WST-1细胞增殖检测方法

细胞增殖检测的常见方法细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础，是生物体的重要生命特征。

检测细胞在培养基或组织中的生长速率，对于细胞生长和分化研究至关重要。

在药物开发过程中也常被用于评估药物的毒性和对癌细胞生长的抑制情况。

细胞增殖检测通常是基于DNA含量或细胞代谢实现的，主要的研究方向为对活细胞的代谢活性的检测（基于CCK-8、WST、XTT、MTT等）及对DNA合成的检测（基于BrdU、EdU），可通过体内成像、微孔板或流式细胞术检测等多种技术进行细胞示踪。

以下是常见的三种方法：使用四唑盐进行代谢活性检测通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。

活细胞能将四咪唑盐（如CCK-8、MTT、XTT、WST-1）还原成有色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪进行检测。

其中Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。

具体是利用四唑盐——WST-8，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。

WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。

测定ATP水平检测细胞增殖活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能，因此通过检测ATP的增加水平可检测细胞增殖。

例如sigma的ATP Bioluminescence Assay Kit HS II及ATP Bioluminescence Assay Kit CLS II)是通过经典的荧光素酶发光对ATP检测定量的试剂盒。

前者主要应用于高灵敏度检测极低浓度ATP的实验，后者主要应用于当有持续信号产生而需要高重复性结果的实验。

细胞增殖检测方法
细胞增殖是细胞数量的增加和分裂的过程，对于检测细胞增殖的方法有很多种。

以下是一些常见的细胞增殖检测方法：
1. 细胞计数：通过显微镜观察和手工计数细胞数量，或使用自动化细胞计数仪进行细胞计数。

2. 细胞增殖染料：使用细胞增殖染料，如溴化乙锭（BrdU）或五溴乙酰胺（EdU），将其添加到培养基中，然后检测细胞摄取或转化这些染料的程度，以评估细胞增殖。

3. MTT试验：MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基-2H-四唑酮）试验通过测量细胞的代谢活力来评估细胞增殖。

MTT试剂会被活细胞还原为紫色的甲基噻唑咪唑离子，可以使用分光光度计测量产生的紫色产物的吸光度来确定细胞的增殖能力。

4. 细胞周期分析：通过流式细胞术检测细胞的DNA含量，可以确定细胞处于哪个细胞周期阶段，并评估细胞的增殖能力。

5. 细胞增殖标记：通过使用荧光标记物或融合蛋白来标记增殖细胞。

例如，使用荧光标记的抗体来检测细胞核内的增殖相关标记物，如Ki-67。

6. 实时细胞分析：使用实时细胞分析系统，如X-Celligence系统，可以通过记录电极传感器阻抗的变化来监测细胞的生长和扩张情况，从而评估细胞增殖。

这些方法可以单独或结合使用，以获得更全面和准确的细胞增殖信息。

分 裂过 程 。细胞增 殖 检 测 是 指检 测 分 裂 中的细 胞 数
及 过氧 化物 的存在 会影 响 ＭＴ Ｔ检测 的准确 性 ’ 。
２ ． Ｘ Ｔ Ｔ法 （ 二 甲氧 唑 磺 比色 法 ） ： Ｘ Ｔ Ｔ［ ２ ， ３一ｂ ｉ ｓ
（ ２一ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ一４一ｎ ｉ ｔ ｒ ｏ一５一ｓ ｕ ｌ ｆ ｏ ｐ ｈ ｅ ｎ ｙ １ ）一２ Ｈ —ｔ ｅ ｔ —
量 或者 细胞 群体发 生 的变化 ， 细胞 增殖 检测技 术 广泛
应 用于分 子 生物 学 、 肿 瘤 生物 学 、 药 理 和 药代 动 力 学 等研 究领 域 ， 不仅在 研究 细胞 的基本 生 物学特 征 中非 常 重要 ， 而且是 分 析 细胞 状 态 、 研 究 遗 传性 状 的一 种 基本 方法 ， 可 为探讨 疾 病 的发 病机 制 、 诊 断疾 病 及 治
ｂ ｒ ｏ ｍｉ ｄ ｅ ］ 商 品名 是 噻 唑蓝 ， Ｍｏ ｓ ｍ ａ ｎ ｎ于 １ ９ ８ ３年 建 立 ＭＴ Ｔ比色法 。其原 理 是利 用 活 细胞 线 粒 体 中 的琥 珀 酸脱 氢酶 在代 谢 过 程 中 ， 能将 可 溶 性 四唑 盐 ＭＴ Ｔ还
原 为不 溶 于水 的蓝 紫 色 甲臌 （ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｚ ａ ｎ ） 晶体 ， 使用 二
疗疾 病提供 有 价值 的资 料 。检 测 细 胞增 殖 的方 法 目 前 主要分 为代谢 活性 检测 、 Ｄ Ｎ Ａ合 成 检测 、 细 胞 增殖
相 关抗 原检 测等 。
一
方法 已用 于各种 细 胞 增殖 的检 测 、 药 物筛 选 、 细胞 毒
性检测 等 。其缺 点是 Ｘ Ｔ Ｔ只有 与 电子偶 合 剂 共 同使 用 时才可 产 生 足 够 的水 溶 性 甲躜 ， Ｘ Ｔ Ｔ水 溶 液 不 稳

