cell epitope as anantigen[J].Journal of Clinical Microbiology,2004,42(3):1 095-1 098.[17] 刘银萍,王全立,张俊仙,等.结核分枝杆菌Rv1419蛋白抗原表位的预测[J].中国防痨杂志,2015,37(1):52-55.[18] 严小玲,何颖,陶爱林,等.猫主要过敏原Fel d1的二级结构及B细胞抗原表位预测[J].国际医药卫生导报,2011,17(9):1 025-1 028.[19] 朱倩倩,吴序栎,肖杰,等.腰果过敏原Ana o 2结构及抗原表位预测[J].食品与生物技术学报,2012,31(2):35-39.[20] 何颖,刘雪婷,王珊,等.乳胶过敏原Hev b 1二级结构及抗原表位的预测[J].国际医药卫生导报,2013,19(11):1 553-1 555.[21] 胡纯秋,高金燕,罗春萍,等.花生过敏原Ara h2.02二级结构和B细胞抗原表位预测[J].食品科学,2009,30(21):13-15.[22] 马凡舒,张蕾,王洋,等.B细胞抗原表位预测方法的研究进展[J].中国畜牧兽医,2016,43(1):63-67.[23] B Ruiter,V Trégoat,M Rabet L,et al.Characterization of T cell epitopes in αs1-casein in cow′s milk allergic,atopic and non-atopic children[J].Clinical & ExperimentalAllergy,2006,36(3):303-310.[24] Picariello G,Iacomino G,Mamone G,et al.Transport across Caco-2 monolayers of peptides arising from in vitro,digestion of bovine milk proteins[J].FoodChemistry,2013,139(4):203-212.[25] Sanz C L,Sanz Sampelayo M R,Gil E F,et al.Evaluation of the allergenicity of goat milk,cow milk,and their lactosera in a guinea pig model[J].Journal of DairyScience,2009,92(3):837-846.。

抗原表位鉴定方法的研究进展孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民【摘要】抗原决定簇又称为抗原表位,是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团,也是蛋白质抗原性的基础.抗原抗体的特异性结合反应是针对特定的抗原表位而并非是完整的抗原,因此明确蛋白质的抗原表位对多肽和新型疫苗分子的设计及诊断试剂的发展具有重要意义.随着科技的发展,出现了一些新的鉴定单克隆抗体抗原表位的方法.本文在传统表位鉴定方法基础上简要综述了多技术结合鉴定抗原表位新方法.【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》【年(卷),期】2017(038)003【总页数】5页(P291-295)【关键词】抗原表位;多技术;鉴定方法【作者】孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民【作者单位】西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061【正文语种】中文【中图分类】R751抗体一般仅与大分子抗原的某一部位反应，这一特异的部位称为抗原决定簇，也称为抗原表位，它是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团。

抗原表位的意义及分类摘要：一、抗原表位的概念与作用二、抗原表位的分类1.连续抗原表位2.离散抗原表位3.共同抗原表位4.独特抗原表位三、抗原表位在免疫反应中的应用四、抗原表位的研究意义与展望正文：抗原表位是抗原分子上具有免疫活性的特定化学基团，能够与免疫细胞表面的抗体结合，诱导免疫应答反应。

抗原表位在生物学和医学领域具有重要的研究价值，对抗原表位的深入了解有助于疫苗设计、免疫诊断和治疗肿瘤等领域的发展。

抗原表位可以根据其性质和功能进行分类：1.连续抗原表位：存在于蛋白质抗原中，具有连续的氨基酸序列。

连续抗原表位通常具有较高的可变性，使得抗原分子能够逃避宿主免疫系统的识别和清除。

2.离散抗原表位：分布于抗原分子上的不连续区域，通常具有较高的保守性。

离散抗原表位在诱导免疫应答反应中起到重要作用，是疫苗设计和免疫诊断的研究重点。

3.共同抗原表位：存在于多个不同抗原分子上，具有相似的氨基酸序列。

共同抗原表位可诱导交叉免疫反应，有助于筛选具有广泛保护作用的疫苗抗原。

4.独特抗原表位：具有高度特异性的抗原表位，通常与病原体的种属特异性相关。

独特抗原表位在病原体诊断和疫苗研究中有重要意义。

抗原表位在免疫反应中起到关键作用，它们与抗体结合后，可诱导B细胞产生免疫球蛋白，激活T细胞，并促使效应细胞发挥抗病原体作用。

此外，抗原表位的研究对于疫苗设计和免疫诊断试剂的开发具有重要意义。

随着生物技术的不断发展，对抗原表位的研究将更加深入，为疫苗研发、免疫诊断和治疗肿瘤等领域带来新的突破。

总之，抗原表位作为抗原分子上具有免疫活性的特定化学基团，对抗原表位的深入了解有助于疫苗设计、免疫诊断和治疗肿瘤等领域的发展。

说明免疫组织化学技术检测组织和细胞内蛋白质抗原
的关键技术
免疫组织化学技术是一种基于免疫学原理的实验技术，适用于检测组织和细胞内蛋白质抗原。

其关键技术包括以下几个方面：
1. 抗原表位的选择：选择合适的抗原表位对于正确识别目标抗原至关重要，通常需要根据已知的抗原序列设计合适的抗原表位。

2. 抗原修复处理：组织标本或细胞病理部分常常因为常规处理方式而导致抗原失活、免疫组织化学染色效果受阻，因此，要使用抗原修复处理方法，如热解或酶解等，来恢复抗原的免疫原性。

