第四节 异常毒性检查法

异常毒性检查法国内外药典之比较与思考
余洋;王秀英;刘彤
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2010(011)005
【摘要】@@ 异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征,是指由生产过程中引入或其它原因所致的毒性.异常毒性检查法是采用动物实验检查异常毒性反应的方法,系将一定量的供试品给予动物,观察48 h内小鼠出现的死亡情况,以判定供试品是否符合规定的一种方法.
【总页数】3页(P391-393)
【作者】余洋;王秀英;刘彤
【作者单位】辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023;辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023;辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023
【正文语种】中文
【中图分类】R921
【相关文献】
1.《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对四种药物检测结果的比较[J], 李趣嫦;江艳芳
2.中国药典与欧洲药典关于"溶液颜色检查法"的比较与分析 [J], 周怡
3.隔离器技术应用及国内外药典有关无菌检查法对洁净环境要求的比较 [J], 张庆基
4.中国药典含量均匀度检查法与美英日药典的比较 [J], 孙苓苓
5.《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对两种制剂检测结果的比较研究 [J], 贾辉;姚东;王作君;张敬一
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关于注射剂安全性检查法应用指导原则（修订稿）的讨论（续）(2007-11-18 13:59:42)标签：知识/探索分类：药品安全性检查检查限值的设定一、异常毒性检查：本法系将一定量的供试品溶液注入小鼠体内，规定时间内观察小鼠出现的死亡情况，以判定供试品是否符合规定。

供试品的不合格表明药品中污染了超过正常产品毒性的剧毒杂质，临床用药将可能增加急性不良反应。

（一）、方法：参照中国药典2005年版（二部）附录异常毒性检查法。

（二）、设定限值前研究：参考文献资料数据并经单次静脉注射给药毒性试验确定该注射剂的小鼠急性毒性数据（LD50和LD1及其可信限）。

有条件时，有不同实验室用不同供试品和动物来源进行试验求得的LD50和LD1数据。

静脉注射速度0.1mL/秒，观察时间为72小时。

（三）、设定限值：异常毒性检查的限值应低于该注射剂的正常产品的毒性最小致死剂量，一般应高于人临床一次公斤体重最大剂量。

考虑到实验室间差异、动物反应差异和制剂的差异，建议限值至少应小于LD1可信限下限的1/3(建议采用1/6) ，或小于LD50的1/4(建议采用1/8)。

如药品半数致死量与临床体重剂量之比小于20时，可采用LD1可信限下限的1/3。

静脉注射最大剂量0.8ml/20g体重仍未见毒性反应或死亡，可以此作为检查限值。

注射速度可按常规速度（0.1mL／秒），如有特殊要求可在限值中注明。

一般采用静脉注射给药，特殊品种采用其他适宜方法，应说明理由并在正文中字明。

讨论：1．确定异常毒性检查限值时，应避免因药品正常毒性出现的假阳性。

据文献报告，实验室间同一药物静脉注射LD50有差异但相对较小（同种系小鼠一般不超过1倍）。

由于异常毒性检查观察时间为48小时，因此，限值设定前必须进行以一定注射速度静脉单次给药观察72小时急性毒性试验（常用昆明种小鼠），求得LD50和LD1及其可信限。

如用14天的结果，有的药品因LD50变小而降低限值水平。

1168 20222判断题1、由于使用和要求不同，标准品可分为国际、国家、工作用三级标准。

( ). A.√. B.×2、实验动物的分组不管采用什么方法，重要的是不要受到主观愿烈的影响。

（）. A.√. B.×3、处于未完全密封状态下产品的操作和转运，如产品灌装（或灌封）、分装、压塞、轧盖等应在A级或B级背景下局部A级环境下完成。

（）. A.√. B.×4、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。

呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后死亡，即为阳性反应。

（）. A.√. B.×5、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

（）. A.√. B.×6、在药品的微生物检验中，若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌。

（）. A.√. B.×7、微生物限度检查应在环境洁净度为不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，检验全过程需严格遵守无菌操作,防止再污染。

（）. A.√. B.×8、在控制菌检查中，白色念珠菌和黑曲霉均接入玫瑰红钠琼脂培养基中，作适应性检查。

（）. A.√. B.×9、药物微生物总数检测时，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35 ℃培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25 ℃培养5〜7天。

（）. A.√. B.×10、霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养24 h。

（）. A.√. B.×11、单向流系沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，所以仅有垂直单向流。

（）. A.√. B.×12、空态系指洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。

（）. A.√. B.×13、IMVC试验是指靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇试验(V)、枸橼酸盐试验(C)，主要用于金黄色葡萄球菌检测。

小鼠异常毒性检测
一、实验过程
（1）将各种试验用具及供试品溶液按一定位置有序摆放在工作台上，鼠盒贴好标签（供试品批号、试验日期）。

（2）小鼠固定：捏住小鼠尾巴从饲养笼中拿出，放入固定器中固定。

（3）左手扭转鼠尾，使其尾静脉向上，右手用镊子取75%酒精棉球擦试小白鼠尾巴，使其扩张及消毒。

（4）在近尾尖1/3处（尾巴下段）用左手三指捏住尾巴，右手持注射器，针尖与尾巴成一适宜的角度（小于30度）刺入静脉，平行地推入少许供试品溶液（约0.01ml，判断是否顺畅在血管内）。