wst-1法原理WST-1法（Water-Soluble Tetrazolium-1）是一种常用的细胞代谢活性检测技术，它通过测定细胞对WST-1染料的还原能力来间接评估细胞的活力。

WST-1法原理是基于细胞酶促反应将WST-1转化为可溶性形式的产品，并利用色谱法或显色反应法测定产物浓度的变化来反映细胞活力的程度。

WST-1是一种四氮唑化合物，它是一种水溶性的无色染料。

当WST-1暴露在细胞培养液中时，活力细胞中的脱氢酶或还原酶类酶会还原WST-1，将其转化为产物WST-1形成的可溶性有色化合物。

这种酶促反应的产物可通过分光光度计测定其吸光度的变化，从而间接测定细胞的活力。

WST-1法主要包括以下步骤：1.细胞培养：将待测细胞接种在含有适宜培养基的培养板中，使细胞达到一定生长密度。

2.处理试剂：在细胞培养液中加入适量的WST-1试剂。

WST-1可直接添加到细胞培养液中，通过溶解在培养液中与细胞接触。

3.反应：将细胞与WST-1试剂共同孵育在恶劣条件下（如高温、低氧或药物处理），使细胞中的代谢活性随时间进行变化。

4.结果测定：将反应结束后的培养液取出，通过离心或其他分离技术去除细胞残留物。

使用分光光度计测定培养液中产生的有色化合物的吸光度。

WST-1反应产物的吸光度与代谢活性正相关，由此可以间接评估细胞的活力。

WST-1法的原理和应用广泛，因其稳定、可靠、简便且无毒性而被广泛应用于不同类型的细胞和生物研究中。

该方法主要用于测定细胞存活率、细胞增殖率、细胞毒性和细胞对不同药物和化合物的敏感性。

需要注意的是，WST-1的还原过程受多种因素的影响，如细胞数量、培养时间、温度、pH值等。

此外，适当的对照组是十分重要的，可以选择添加阳性对照（如增殖剂）和阴性对照（如细胞毒素）进行比较以确保结果的准确性。

综上所述，WST-1法是一种基于细胞对染料WST-1的还原反应来评估细胞活力的方法。

通过测定化合物产生的吸光度变化，WST-1法可以间接测定细胞的存活率、增殖率和毒性等。

细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖是指细胞数量的增加，是生物体生长和发育的基础过程。

细胞活力是指细胞代谢水平和功能状态的综合体现。

细胞增殖和细胞活力的检测方法在细胞生物学和生物医学研究中非常重要。

本文将介绍一些常用的细胞增殖和细胞活力检测方法。

一、细胞增殖检测方法1.平板计数法：平板计数法是一种直接计数方法，通过显微镜观察计数细胞数量。

首先，将细胞悬液均匀地涂布在显微镜滑片上。

然后，使用显微镜对细胞进行计数。

这种方法简单直接，但在大量细胞计数时比较耗时。

2.显微镜观察法：显微镜观察法是另一种直接计数方法。

通过显微镜观察细胞在培养皿中的覆盖度，以评估细胞增殖。

这种方法可以快速获得细胞增殖信息，但由于操作主观性较强，结果可能存在一定的误差。

3. MTT法：MTT法是一种间接计数方法，通过测定细胞代谢能力来估计细胞增殖。

首先，将MTT试剂加入细胞培养皿中，MTT会被活细胞还原成紫色的甲基化四氮唑盐（formazan）。

然后，通过比色法测定培养基中的甲基化四氮唑盐含量，从而间接反映细胞的增殖情况。

MTT法具有操作简便、结果可重复性好的优点。

4.WST-1法：WST-1法也是一种间接计数方法，通过测定细胞膜透过性来估计细胞增殖。

首先，将WST-1试剂加入细胞培养皿中，WST-1会被细胞色素P450酶一氧化还原成形成可溶性产物。

然后，通过光密度测定产生的产物浓度，从而间接反映细胞的增殖情况。

WST-1法灵敏度高，操作简单。

二、细胞活力检测方法1.ATP酶联反应法：ATP酶联反应法是一种直接测定细胞活力的方法。

ATP是细胞内的能量分子，可以反映细胞代谢水平。

通过酶联反应，将ATP转化为发光物质，然后使用发光仪测定发光强度，间接反映细胞活力。

这种方法灵敏度高，但样品处理复杂。

2.细胞膜透过性检测法：细胞膜透过性检测法是一种间接测定细胞活力的方法。

细胞在不同状态下，细胞膜透过性会发生变化。

细胞增殖及细胞活力检测方法目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。

一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。

另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability ）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。

显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。

如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。

所以最直接的证据应该采用方法一。

用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞，再检测DNA链中氚含量。

若细胞具有增殖能力，DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA的合成。

但更为常用的方法是BrdU检测法。

用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。

细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量（如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。

Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒，以微孔板的形式，合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。

比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数，所有操作在3小时内结束。

而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。

1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2 小时，100个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。

BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。

有些情况下，研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，然而，在变性条件下，DNA的双链结构将被破坏，DAPI和Hoechest 33342等核酸标记探针就不再能识别DNA，因而也无法估计DNA总量。

细胞增殖检测方法细胞增殖是指细胞在生物体内不断分裂和繁殖的过程，是生物体生长和发育的基础。

检测细胞增殖的方法有很多种，以下将详细介绍几种常见的细胞增殖检测方法。

首先，细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一。

细胞计数法主要通过显微镜观察和数数的方式，计算细胞的数量来反映细胞增殖的情况。

可以通过细胞染色或细胞标记技术使细胞在显微镜下更易于观察和区分。

细胞计数法通常需要使用专业的细胞计数仪或显微相机来帮助实施，具有操作简单、结果准确等特点。

其次，MTT法是一种在体外细胞培养中常用的细胞增殖检测方法。

MTT法基于细胞中还原剂细胞线粒体呼吸将黄色硫代唑盐（MTT）还原为紫色的可溶性产物，最后通过比色法测定细胞数目和细胞活力。

MTT法操作简单、结果稳定可靠，广泛应用于药物筛选和细胞增殖研究中。

另外，细胞增殖标记法是通过标记DNA合成阶段的细胞来检测细胞增殖的方法。

常见的细胞增殖标记法有Brdu法和EDU法。

这两种方法都是通过标记新合成的DNA分子来反映细胞增殖情况，Brdu法利用抗体检测Brdu标记的DNA，而EDU法则利用稳定的EDU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）分子和荧光染料的结合来检测标记的DNA。

