梅毒螺旋体抗体测定SOP

梅毒螺旋体检测标准操作规程【梅毒螺旋体检测标准操作规程】1. 引言梅毒作为一种性传播疾病，早期检测对于治疗和控制传播至关重要。

本操作规程旨在规范梅毒螺旋体检测的操作流程，确保检测结果的可靠性和准确性。

2. 实验器材与试剂准备（1）实验器材：显微镜、荧光显微镜、玻片、盖玻片、恒温水浴、离心机等。

（2）试剂准备：梅毒螺旋体检测试剂盒、PBS缓冲液、荧光素。

3. 实验操作步骤（1）准备标本：从患者体内采集组织液（如血液、脑脊液等）作为标本。

（2）制备玻片：将标本涂在多个玻片上，将玻片放入恒温水浴中，使组织液干燥。

（3）固定标本：将玻片置于甲醛固定液中浸泡15分钟，然后用PBS缓冲液洗涤。

（4）孵育标本：将固定的玻片置于荧光显微镜下，加入梅毒螺旋体检测试剂盒中的梅毒螺旋体特异抗体，孵育30分钟。

（5）洗涤标本：用PBS缓冲液洗涤玻片，去除非特异性结合的抗体。

（6）添加荧光素：加入荧光素作为可视化记号，孵育15分钟。

（7）洗涤标本：用PBS缓冲液洗涤玻片，去除未结合的荧光素。

（8）观察标本：将玻片置于显微镜下，观察是否有梅毒螺旋体的荧光信号。

4. 质量控制与结果判读（1）质量控制：每次实验需进行质控，使用已知梅毒阳性标本作为阳性对照，使用无感染标本作为阴性对照。

（2）结果判读：观察玻片下的荧光信号，有荧光信号则判定为阳性，无荧光信号则判定为阴性。

5. 结果报告与记录记录每次实验的梅毒螺旋体检测结果，包括标本信息、实验日期、操作人员姓名、实验结果等。

6. 问题与解决方法（1）标本准备不当：确保采集到的标本质量良好，避免污染或变质。

（2）实验操作不准确：按操作规程进行实验，避免操作中的误差。

（3）质量控制出现问题：检查质控过程是否严格按照规程执行，确保质量控制结果可靠。

7. 安全注意事项（1）遵守个人防护措施：在实验操作过程中，佩戴手套、口罩等个人防护装备。

（2）遵守实验室安全规范：实验室内保持清洁、整齐，并按规定处置废弃物。

目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。

适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。

1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。

1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。

1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。

也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。

溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。

1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。

血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。

1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。

一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。

收集滴出的血液，立即用于检测。

1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。

1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。

1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。

梅毒TPPA抗体检测作业指导书1、试验原理：梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。

其原理如下：将梅毒(Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。

这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test;PA法），由此可检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。

2、样本收集和贮存：血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。

不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。

标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。

3、安全防范：3．1此试剂盒内含人血成分。

尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。

3．2移液过程禁止用口。

3．3在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。

3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。

使用后请彻底洗手清洁。

3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。

3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积.4、试剂：4．1 储存与稳定性：试剂应在2-10℃保存。

冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。

4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产）（1）溶解液（液体）8mL×1瓶用于调制致敏粒子和未致敏粒子。

（2）血清稀释液29mL×1瓶用于样品的稀释。

（3）致敏粒子（冷冻干燥）调制浓度为1%的Treponema Pallidum(Nichols 株)致敏明胶粒子。

（4）未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。

广西壮族自治区疾病预防控制中心SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验标准操作细则（日本富士，FUJIREBIO INC.）版号：第2003年版文件编号：GXCDC/Y16-13-1811、目的对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用进行必要的细化和补充，以规范本试剂的操作程序，正确使用本试剂,保证检测结果准确。

2、适用范围操作适用于采用SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂的所有操作。

3、职责科室负责人：负责对科室综合管理。

保管人员：负责对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用操作是否符合规范，并对SERODIA—HIV明胶凝集试剂进行使用效期记录。

使用人员：负责按照本细则对SERODIA—TP·PA梅毒螺旋体抗体明胶凝集试剂使用操作，并进行使用记录。

4、工作程序（一）、原理利用纯化的致病性梅毒螺旋体（Nichol株）抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合产生可见的凝集反应。

