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实验室常用培养基的配制方法在实验室中，培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础，正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基，并掌握正确的配制方法。
接下来，我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基（LuriaBertani 培养基）LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基，其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基，所需材料如下：胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤：1、称取上述成分，将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水，用玻璃棒搅拌，直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70（通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节）。
5、将培养基分装到锥形瓶中，每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞，用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中，在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基，需要准备以下材料：牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下：1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水，搅拌溶解。
3、定容至 1L，搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌，方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）PDA 培养基常用于培养真菌，尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基，材料如下：马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程：1、将马铃薯去皮，切成小块，称取 200g，放入锅中，加入约1000ml 去离子水，煮沸 20 30 分钟，直到马铃薯块变软。
食用菌母种的制作实验一、目的要求了解无菌操作规程，熟练掌握PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)的制作、母种的转管与培养技术。
二、材料与用具(1) 材料:马铃薯、葡萄糖、琼脂、酒精棉球、高锰酸钾、37%甲醛溶液、紫外线灯、标签纸等。
(2)用具:锅、玻璃棒、18mm×180mm试管、棉塞、纱布、牛皮纸、1000mL量筒、手提式高压蒸汽灭菌锅、菜刀、砧板、天平、烧杯、接种箱、超净工作台、接种针、酒精灯、恒温培养箱等。
三、内容与方法(一)PDA母种培养基的制作1.PDA培养基配方去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18-20g，水1000mL,pH自然。
此配方培养基适用于香菇、黑木耳、金针菇、滑菇、灵芝、草菇、平菇等多种菌种，但不适用于双孢菇等有特殊营养要求的食用菌。
2.配制方法(1)确定使用量:根据人数确定使用量，一般每人制作10-20支培养基供接种用。
(2)制备营养液:马铃薯去皮、挖掉芽眼，切成黄豆大小的块。
称量后用略多于用量的水煮开，并维持10-20min，至马铃薯块酥而不烂，再用2层纱布过滤，取其滤液，定容至1000ml待用；琼脂称好后，用剪刀剪成小段，再用清水浸泡，以利于熔化;将琼脂条放人滤液申边煮边搅拌，至全部熔化。
