华中农业大学本科课程考试试卷

【第 1 页 共 6 页】 华中农业大学本科课程考试试卷

考试课程与试卷类型：基因操作原理 姓名：

学年学期：2003-2004-2 学号：

考试时间：2004-05-28 班级：

一、填空题（每小题2分，共24分）

1. 限制性内切酶的命名主要根据__________________________________________来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确________________。 A: SalI; B: SmaI; C: HindIII; D: HindIII;

E: Tth111I; F: Bsp1286I; G: NotI

2. RNA polymerase 可识别启动子并启动基因的转录从而合成mRNA，____________________和___________________方法可用来检测mRNA合成的起始位置。

3. 在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA的特定位点作甲基化修饰，而许多限制性内切酶位点对甲基化是敏感的，如ClaI (AT/CGAT)。请问ClaI能切割以下哪个或哪些来自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列________________。 （A） ATCGATA; （B）

ATCGATG; （C） ATCGATC; （D） ATCGATT.

4. 从高温嗜热细菌中发现高温DNA polymerase后，使得PCR技术得以广泛应用，在高温下有活性的DNA

polymerase有、、、。其中具有3’-5’外切活性的高温DNA polymerase有和。

5. DNase I 切割DNA的方式受条件的影响, 在Mn++存在下________________________

________________，在Mg++存在下__________________________________________。

6. 限制性内切酶有其特定的识别位点，如EcoRI 的识别位点为 _______________；___________限制性内切酶 与 ____________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。

7. Lambda phage 的基因组在噬菌体颗粒中是_____________，在感染宿主细胞后主要以___________形式存在。

8. Sequenase 是用于_________________________的工具，与_________________最相似，但不同之处在于_____________________________________________ 。

9. 在基因操作过程中有许多对人体有害的物质, 应小心使用, 常用的有害物质有 : _____________,

_________________, ___________________, _________________。

10. Splicing by overlap extension 是一种___________ 工作方式，可用于对两个DNA片段作___________________连接。

11. Competent cells 是一种处于_________________________状态的细胞, electroporation 是指一种将___________（物质）通过_________________方式_____________________________遗传转移方法。

12. 用于基因克隆的载体种类繁多，从克隆片段的大小来看，可分为常规克隆载体和大容量克隆载体。常见的大容量克隆载体有_____________，______________，_____________，_______________。 【第 2 页 共 6 页】 二、名词解释（每小题3分，共24分）

1．Klenow fragment

2. BAC vector

3. CIP

4. IPTG/X-gal

5. M13KO7

6. Site preference

7. Nick translation

8. Plateau effect ( in PCR)

三、分析简答题（每小题5分，共25分）

pBlue-A

10000 bps 2000

4000 6008000 10000/0 EcoRI

3000

5000 7000 9000 1000

HindIII 1．当利用质粒载体从基因组中克隆得到含有目标基因的DNA片段后，通过限制性内切酶切割该重组DNA可制作该目标DNA片段的物理图谱。例如，选用3种内切酶切割重组pBlue-A，通过agarose电泳分析，得到如下大小的DNA片段。请标出酶切位点A的相对位置。

EcoRI：10kb

HindIII：10kb

A酶：4kb, 3.5kb, 2.5kb

HindIII和EcoRI ：4kb, 6kb

A酶和EcoRI：3.5kb, 2.5kb, 2.5kb, 1.5kb

A酶和HindIII：4kb, 2.5kb, 1.0kb, 2.5kb

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3． 许多限制性内切酶切割DNA后可产生相同的突出末端，这些产物彼此之间可进行粘端连接。但在连接产物中相应位置的酶切位点就不存在了。例如某DNA片段用ClaI (AT/CGAT)酶切后，可与AccI (GT/CGAC)切割的载体连接，但在连接点处的ClaI和AccI位点都消失了，相应的序列变成了ATCGAC。右图最上面的序列为ClaI/ AccI连接处的DNA序列。通过右边步骤可在连接点处恢复ClaI位点，请指出每一步所用的关键酶和底物。

SphI位点：GCATG/C Recovering ClaI --ATCGA CAAGCTT--

--TAGCTGGCC AA--

--ATCGA TT--

--TAGCT AA--

--ATCGATT--

--TAGCTAA-- --ATCGACCGGCATGCAAGCTT--

--TAGCTGGCCGTACGTTCGAA--

--ATCGACCGGCATG CAAGCTT--

--TAGCTGGCC GTACGTTCGAA--

( ) ( ) ( , ) ( ) 2．右图是一个常用克隆载体的遗传图谱。请问该载体有何主要特点，利用该特点可作何用途，举出一种构建该特点的方法。 【第 4 页 共 6 页】

4．右图是一个典型的E.coli表达载体，利用T7噬菌体的启动子可达到高效表达的目的。在利用T7噬菌体的启动子表达时，一般对宿主菌有一定要求，通常使用BL21(DE3)菌株。请问该载体利用T7噬菌体的启动子高效表达外源基因的工作原理。

UUUUUUUUUUUUUUUUUUUUInsert target DNA转化E.coliCJ236M13K07感染Isolatephagemid ssDNA与突变寡核苷酸退火T7 DNA polymeraseligase转化MV1190dut+/ung+phagemid5. 下图是通过Kunkel法进行DNA定点诱变的流程示意图。请结合流程步骤，简述其工作原理。 【第 5 页 共 6 页】

四、问答题 （每小题9分，共27分）

1. 截至2004年5月17日，有9种真核生物、144种细菌和18中古细菌完成了基因组测序工作。在某一植物基因组测序过程中，通过生物信息分析发现一个全新的ORF，试问如何检测该植物是否表达出相应ORF的蛋白质产物？如果存在该蛋白产物的话，请问如何找到与之发生相互作用并结合的其他蛋白质的编码基因。

2. 通过生物化学的的方法从某植物中分离到一个蛋白质活性因子，若要在E.coli中大量表达该蛋白质，试问如何分离得到该基因。