本试剂有如下优点：（1）操作简便，无需特殊设备。

即可对单个标本进行检测，也可用于大规模普查。

（2）反应时间短：孵育时间仅2小时，随后肉眼观察结果。

（3）高度特异性：本试验中所用的载体为人工制造的明胶颗粒，由富士公司独创。

与其它同类试剂中所用的生物载体相比（如TPHA 中的红细胞），最大限度地降低了非特异凝集反应。

（二）、试剂盒内容“A”溶解液（Reconstituting Solution）：用于溶解致敏颗粒“C”和非致敏颗粒“D”。

“B”标本稀释液（Sample Diluent）：用于标本的稀释。

“C”致敏颗粒（Sensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

是包被有梅毒螺旋体抗原的明胶颗粒。

“D”非致敏颗粒（Unsensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

梅毒螺旋体抗体检测（乳胶法）作业指导书1.检测目的定性检测人血清或血浆样本中梅毒螺旋体抗体（TP）,可作为梅毒感染的辅助诊断。

2.测定原理采用高度特异性的抗体抗原反应原理及乳胶标记免疫层级分析技术，试剂含有预先固定于膜上检测区（T）的梅毒重组抗原盒包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。

3.标本要求1试剂适用于检测血清或血浆样本，检测时应使用未溶血的样本。

2.样本应收集于清洁、干燥的容器中，可采用肝素、EDTA或柠檬酸三钠作为抗凝剂。

3.样本收集后应尽可能马上使用，不可再室温长时间存放。

血清血浆样本可在2-8°C冷藏存放一周，长期保存需冷冻于-20℃。

冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混均，样本禁止反更冻融。

4.试剂艾博生物医药（杭州）有限公司5.操作步骤5.1使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温。

从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温），在1小时内应尽快地使用。

5.2将试剂置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，垂直加入1滴（约25UI）试剂板的加样孔（S）中，然后加入2滴缓冲液。

5.3加样后立刻开始计时等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。

20分钟后读取的结果无效。

6.结果判定6.1阳性（+）：两条紫红色条带出现。

一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）。

6.2阴性（-）：近质控区（C）出现一条紫红色条带，在检测区（T）内务紫红色条带出现。

6.3无效（X）：质控区（C）未出现紫红色条带，标本不正确操作过程或试剂已变质损坏。

1湎血清/血桨∖υC2滴缓冲液—阳性阴性无效7.质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后15-20分钟左右读取，20分钟后读判定无效。

7.2质控区内（C区）一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。

质控内（C）所显现的红色条带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

8.注意事项8.1加样过多或过少可能导致结果出现偏差。

梅毒密螺旋体抗体测定1．样品的接收、登记和处理1.1 采血3-4ml，收集到促凝管中（可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝）1.2检查样品的状况，有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。

如果污染过重或者认为样品不能被接受，要将样品情况立即通知送样人。

1.3仔细核对样本与送检单,然后编号1.4样品为全血（抗凝），用3.000r/min离心15min，血清/血浆备用。

打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。

样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。

同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。

1.5 每天上午进行样品的检测。

节假日（短期1周内）进行检测的样品存放于2～8℃，需长期存放的样品，应置于-20℃以下。

2.检测方法和步骤2.1检测方法（一）酶联免疫吸附试验（ELISA）2.1.1 基本原理以珠海丽珠试剂股份有限公司的ELISA（双抗原夹心法）为例。

用纯化基因工程梅毒螺旋体抗原TP47（TmpA）和TP17包被的微孔板和辣根过氧化物酶标记基因工程梅毒螺旋体抗原，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。

2.1.2检测步骤实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18～23℃)，平衡30分钟后使用。

配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。

准备实验原始记录表2.1.3 实验操作2.1.3.1装好所需使用数目的孔条,每孔均加入50μl样品稀释液。

留一孔作空白对照,暂不加任何液体。

另设3个阴性对照孔，阳性对照1孔，若需要可再设1个阳性对照孔。

2.1.3.2每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），加样时吹打混匀则效果更佳。

在反应板上加盖封板膜,振荡混匀,置37±2℃温箱或水浴锅中，孵育30min。

2.1.3.3置洗板机上洗涤6遍, 每次静置30～60S, 洗完后孔上方及底部不应残存液体。

SOP标准操作程序TP梅毒螺旋体抗体【实验原理】梅毒试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测全血/血清/血浆中是否含有梅毒抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的重组特异性梅毒抗原和质控区（C）的相应抗体。

