石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性

石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性引言石油是世界上最重要的能源资源之一，石油的开采、储运和利用过程中常常会产生大量的污染物，其中包括石油及其衍生物。

石油污染对环境和人类健康造成了严重的危害，因此降低石油污染对环境的影响成为了当前环境科学领域的重要课题之一。

微生物在土壤石油污染的生物修复过程中起着非常重要的作用，能够利用石油为碳源和能源，通过降解石油中的有机物质来减少石油对环境的污染。

本文旨在研究石油污染土壤中微生物的分离鉴定及其降解特性，以期为石油污染土壤的生物修复提供科学依据。

一、石油污染土壤中微生物的分离1.1 采样为了研究石油污染土壤中的微生物，首先需要对石油污染的土壤进行采样。

采样应该尽可能地覆盖到污染源周围的不同地点，以确保获得全面的样品。

采样后的土壤应该尽快送至实验室进行分析，以免微生物数量和种类的变化。

1.2 微生物分离在实验室中，可以通过多种方法将土壤中的微生物分离出来，比如土壤稀释法、过滤法、离心法等。

然后将分离出的微生物置于适当的培养基中培养、分离纯化。

二、石油污染土壤中微生物的鉴定2.1 微生物分类分离出的微生物可以通过形态学、生理学、生态学等方面进行初步鉴定，确定其基本分类和生理特征。

2.2 生物学特性鉴定在初步鉴定的基础上，可以通过生化鉴定、分子生物学鉴定等手段，进行微生物的进一步鉴定，确定其属种及亚种。

三、石油污染土壤中微生物的降解特性研究3.1 微生物降解能力的测定通过实验室模拟和微生物培养方法，可以测定微生物对石油成分的降解能力。

例如通过测定微生物对石油中不同组分的降解效率，来评估其降解能力。

3.2 降解代谢产物的分析也可以通过气相色谱-质谱、高效液相色谱等方法，对微生物降解石油产生的代谢产物进行分析，以确定微生物的降解途径和降解产物。

3.3 现场降解效果的评价可以将具有较高降解能力的微生物应用于实际的石油污染土壤降解试验中，并通过现场观察和样品分析，评价微生物在实际环境中的降解效果。

石油污染对土壤微生物群落影响及石油降解菌的筛选鉴定摘要：近年来，随着经济的快速发展，人们对石油原材料和石油产品的需求量迅速增加。

然而，社会经济的发展导致了石油污染进一步扩大。

石油在开采、运输、储存、加工和生产过程中，会泄漏到环境中并随着水体和大气循环进入土壤，进而破坏土壤的组成和结构，影响其通透性。

石油是一种复杂的有机混合物，由各种极性和非极性的烷烃、环烷烃和芳香烃、胶质和沥青等物质组成。

针对石油污染土壤修复，按处置地点可分为原位修复技术和异位修复技术两大类。

本文重点对近年来国内外原位修复技术中的原位热脱附、原位高级氧化、气相抽提、生物通风、阴燃技术的应用研究进展进行了综述，分析了当前研究存在的问题，并对其发展方向做了展望。

关键词：石油污染；土壤微生物群落影响；石油降解菌；筛选鉴定引言石油烃－重金属复合污染土壤也日渐引起了国内外学者的高度重视。

研究表明，不同年代开发的油井周围土壤中重金属有效态和全量随着油井运行时间的增长呈现增高的趋势。

原油和钻井液中含有的重金属及油田开采区农业生产中化肥的施用，常导致土壤重金属浓度提高，致使油田开采区土壤呈现石油烃和重金属复合污染特征。

土壤中有机污染物和重金属复合污染的交互作用常会产生不同的环境行为和环境效应。

目前，有机－重金属复合污染的研究主要集中在农药、有机鳌合剂、石油烃及芳香类化合物与重金属之间的复合污染。

石油生产、运输和应用，农业机具清洗或泄漏等途径都会产生石油烃与重金属复合污染。

1材料与方法1.1试验材料试验采用土壤为远离油井污染的清洁耕作层黄绵土，有机碳含量6.26mg/kg,pH值为8.11，土壤颗粒机械组成为小于0.002mm的黏粒占10.97%,0.002~0.05mm的粉粒占72.05%,0.05~2mm的砂粒占16.98%。

供试原油为延长石油公司采自陕西安塞的原油，密度是0.858g/cm2，黏度系数为4.05mPa.s；柴油为普通商品油品，密度是0.854g/cm'，黏度系数为3.45mPa.s。