（5）若推注顺畅，立即将注射器内栓平行地推入，应在4—5秒内匀速注入供试品溶液0.5ml（规定缓慢注射的品种可延长至30秒）。

如皮下发白且药液阻力很大，表示针头未刺入静脉内。

（6）注射完毕后拔出针头，用左手拇指按住注射部位，压迫止血。

（7）正常饲养，观察即时反应。

（8）结果判定：48小时内不得有死亡，如有死亡时，应另取18—19g小鼠10只复试，全部小鼠48小时不得有死亡为符合规定。

二、实验照片
见下图：
三、实验小结
异常毒性实验用到了尾静脉注射技术，在动物实验技能中，由于小鼠尾静脉较细，技术要求高些，经过一段时间的练习，现能完成实验操作。

目前操作小鼠体重较大，血管相对较粗，进针容易。

今后练习应以20g左右小鼠为对象，提高技能水平。

异常毒性检查标准操作规程1 检验依据：《中华人民共和国药典》2005年版（二部）2 检验原理：将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。

3 检验操作方法3.1 仪器及用具电子天平架盘天平（最大称量100g、分度值0.1g）电热恒温干燥箱记时器（或秒表）1块灭菌饭盒1个白瓷盆1个试管架1个小鼠固定器毛巾2条棉球贴瓶签2张0.5ml注射器5支4#注射针头5个100ml量筒1个100ml烧杯2个5ml量筒1个具塞广口瓶1个试剂瓶1个玻璃棒2根3.2 化学试剂3.2.1 分析纯：葡萄糖注射液、甲酚皂溶液、乙醇。

3.2.2 75%酒精棉：用量筒量取75ml无水乙醇，倒入100ml烧杯内，加水稀释至刻度，用玻璃棒搅匀倒入装有棉球的广口瓶中浸透，贴上瓶签，备用。

3.2.3 2%来苏儿：取2ml甲酚皂溶液倒入100ml烧杯内，加水稀释至刻度，并用玻璃棒搅拌均匀，倒入试剂瓶中，贴上瓶签，备用。

3.3 操作方法3.3.1 供试用小鼠的要求：供试验用小鼠应健康，无伤，毛色光滑，眼睛明亮，活泼，体重17-20g，同品种，同性别，雌者无孕，在试验前及试验观察期内，均应按正常饲养条件饲养，做过本试验的小鼠不得重复使用。

动物等级为普通级以上（一级以上含一级）。

3.3.2 试验前的准备：将试验用的一切玻璃器皿及一切与供试品溶液接触的器皿统一装入饭盒内，按“恒温干燥箱操作规程”（SOP.QC-YQ-15）操作，于250℃干燥30分钟或180℃2小时，也可用其他适宜的方法。

3.3.3 供试品溶液的制备：除另有规定外，用0.9%氯化钠注射用水按各药品项下规定的浓度制成供试品溶液。

3.3.4 检查法：取毛巾浸洗于装有2%来苏儿水溶液的白瓷盆中，拧干后，将检验所需物品及台面擦拭一遍，稍后，再用75%酒精棉擦拭一遍，并擦干双手。

除另有规定外，取上述小鼠5只，按各供试药品说明书规定的给药途径，每只小鼠分别给予供试品溶液0.5ml。

异常毒性检查法标准操作规程目的：建立异常毒性检查的基本操作，为异常毒性检查人员提供正确的操作规程。

2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3.范围：本标准适用于采用小鼠法进行的异常毒性检查。

4. 职责：QC异常毒性检查人员对本标准的实施负责。

5.程序：5.1. 实验用具：天平（精度0.5g，小白鼠称重用）、小白鼠固定装置、注射器（精度0.02ml）、针头、刻度吸管、洗耳球、砂轮、试管、试管架、时钟、75%酒精棉球、玻璃铅笔。

稀释剂：注射用水、氯化钠注射液或其他规定的溶剂。

5.2. 供试品溶液的配制。

5.2.1. 用75%酒精棉球擦手消毒；5.2.2. 取供试品适量，加入试管架上的试管中，并标明批号；5.2.3. 加入规定的稀释剂，制成规定浓度的供试品溶液。

5.3. 实验动物：健康无伤，体重17-20g小白鼠,做过本实验的小鼠不得重复使用。

检查法：除另有规定外，取小鼠5只，按各该药品项下规定的给药途径，每只小鼠分别给予供试品0.5ml，给药途径有以下几种：5.4.1.静脉注射5.4.1.1. 将小鼠放入固定器中，使尾巴暴露在外。

5.4.1.2.用75%酒精棉球擦拭鼠尾注射部位。

5.4.1.3.尾静脉注入供试品溶液，注射速度4~5秒，如注射部位皮下发白且推入药液有阻力时，表示针头未插入静脉内，应重插，如药液有损失，应另取小鼠注射。

5.4.1.4.注射完毕后，拔出针头，在注射部位止血后取出小鼠，放鼠盒中，观察即时反应。

5.4.1.5.共注射5只小鼠，正常饲养。

5.4.2.腹腔注射：5.4.2.1. 一手握小鼠，用拇、食指捏住小鼠颈背部，用无名指及小指固定其尾及后肢，腹部向上。

5.4.2.2.用75%酒精棉球擦拭小鼠腹部注射部位。

5.4.2.3.腹腔注入供试品溶液。

5.4.2.4.注射完毕后，拔出针头，放鼠盒中，观察即时反应。

5.4.2.5.共注射5只小鼠，正常饲养。

5.4.3.皮下注射：5.4.3.1. 握小鼠，同腹腔注射法。