【标本】全血标本收集后应尽快使用，或尽快分离血清或血浆以避免融血，检测时只能使用未融血的标本，严重融血的标本必须重新采集血样。

样本收集后应尽可能马上使用，不能够在室温下长时间存放。

血清或血浆标本可在2 -8℃冷藏存放一周。

长期保存需冷冻于-20℃。

冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混匀。

样本切忌反复冻融。

【注意事项】1.本产品是一种定性地检测梅毒抗体存在的试剂，不能确定标本中抗体的含量。

2.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为机体感染梅毒临床诊断的唯一依据。

3.本产品仅用于体外诊断，并适用于检测血清/血浆样本中的梅毒抗体。

4.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为确诊依据。

为了确保结果的准确性，可对样本用其他方法，例如ELISA，进一步确认。

5.同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。

6.如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。

阴性结果并不能排除感染梅毒的可能性。

【操作步骤】*实验前准备在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。

*实验步骤1．从原包装铝箔带中取出试剂条，粘附于记录卡上，平置桌面，在1小时内应尽快地使用。

2．吸取全血/血清/血浆标本50ul（或吸管2滴）置于加样区，再加1滴缓冲液。

3．等待红色条带的出现，在10分钟内读取测试结果。

关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的梅毒抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。

在30分钟后读取的结果无效。

【结果判定】阳性（+）：两条红色条带出现。

一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。

梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：TPPA;组合项目申请:RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝,置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管. 2.1。

2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符.2。

1.3标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.8下列标本为不合格标本2。

1.8。

1标本量不足。

2.1.8。

2严重溶血、严重浑浊的标本.2。

1。

8.3无法确认标本与申请单对应关系的.2.1。

8.4其他如标识涂改、标本试管破裂等.2。

2标本保存2。

2.1标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内.2.2.2已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。

3、方法原理凝集法。

将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上。

这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。

4、试剂及其他用品准备溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子（冷冻干燥） 0.6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0。

6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状) 0。

6ml/瓶×5。

5 质控品与室内质控规则5。

1 质控液重建方法：液态质控血清,即开即用，无需特殊准备。

5.2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。

5.3质控规则:阴性和阳性对照符合即可。

5。

4如出现失控情况,按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。

6操作步骤6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴(100ul)，从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25ul）。

梅毒螺旋体特异性抗体检测作业指导书1.实验原理梅毒的病原是苍白螺旋体（TP），感染后患者血清学反应较复杂，可产生2种抗体，一种是非梅毒螺旋体抗体；另一种是TP特异性抗体。

前者在疾病活动期可检出，但治疗后很快下降，一般用RPR等检测。

后者在治疗后相当长时间内都可检测到。

Syphagen-TPHA 是一种检测TP抗体的特异、灵敏的间接血球凝集试验。

适用于梅毒确诊检查。

2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：空腹采血2.2 标本种类：血清或EDTA抗凝血浆2.3 标本要求：检测标本可以是血清，对于大范围筛选实验，也可用含EDTA的血浆。

如果出现可疑结果，用血清标本来确证。

用含抗凝剂（EDTA）的试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。

3. 标本储存：血清于2-8℃可存放48小时，在-20℃可存放4周；血浆则用含抗凝剂（EDTA）的试管收集血液，离心收集血浆，在24小时内检测。

4. 标本运输：室温运输。

5. 标本拒收标准：溶血、脂血或污染标本。

6. 试剂6.1 试剂名称：Syphagen-TPHA试剂6.2 试剂生产厂家：西班牙BIOKIT公司6.3 包装规格：200人份6.4 试剂盒组成：6.4.1 实验细胞：Antigen Reagent 15ml6.4.2 对照细胞:Control Reagent 15ml6.4.3 稀释液：Dilution Solution 50ml6.4.4 阳性对照:Positive Control 2.5ml6.4.5 阴性对照:Negative Control 2.5ml用前将试剂回复至室温，致敏及对照红细胞在用前彻底悬浮。

6.5 试剂储存条件及有效期存放于2-8℃，不同批号的试剂不得混用。

7. 操作步骤7.1 定性检测7.1.1 每人份需4个孔，其中2个用于样品稀释。

在第1个孔中加25ul（1滴）稀释液，在第2孔中100ul （4滴）稀释液，在第3、4孔中加25ul（1滴）稀释液。

梅毒螺旋体抗体测试标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：梅毒螺旋体抗体（速写TP）；组合项目申请：性病检测、输血前监测定加选本项目。

临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 采用含高效促凝剂或含分离胶的真空采血管，常规静脉采血约2 ml，无需抗凝。

2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符号。

2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于0.5 ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.3 其它如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2 标本保存2.2.1 标本接收后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2 标本保存时间：血清室温（15～25℃）下可稳定48h，在冰箱中（2～8℃）可稳定7天。