由于这两种方法都需要使用荧光染料或抗体检测，因此需要显微镜或流式细胞仪等设备来进行检测。

此外，细胞增殖检测还可以通过测定细胞凋亡（细胞死亡）来间接反映细胞增殖情况。

细胞凋亡是细胞自身程序性死亡的一种形式，常使用TUNEL（DNA末端标记术）法或Annexin V/PI双染法来检测细胞凋亡。

这些方法通过标记DNA 断裂或细胞膜破损来区分凋亡细胞和正常细胞，并通过荧光染料或抗体检测来反映细胞凋亡的程度。

细胞凋亡的明显增加往往意味着细胞增殖的受抑制。

总的来说，细胞增殖检测方法的选择应根据具体实验的目的、条件和资源来决定。

不同的方法各有优势和局限性，需要结合实际情况进行选择。

在细胞增殖检测中，细胞计数法是最常用的方法，MTT法和细胞增殖标记法是常见的体外检测方法，而通过检测细胞凋亡来间接反映细胞增殖情况也是一种有效的方法。

细胞增殖检测方法
细胞增殖检测方法通常分为：细胞计数法、细胞生长曲线法、3H-thymidine法和放射免疫方法，其中放射免疫方法是最常用的检测手段。

细胞计数法是用于检测细胞的最简单的方法，可以直接观察细胞的数量，但是不能进行长期观察。

细胞生长曲线法比较常用，方法是把细胞放置在细胞培养皿中，观察
细胞增殖的情况，依据细胞的生长和分裂情况，绘制出一条细胞生长曲线，从而确定细胞生长和分裂的情况。

3H-thymidine 法是一种常用的细胞增殖检测方法，原理是把 3H-thymidine 添加到细胞培养液中，在后续细胞增殖的过程中，3H-thymidine 会被细胞吞噬，并在 DNA 中积累，随后可以通过放射免疫检测，来确定细胞总的增殖情况，以及细胞之间的差异。

最后，放射免疫法是最常用也是最准确的细胞增殖检测方法，这种方
法通常先将标记剂添加到细胞培养皿中，随后经过一段时间，再收集标记
的样本，通过放射免疫的方法，来观察细胞的增殖情况，并且能够精确地
检测细胞数量的变化。

