牡蛎水解
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牡蛎食品的研究进展郭玉华,曾名勇,刘尊英,董士远,杨会成(中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛,266003)摘 要 牡蛎是沿海地区常见的一种贝类,以其独特的风味、丰富的营养而深受人们的喜爱。
文中介绍了牡蛎保健功能的研究进展、功能性牡蛎食品开发现状、高新技术在开发功能性牡蛎食品中的应用现状,并分析了功能性牡蛎食品的开发前景和存在的问题。
关键词 牡蛎,功能,开发利用第一作者:硕士研究生。
收稿日期:2006-12-07,改回日期:2007-03-07牡蛎俗称海蛎子、蚝等,是世界上第一大养殖贝类,也是我国四大养殖贝类之一。
牡蛎肉鲜味美,营养丰富。
因其含有特殊氨基酸和多种微量元素,能促进儿童的智力发育,故又有 益智海鲜 的美称。
牡蛎作为一种优质的海产养殖贝类,不仅具有很高的食用价值,而且具有独特的保健功能。
但是,随着牡蛎养殖产量的迅速增加,如何充分高效地利用牡蛎资源,开发出更多更好的功能性牡蛎产品,既是牡蛎产业面临的巨大机遇,也是牡蛎产业面临的一个严峻挑战。
1 牡蛎保健功能的研究进展人类对牡蛎保健功能的认识已逾千年,早在我国汉代的 伤寒论 、明代的 本草纲目 中就已有记载。
随着食品、医药、生物技术的快速发展,对牡蛎保健功能的认识越来越深入,其新的功能正在不断地被发掘出来。
我国卫生部已批准将牡蛎列为第一批具有药用价值兼保健功效的食品。
1 1 降血糖功能滕瑜等人[1]用牡蛎提取物对四氧嘧啶引起的高血糖大鼠进行治疗,发现血糖下降较明显,胰岛素也有明显提高,表明牡蛎提取物对糖尿病具有一定的疗效作用。
经临床实验证实,它能够较好地改善临床症状。
徐静[2]研究了牡蛎提取物降低小鼠血糖的作用,结果表明,牡蛎提取物能阻抑四氧嘧啶诱导的小鼠血糖和丙二醛(MDA)水平升高、胰岛素和SOD 含量降低及肿瘤坏死因子(TNF)的异常表达。
T an aka 等人[3]通过小鼠实验发现牡蛎酶解产物显著的抑制小鼠血糖浓度的升高,具有一定的降血糖作用。
牡蛎肉双酶复合水解工艺哎呀,说起牡蛎肉双酶复合水解工艺,这事儿可真不是随便能聊的,得有点专业背景。
不过呢,我尽量用大白话给你讲讲,咱们就像俩老朋友聊天一样,轻松点。
首先,牡蛎,你知道吧?就是那种海边的,壳儿硬硬的,里面那肉滑滑的,吃起来挺鲜美的。
不过,这牡蛎肉啊,直接吃是挺费劲的,得有人专门去壳,还得处理,挺麻烦的。
所以呢,就有了这个双酶复合水解工艺,简单来说,就是用两种酶来帮助我们把牡蛎肉处理得更细腻,更易于消化吸收。
这第一种酶,咱们就叫它“小A”吧,它特别擅长把牡蛎肉里的蛋白质分解成小分子,这样人体就容易吸收了。
想象一下,就像你用锤子敲碎一块大石头,把它变成一堆小石子,是不是就容易搬动了?然后,第二种酶,咱们叫它“小B”。
小B的作用是把牡蛎肉里的多糖分解掉。
多糖,你可能不太熟悉,但它就像是牡蛎肉里的“胶水”,让肉紧紧粘在一起。
小B一出手,这“胶水”就化开了,肉就松散了,吃起来口感更好。
这俩酶一起工作,就像是一对默契的搭档。
小A把蛋白质分解了,小B 把多糖分解了,牡蛎肉就变得又嫩又滑,吃起来那叫一个享受。
记得有一次,我去海边的一个小镇,那里的渔民就用了这种工艺处理牡蛎。
他们把新鲜的牡蛎肉放在一个大桶里,然后加入小A和小B,搅拌均匀。
过了一会儿,你就能看见牡蛎肉开始慢慢变软,颜色也变得更鲜亮。
那味道,啧啧,真是鲜美极了。
而且,这种工艺还有个好处,就是能保留牡蛎肉里的营养成分。
你想想,牡蛎肉里有那么多好东西,比如锌啊、铁啊,这些都是对人体特别好的微量元素。
用双酶复合水解工艺处理后,这些营养成分就能更好地被人体吸收。
最后,我想说的是,虽然这个工艺听起来挺高大上的,但其实它就像是我们日常生活中的小技巧一样,让生活变得更美好。
就像我们用双酶复合水解工艺处理牡蛎肉,让牡蛎肉变得更加美味,更加健康。
所以,下次你去海边,别忘了尝尝这种用双酶复合水解工艺处理过的牡蛎肉,保证让你回味无穷。