再将溶液倒入量器中，加入葡萄糖，并不断搅拌使之完全溶解。
一般情况下，此营养液的pH不需要特意调节。
(3)营养液分装:趁热用注射器分装营养液。
营养液以装人试管容量(或高度)的1/5 左右为宜，一般18mmx180mm试管注人8-10ml营养液即可。
注意防止培养液粘到近管口的壁上装好后，塞好棉塞，每7支或10-12支捆成束，管口一端用防潮纸包扎好，待灭菌。
(4)灭菌:按照高压蒸汽灭菌锅的操作规程使用。
①加水:先向外锅加水，略超过支架。
②装锅:将灭菌物品装人锅内，不宜装得过满过紧，应留下1/5空间及空隙，以利蒸汽流通，并检查导管是否与排气网结合紧密，畅通。
③盖锅盖:对好内锅上插孔，盖好锅盖，对角将螺丝旋紧。
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
pda培养基配置的原理
PDA培养基，通常也称为紫外通道培养基，是一种用于培养真菌菌株的液态培养基，是一种灰白色的粉末状的混合物，主要由酵母粉、蔗糖、凝胶、血清、矿质元素和碳水化合物组成。
其特性包括低氧，抑制杂菌的生长，促进真菌生长，还可以用来检测真菌菌株间的相互关系，如同它们之
间的系谱关系和共同特征。
PDA培养基在正确配制组成后，可以利用紫外
光照射这种培养基，以特殊的光照强度使背景发紫外反射，使图像突出显示；经过紫外照射变色，从而使得真菌和伪菌的形态明显区分开来，增强
菌类识别的准确性和效率，大大提高了识别菌类的速度。
首先，PDA培养基的成分配比必须谨慎控制，以确保培养基的稳定性。
这意味着主要原料（如碳水化物、矿质元素、血清、酵母粉和蔗糖）的含
量需要精确地控制在配置规定范围内。
比如，给定的亚硝酸盐对真菌的增
长具有显著的抑制作用，因此PDA培养基中的含量必须严格控制，以保证
培养基的可靠性和可控性。
此外，使用PDA培养基还需要考虑不同环境条件下的配置要求。
因此，在添加各种原料之前，首先检查培养基的pH值，防止不同种类的酵母形成
软化物，以及酵母毒素对真菌菌株的毒性影响，在环境pH值确定后，整体
培养组份比例应考虑到环境pH值影响，在使用硝酸钠时应控制在10毫克/升，另外要注意原料混合温度，以免改变培养基的性质。
最后，在配置PDA培养基时，还应注意维持良好的材料制备条件，以
免影响真菌的有效性和分类识别精度，确保高质量的培养基可以有效地提
升细菌的分类准确率。
在配制培养基时，需要保证过氧化物能量的首要性，才能达到预期的培养效果。
2.2 培养基的配制2.2.1 PDA固体培养基（1L）取新鲜的马铃薯，在洗净、去皮后称取200 g，切碎后放入装有800 mL蒸馏水的1 L的烧杯内。
使用控温电热套加热、煮沸30 min后，4层纱布过滤，收集滤液。
最后，用电子天平称取20 g蔗糖、15 g琼脂粉，倒入收集到的滤液中，搅拌均匀后定容至1000 mL。
2.2.2 Bavendamm氏反应培养基（1L）在1000 mL的PDA固体培养基中，加入0.4mM 鞣酸，并搅拌均匀。
2.2.3 氧化带测定培养基（1L）在1000 mL的PDA固体培养基中，加入0.04%的愈创木酚，并搅拌均匀。
2.2.4 液体产酶培养基（1L）即PDA液体培养基。
取新鲜的马铃薯，在洗净、去皮后称取200 g，切碎后放入装有800 mL蒸馏水的1 L的烧杯内。
使用控温电热套加热、煮沸30 min后，4层纱布过滤，收集滤液，并称取20 g蔗糖（或葡萄糖），并搅拌均匀。
最后，用量筒均匀地量取50 ml的培养基，倒入150 ml的三角瓶中。
2.3 实验方法2.3.1 菌种的纯化和扩大培养从桂林南方食用菌研究所购买的15个平菇菌株，需要利用PDA固体培养基进行菌种的纯化以及扩大培养，才能够在实验过程中使用。
在无菌操作台内，使用灭菌后的镊子，取菌种培养瓶内的平菇菌株，接种到事先配制好PDA固体培养基平板上，并放入28℃的恒温培养箱中。
待平菇菌株的菌丝长好后，再次转接到PDA平板上，28℃恒温培养8 d，进行扩大培养。
待菌丝长满整个平板后，即可用灭菌后的打孔器，将PDA平板上的菌种制成直径12 mm、厚2mm 的菌种塞，备用。
2.3.2 初筛用打孔器分别取1片纯化且培养好的直径12 mm、厚2mm的菌丝，接种于装有Bavendamm氏反应培养基的平板中心，置于恒温培养箱中，28℃条件下恒温培养。