细胞增殖的检测方法和指标
细胞增殖是生物体生长和发育的重要过程，也是许多疾病发展的关键环节。

为了检测细胞增殖，科学家们使用了多种方法和指标来评估细胞的增殖情况。

以下是一些常用的方法和指标：
1. 细胞计数，最直接的方法是通过显微镜观察和手动计数细胞数量。

这种方法简单直观，但是需要耗费大量时间，并且容易受到操作者主观因素的影响。

2. MTT（甲基噻唑蓝）法，MTT法是一种常用的细胞增殖检测方法，通过将MTT溶液加入培养皿，细胞内代谢活跃的细胞将MTT 还原成紫色的甲基噻唑蓝结晶沉淀，从而间接反映细胞数量。

3. CCK-8法，类似于MTT法，CCK-8法也是通过检测细胞内代谢活性来评估细胞增殖情况，它的优势在于操作简便、结果稳定。

4. BrdU（溴脱氧尿苷）标记法，BrdU法是通过将BrdU加入培养基，使其被活跃的细胞摄取并与DNA结合，然后使用特定抗体检测BrdU标记的细胞数量，从而评估细胞增殖情况。

5. Ki-67抗原检测，Ki-67是一种细胞周期相关的核抗原，其在增殖期的细胞中表达较高。

因此，通过检测细胞中Ki-67的表达情况可以间接评估细胞的增殖能力。

除了以上提到的方法外，还有一些其他的细胞增殖检测方法，如细胞周期分析、细胞增殖相关基因的表达检测等。

这些方法可以从不同的角度全面评估细胞的增殖情况，有助于科学家们更全面地了解细胞增殖的机制和调控。

在实际应用中，科学家们通常会根据具体的研究目的和条件选择合适的方法和指标来进行细胞增殖的检测和评估。

Product datasheetWST-1 Assay Kit (Cell Proliferation) ab6547339 ReferencesOverviewProduct name WST-1 Assay Kit (Cell Proliferation)Detection method ColorimetricSample type Adherent cells, Suspension cellsAssay type QuantitativeAssay time4h 00mProduct overview WST-1 Cell Proliferation Assay Kit (ab65473) provides by far the easiest and most sensitivemeans for performing a quantitative cell proliferation assay, cell viability assay, or cytotoxicityassay in mammalian cells. It is also available in a ready-to-use reagent format: ab155902.The WST-1 assay protocol is based on the cleavage of the tetrazolium salt to formazan by cellularmitochondrial dehydrogenase. The amount of the dye generated by activity of dehydrogenase isdirectly proportional to the number of living cells. The formazan dye produced by viable cells canbe quantified by microplate reader by measuring the absorbance of the dye solution at 440 nm.The WST-1 assay is just add-and-read, requiring no washing, no harvesting, and no solubilizationsteps. It is faster, stable, and more sensitive than MTT, XTT, MTS based assays. The assaycorrelates well with the [3H]-thymidine incorporation assay.The WST-1 assay protocol is very simple:- add the WST-1 assay reagent to the cell culture media and incubate for between 0.5 and 4 hrs- shake the plate to mix the contents- analyze the amount of formazan dye produced by measuring the absorbance at 440 nmNotes This product is manufactured by BioVision, an Abcam company and was previously called K301Quick Cell Proliferation Colorimetric Assay Kit. K301-500 is the same size as the 500 test size ofab65473.Review our cell health assays guide to learn more about our other cell viability, cytotoxicityand cell proliferation assay kits.Platform