细胞各种染色方法

细胞染色一).瑞特(Wright)染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。

血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。

目前常用瑞特染色法。

(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。

亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。

通常为氯盐，即氯化美蓝。

美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。

市售美蓝中部分已被氧化为天青。

伊红通常为钠盐。

即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。

(2)细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。

因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

(3)PH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。

EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。

rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定)，加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。

Ra=a6 50/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。

细胞各种染色方法1细胞各种染色方法1细胞是生物体的基本结构单位，研究细胞结构和功能对于理解生命活动的基本原理具有重要意义。

而在细胞研究中，染色方法是最常用的一种技术手段之一、通过染色，可以使细胞内的各种器官、蛋白质、核酸等结构或分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

下面介绍一些常用的细胞染色方法。

1.原位杂交染色原位杂交是一种通过特异性核酸探针与目标细胞中的特定DNA或RNA 序列结合，从而实现靶分子检测和定位的方法。

通过这种方法，可以查看细胞中特定基因或RNA的表达情况，从而揭示该基因或RNA在细胞中的作用。

在原位杂交染色中，探针可以用荧光标记或放射性同位素标记，并使用显微镜观察或放射性成像等方法进行检测。

2.免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，对细胞或组织进行染色分析的方法。

由于抗体可以识别并结合到蛋白质、多肽、糖、核酸等生物分子上，所以免疫染色可以用于检测特定蛋白质或分子的存在和表达水平。

免疫染色可以通过荧光染色或酶标染色来实现，进一步结合显微镜观察和图像分析等方法，可以定量或定位地研究细胞内的各种分子。

3.组织化学染色组织化学染色是一种通过化学反应将细胞或组织中特定分子染色的方法。

常用的组织化学染色方法有哈维氏酸碱性染色、格里姆萨染色、伊红-Wright染色等。

这些染色方法可以用来观察细胞内的DNA、蛋白质、核酸以及细胞器等结构，并通过显微镜观察，从而对细胞和组织的结构和组成进行研究。

4.核酸染色核酸染色是一种利用荧光染料或放射性染料对DNA或RNA进行直接染色的方法。

通过核酸染色，可以观察到细胞和细胞核的形态、数量和分布情况，进而研究细胞的分裂、DNA合成和RNA转录等过程。

核酸染色方法包括荧光染色和核酸复合物染色等，其中荧光染色可用于显微观察，核酸复合物染色则可通过放射性成像等方法进行检测。

细胞染色是细胞生物学研究中非常重要的一种手段，通过染色可以使细胞内的各种结构与分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

常用细胞染色方法
常用的细胞染色方法包括：
1.吉姆萨染色法：使用吉姆萨染料染色，可用于观察细胞核和细胞质的形态结构。

2.荧光染色法：使用荧光染料，通过荧光显微镜观察细胞内的特定结构、蛋白质或核酸等。

3.伊诺金染色法：使用伊诺金染料，主要用于显微镜下观察和鉴别细菌和真菌等微生物。

4.嗜酸染色法：使用嗜酸染料，能够染色细胞内的酸性结构和胞质。

5.嗜碱染色法：使用嗜碱染料，能够染色细胞内的碱性结构和胞质。

6.免疫组化染色法：利用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，再使用染料标记抗体来观察和定位细胞内的特定蛋白质。

7.核酸染色法：使用DNA或RNA特异性的染料，能够染色细胞内的核酸，常用于细胞周期和细胞分裂等研究。

8.血液细胞染色法：包括委氏染色法、中日染色法等，用于观察和鉴定血液细胞
类型和形态变化。

以上是一些常用的细胞染色方法，根据需要和研究目的的不同，可以选择合适的方法来观察和研究细胞。

血细胞的染色方法
血细胞的染色方法有以下几种：
1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。

首先将薄片
经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料
的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。

这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。

2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染
料的浓度和染色时间稍有不同。

这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。

3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等
处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。

这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。

4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。

常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。

5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。

它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。

以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。

细胞各种染色方法细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。

由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。

目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。

第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。

细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。

正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。

加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。

在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。

所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。

一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。

培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。

用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。

细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。

贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。

悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。

二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。

相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。

若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。

浆细胞染色方法
1.苏木精伊红染色法（H&E染色法）：
这是一种常规的组织切片染色方法，对于检测浆细胞的分布
和形态特征非常有效。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于苏木精溶液中染色，可以染出细胞核为深蓝色，胞质为红色。

3）用伊红溶液处理薄片，可使核仁染成深蓝色，细胞质和胶原纤维染成粉红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

2.伊红/橙G染色法：
这种染色方法也可用于浆细胞的染色，它可以使细胞质染成
橙色、胞核染成淡红色。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于5%的酸性酒红溶液中，用浓盐酸处理23秒钟，使浆细胞细胞浆呈现橙色。

3）用伊红溶液处理薄片，胞核呈现淡红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

3.免疫组化染色法：
这种方法使用特异性抗体标记目标蛋白，可用于检测浆细胞中特定抗体的表达。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片进行抗原修复处理，以恢复蛋白质的免疫反应性。

3）在薄片上加上特异性的抗体，与目标抗体结合形成免疫复合物。

4）用酶标记的二抗结合免疫复合物，生成可视化信号。

5）最后用染色剂染色，观察和分析浆细胞中目标抗体的表达情况。

细胞凋亡染色种类
细胞凋亡染色有多种方法，包括以下几种常见的染色种类：
1. HE染色：这是一种常用的细胞凋亡染色方法，使用苏木素-伊红染料对细胞进行染色。

在光学显微镜下观察，凋亡细胞会呈现圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状的现象。

2. Giemsa染色：Giemsa染色也是一种常见的细胞凋亡染色方法。

正常细胞的核色泽均一，而凋亡细胞的染色质会浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状和凋亡小体等。

3. AO/PI双染色法：吖啶橙(AO)是一种荧光染料，能透过细胞膜使核DNA和RNA染色。

在荧光显微镜下观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。

凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

碘化丙啶(PI)是一种DNA 结合性染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。

因此，通过AO/PI双染色法可以区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。

4. Hoechst染色：Hoechst染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。

在紫外光激发下，活细胞核呈均匀淡蓝色荧光，凋亡细胞则呈现亮蓝色，或核呈分叶状、边集的荧光。

5. TUNEL染色：这是一种检测细胞凋亡中DNA断裂的方法。

在细胞凋亡过程中，会激活DNA内切酶，导致DNA断裂。

TUNEL 染色可以标记这些断裂的DNA，从而检测细胞凋亡。

以上信息仅供参考，如需了解更多关于细胞凋亡染色的信息，建
议查阅专业书籍或咨询相关领域的专家。

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。

但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。

但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。

Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。