最后，每天按时记录菌落周围是否产生棕色的轮环，有棕色轮环出现者记录为（+），无棕色轮环出现者则记录为（-），且用相机拍下平板上菌落周围的变化情况。
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微生物实验室培养基制作个人总结实验二母种培养基制作一、实验目的掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程，为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。
二、常用培养基配方1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基（pda）去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，ph自然。
2.pda综合培养基去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3.0克，硫酸镁1.5克，维生素b10.05克，水1000毫升，ph自然。
三、实验材料和用具天平、电炉，18×180毫米试管，止水夹。
纱布，棉塞，牛皮纸，皮筋，手套、菜板、刀、恒温箱，三角漏斗、支架（每组一套）。
手提式高压灭菌锅。
马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。
四、实验步骤与方法1.pda培养基的配制2.装管、捆把3.灭菌锅内加适量水→灭菌物品放内锅→加热→压力表0.05pa时放气→压力表1.15pa（121-126℃）时计时30分钟。
4.摆斜面。
灭菌后将试管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板条上，使试管内斜面的长度为试管长度的3／5。
放置凝固后备用。
五、作业思考题1.制作pda培养基过程中，为什么要用牛皮纸将整捆的棉塞部分封盖灭菌。
2.灭菌时，加热水沸后，在锅内压力升至0.5pa时，为什么要打开放气阀。
3.写出试管培养基制作的工艺流程。
4.消毒与灭菌是同一概念吗。
为什么。
实验三原种培养基制作原种即二级种，就是将试管中的母种，接入菌种瓶内，等菌丝长满后形成的菌种。
一、实验目的通过实验初步掌握原种培养基的配料、装瓶（袋）、灭菌、消毒、接种、培养等生产工艺流程。
并了解原种培养基的不同配方及不同的制作方法。
二、实验材料和用具天平，立式或卧式高压灭菌锅，菌种瓶或菌种袋（菌种瓶口径3厘米，容积750毫升），塑料套环，塑料绳，擦布，锥形捣木。
称，大盆麦粒，麦麸，棉籽壳，不锈钢锅，石膏，碳酸钙，白糖，牛皮纸，皮筋，三、培养基配方1.木屑米糠培养基（适用于香菇、木耳、猴头菇、杨树菇等木腐生类食用菌）：木屑（锯木屑）78千克，米糠或麦麸20千克，石膏1千克，蔗糖（俗称白糖）1千克。
一、培养基配方
药品用量（g）
松针200
蔗糖20
蛋白胨 5
酵母粉 3
K2HPO4 1
MgSO4·7H2O 0.5
琼脂20
二、培养基制备
摘取新鲜松树针叶（油松针叶最好）去掉叶鞘，称量200克，用水冲洗清洁后，剪成1厘米的小段，放入铝锅或大烧杯中加水800毫升，煮沸1小时，不断补足蒸发掉的水分。
煮好后用双层纱布过滤，待滤液中悬浮物沉淀后，将沉淀弃去，加入含0.1克高锰酸钾的水溶液20毫升，混匀。
称取蔗糖20克，蛋白胨5克，K2HPO4 1克，放入200毫升水中加热融化，与氧化松针叶煮汁混匀，放入琼脂20克，加热溶化。
未调pH的松针培养基，其pH为6.2左右，用NaOH溶液和HCl调pH至7，然后用纱布过滤，分装三角瓶或试管中。
注：（1）高锰酸钾可抑制细菌生长
（2）在松针培养基上，细菌最适pH为5和6，而真菌为5、6、7。
应调整到7 参考文献：
[1]武觐文. 氧化松针煮汁培养基——一种选择性真菌培养基[J]. 微生物学报,1975,01:37-41.
[2]贺新生,梁福,贾继东,郑秀琼. 粗柄鸡 菌菌丝体培养和无性繁殖过程研究初报[J]. 微生物学杂志,1996,03:26-31.
[3]贺新生,张玲. 四川省袋栽毛木耳镰刀菌病害研究简报[J]. 食用菌学报,1995,02:44-47.