Microplate readerPropertiesStorage instructions Store at -20°C. Please refer to protocols.Components500 tests2500 testsElectro Coupling Solution (ECS) 1 x 5ml 1 x 25mlWST-1 Reagent (lyophilized) 1 vial 1 vialRelevance Cell proliferation is the multiplication or reproduction of cells, as a result of cell growth and celldivision, resulting in the expansion of a cell population.Please note: A ll products are "FOR RESEA RCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIA GNOSTIC PROCEDURES"Our Abpromise to you: Quality guaranteed and expert technical supportReplacement or refund for products not performing as stated on the datasheetValid for 12 months from date of deliveryResponse to your inquiry within 24 hoursWe provide support in Chinese, English, French, German, Japanese and SpanishExtensive multi-media technical resources to help youWe investigate all quality concerns to ensure our products perform to the highest standardsIf the product does not perform as described on this datasheet, we will offer a refund or replacement. For full details of the Abpromise, please visit https:///abpromise or contact our technical team.Terms and conditionsGuarantee only valid for products bought direct from Abcam or one of our authorized distributors。

细胞增殖常用的检测方法
细胞增殖可是生命活动中超级重要的一环呢！那怎么检测它呢？嘿，这可有不少有趣的方法。

比如说，通过检测细胞内 DNA 的合成情况来了解细胞增殖状况。

这就好像是给细胞的生长盖个章一样，一旦有新的 DNA 合成，就说明细胞在努力增殖啦！这不就像我们盖房子，一砖一瓦地搭建起来嘛。

还有啊，利用细胞计数法。

直接数数看细胞的数量有没有增加，简单又直观！就好像数自己口袋里的糖果一样清楚明白。

再说说免疫细胞化学法，它能检测特定蛋白质的表达，从而反映细胞增殖情况。

这就像是给细胞贴上了独特的标签，让我们能准确地找到它们增殖的迹象，是不是很神奇呢？
细胞增殖的检测方法可真是多种多样啊！每一种都有它独特的魅力和用处。

难道不是吗？我们可以根据不同的研究需求和实验条件来选择合适的方法。

就如同我们选择不同的工具去完成不同的任务一样。

细胞增殖的研究对于理解生物体的生长发育、疾病的发生发展等都具有至关重要的意义。

它就像是一把钥匙，能打开许多生命奥秘的大门。

通过对细胞增殖的检测和研究，我们可以更好地了解生命的运行机制，为疾病的诊断和治疗提供有力的支持。

所以说，细胞增殖常用的检测方法真的是非常非常重要啊！我们一定要好好掌握和利用它们，去探索更多的未知，去为人类的健康和科学的进步做出更大的贡献！。

图2. WST-1、XTT 和MTT 的检测效果比较 注：450nm 为测定波长，690nm 为参考波长WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装C0035 WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 100次产品简介：WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-1是一种类似于MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。

细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

图1. WST-1检测原理图 (EC=electron coupling reagent ，即电子耦合试剂) WST-1是MTT 的一种升级替代产品，和MTT 或其它MTT 类似产品如XTT 、MTS 等相比有明显的优点。

首先，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT 、MTS 产生的formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。

