无病毒苗木的培育

④ 茎尖分生组织存在较高水平的内源生长素， 可抑制病毒的增殖。
培养基

培养基： 一般以White、Morel和MS作为基本培 养基，尤其是提高钾盐和铵盐的含量会有利于茎尖的 生长。 植物激素： 其种类与浓度对茎尖生长和发育具有 重要的作用。适当提高生长素(0.1~0.5 mg/L)与细胞 分裂素的浓度，避免使用易促进愈伤组织化的2，4-D， 宜换用稳定性较好的NAA或IBA，细胞分裂素可用Kt 或 BA。有时需添加活性炭。
1、隔离保存：防虫网室 2、长期保存： 低温保存：培养基中，生长缓慢 超低温保存：液氮
无病毒苗在生产中也要防止病毒的再感染。
生产场所应隔离病毒感染途径，做好土
壤消毒或防蚜等工作。在此种植区及种植
规模小的地方，要较长时间才会感染。而 在种植时间长、轮作及种植规模大的产地 则在短期内就可以感染。
三、无病毒苗的效果
问答题
1、何谓花卉？花卉有何用途？ 2、什么是花卉的无性繁殖和有性繁殖？简述无性繁 殖的几种方式（分生、嫁接、压条、扦插）。 3、什么是组织培养？植物组织培养按培养对象分为 哪几种类型？ 4、培养基一般包括哪些基本成分?
5、茎尖分生组织培养脱毒的基本原理是什么？ 6、花粉和花药培养的意义？ 7、试述菊花的无菌苗的诱导、继代快繁、生 根培养的过程。 8、什么叫外植体？外植体的选择原则怎样？ 9、鉴定脱毒苗有哪几种方法？

微茎尖培养方法
外 植 体
茎尖 （shoot tip）
顶端分生组织及其下方 1—3个幼叶原基构成
茎的顶端分生组织 （apical meristem）
茎的最幼龄叶原基上方 的一部分，最大直径约 100um,最大长度约 250um
（1） 外植体的预处理
将带幼叶的茎芽叶片在75％酒精中浸蘸数秒钟 （叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花）或用0．1％次 氯酸钠表面消毒l0min（叶片包被松散的芽，如香石
同病毒产生的抗血清有各自的特异性。用已
知抗血清可以鉴定未知病毒的种类。
2. 鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分 离→→把稀释的抗血清与未知的病毒植物 的汁液在小试管内混合→→根据沉淀反应 来鉴定病毒种类。
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一性的 试剂），测定速度快，一般几小时甚至几分 钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒 鉴定中最有用的方法之一。
注意：剥离与接种尽量要快，以防茎尖变褐死亡。
（3）培养条件
温度：22℃左右 光强：2000~3000Lx 由于在低温和短日 照下，茎尖有可能


进入休眠；所以较
高的温度和充足的 日照时间必须保证。


光照时间：每天16h 。
微茎尖需数月培养才能成功。 茎尖培养的继代培养和生根培 养和一般器官的培养相同。
2、病毒在植物上的危害
病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病
毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄
扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般 会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、 变色等。 由于病毒对植物造成如此严童的危害，所以世界各
国都积极开始重视这方面的研究。
薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时光照强度便增
加到4000Lx。
（3）外植体的生理状态

最好取顶芽：旺盛生长的枝条顶芽比侧芽培
养效果好（ 如香石竹和菊花）。

宜选取萌动期的芽：取芽时间很重要，否则
要采用某种适当的处理、打破休眠才能进行。
3、其他途径脱毒
（1）愈伤组织培养脱毒
通过植物的器官和组织的培养去分化诱 导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产 生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗
栽培去病毒植物可
二、 无病毒苗培育的方法
1、热处理脱毒
2、微茎尖培养脱毒
3、其他途径脱毒
1、热处理脱毒
发现：
1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的
甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保
持30min，甘蔗就可去病生长良好。以后此方法被
广泛用于防治许多植物的病毒病。 热处理又称温治疗法。
一、指示植物法
（1） 概念：利用病毒在其他植物（指示植物或鉴 别寄主）上产生特定症状（枯斑和空斑）作为鉴 别病毒存在与否和种类的方法。 （2）局限性：它只能鉴定靠汁液传染的病毒。
（3）适用：草本与木本植物
（4）优点：灵敏、准确、可靠，操作方便。
（5）鉴定方法：

