窖泥微生物特性及其培养共46页文档

分离时发现菌株 B1 的生长速度显著快于 B3, 应用潜力更大, 选取 B1 进行后续实验。 2 2 1 生长温度: 菌株 B1 在 20 ~ 41 范围内生 长, 最适生长温度 30 ~ 37 , 其中 37 生长最佳。 2 2 2 菌株 B1 的生长曲线和 pH 曲线: 菌株 B1 在 RCM 培养基中生长良好, 生长曲线和 pH 曲线见图 1, 可知菌株 B1 在 RCM 培养基中 3h ~ 4h 进入对数 生长期, 菌数急剧上升, 代谢产生酸性物质使培养基 pH 值也随之急速下降, 对数生长期维持约 8h 后进 入稳定期, 此后菌 数不再增加, pH 值稳定 在 4 6~ 4 7。
C6
+
+ 短杆状、无芽孢 短杆状、无芽孢
-
C7
+
+ 短杆状、无芽孢 杆状、无芽孢
-
C8
+
+ 杆状、无芽孢
杆状、无芽孢
-
注: + 实验结果阳性, - 实验结果阴性, * 实 验结果与要求 相符, 进 行后续实验。
2 1 3 分离菌株 16S rDNA 序列分析鉴定: 将得到 的 4 组序列在 NCBI 数据库中进行 16S rDNA 序列同 源性分析, 菌株 B1、B3 与 C. butyricum 的同源 性分 别达 100% 、99% , 均属于梭菌属群 丁酸梭菌种。 2 2 丁酸梭菌的生长特性
丁酸梭菌和致病菌混合培养: 活化好的丁酸梭 菌和致病菌菌液均稀释到 104cfu mL~ 105 cfu mL, 各 取 0 1 mL 接种 到 9 8 mL RCM 液体 培养 基中, 置 37 静 止培 养。 分别 在 0h、4h、8h、12h、16h、20h、 24h、36h、48h 取样测活菌数和 pH 值, 并与单独培养 相比较[ 9~ 10] 。

第五节 微生物的培养
1.相关定义。 2.实验室微生物培养
3.工业规模微生物培养
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• 一.关于培养的几个概念：
• 培养： 以适宜的条件促使微生物发生、成长和繁殖的过程。 • 纯培养：微生物学中将在实验室条件下，从一个细胞或一种细胞
群繁殖得到的后代，称为纯培养。
• 培养物：在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的
• 适用于分离混杂微生物中弱势群体。 • 方法：
• （1）用显微操作仪在显微镜下用毛细吸管或显微针、钩、环等挑 取→获得纯培养。
• （2）用一般显微镜，将一滴经适当稀释后的菌液置于载玻片 上，选取只含有一个细胞的液滴进行纯培养的分离。 此法多限于高度专业化的科学研究中采用。
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• 2.培养
微生物群体
• 混合培养物：含有两种以上微生物的培养物。 • 二元培养物：只含有二种微生物，并保持二者之间特定关系
的培养物。 • 纯培养物：只有一种微生物的培养物。
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二 实验室微生物培养的基本程序
培养基的配制（P120）—称量→溶化→调pH→分装→包扎
灭菌
接种
固体培养基—平板划线（接种环）、稀释涂布（玻璃刮刀） 液体培养基—用接种环蘸取菌液（扩大培养）
在自然界中，各种各样的微生物总是混杂在一起的，要研究和利用某一微生物
，就必须把它同其他微生物分开，才能得到只含有同一种微生物的纯种微生 物。这种方法叫纯种微生物的分离
大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体 培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得 到纯培养。
➢ 好氧微生物的分离、培养
• 实验室常用仪器：试管、烧瓶、培养皿。

简析窖泥培养中应注意的问题窖泥是浓香型白酒生产的关键，窖泥质量的优劣直接影响着基酒的产量和质量，也与酒体风格息息相关，故有“千年老窖”之说。

一般来说，窖泥在发酵过程中，随着窖龄的延长，营养成份的不断补充，其中的微生物体系达到相对平衡状态，厌氧细菌，如己酸菌、丁酸菌、甲烷菌的生长繁殖处于长期活跃状态，使得基酒的质量随着时间的延长逐步提高。