3. 抗原特异性抗体的使用：使用特异性抗体与目标抗原发生特异性结合，通常用于检测和定位特定的抗原。

4. 免疫组化染色：将标本与特异性抗体反应后，通过适当的染色方法，如荧光染色、酶染色或放射性标记等方法，来进行成像和信号检测。

5. 图像分析和数据处理：通过数字化成像技术和计算机软件处理技术，对免疫组织化学染色的图像数据进行定量分析和计算，以实现更精确的数据表达和研究结果。

EDSV京911株五邻体优势抗原表位的筛选及鉴定的开题报告题目：EDSV京911株五邻体优势抗原表位的筛选及鉴定一、研究背景近年来，世界范围内不断发生病毒性感染性疾病的爆发，其中包括禽流感、流行性感冒、登革热、寨卡病毒等，给全球公共卫生带来了巨大威胁。

对于这些病毒性感染性疾病的预防和控制，疫苗是最为有效的手段之一。

而疫苗主要依靠免疫机制产生保护性抗体来预防疾病。

因此，决定疫苗效果的关键因素是疫苗能否诱导产生高效的抗体反应。

而研究表位抗原是疫苗开发中的重要环节。

抗原表位是指能够被免疫系统识别并结合的特定区域，因此，选取抗原表位能加速疫苗开发并提高其效果。

EDSV京911株是常见的病毒性感染疾病的研究对象之一，目前尚未找到其有效的抗原表位，因此，本研究旨在筛选和鉴定EDSV京911株五邻体优势抗原表位。

二、研究目的本研究的主要目的是：筛选和鉴定出EDSV京911株五邻体优势抗原表位，以便开发更为有效的疫苗，提高EDSV京911株的抗病能力。

三、研究方法本研究将采用以下方法：1.构建五邻体肽库：以全长EDSV京911株基因为模板，利用DNA重组技术，构建出包含不同长度五邻体的肽库。

2.免疫筛选：利用采集自EDSV京911株阳性血清的抗体，对五邻体肽库进行筛选，得到与抗体交互反应的肽段。

3.限定肽段：对筛选出的肽段进行进一步筛选，得到限定肽段。

4.鉴定抗原表位：利用酶联免疫吸附实验（ELISA）等技术，检测限定肽段和EDSV京911株DNAb相互作用，鉴定抗原表位。

四、研究意义本研究的结果将为EDSV京911株抗原表位的研究提供新思路，为疫苗的开发提供技术支持，具有重要的临床应用意义。

同时，本研究所采用的肽库筛选方法，也可应用于其他病毒的抗原表位研究中。

五、研究进度安排本研究将于明年三月开始，预计于明年六月完成五邻体肽库的构建，七月完成免疫筛选，八月份完成限定肽段的筛选，九月完成抗原表位的鉴定，并在年底之前完成论文撰写和稿件的提交。

抗原表位名词解释
抗原表位是生物学领域常见的一个名词，它们提供了细胞和组织的结构信息，有助于我们理解和调查细胞和组织活动的机制。

抗原表位也可以有助于诊断和治疗疾病，从而增强人体的防御能力。

下面，将介绍抗原表位及其定义，并对它们之间的关系作出解释。

首先，抗原表位是指细胞表面上能够吸引免疫系统反应的特定表位。

抗原表位可以是一种基因上的结构形式，也可以是一种产物，它们可以帮助细胞识别所处的环境，吸引特定的免疫细胞。

这些细胞被称为“抗原呈递细胞”，它们的任务是将细胞表面上的抗原物质向免疫系统发送信号，激活免疫系统的反应。

其次，抗原表位可以是一种生物化学物质，如糖蛋白、抗原抗体或抗原-抗体复合物。

这类物质可以用来识别细胞表面上的特定抗原，这有助于免疫系统对特定的物质进行识别和响应。

此外，抗原表位可以指细胞表面上的受体蛋白，这些受体蛋白可以用来识别外部特定的抗原，并促进细胞的增殖和存活。

这类受体蛋白的种类和数量有着重要的影响，可以作为衡量抗体对病原微生物的免疫反应的指标。

最后，抗原表位还可以是抗原-抗体复合物。

它们可以用来识别免疫系统反应性细胞表面上的特定抗原，它们可以帮助诊断和治疗疾病，从而增强人体的防御能力。

本文介绍了抗原表位的概念，以及它们在生物学中的意义。

抗原表位的作用有：帮助细胞识别外部环境，帮助免疫系统反应，帮助细
胞增殖和存活，以及诊断和治疗疾病等。

它们不仅能帮助我们理解和调查细胞和组织活动的机制，还能有效地帮助诊断和治疗疾病，从而增强人体的防御能力。

因此，抗原表位在生物学研究和实践中具有重要的意义。