摘要:本文概述了影响石油污染物生物降解修复处理的多种因素,对石油污染生物处理技术的发展进行了展望。

其中主要影响因素包括:菌种的影响,菌种在不同的环境中和对不同碳链长度的碳氢化合物表现出不同的降解效率;石油物质本身物理化学特性的影响,如石油物质在水体或土壤中的浓度以及石油的粘度、沸点、折射率等特性;生存环境条件的影响,在接种入高效率的降解菌或利用土著微生物进行降解时,降解率受到生存环境中各种条件的影响,如表面活性剂、光照条件、吸附剂的利用、营养盐、共代谢底物、氧气、温度、盐度等。

关键词:石油污染;生物修复;影响因素;降解率随着社会的发展,人们对石油的需求不断加大,同时各种途径所造成的石油污染也日趋严重如工业废水排放、船舶排水、油船的泄漏等。

石油进入水中,造成水体污染,改变局部水生态环境使水生生物死亡,给水资源、生物资源和养殖、旅游业带来巨大损失[1]。

自1989年Alaska发生原油泄漏事故后,人们对石油污染的生物修复进行了大量的研究[2,3]。

生物修复即利用微生物能降解石油的特性达到修复石油污染的目的。

相对于物理化学处理,微生物修复有很多优点:经济花费少,仅为传统化学、物理修复的30%-50%;对环境影响很小,不产生二次污染;污染物可在原地被降解清除;修复时间较短;处理操作简便[4]。

在实际的土壤石油污染和水体石油污染生物修复应用中,已有大量研究肯定了其可行性。

本文介绍了近年国内外对影响石油生物修复的重要因素的研究概况,从石油生物修复过程理论上,探讨了有待进一步深入研究的加速石油生物修复的因素。

1 生物因素——微生物的选种自然界存在大量能降解石油的微生物,至少有8属细菌、6属放线菌、6属酵母和6属霉菌[5],Yamaguchi 等人发现一些微藻也能降解石油物质[6]。

降解石油的微生物的分布,在海洋中细菌较多,在土壤中以真菌较多[7]。

不同种属的微生物对石油的降解能力不同,有研究[8]对细菌和霉菌的石油降解能力进行比较,发现细菌Acinetobacter calcoaeticus和Serratia marcescens分别能降解C22-C30和C20-C28的石油物质,霉菌Candida tropicalis能降解C12-C32的石油物质,Serratia marcescens对石油有较大的吸附能力,而Acinetobacter calcoacelicus和Candida tropicalis对石油有强的乳化作用。

石油污染土壤中降解菌的分离鉴定及降解基因筛选秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远【摘要】为了得到高效的石油降解菌,以原油为唯一碳源配制培养基,从金南油田油污染土壤中选取4处样品富集培养,纯化出14株细菌,8株放线菌,9株真菌;通过生理生化反应以及16S rDNA鉴定,确定了C-1和H-1菌株均为芽孢杆菌属；通过降解性能实验和优化实验,初步绘制了C-1和H-1的生长曲线并确定了最佳生长条件和降解率；经查询相关文献,设计了6对降解基因引物,应用PCR的方法对所筛选出的降解菌进行基因克隆,确定C-1与H-1菌中含有可降解芳香族化合物的谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)的基因.%In order to get high degradation of oil bacteria, this study used oil as the only carbon source, chose samples from four places in the soil polluted by oil of Jinna oil field and purified the 14 strains of bacteria, 8 strains of actinomyces, and 9 strains of fungi. Through the physiological and biochemical reaction and identification of 16S rDNA, the C— 1 and H—1 strains were determined to belong to the genus bacillus. After degrading performance and optimization experiments, C—1 and H —1 growth curves were drawn and the best growth conditions and degradation rate were identified. Based on the design of 6 pairs of primers of degradation genes and the PCR method for cloning genes after referring to the relevant references, C—1 and H —1 bacteria were found out to contain genes of glutathione S—shift enzyme (GSTs) that can degrade biodegradable aromatic compounds.【期刊名称】《常州大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(024)004【总页数】7页(P1-7)【关键词】石油烃降解菌;分离鉴定;生物降解;基因【作者】秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远【作者单位】常州大学环境与安全工程学院,江苏常州213164;常州大学环境与安全工程学院,江苏常州213164;常州大学环境与安全工程学院,江苏常州213164;常州大学环境与安全工程学院,江苏常州213164;常州大学环境与安全工程学院,江苏常州213164【正文语种】中文【中图分类】X172石油是现代社会的重要能源，被称作工业的血液、黑色的金子[1]。

石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性石油是一种重要的化石能源，但在运输、储存、加工等过程中，常常会发生泄漏和污染，给环境造成严重危害。