窖泥培养过程是决定产品质量的最重要一环，本文结合近年来仰韶酒业在窖泥培养过程中的方式方法进行阐述。

1 泥土选择泥土是己酸菌、甲烷菌等的栖息场所，是浓缩的营养库。

在培泥之前，对泥土的选择要非常慎重，须对土壤的不同地区、不同深度、理化成分、微生物群属及数量进行详细的了解，并进行土壤分析。

1.1 腐殖质：腐殖质是窖泥培养的重要成分，在窖泥有效成分中所占比例较大。

一般土壤所含腐殖质仅有1%—2%，而菜地、果园表层的腐殖质含量相对较高一些。

黄粘土中腐殖质含量约为0.5%。

用于窖泥发酵的土壤应选择腐殖质适中，占比为1.5%—2.5%为宜，且土质无异臭味。

1.2有效磷：土壤中的有效磷多为植酸状态下的有机磷，是细胞基质的重要组成部分，一般土壤中有效磷较低（100mg干土中含有效磷3mg—7mg），而老窖泥中100mg干土有效磷含量为20mg 以上。

因此，在培泥中应适当增加有机磷的含量。

1.3微生物群：选土时，应选用微生物群较少的土壤，微生物含量较多，会造成基酒质量有杂味。

1.4 土壤粘性：土壤颗粒要细小，可以增加界面作用，吸着营养与调剂pH值。

同时，培养好的窖泥建窖后不易渗漏，能保持黄水的容量，对提高基酒质量十分有利，北方因土壤多为砂土，选土时若不注意，易导致窖泥渗漏、少黄水或无黄水，从而影响酒质。

2 泥土处理泥土选好后应进行处理，先过筛，去除土壤中的石块或杂质，然后晾晒3天—5天，使土壤中的水份达到8%以下，再粉碎成细粉状，拢堆备用。

去杂目的是要防止土壤中钙过量存留，因为石块是钙的重要来源，过多的钙能加速窖泥的老化。

浓香型白酒生产有机窖泥培养卜宇宏【摘要】The main physiochemical indexes of organic pit mud and inorganic pit mud for Luzhou-flavor liquor production were compared including microbial species,sensory indexes,moisture content,pH values,ammonia nitrogen,phosphorus,available potassium and humus.The selection of raw materials for the culture of organic pit mud,pit mud formula,and the operating points were discussed.The purpose of organic pit mud culture was to culture quality beneficial microflora and create favorable growth environment for beneficial microbes and achieve sustainable and efficient growth of microbes.（Tran.by YUE Yang）%对浓香型有机窖泥和无机窖泥的微生物种类、感官指标以及水分含量、pH值、氨态氮、有效磷、有效钾和腐殖质等主要理化指标进行对比研究。

对有机窖泥培养的原料选择、窖泥配方、操作要点进行了论述。

有机窖泥培养的目的是培养优质有益菌群,为有益微生物创造一个良好的生长环境,使之能持续有效地生长。

【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】4页(P61-64)【关键词】微生物;浓香型白酒;有机窖泥【作者】卜宇宏【作者单位】新疆伊力特实业股份有限公司,新疆新源835811【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;TS262.31浓香型白酒与其他白酒生产的最主要区别在于使用泥窖发酵方式。

04
营养物质：提供充足的营养 物质，如氮、磷、钾等，有 利于微生物生长
06
接种：接种适量的活性污泥， 有利于微生物生长和驯化
监测污泥性能
污泥浓度：监 测污泥浓度， 确保污泥浓度 在合理范围内
污泥沉降性能： 监测污泥沉降 性能，确保污 泥具有良好的 沉降性能
污泥生物相： 监测污泥生物 相，确保污泥 中含有丰富的 微生物种类
04 好氧活性污泥培养与驯化技术在污水处理厂的应用，有助 于实现水资源的可持续利用和生态环境的保护。
环境修复工程的应用
STEP1
STEP2
STEP3
STEP4
污水处理：好氧活 性污泥法在污水处 理中的应用，可以 有效去除污水中的 有机物、氮、磷等 污染物。
土壤修复：好氧活 性污泥法在土壤修 复中的应用，可以 有效去除土壤中的 有机污染物，改善 土壤质量。
条件下生长的微生物群体， 主要由细菌、真菌、原生 动物等组成。
02 好氧活性污泥具有分解有
机物、去除污染物、净化 水质等作用。
03 好氧活性污泥的培养与驯
化是污水处理工艺中的重 要环节，直接影响污水处 理效果。
04 好氧活性污泥的培养与驯
化需要控制合适的温度、 pH值、溶解氧等条件， 以保证微生物的正常生长 和繁殖。
污泥脱水性能： 监测污泥脱水 性能，确保污 泥具有良好的 脱水性能
防止污泥流失
STEP1
STEP2
STEP3
STEP4
控制污泥浓度： 保持适当的污泥 浓度，避免污泥 流失
调整曝气量：根 据污泥生长情况， 调整曝气量，避 免污泥流失
控制污泥回流比： 合理控制污泥回 流比，避免污泥 流失
定期监测污泥沉 降性能：定期监 测污泥沉降性能， 及时发现并解决 污泥流失问题