其次，WST-1产生的formazan 比XTT 和MTS 产生的formazan 更易溶解。

再次，WST-1比XTT 和MTS 更加稳定，使实验结果更加稳定。

另外，WST-1和MTT 、XTT 等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考图2)。

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。

本试剂盒检测非常便捷。

无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。

不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan 。

可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。

3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。

4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。

或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。

5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。

如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。

特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。

6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

实验二：细胞毒性分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。

3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。

4、加入不同浓度的毒性物质5、37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。

6、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。

7、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。

如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。

特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。

8、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

注：•若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。

细胞增殖检测方法简介1.检测细胞代谢活性检测细胞的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。

在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加，而活性的脱氢酶可以使得外源性的四唑盐或者阿尔玛蓝(Alamar blue)还原成为带有颜色还原产物。

通过分光光度计或者酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。

四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1，其还原产物为甲瓒(formazan)。

(1)四甲基偶氮唑盐法(MTT)：MTT商品名为噻唑蓝，是一种黄色的染料。

1983年Mosmann 建立MTT比色法，用于检测细胞存活和增殖。

其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶，甲瓒并沉积在细胞中，而死亡的细胞无此功能。

二甲亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫分析仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数量范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

MTT可以用于所有细胞类型，但MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲瓒晶体需要溶解在DMSC)中。

因此，MTT主要作为终点检测方法。

另外，有研究发现过氧化物会降低MTT测定的准确度，抑制将近95％的MTT与O2-的反应，MTT溶解产物甲瓒会吸附在纳米纤维上，而致使检测的结果呈现假阴性。

(2)二甲氧唑黄比色法(XTT)：XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞还原形成水溶性的橘黄色的甲瓒产物，不形成颗粒，可直接用酶联免疫分析仪检测吸光度，故较MTT法更加快速、简便、敏感。

但XTT水溶液不稳定，需要低温保存，现配现用。

由于XTT的代谢产物呈橘黄色，故培养体系中有些黄色代谢物和试剂可能会影响其检测结果。

与MTT一样，过氧化物可抑制近95％的XTT与O2-的反应，故对XTT测定的准确度有一定的影响。

(3)内盐法(MTS)：MTS是一种新型的MTT类似物。

MTs在偶联剂PMS存在的条件下，可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成水溶性的有色甲瓒产物，其颜色深浅与活细胞数量在一定范围内呈高度相关，可用酶标仪检测。

XTT 水溶液不稳定， 需要低温保存， 现配现 用。 由于 XTT 的代谢产物呈桔黄色，故培养体系中 有 些 黄 色 代 谢 物 和 试 剂 可 能 会 影 响 其 检 测 结 果 [19]。 与 MTT 一 样 ， 过 氧 化 物 可 抑 制 近 95%的 XTT 与 O2－的反应， 故对 XTT 测定的准确度有一定的影响 [9] 。 这些缺点也限制了它在临床上的应用。 4 内盐法(MTS )
3H-TdR 掺入法的放射性对试验者有一定的危 害；MTT 法由于产生了不溶性的甲瓒，检测步骤复 杂且结果不准确；XTT 法虽克服了这个缺点，但其 桔黄色的水溶性甲瓒产物亦影响结果的检测，且 与 MTT 一样均受过氧化物的影响；MTS 法的检测 原理类似 MTT 与 XTT，虽结果较二者准确，但检测 结果易受外界环境影响，试剂蒸发影响其准确性； WST-1 是 MTT 的升级产品，其试剂和产物均属水 溶性，试剂本身稳定性更好，产物的水溶性比 XTT 与 MTS 更高， 因此结果更稳定更准确， 灵敏度更 高；CCK-8 由于含有较 WST-1 更新的 WST-8，细 胞毒性低，方法更简单，灵敏度、准确性和重复性 更好，尤其是被检测的细胞可重复利用，利用价值 更高。
[5]Ahmadian S, Barar J, Saei A A, et al. Cellular toxicity of nanogenomedicine in MCF-7 cell line: MTT assay [J]. J Vis Exp, 2009(26).
反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找 到最佳测定时间。 6 Ce ll Counting Kit- 8(CCK- 8)
CCK-8 试剂中含有 WST-8。 WST-8 是近年新 开发的一种较 WST-1 更新的水溶性四唑盐，检测 原理与 WST-1 类似，但较 WST-1 更稳定，灵敏度 更高，溶解性更强，更易于保存。 CCK-8 检测细胞 增殖、细胞毒性实验的灵敏度比 MTT、XTT 及 MTS 更高，数据可靠，重复性好，操作简便，且无需放射 性同位素和有机溶剂，对细胞几乎没有毒性。 尤其 适合于悬浮细胞，高通量药物筛选。 该方法已应用 于生物活性因子的活性检测、 大规模抗肿瘤药物 的 筛 选 、细 胞 增 殖 检 测 以 及 细 胞 毒 性 试 验 等 。 [30-32] 与 MTT 法相比，CCK-8 法操作更简便，灵敏度、准 确性和重复性均更好[33]。 更重要的是 CCK-8 法细 胞毒性低，细胞检测后还可重复利用，具有更好的 实用性，可替代 MTT 法，具有良好的应用前景[34]。 7 小结