咱们今天就聊到这儿,下次再聊点别的,拜拜啦!。
牡蛎贮藏品质变化及其保鲜技术0 前言牡蛎(Oyster),俗称牡蛤、蛎蛤、蚝、白蚝、蛎子或海蛎子。
牡蛎是一种珍贵贝类,历来为世人所推崇喜食,牡蛎肉弥蛎黄,味极鲜美,蛋白质、脂肪、糖元、脂肪含量较多,富含多种维生素及锌、磷、铁等,素有“海洋牛奶”之美称。
1 牡蛎的主要化学成分组成近代研究发现,牡蛎含有丰富的糖原、牛磺酸、18种氨基酸、B族维生素、多糖、低分子活性肽、Fe、Zn、Se等矿物质和微量元素[1] 。
牡蛎含有人体所必需的8种氨基酸,其中含量最高的是赖氨酸,呈味氨基酸(谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和丙氨酸等)的含量也较高,占氨基酸总量的33 %,游离鲜味氨基酸是构成鲜味的主要成分,加上牛磺酸等特殊氨基酸赋予牡蛎鲜味,糖原加强牡蛎鲜味的厚味、协调感,因此牡蛎味道鲜美。
牡蛎中脂肪含量不到7 %,其中含有丰富的ω-3多不饱和脂肪酸,特别是DHA 与EPA约占脂肪酸总量的25 %,此外还含有多种维生素、矿物质及微量元素[2,3]。
2 牡蛎在贮藏过程中发生的品质变化2.1 脂肪变化牡蛎在贮藏期间脂肪主要发生氧化和水解两种形式的变化。
脂肪水解反应是因为牡蛎内脏含有脂肪水解酶和磷脂水解酶,牡蛎在贮藏过程中这些酶会引起脂肪的水解,水解后生成的游离酸能够促进蛋白质的变性,并且游离酸与氧结合的速度大于脂肪酸与氧结合的速度,这样就更多更快地产生小分子的醛和醇,使牡蛎的香味和品质受到严重影响。
脂蛋白过氧化体系研究新鲜牡蛎水提液的抗氧化活性表明,新鲜牡蛎水提液具有较强的清除自由基能力,并有一定的抗脂质过氧化作用[4,5]。
牡蛎脂肪中不饱和脂肪酸含量高(EPA和DHA),而且分布在皮下的一层肌肉组织里,这些不饱和脂肪酸凝固点比较低。
在长期冻藏中,脂肪酸往往在冰的压力作用下,由内部转移到表层,因此很容易同空气中的氧气作用,产生酸败。
同时,脂肪氧化产物又往往同蛋白质的分解产物,如氨基酸、盐基氮等共存,从而加强了酸败作用,造成色、香、味严重恶化,即“油烧”[6]。
牡蛎水解一1材料与方法1 1 供试材料蚝干:海南省产,金丰实业有限公司提供酸性蛋白酶(黑曲霉3 4130):食用级,由无锡星达生物工程公司提供其它试剂均为国产分析纯1 2 实验方法1 2 1 原料及成品的全氮测定:凯氏定氮法〔3〕1 2 2 氨基酸态氮的测定:茚三酮比色法〔4〕1 2 3 全氮利用率=水解液含氮量×100 原料含氮量1 2 4 氨基酸生成率的计算:氨基酸生成率=水解液总氨基酸态氮×100 原料含氮量1 3 水解液制备蚝干水解液→加盐→30℃保温4~5天→过滤(100目)→滤液调配→分装→巴氏杀菌→成品利用蛋白酶,使水解液中的氨基酸生成率有所提高,为进一步提高氨基酸生成率,充分利用原料中的蛋白质,选择酸性蛋白酶作了加盐保存实验,即在酸性蛋白酶的适宜酶解条件下,制备水解液(渣与水的混合物),分装在250ml三角瓶中,分别添加不同的食盐量,用塑料封口,于30℃下保存,定期取样测定氨基酸态氮含量,检查风味变化情况。
得到如下结果(表1)。
除用氨基酸生成率为指标外,还采用全氮利用率为指标,更明了地表现出变化情况(表2)。
从表2看出,酶水解全氮利用率达到50 31%,加盐保存5天,全氮利用率可提高到85%~90%,其中以加盐9%~13%最好。
二1.1原料牡蛎:市售枯草杆菌AS1.391中性蛋白酶(AS1.391,Subtrilisin):酶活力50,000U/g,无锡酶制剂厂。
木瓜蛋白酶(Papain):酶活力 60000U/g,上海生化所。
胰蛋白酶(Trypsim):酶活力 70000U/g,上海生物化学试剂公司。
1.2试验仪器JB-90-2 恒温磁力搅拌器,上海天平仪器厂。
DS-200 高速组织捣碎机,江苏江阴科研器械厂。
MA-110 分析天平,上海天平仪器厂。
常规实验设备。
1.3试验方法1.3.1原料处理取鲜活带壳牡蛎,先将壳剥去,肉放入洁净容器中,加入清水轻轻搅动洗净。