-20℃放置12个月。

为避免标本中水份挥发使血清浓缩，对保存超过1天的标本均加塞密闭或覆盖保鲜膜。

2.2.3 已完成测试的标本保存完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7天。

备复检。

2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛状态。

2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。

3 方法原理本品采用胶体金免疫检测技术和层析原理，定性检测血清（血浆）样本中的梅毒螺旋体抗体。

检测时，样本中梅毒抗体可与胶体金标记抗原（大肠杆菌表达）结合形成抗原抗体复合物，由层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原（大肠杆菌表达）结合形成“Au-TPAg-TPAb-TPAg”夹心物而凝聚显色。

游离的胶体金标记梅毒抗原（大肠杆菌表达）则在对照线处与预包被的兔抗TP抗体结合而富集显色。

梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）1.原理梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。

2.方法2.1仪器耗材：1)TPPA检测试剂盒2)移液器3)保湿盒2.2检测流程：1)试剂准备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。

2)加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔（100μl），从第2孔-第4孔各滴25μl。

3)样本稀释：用移液器取待检血清25μl置第1孔中，然后以2n 的方式从第1孔稀释至第4孔。

4)加对照液：用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子；在第4孔滴入25μl致敏粒子。

5)混合：以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟。

6)反应：加盖置湿盒内，于室温（15℃-30℃）下水平静置。

2小时后观察并记录结果。

附：重吸收试验对于未致敏粒子和致敏粒子均显示±以上凝集的样品，要按照下列程序在完成吸收操作的基础上进行再试验。

1)取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。

2)加入样品50μl混合，于室温（15℃-30℃）下放置20分钟以上。

3)离心分离（2000rpm、5分钟），然后分别吸取上清液【吸收完毕的稀释样品（1：20）】50μl至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。

4)从第4孔以后，要预先各滴入25μl血清稀释液，从第3孔至最后一孔用移液器以2n 的方式进行稀释。

5)之后的步骤同上。

3.结果3.1结果判读首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔），判断试验有效性后，再根据致敏粒子与标本反应孔（第4孔）与致敏粒子是否产生1+ ～2+凝集反应凝集反应，判断结果。

如未致敏粒子反应孔出现凝集（第3孔）为无效试验，需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。

++ ：产生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜状延展；+ ：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围；±：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形；- ：粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。

非特异性梅毒螺旋体试验1.原理：非特异性梅毒螺旋体试验包括性病研究实验室试验（venereal disease research laboratory test，VDRL），不加热血清反应素试验（unheated serum reagin test,USR）和快速血浆反应素环状卡片试验（rapid plasma reagin test,RPR）。

其原理是梅毒螺旋体可使被破坏的组织细胞释放类脂样物质，螺旋体自身释放亦产生类脂及脂蛋白。

这些物质刺激机体产生抗体（IgG或IgM）。

这些抗体可与从牛心中提出的心磷脂发生抗原抗体反应。

由于非梅毒螺旋体感染引起的各种急性或慢性组织损伤也可产生类似的抗体，所以这种反应是非特异性的，适合用于筛选实验。

将标准的心磷脂抗原吸附在特制的活性碳粒上，这种碳粒抗原与患者血清混合在一起后，可以与血清中抗心磷脂抗体起反应在白色纸卡上形成肉眼可见的黑色凝集颗粒。

2.试剂：1)RPR检测试剂盒2)移液器3.方法：1）将待检血清及试剂用前放室温平衡（23-29℃），冻干阳性对照血清应在试剂前5分钟用0.2ml生理盐水溶解。

2）吸取待检血清50μl，在卡片圈内，并将血清用牙签或吸液嘴扩展到整个圆圈。

3）将盒内RPR抗原悬液轻轻摇匀，用专用滴管和针头吸取抗原于每个血清圈内垂直加一滴。

4）振荡或摇动8分钟后，立即在明亮光线下用肉眼观察结果。

5）如有需要，阳性标本可做1:2 1:4 1:8 1:16和1:32稀释，按定性试验方法作定量试验。

4.结果判定：阳性反应：中等或大块黑色凝集块。

弱阳性反应：散在的小黑色凝集块。

阴性反应：黑色均匀分散无凝集块。

必要时应再做TPHA试验确证。

5.注意事项：1、本试剂应保存于2-8℃，效期一年。

2、如做半定量试验，可将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述方法进行试验，以呈现出明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。

3、本试验系非特异性反应，需再做TPHA确证。

SOP标准操作程序TP梅毒螺旋体抗体【实验原理】梅毒试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测全血/血清/血浆中是否含有梅毒抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的重组特异性梅毒抗原和质控区（C）的相应抗体。