细胞增殖检测方法
细胞增殖是指细胞数量的增加。

检测细胞增殖可以通过多种方法，其中常用的方法包括：
1. 细胞计数：使用显微镜观察细胞培养物中的细胞数量，并通过计数来得出细胞增殖情况。

2. 晶紫染色法：晶紫染色可以染色细胞核，通过观察染色后细胞数量的增加来判断细胞增殖情况。

染色后的细胞可以在显微镜下观察，并可以使用图像处理软件进行图像分析。

3. DNA含量分析：细胞增殖时DNA含量也会增加，可以通过荧光染料如荧光素琥珀酰胺（Propidium Iodide）染色，使用流式细胞仪来分析DNA含量。

4. 噻吩蓝染色法（MTT法）：MTT法使用噻吩蓝（MTT）染料可以评估细胞活性和增殖能力。

活细胞将MTT染料转化为紫色的内盐，通过溶解细胞并测量溶液的吸光度来确定细胞增殖情况。

5. 细胞增殖标记物：细胞增殖标记物如脱氧尿苷（BrdU）或5-乙酰基-2'-脱氧尿苷（EdU）可以被细胞吸收并集成到新合成的DNA中。

这样，在染色时可以使用抗-BrdU或抗-EdU抗体染色，并通过观察标记物阳性细胞的数量来评估细胞增殖情况。

以上方法都可以用于检测细胞增殖情况，选择适合实验需求的方法进行研究。

需要注意的是，不同的方法可能具有不同的准确性和敏感性，因此在实验设计和数据分析过程中需要谨慎操作。

CCK８检测细胞增殖/毒性得原理、方法及注意事项一、CＣK8检测细胞增殖/毒性得原理Cｅｌl Ｃouｎting Kiｔ—8(简称CCK－8)试剂可用于简便而准确得细胞增殖与毒性分析。

其基本原理为:该试剂中含有ＷSＴ—8【化学名:2—(２—甲氧基—４-硝基苯基)－3-(4-硝基苯基)-5—(2,4—二磺酸苯)－２H—四唑单钠盐】,它在电子载体1－甲氧基-5－甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(１—Ｍethｏxy PＭＳ)得作用下被细胞中得脱氢酶还原为具有高度水溶性得黄色甲瓒产物(Foｒmazａn dye)。

生成得甲瓒物得数量与活细胞得数量成正比。

因此可利用这一特性直接进行细胞增殖与毒性分析、用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验ﻫCCK8得优点:•使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素与有机溶剂;•ＣCＫ-8法能快速检测;•CＣK—8法得检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;•ＣＣK－8法得重复性优于ＭTT法;•CCK－8法对细胞毒性小;•CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。

ﻫＣCＫ8得缺点:•与MＴT法相比,CCK8与XTT得价格比较贵。

•CCK8试剂得颜色为淡红色,与含酚红得培养基颜色接近,不注意得话容易产生漏加或多加。

ﻫ与以往得增殖/毒性测定试剂相比较:ﻫ检测方法MTT法XＴT法WST－1法CCＫ8法甲臢产物得水溶性差(需加有机溶剂溶好好好解)产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-６0０nm ４2０-48０nm４20-4８0nｍ4３0—490ｎm细胞毒性高,细胞形态完全消失很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变很低,细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷ﻫ二、CCK８检测细胞增殖/毒性得方法ﻫ实验一:细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数2、接种到９6孔板中:根据合适得铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液,同样得样本可做3个重复。