鸽肉酶解液水解工艺优化及其体外抗氧化性研究姚宏亮;鹿取;韩燃;佴一凡;贾添慧【摘要】The pigeon meat was hydrolyzed with the flavor protease,alkaline protease,papaya protease and bromelain,and the process was optimized by single factor experiment and orthogonal experiment using the hydrolysis degree as the index.Then the antioxidant properties in vitro was tested using the reducing capacity,DPPH (1-1-diphenyl 2-picryl hydrazyl)radical scavenging activity,superoxide radical scavenging activity and hydroxyl radical scavenging activity.The result showed that the optimized hydrolysis processing was as follows:flavor protease acted as the enzyme,the amount of the enzyme was 600 U/g (material),hydrolysis temperature was 55 ℃,pH was 7.0,and hydrolysis time was 2.5 h.Under optimal conditions,the degree of hydrolydis was 28.69%± 0.29%.The antioxidant activity assay also indicated that the hydrolysates had good reducing eapacity and performance on radical scavenging activity compared with ascorbic acid.%以乳鸽胸脯肉为原料,利用风味蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,以水解度为指标,利用单因素实验和正交实验对酶解工艺进行了优化,并以抗坏血酸为对照,以还原能力、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、羟自由基清除能力为指标分析了酶解液的体外抗氧化能力.结果表明,最佳水解工艺为:风味蛋白酶600 U/g(原料),水解温度55℃,pH7.0,在此条件下水解2.5 h,水解度达到28.69%±0.29%;水解得到的鸽肉酶解液具有一定的还原能力,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基均具有很好的清除作用.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)004【总页数】5页(P64-67,87)【关键词】鸽肉;酶解液;水解工艺;抗氧化性【作者】姚宏亮;鹿取;韩燃;佴一凡;贾添慧【作者单位】金陵科技学院食品科学系,江苏南京210038;金陵科技学院食品科学系,江苏南京210038;金陵科技学院食品科学系,江苏南京210038;金陵科技学院食品科学系,江苏南京210038;金陵科技学院食品科学系,江苏南京210038【正文语种】中文【中图分类】TS251.1鸽肉不仅具有丰富的营养价值,而且对人体有良好的保健功能。
有机酸沉淀法分离牡蛎中的糖原和蛋白质谢昕蛰;赵伟;孙茜妍;杨瑞金【摘要】研究了有机酸对牡蛎匀浆中糖原和蛋白质分离效果的影响。
采用有机酸溶液对牡蛎匀浆进行处理,离心后得到富含蛋白质的沉淀和糖原含量相对较高的上清液,以达到分离牡蛎中糖原和蛋白质目的。
通过单因素实验和正交试验得到的优化工艺条件为:牡蛎匀浆与0.5 mol/L的乙酸溶液的料(g)液(m L)比为1∶3,将p H值调至7.0,60℃下搅拌30 min,最后5 000 r/min离心10min。