石油污染土壤中的微生物能够降解石油，是处理石油污染的重要手段之一。

本文将介绍石油污染土中微生物的分离鉴定及降解特性。

为了分离石油污染土中的微生物，需要先收集石油污染土样品，并进行处理，去除其中的杂质。

处理后，将土样分别加入9 mL生理盐水中，摇匀，制备成1：10～1：100土液悬浮液。

然后，将土液悬浮液平板接种在以石油为唯一碳源的固体培养基上，利用稀释法，分别进行等体积和不等体积的拉曼酒滴法，进行微生物分离。

得到的微生物菌株需要进行鉴定，确定其类别和生理特性。

传统的鉴定方法主要包括形态学、生理生化和生态鉴定。

其中，形态学包括菌落形态、细胞形态、产孢情况、荚果形态等。

生理生化鉴定主要包括氧气需求、温度范围、酸碱适应性、缺氮或缺磷生长等特性。

生态鉴定则包括对微生物的生存环境进行研究，例如在何种环境下其繁殖最为适宜。

近年来，基于分子生物学技术的鉴定方法也得到了广泛应用，如利用16S rDNA序列分析法对菌株进行鉴定。

石油污染土中的微生物能够利用石油中的各种化合物为能源进行生长和繁殖，并将其降解为较为简单的有机物质。

不同的微生物在降解过程中，对不同的石油组分具有不同的降解能力和特性。

一些菌株能够利用具有较高环数的芳香烃，如萘、苯并芘等为基质，而其他菌株则对这些复杂的化合物无降解能力。

石油污染土壤中微生物降解石油的速率和效果受到多种因素的影响，例如温度、湿度、土壤pH值、微生物的种群和数量、氧气的含量等。

一些微生物需要在较高的温度和湿度条件下进行降解，而且在一定的pH范围内才能更好地生长和繁殖。

此外，土壤中的微生物种群和数量也会影响降解效果。

在一些情况下，人工注入降解菌群能够有效地提高石油降解速率和效果。

唐山学院毕业设计设计题目：微生物降解石油烃最适条件研究系别：环境与化学工程系班级：09 石油化工生产技术2班姓名：张贺松指导教师：程磊2012年6月11 日微生物降解石油烃最适条件研究摘要从学校腐蚀质土囊中筛选到2株对机油等相关石油制品具有高效降解能力的菌种ZL1 ZL2。

通过生长条件正交实验测定了温度、油量和pH值对其降解能力的影响。

实验表明：4天对于含油300mg/L的去除率分别达到67.9%和76.2%，其中ZL2菌对底物浓度和PH值有较广的适应范围。

关键词：正交实验高效降解菌菌种筛选Microbial degradation of petroleum hydrocarbons in the optimum conditionsAbstractCorrosion from the school the quality of soil in the bag filter to the 2 strains of bacteria degrading ability of oil and other petroleum products ZL1 ZL2. Orthogonal experimental determination of the growth conditions of temperature, substrate concentration and PH value of their degradation ability. The experimental results show that: four days for oily 300mg / L, the removal rate of 67.9% and 76.2%, which ZL2 bacteria have a wider range of substrate concentration and pH value.Keywords：Orthogonal experiment Efficient degradation bacteria Strain screening目录1 引言 (1)1.1石油污染的危害 (1)1.2微生物法治理石油污染 (2)1.3微生物降解石油途径 (4)1.4微生物降解石油影响因素 (5)1.5各国对微生物降解石油烃的研究 (6)1.6微生物降解石油烃类污染物的代谢机制 (6)1.7微生物降解菌的种类 (6)2 试验 (8)2.1材料 (8)2.1.1菌种 (8)2.1.2 培养基 (8)2.1.3试验药品 (8)2.1.4试验仪器 (9)2.2 优势菌筛分试验 (9)2.2.1取样 (9)2.2.2 准备实验用品 (9)2.2.3制作培养基 (9)2.2.3 高温灭菌 (9)2.2.4 初次富集分离 (10)2.2.5 连续富集分离 (10)2.2.6 平板分离 (10)2.2.7 划线分离 (10)2.3生长条件正交实验 (10)2.4 混合菌机油降解效率 (11)2.5分析方法 (11)3结果分析 (12)3.1 优势菌筛分实验 (12)3.2生长条件正交试验 (12)3.3混合菌种实验 (13)4结论 (15)谢辞 (16)参考文献 (17)外文资料 (18)唐山学院毕业设计1 引言上世纪初以来,石油的重要性日益突显。