对罗汉果中多糖活性成分的分离提取及纯化研究

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010111863.1(22)申请日 2020.02.24(71)申请人 湖南华诚生物资源股份有限公司地址 410006 湖南省长沙市岳麓区高新开发区东方红街道杏康南路8号(72)发明人 李伟　宋谷良　黄华学　赵冠宇　刘永胜　黄俊　贺进军　(74)专利代理机构 北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11690代理人 张玉仙(51)Int.Cl.A61K 36/42(2006.01)C08B 37/00(2006.01)A61K 125/00(2006.01)(54)发明名称一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法(57)摘要本发明提供了一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法，包括以下步骤：热水提取，聚酰胺吸附与洗脱，得罗汉果根总黄酮；脱色脱盐，大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷。

本发明通过一种连续型的方法，得到了三种具有经济价值的产物，即罗汉果总黄酮、总三萜皂苷和总多糖。

优选实施方案中，三种产物的含量和收率均在90％以上，经济价值高，是一种对罗汉果的综合利用方法。

本发明提供的方法工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，不使用有毒有害化工溶剂，安全环保，适合工业化生产。

权利要求书1页 说明书7页CN 111297936 A 2020.06.19C N 111297936A1.一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法，包括以下步骤：(1)热水提取：将罗汉果根破碎，加入热水搅拌分多次提取，提取液冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；(2)聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮；(3)脱色脱盐：将步骤(2)聚酰胺树脂柱流出液通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，得脱色脱盐液；(4)大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷；(5)总多糖的分离：将步骤(4)大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖。

罗汉果生理活性成分研究进展赵秀玲【摘要】Siraitia grosvenorii belongs to cucurbitacease vine species,being a kind of medicinal and edible plant with biological activity and health care effect.Its active ingredients have triterpenoids,flavonoids,lignans, furans,sugars,fatty acids,steroids and the like.This paper reviews the recent research progress at home and a-broad in physiologically active ingredients and health care function as well as the active ingredients extraction and determination of Siraitia grosvenorii triterpenoids,etc.so as to provide a reference for further research,de-velopment and utilization of Siraitia grosvenorii in food and medicine.%罗汉果是葫芦科藤本植物，也是一种药食两用植物，其有效成分具有生物活性和保健功效。

罗汉果中的有效成分有三萜类、黄酮类、木脂素类、呋喃类、糖类、脂肪酸类、甾体类等。

本文综述近年来国内外在罗汉果的生理活性成分及其保健功能，以及罗汉果三萜类化合物活性成分的提取、测定等方面的研究进展，为罗汉果在食品和药品上的进一步研究与开发利用提供参考。

【期刊名称】《包装与食品机械》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P54-57)【关键词】罗汉果;活性成分;保健功能;提取;测定【作者】赵秀玲【作者单位】黄山学院生命与环境科学学院，安徽黄山 245021【正文语种】中文【中图分类】TS201.2罗汉果，又名拉汉果，罗晃子，金不换，光果木鳖，假苦瓜等，是葫芦科植物罗汉果(Momordica grosvenorii Swingle)的干燥果实［1］。

罗汉果多糖提取分离、结构解析及对糖尿病肾病小鼠保护作用研究罗汉果多糖提取分离、结构解析及对糖尿病肾病小鼠保护作用研究糖尿病肾病是糖尿病患者最常见的并发症之一，其特点是肾小球肾炎和肾间质纤维化。