一、培养基配方
药品用量（g）马铃薯200
蔗糖20
蛋白胨酵母膏1 2
KH2PO4 1.5 MgSO4 1 VB1 0.01 琼脂20。
PDA培育基的配制方式一、目的要求1．学习并把握配制培育基的一样方式和步骤。
2．学习并把握棉塞的制作方式。
二、培育基的配制原理培育基是人工配制的各类营养物质供微生物生长繁衍的基质，用以培育、分离、鉴定、保留各类微生物或积存代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，因此培育基的种类很多，但不论是何种培育基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样，因此配制培育基时，还应依照不同微生物对pH值的要求，将培育基调到适合的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方式与步骤(一) 培育基的配制PDA培育基的配制其配方如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培育基配方一一称取去皮马铃薯。
马铃薯切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提早弄碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求，将配制的培育基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以避免使培育基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培育基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培育基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
指状青霉拉丁学名Penicillium digitatum分类地位：菌物界> 无性型真菌门> 半知菌纲> 壳霉目> 杯霉科> 指状青霉属菌落绒状,暗黄绿色,后变橄榄灰,有特殊的香味;分生孢子梗短,帚状枝大而不规则;产孢瓶体在不同的高度上形成;分生孢子卵形至圆柱形。
侵害柑橘果实,引起绿霉病。
培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含。
培养基有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。
有的培养基还含有抗菌素、色素、激素和血清。
培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。
一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6℃的冰箱内。
由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。
培养基的配制1.配料配方换算→在容器中加入少量水〔蒸馏水，自然水〕→按照配方称取各种药品〔依次加入〕→加足所需水量《一药一勺，取药后立即盖上瓶盖》。
2.溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95～97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH用1N的盐酸或的1N NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.过滤滤纸或棉花进行过滤。
5.分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15～20 ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装液体培养基一般装4～5 ml，约试管的1/4高度；固体斜面培养基一般装3～4 ml，约试管的1/5高度。
6.包扎分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
培养基配方1斜面菌种保存培养基1.1PDA 培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取 200g 马铃薯，洗净去皮切碎，加水 1000ml 煮沸 0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加 15g 葡萄糖和 15-20g 琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2 麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的 3~4 倍加水，搅拌均匀后， 37℃左右浸泡 1 小时，然后缓缓加温至 55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温 4~6 小时（用 0.02 摩尔 /升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加 1.8%琼脂，分装试管，每试管约 5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1 平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨 5.0g、酵母浸膏 2.5g、葡萄糖 1.0g、琼脂 15.0g 加入蒸馏水 1000ml 中，煮沸溶解后，调 pH，然后在 121℃下灭菌 15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN 增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水 1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH 为 7.0，分装，在 115℃高压灭菌 15min。
3.2 HE 琼脂成分：胨： 12g，牛肉膏 3g，乳糖 12g，蔗糖 12g，水杨素 2g，胆碱20g，氯化钠 5g，琼脂 18~20g，蒸馏水 1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16ml，Andrade 指示剂 20ml.，甲液 20ml，乙液 20ml。
PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基是分离菌物和细菌的常用培养基，其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），15磅蒸气（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
小技巧：1、做PDA培养基用土豆应去皮，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
分装于试管按物理性状划分：固体培养基按培养基成分划分：半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然PH配制步骤其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。
其他事项1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基，一般用pH 试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性LB培养基LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
PDA培养基的配制方法
一、目的要求
1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2．学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理
培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、
保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训
和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、
氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不
同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具
琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖， 10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，
K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH
试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，
四、操作方法与步骤
(一) 培养基的配制
PDA培养基的配制 其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮 药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水
1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充
水分到1000ml。
(2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小
火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培
养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为
宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4) 加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止
外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
(5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润
湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(二) 棉塞的制作
棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基水分的蒸发，所以
正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状、大小，松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适
合。过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到灭菌的目
的。棉塞过小往往易掉进试管内，因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。正确的棉塞头较大，加塞
时，应使棉塞长度的1／3留在试管口外，2／3在试管口内（见实训图6-4）。目前，有条件的实训室已使用坚固
的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，制作棉塞要选纤维较长的棉花，一般不选用脱脂棉。因为它
容易吸水变湿，造成污染，而且价格也贵。棉塞制作方法见图6-5
实图6-4棉塞 实图6-5 棉塞的制作方法
（三）斜面与平板培养基的制作
斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面，凝固
后即成斜面培养基。斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作。将灭菌后的琼脂培养基倾注于无菌培养
皿中，凝固后即成平板培养基。平板培养基常用于分离菌种、菌落计数、菌落形态观察及菌种鉴定等。斜面
与平板培养基的制作过程大致为：溶解原料、融化琼脂、调PH、分装、灭菌和制斜面或平板。
1、溶解原料
为加速原料的溶解，最好用热水。先将原料依次加入到占配制量一半的水中，待全部溶解后在加足水
量。如配方中有马铃薯、麸皮、胡罗卜、豆芽等天然原料，需将其熬制约30min，取出定量滤液，在将所需
的其他原料加入滤液中。
2、融化琼脂
琼脂的用量可灵活掌握。用作保藏菌种的培养基，琼脂用量可提高至2.5%，以增加持水性。冬季
的气温低，琼脂用量可适当减少。琼脂用前可剪成小段，以利于融化。待溶液煮沸是再加入，不断搅拌至
完全无琼脂块状物时再停止加热。
3、调整PH
用洁净干燥的玻璃棒沾一点培养基滴在试纸上，立即与比色板比较。一般用10%NaOH或HCl调节。
4、分装
将培养基趁热倒入垫有纱布的漏斗中，使培养基直接滤至试管或三角瓶中，试管装量一般为管高的1/4
左右，三角瓶的装量约为其容量的一半。勿使培养基玷污容器口部。口部塞有棉塞，试管每7或9 支扎一
捆，棉塞外面包牛皮纸，以防在灭菌过程中被水汽打湿。
5、灭菌
分装后的培养基应随即灭菌。除特殊情况外，一般培养基均用高压蒸汽灭菌，在104kPa压力下，灭菌
20-30min 。
6、制作斜面或平板
将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上，倾斜度以试管中的培养基约占试管长度的1/2为宜，凝固后即成
斜面培养基。待灭菌后三角瓶内的培养基冷却至45~50时，以无菌操作法向无菌培养皿中倒入培养基，装
置以刚覆盖整个培养皿底部为宜（约15ml）,凝固后即成平板培养基。
五、高压蒸汽灭菌法
该法使用高压灭菌锅，在121℃，O．105MPa压力下灭菌15～30min。微生物实训所需的一切器皿、器
具、培养基(不耐高温者除外)、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌。
高压蒸汽灭菌锅是能耐一定压力的密闭金属锅，有立式或卧式(实图8-1、2 )两种。
灭菌锅上附有压力表、排气阀、安全阀、加水口、排水口等。卧式灭菌锅还附有温度计。有的还有蒸汽
人口。灭菌锅的加热源有电、煤气和蒸汽三种。
高压蒸汽灭菌的操作过程
(1) 加水 将灭菌锅内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。立式锅
是直接加水至锅内底部隔板以下1／3处。有加水口者由加水口加入至止水线处。
(2) 装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。放置装有培养基的容器时要防止液体溢出，瓶塞不
要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。
(3) 加盖 摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，打开排气阀。
(4) 排气 用电炉或煤气加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出。一般认为，当排气流很
强并有嘘声时，表明锅内空气已排净(沸后约5min)。
(5) 升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。
实图7-1 立式灭菌锅 实图7-2 卧式灭菌锅
1．安全阀 2．压力表 3．放气阀
4．软管 5．紧固螺栓 6．灭菌桶
7．筛架8．水
(6)保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源，开始计时并维持压力至所需时间。本实训用
121℃、20rnin灭菌。
(7)降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽
后，再打开锅盖，取出灭菌物品，排掉锅内剩余水。
(8)无菌检查 将已灭菌培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长，则放人冰箱或阴凉处保
存备用。
4．化学药品灭菌 化学药品消毒灭菌法是用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。能
破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂，如重金属离子等；仅阻抑细菌代谢机能，使细菌不能
增殖的化学药剂为抑菌剂，如磺胺类及大多抗生素等。化学药品对微生物的作用是抑菌还是杀菌以及作用效
果，还与化学药品浓度的高低、处理微生物的时间长短、微生物的种类及微生物所处的环境等有关。
微生物实训室中常用的化学药品有2％煤酚皂溶液(来苏尔)、O．25％新洁尔灭、0．1％升汞、3％～5％
的甲醛溶液和75％乙醇溶液等。
5．注意事项
(1)使用高压灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开；务必待压
力降到零后，才可打开锅盖。
(2)干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤，以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭菌物品不要与电烘
箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦。
(3)记述高压蒸汽灭菌的操作过程及注意事项。
六、实验报告（思考题）
1．培养基根据什么原理配制成？牛肉膏蛋白胨培养基中不同成分各起什么作用？
2．配制培养基有哪几个步骤?在制备培养基的过程中应注意些什么问题？ 为什么？
3．记录本实训配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。
4．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?已灭菌的培养基如何进行灭菌检查？