【标本】全血标本收集后应尽快使用，或尽快分离血清或血浆以避免融血，检测时只能使用未融血的标本，严重融血的标本必须重新采集血样。

样本收集后应尽可能马上使用，不能够在室温下长时间存放。

血清或血浆标本可在2 -8℃冷藏存放一周。

长期保存需冷冻于-20℃。

冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混匀。

样本切忌反复冻融。

【注意事项】1.本产品是一种定性地检测梅毒抗体存在的试剂，不能确定标本中抗体的含量。

2.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为机体感染梅毒临床诊断的唯一依据。

3.本产品仅用于体外诊断，并适用于检测血清/血浆样本中的梅毒抗体。

4.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为确诊依据。

为了确保结果的准确性，可对样本用其他方法，例如ELISA，进一步确认。

5.同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。

6.如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。

阴性结果并不能排除感染梅毒的可能性。

【操作步骤】*实验前准备在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。

*实验步骤1．从原包装铝箔带中取出试剂条，粘附于记录卡上，平置桌面，在1小时内应尽快地使用。

2．吸取全血/血清/血浆标本50ul（或吸管2滴）置于加样区，再加1滴缓冲液。

3．等待红色条带的出现，在10分钟内读取测试结果。

关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的梅毒抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。

在30分钟后读取的结果无效。

【结果判定】阳性（+）：两条红色条带出现。

一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。

梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）1.原理梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。

2.方法2.1仪器耗材：1)TPPA检测试剂盒2)移液器3)保湿盒2.2检测流程：1)试剂准备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。

2)加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔（100μl），从第2孔-第4孔各滴25μl。

3)样本稀释：用移液器取待检血清25μl置第1孔中，然后以2n 的方式从第1孔稀释至第4孔。

4)加对照液：用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子；在第4孔滴入25μl致敏粒子。

5)混合：以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟。

6)反应：加盖置湿盒内，于室温（15℃-30℃）下水平静置。

2小时后观察并记录结果。

附：重吸收试验对于未致敏粒子和致敏粒子均显示±以上凝集的样品，要按照下列程序在完成吸收操作的基础上进行再试验。

1)取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。

2)加入样品50μl混合，于室温（15℃-30℃）下放置20分钟以上。

3)离心分离（2000rpm、5分钟），然后分别吸取上清液【吸收完毕的稀释样品（1：20）】50μl至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。

4)从第4孔以后，要预先各滴入25μl血清稀释液，从第3孔至最后一孔用移液器以2n 的方式进行稀释。

5)之后的步骤同上。

3.结果3.1结果判读首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔），判断试验有效性后，再根据致敏粒子与标本反应孔（第4孔）与致敏粒子是否产生1+ ～2+凝集反应凝集反应，判断结果。

如未致敏粒子反应孔出现凝集（第3孔）为无效试验，需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。

++ ：产生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜状延展；+ ：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围；±：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形；- ：粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。

梅毒螺旋体抗体定量测定作业指导书一、目的：规范梅毒螺旋体抗体测定的标准操作程序，确保梅毒螺旋体抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的梅毒螺旋体抗体。

三、临床意义梅毒是梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种性传播疾病[1]，人是梅毒螺旋体的唯一宿主。

梅毒具有较强的传染性和慢性复杂的病理，它几乎可以引起全身所有系统的组织和脏器的损害及病变[2]，导致功能失常，组织破坏，乃至死亡。

2009年，梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中居第三位[3]，其病程漫长，危害严重，早期侵犯生殖器和皮肤，晚期侵犯全身各器官，尤其是心血管和中枢神经系统[4]。

TP不仅严重损害成人身体的健康，同时还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿，侵犯胎儿肝、脾、肾上腺、牙齿、骨骼、眼及脑神经等全身器官系统，引起早产、流产、死胎、畸胎、或胎传梅毒儿（又称先天性梅毒）[4]，严重影响出生人口质量。

梅毒螺旋体抗体是梅毒感染人体后由免疫系统产生的特异性抗体，是梅毒感染的特异性指标。

四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。

用TP抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记TP抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原-抗体-抗原-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与TP抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理5. 1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

5.2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。

5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。

目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。

适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。

1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。

1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。

1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。

也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。

溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。

1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。

血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。

1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。

一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。

收集滴出的血液，立即用于检测。

1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。

1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。

1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。

梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）（凝集法）1.目的：规范实验室TPPA检测操作。

2.范围： xxx 院 xxx 科3.测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。

这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。

4.标本：4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。

4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。

4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。

5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。

5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。

5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。

5.3试剂组成5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。

5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。

5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。

5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。

5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。

6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。

6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。