糖尿病肾病的发生与代谢异常、氧化应激和炎症反应等因素密切相关。

现有的治疗手段多是以药物为主，但其副作用和效果并不理想。

因此，寻找一种安全有效的保护剂对糖尿病肾病具有重要意义。

罗汉果是一种常见的中草药，有着广泛的药用价值。

近年来的研究表明，罗汉果中含有丰富的多糖，具有抗氧化、抗炎和免疫调节等生物活性。

本研究旨在通过提取、分离罗汉果多糖，对其结构进行解析，并研究其对糖尿病肾病小鼠的保护作用。

首先，我们使用水煎法提取罗汉果中的多糖。

得到的提取液通过聚酰胺凝胶柱层析进行分离。

通过稀释、醇沉和醇解等步骤，获得了纯度较高的多糖样品。

分离得到的多糖样品经过高效液相色谱、气相色谱和质谱等分析手段进行结构解析。

结果显示，罗汉果多糖主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成，且具有多糖链的分支结构。

随后，我们利用糖尿病肾病小鼠模型进行动物实验。

将小鼠随机分为对照组、糖尿病组和罗汉果多糖治疗组。

糖尿病组和罗汉果多糖治疗组小鼠均通过链脲佐菌素注射建立糖尿病肾病模型，罗汉果多糖治疗组同时给予罗汉果多糖治疗。

实验结果显示，与糖尿病组相比，罗汉果多糖治疗组小鼠的肾功能指标明显改善，包括血清尿素氮和肌酐水平的下降，尿蛋白的减少等。

进一步研究发现，罗汉果多糖可以有效抑制氧化应激反应和炎症反应。

糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的氧化应激标志物和炎症相关因子的表达均明显下调。

此外，罗汉果多糖还能够减少糖尿病肾病小鼠肾脏组织的纤维化。

免疫组化结果显示，罗汉果多糖可抑制基质金属蛋白酶-9活性和转化生长因子-β1的表达水平，从而抑制肾间质纤维化的发生。

综上所述，罗汉果多糖具有对糖尿病肾病小鼠的保护作用。

其可能通过抑制氧化应激和炎症反应、减少肾间质纤维化等途径发挥作用。

罗汉果提取工艺的研究背景罗汉果是一种具有丰富营养和药用价值的水果，其果实含有大量的维生素C、膳食纤维、氨基酸和多种微量元素等成分。

研究表明，罗汉果不仅有很高的抗氧化活性，还具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、降血脂和保护肝脏等多种生物活性。

因此，罗汉果在药食同源、保健食品和药物研发领域具有广阔的应用前景。

然而，由于罗汉果果实中的活性物质较为复杂，传统的提取工艺存在一些问题，如提取效率低、产品质量不稳定、工艺流程繁琐等。

因此，科学研究人员积极开展罗汉果提取工艺的研究，旨在提高提取效率，改善产品质量，并降低生产成本。

首先，研究人员通过对罗汉果果实的化学成分进行分析，明确了罗汉果中主要的活性物质以及其药理作用机制。

随后，针对活性物质的特性，研究人员探索了多种提取剂的使用，如酶解剂、溶剂和超声波等，以寻找最适合罗汉果提取的方法。

通过优化提取剂的种类、浓度和提取时间等条件，提高了提取效率，同时还从提取液中去除了一些无关的杂质。

其次，为了提高罗汉果提取的产品质量，研究人员研究了提取工艺中的各个环节对产品质量的影响，并提出了相应的解决方案。

例如，研究人员发现，提取温度和pH值对罗汉果提取工艺的影响较大，因此他们通过调整提取条件来优化产品的色泽、气味和口感等品质指标，使其更加接近罗汉果原有的特性。

另外，有些研究还探索了添加辅助剂和利用低温等方法来提高提取物的稳定性和保鲜效果。

此外，为了降低生产成本，提高提取工艺的经济效益，研究人员还开展了一些工艺改进的研究。

例如，他们通过改变提取剂的类型和浓度，降低了生产成本。

在工艺流程的设计上，研究人员也通过改进搅拌方式和降低设备能耗来提高工艺的效率。

综上所述，罗汉果提取工艺的研究背景主要源于罗汉果丰富的营养和药用成分，以及其广泛的应用前景。

研究人员通过对罗汉果化学成分的分析，选取适宜的提取剂和调整提取条件，优化提取工艺流程，以提高提取效率、改善产品质量，并降低生产成本。

这些研究成果不仅能够促进罗汉果的开发利用，还可以为其他类似水果的提取工艺研究提供参考和借鉴。

罗汉果中多糖及其生物活性成分的分离与研究罗汉果又称罗汉枣、清明果、佛手瓜，是我国传统的药食兼用植物，被认为具有“大补益气、清热解毒、润肺止咳、开胃消食”的功效。

除此之外，罗汉果还富含多种营养物质，包括维生素C、铁、钙和蛋白质等。

随着人们健康意识的提高，罗汉果越来越受到人们的关注和喜爱。

然而，在罗汉果中，除了上述的主要营养成分外，还含有多种复杂的次生代谢产物，如多糖、黄酮和单萜类等，这些物质被认为具有潜在的抗菌、抗氧化、抗炎、降脂、降糖等生物活性。