一、中国白酒窖池微生态系统
3、窖池微生态系统与生态酿酒产业的关系 （1）工业生态学的产生 几乎与微生态学的发展同步，20世纪60年代 以来，就已经有了工业生态学的概念，到20世纪 80年代末，在美国人Robert Frosch 和 Nicolas Gallopoulos等人的推动下，另一门边缘学科，工 业生态学(Industrial Ecology）逐渐形成和得到 了发展，并在卡伦堡工业共生体系的影响下,生态 工业园区(eco-industrial park) 自1993年起正 式诞生。
二、中国白酒窖池微生态研究
（5）研究结论 大曲培养过程中，主要微生物总数在初期出 现高峰，中期步入低谷，后期在曲心稍有回升； 前期以细菌和酵母菌为优势类群、中期霉菌占优 势，后期以霉菌和细菌居多；无论哪个时期，曲 外层的霉菌数和酵母菌数明显高于曲心，而细菌 数偏高的原因是中后期在二楼培菌，曲表保温保 湿不够，而曲心水分难以排出，这有利于细菌的 过度增殖，影响出酒率与酒质。这种微生物消长 的规律，与微生物的生理和曲坯的水分、温度、 酸度、营养、通气状况等环境因素的变化有关。
一、中国白酒窖池微生态系统
图为泸州老窖窖池
图为国窖1573窖池
一、中国白酒窖池微生态系统
2、窖池微生态系统与酿酒生态环境的关系
（1）窖池微生态系统离不开酿酒生态环境
中国传统固态发酵酿酒窖池,浓缩了自然环境
的各种地域特征,如气候状况、土壤条件和水质条
件。窖池微生态系统，作为酿酒生产园区系统的有
机组成部分，从属于所处的周边自然地理环境，依
表3-2 窖龄（年） pH 窖壁 窖底 0 6.84 不同窖龄窖泥pH值的比较 2 6.52 7.06 16 5.23 7.33 33 5.46 7.54

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
己酸菌是一种重要的微生物资源，可以用于生产己内酯、己二酸等化
学品。

本研究旨在从窖泥中分离筛选出高产己酸菌，并对其培养条件
进行优化。

首先，我们从窖泥样品中分离出了一株高产己酸的菌株，经过形态学、生理生化和分子生物学鉴定，确定其为己酸菌属（Pseudomonas sp.）。

该菌株在己烷为唯一碳源的条件下，能够高效地产生己酸，其
最高产量达到了5.2 g/L。

接下来，我们对该菌株的培养条件进行了优化。

首先，通过单因素试验，确定了己烷浓度、氮源、磷源和温度等因素对己酸产量的影响。

然后，采用响应面法对这些因素进行了优化，得到了最佳的培养条件：己烷浓度为2.5%（v/v）、氮源为尿素（1.5 g/L）、磷源为KH2PO4（0.5 g/L）、温度为30℃。

在这些条件下，该菌株的己酸产量达到了7.8 g/L，比单因素试验的最高产量提高了50%。

最后，我们对该菌株的代谢途径进行了初步研究。

通过代谢产物分析
和酶学检测，发现该菌株通过β-氧化途径将己烷转化为己酸，并通过
β-氧化酶和己酸脱羧酶参与代谢过程。

综上所述，本研究成功地从窖泥中分离出了一株高产己酸的菌株，并对其培养条件进行了优化。

这些结果为己酸的生产提供了重要的微生物资源和技术支持。

同时，该研究还为深入探究己酸菌的代谢途径和代谢调控机制提供了基础数据。