汁液涂抹法：从被鉴定植物上取1~3g幼叶 →
第三章 组织培养技术
第六节 植物无病毒苗的培育
多数园艺植物，特别是无性繁殖植物，都 易受到病毒侵染（一种、一种以上）。
病毒侵染不一定都会造成植物死亡，甚至 不表现可见症状，但可传递给下一代，并 逐代积累，导致植物种性退化，使产量、 品质下降甚至死亡，造成生产上的巨大损 失。 应用组织培养技术获得无病毒植株是目前 防治作物病毒病最有效的方法和根本措施。
茎尖初代培养和继代培养
在培养的茎尖中选取转绿的茎尖转接到 增殖培养基上作为病毒待检材料备用。
备用苗
脱毒苗鉴定，确定核心种苗
采用酶联血清免疫吸附反应鉴定(ELISA） 鉴定由茎尖培养获得的试管苗是否带有马铃 薯主要病毒。确定无毒核心种苗。
无病毒苗快速繁殖培养
经鉴定脱毒的马铃薯试管苗，采用 固体、液体培养基相结合方法扩繁，要 求切段为1-2片叶的茎段，繁殖系数达到 1：3，25天继代一次。
无病毒苗可以表现出明显的优良效果。
如草莓可增产20％~50％，植株结果多，单
果重增加，上等果比例提高。菊花切花品种的脱 毒株，表现出株高增加，切花数增多，花朵大， 切花较重等特点。
马铃薯脱毒过程
解剖镜下剥取茎尖并培养——马铃薯
以马铃薯试管苗或微型薯的萌芽 为材料，在双筒解剖镜下剥取0.20.5mm带1-2个叶原基的茎尖培养在诱 导培养基上。
脱毒技术在菠萝、香蕉、草莓、马铃薯、 菊花、香石竹、唐菖蒲、水仙、郁金香、 百合、大丽花、白鹤芋等主要园艺作物上 已成功应用。从根本上解决了植物的退化 问题。
一、 无病毒苗培育的意义
二、 培育无病毒苗木的方法 三、 无病毒苗木的鉴定
一、 无病毒苗培育的意义
1、无病毒苗木的概念
是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在 植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。 通常危害植物的病毒有几百种，并且随着栽培时间的延 长，危害程度越来越严重，种类越来越多。尤其是靠无性繁 殖的作物，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积 累，危害日趋严重。而以种子进行繁殖的种类，可随着世代 的交替而去除病毒，病毒只能危害一个世代。
（2） 热空气处理


适用：对活跃生长的茎尖效果较好 方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般
在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异，
如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。 马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。

特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例
竹，蒜和马铃薯等）。
（2） 茎尖的剥离与接种
在解剖镜下，将灭菌的外植体放在一个衬有无 菌湿滤纸的培养皿内（防止茎尖变干 ），用解剖 针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端 分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组 织切下来(0.2~0.5mm)，可带1~2枚幼叶，然后将 其接种到培养基上。
诱导试管薯
将健壮的试管苗转到含8%糖浓度 的MS培养基上，诱导试管薯，要求每 株诱导1.5粒，每瓶达到10粒以上， 每粒不小于0.5g。
试管苗扦插生产微型薯
用蛭石和珍珠岩按1：0.5的比例准备扦插
床，高密度扦插试管苗（10*5cm），业余时
间进行温度、湿度控制、培埋蛭石等管理，
平均每株生产微型薯1.2粒，每粒2g以上。
脱毒马铃薯原种生产
播种微型薯生产脱毒马铃薯原种。要 求利用业余时间以小组承包形式管理，在 40目网室生产，亩产达到1000公斤。
我院学生承包的网室
实践操作
材料选择和消毒
生产脱毒原种
茎尖剥离和接种
茎尖脱毒技术
诱导试管薯、微型薯
初代培养 脱毒苗的鉴定
继代增殖
复习题
名ห้องสมุดไป่ตู้解释
有性繁殖、无性繁殖、植物组织培养、细胞全能性、 愈伤组织培养、无病毒苗、外植体
三、电子显微镜检查法 病毒有一定的形态（ 球状、杆状、线状等）
和大小（ 0.01~0.3um ）。

采用电子显微镜（分辨率0.0001um）可以直 接观察病毒，检查出有无病毒存在，并鉴定病毒 的种类。 优点：灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测 定病毒。

第四节 无病毒植物的利用
一、植物病毒的浸染与传播 （一）浸染 植物自然孔口

三、 无病毒苗木的鉴定
从上述途径培育得到的植株，必须经严格鉴定，证明确 实无病毒存在，才是其真正的无病毒苗，才可提供给生产应 用。
鉴定的方法有多种：
指示植物(indicating Plant)法 抗血清(antiserum)鉴定法 电子显微镜(electric microscope)检查法
原理：
是当植物组织处于高于正常温度的环境中 时，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化， 不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断 降低从而达到脱毒的目的 。
热处理方法 （1） 温汤浸渍处理
适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料 方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时 特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处 理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。
2、微茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒原理