特别是罗汉果中的多糖，近年来受到了广泛关注。

多糖是一类具有多个糖基结构的高分子化合物，由于其化学结构的复杂性和多种生物学活性，已经成为人们研究的热点之一。

目前，从罗汉果中分离出的多糖已经发现有较好的保健作用，如增强机体免疫力、抗肿瘤、降血糖、降血脂等。

然而，罗汉果中的多糖与其他植物中的多糖相比，具有独特的化学结构和生物活性，因此，需要进行深入研究和分析。

在目前的研究中，研究人员主要采用了纯化、结构分析、生物学活性评价等多种手段。

首先，研究人员通过超声波法、水浴法等化学提取技术，从罗汉果中提取出多糖。

然后，采用凝胶层析、离子交换层析、分子筛等技术，分离出罗汉果中的多种多糖，如佛手酸多糖、罗汉果多糖、大麦苷酸等。

利用琼脂糖凝胶电泳、红外光谱、核磁共振等多种方法，对所得多糖的化学结构进行了分析和鉴定，进一步确定其结构特点和可能的生物活性。

最后，研究人员利用体内和体外实验手段，验证了多糖的抗氧化、抗炎、降脂、降糖等生物活性，并初步探讨了其可能的分子机制。

实际上，在罗汉果中，不仅仅存在多糖这一种类的次生代谢产物，还包括其他多种生物活性物质。

位于研究流程的生物活性评价阶段，则是整个研究课题至关重要的阶段。

通过构建体内和体外评价模型，评估罗汉果次生代谢产物的生物学活性水平和潜在的药理作用，可以为研究人员提供更准确的生物学活性信息，揭示多糖及其它物质的药理机制，并为进一步研发罗汉果的保健品和药物提供理论依据和技术支持。

罗汉果多糖的分离纯化及分析
李俊;陈海燕;邓胜平;苏小建;义祥辉
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】2005(46)5
【摘要】采用热水法提取罗汉果多糖,用Sevag法去除蛋白质,通过用DEAE 纤维素柱和SephadexG 200柱的分离纯化得到2个多糖组分。

经测定,其相对分子质量分别为Mr1=430000,Mr2=650000。

组分1的单糖组成:葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖和葡萄糖醛酸;组分2的单糖组成;鼠李糖、葡萄糖醛酸。

【总页数】4页(P277-280)
【关键词】罗汉果;多糖;分离纯化
【作者】李俊;陈海燕;邓胜平;苏小建;义祥辉
【作者单位】广西师范大学资源与环境学系;桂林斯达药业公司
【正文语种】中文
【中图分类】TQ225.1
【相关文献】
1.对罗汉果中多糖活性成分的分离提取及纯化研究 [J], 黄飞;梁智群
2.罗汉果根多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究 [J], 颜小捷;卢凤来;陈换莹;李典鹏
3.双孢蘑菇胞外多糖及胞内多糖的分离纯化和化学结构分析 [J], 高宏伟;李兆兰;刘志礼
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5.九里香多糖和蛋白多糖的分离,纯化和分析 [J], 刘京丽;王淑如
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罗汉果甜苷的提取及活性研究进展李雨蒙;张泽生;秦程广;王春龙;孙艳伟【摘要】Mogroside, one of the main active ingredients of Siraitia grosvenorii, has rich plant sources in our country. In recent years, the study found that mogroside has many biological activities, such as hypoglycemic, antioxidant, protecting liver and lipid-lowering diet. Mogroside can also be used in medicine, food additives, functional food and other fields. This article mainly to make a brief conclusion about the physical and chemical properties, extract method, biological activities and application development of mogroside.%罗汉果甜苷是罗汉果的甜味主要成分,我国具有丰富的植物来源.近年来研究发现,罗汉果甜苷具有多种生理活性,如降血糖、抗氧化、保肝、降脂减肥等,因此罗汉果可用于医药、食品添加剂、功能食品等领域.本文主要对罗汉果甜苷的理化性质、提取方法、生理活性及开发应用做简要概述.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)008【总页数】5页(P220-224)【关键词】罗汉果甜苷;提取方法;生理活性;开发应用【作者】李雨蒙;张泽生;秦程广;王春龙;孙艳伟【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,食品营养与安全教育部重点实验室,天津300457;天津食品安全低碳制造协同创新中心,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,食品营养与安全教育部重点实验室,天津300457;天津食品安全低碳制造协同创新中心,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457【正文语种】中文罗汉果（Siraitia grosvenorii），葫芦科多年生藤本植物，学名光果木鳖，是我国特有的药食同源植物，主要分布于广西、贵州、湖南等热带、亚热带地区[1]。

罗汉果茎叶总黄酮提取纯化工艺及其质量分析研究罗汉果茎叶总黄酮提取纯化工艺及其质量分析研究引言：罗汉果（Gynostemma pentaphyllum）是一种中国传统草药，被广泛应用于中医药领域。

研究表明，罗汉果茎叶中富含多种有益化合物，其中包括黄酮类化合物。

黄酮类化合物作为一类重要的天然活性成分，在抗氧化、抗炎、抗肿瘤和降血脂等方面展现出了广泛的应用价值。

因此，研究罗汉果茎叶总黄酮的提取纯化工艺以及对其质量的分析具有重要的理论与实践意义。

一、罗汉果茎叶总黄酮提取纯化工艺的研究1. 原料的选择与预处理罗汉果茎叶的新鲜采摘是保证提取物质质量的关键。

新鲜采摘后，茎叶应立即进行清洗，去除杂质和表面污染物。

同时，茎叶还需要晾干至水分含量低于10%。

2. 提取溶剂的选择与浸提条件的研究常用的溶剂包括乙醇、醚类、酯类等，针对罗汉果茎叶总黄酮的提取，乙醇是一种合适的提取溶剂。

研究发现，乙醇浓度、浸提时间和温度是影响提取效果的重要因素。

在实验中，我们选择了50%乙醇浓度，浸提时间为2小时，浸提温度为50℃。

3. 抽提液的过滤与浓缩经过浸提后，提取溶剂中含有大量的杂质和固体颗粒物，需要通过过滤进行分离。

过滤后的抽提液通过真空浓缩，减少溶剂的体积。

4. 纯化过程的优化抽提液的纯化是提高总黄酮纯度的关键。

人们通常采用吸附剂法、分离膜法或凝胶柱层析法等进行纯化。

在本研究中，我们采用凝胶柱层析的方法，通过改变流动相、固定相和流速等条件，优化纯化过程。

二、罗汉果茎叶总黄酮质量分析的研究1. 总黄酮含量的测定采用铝盐比色法对提取物进行总黄酮含量测定。

实验中，将提取物与铝盐反应生成有色络合物，根据其吸光度值与标准曲线对照，可以得到提取物中总黄酮的含量。

2. 黄酮类化合物的成分分析通过高效液相色谱法（HPLC）对罗汉果茎叶提取物中的黄酮类化合物进行分析。

采用梯度洗脱的方法，通过比对保留时间和UV波谱，可以准确地鉴定提取物中的黄酮类化合物。

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101289517A [43]公开日2008年10月22日[21]申请号200810073602.4[22]申请日2008.05.30[21]申请号200810073602.4[71]申请人广西师范大学地址541004广西壮族自治区桂林市育才路15号广西师范大学[72]发明人李俊 廖日权 苏小建 黄艳 何星存 黄翠萍 陆学文 何星基 [74]专利代理机构桂林市华杰专利事务所有限责任公司代理人罗玉荣[51]Int.CI.C08B 37/00 (2006.01)A61P 37/04 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 2 页[54]发明名称罗汉果多糖的提取方法[57]摘要本发明公开了罗汉果多糖的提取方法，它是先将罗汉果粉碎，然后沸水浸提3次，每次浸提1.5h，合并浸提液后经大孔树脂柱层析，得罗汉果甜甙，漏出液进行膜分离，得到罗汉果多糖产品；或是将浸提液进行膜分离，得罗汉果多糖产品，分离液再进行大孔树脂柱层析，得罗汉果甜甙。

这两种提取方法分离、提取、浓缩都可一步完成，并可连续生产；采用高效膜分离技术，所得罗汉果鲜果多糖得率高；所用溶剂只需使用水和乙醇，不产生任何影响环境的废水废渣，且可回收循环使用，节省原料，成本大大降低；所用原料还可以为企业所废弃的含有多糖的废弃液，提高了罗汉果有效成分的利用率，提高企业的效益；设备简单，投资少。

200810073602.4权 利 要 求 书第1/1页 1、一种罗汉果多糖的提取方法，其特征是：提取工艺包括如下步骤：(1)取成熟的鲜罗汉果或烘干果粉碎；(2)将粉碎后的罗汉果用沸水浸提，每次时间为1.5小时，共提取3次；(3)提取液过滤降温后进行大孔树脂柱层析，得漏出液a，用乙醇洗脱后得洗脱液b，洗脱液b经浓缩、纯化、干燥得罗汉果甜甙；(4)漏出液a经压力泵在0.01～0.2Mpa工作压力下顺序送入膜分离系统，通过膜分离，截留分离出含罗汉果纤维素、蛋白质、果胶、多糖的浓缩物；(5)浓缩物中再加入乙醇至含醇量85％，静置过滤，离心分离沉淀，得多糖产品；(6)膜分离后的废液从溶剂出口排出，进行回收环保处理。

专利名称：从罗汉果中提取分离多种成份的方法专利类型：发明专利
发明人：何伟平
申请号：CN02113548.7
申请日：20020328
公开号：CN1375499A
公开日：
20021023
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种从罗汉果中提取分离多种成份的方法,是用水之后再用碱水处理破碎的罗汉果得到提取液,再经脂肪醇处理得到沉淀物(I)和溶解液(II),沉淀物(I)经阴离子树脂柱再结合脂肪醇处理纯化得到罗汉果多糖。

溶解液(II)经过聚酰胺树脂柱,从柱中的流出液再经大孔树脂柱结合脂肪醇处理纯化得到罗汉果甜甙。

被聚酰胺树脂柱吸附的成份,经碱性脂肪醇洗出后浓缩干燥即得到罗汉果黄酮。

三种提取成份均适宜作保健品和食品添加剂。

申请人：何伟平
地址：541213 广西壮族自治区桂林市八里街经济技术开发区桂林实力公司
国籍：CN
代理机构：桂林市持衡专利事务所有限公司
代理人：黄流
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罗汉果有效成分提取的研究进展
林硕;高学玲;岳鹏翔
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2007(000)004
【摘要】综述了罗汉果主要化学成分的类别、成分分析;简要介绍了罗汉果所含主要成分的药理和保健作用;着重对其有效成分的各种先进的提取技术作了综合性的分析研究.为罗汉果的深度研究开发和资源合理利用提供必要的依据.
【总页数】5页(P77-80,72)
【作者】林硕;高学玲;岳鹏翔
【作者单位】安徽农业大学,合肥,230036;安徽农业大学,合肥,230036;大闽食品(漳州)有限公司,漳州,363000
【正文语种】中文
【中图分类】TS202.3
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1.植物提取物有效成分提取新技术的研究进展 [J], 杜方岭
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3.罗汉果黄酮的提取、纯化及生物活性研究进展 [J], 邵佩; 庄虎; 蹇顺华; 陈胜
4.罗汉果多糖提取工艺研究进展 [J], 孙丹玲;邓月义
5.罗汉果提取物中有效成分的结构分析 [J], 黎海彬;王邕;李小梅;李琳;郭祀远;杨晓泉
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