在此优化条件下得到的沉淀中蛋白质质量比为62.1%,占总蛋白质的59.6%;糖原质量比为2.21%,占总糖原的5.5%。
上清液中蛋白质质量比为19.4%,占总蛋白质的29.7%;糖原质量比为23.8%,占总糖原的93.5%。
研究结果表明,乙酸沉淀法可有效分离牡蛎中的糖原和蛋白质。
【期刊名称】《食品科学技术学报》【年(卷),期】2016(034)003【总页数】8页(P53-60)【关键词】牡蛎;有机酸;糖原;蛋白质;分离【作者】谢昕蛰;赵伟;孙茜妍;杨瑞金【作者单位】[1]江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;[2]江南大学食品学院,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS254.1牡蛎是一种海产品,又名蚝、蛎黄、海蛎子、蚵,属于软体动物门双壳纲珍珠贝目的曲蛎科和牡蛎科[1]。
牡蛎中含有丰富的糖原和蛋白质。
牡蛎糖原具有降血压、抗凝血、抗血栓,提高机体免疫功能和抗白细胞下降等作用[2]。
牡蛎富含优质蛋白质,其氨基酸组成完善,易于被人体吸收。
将牡蛎蛋白适度水解获得的小肽具有抗氧化[3]、清除自由基[4]、降血压[5]、抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖免疫抑制活性[6]等功能性质。
由于牡蛎的糖原和降解后的小肽具有不同的功能性质,可将其分别开发成不同产品,使牡蛎大大增值。
传统的提取糖原的方法有热碱提取法、水提法、酶解法等。
糖原易溶于热碱溶液[7],但是强碱会破坏蛋白质,使糖原降解[8],在提取过程中宜采用更为温和的条件。
2021年第40卷第5期总第351期• 97 •中国酿造研究报告一种含有牡蛎肽保健酒的功能评价车 帅",刘楚怡,王长伟2,冯晓梅2,杜 芬2,李八方2(1.中国海洋大学海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室6山东青岛266000;2.青岛海洋生物医药研究院6山东青岛266000;3.中国海洋大学医药学院6山东 青岛266000)摘 要:以牡蛎肽为主要原料,辅以枸杞、黄罠、杜仲和西洋参,研制出一种含有牡蛎肽的保健酒,并对其保健功能进行评价。
缓解体力 疲劳 能评 结果表明,该保健酒低剂量组能显著延长小鼠负 游泳时间(P V0.05),低剂量组 中剂量组均能显著降低运动后 清氮含量(P V0.05),增加小鼠 储备(P V0.05)。
增强免疫力功能评价结果表明,该保健酒对小鼠的体质量数数均无显著影响(P 60.05)。
低剂量和中剂量组的保健 均能显著提高小鼠 的转化率和半数[(HCQ(P V0.05),并对小鼠 能有显著高的作用(P V0.05)。
评 准,判该保健 有解体力疲劳增免疫力的。
关键词:肽;保健酒缓解体力疲劳;增 免疫力;功能评中图分类号:TS262.4文章编号:0254-5071 (2021)05-0097-06doi:10.11882j.issn.0254-5071.2021.05.018引文格式:车帅,刘楚怡,王长伟,等•一种含有牡蛎肽保健酒的功能评价[J ].中国酿造,2021,40⑸:97-102.Functional assessment of a novel health care wine containing oyster peptideCHE Shuai 1, LIU Chuyi 2,3*, WANG Changwei 2, FENG Xiaomei 2, DU Fen 2, LI Bafang 2收稿日期:2020-11-16修回日期:2021-02-08作者简介:车帅(1989-),男,博士研究生,研究方向为海洋活性物质。
牡蛎水解一1材料与方法1 1 供试材料蚝干:海南省产,金丰实业有限公司提供酸性蛋白酶(黑曲霉3 4130):食用级,由无锡星达生物工程公司提供其它试剂均为国产分析纯1 2 实验方法1 2 1 原料及成品的全氮测定:凯氏定氮法〔3〕1 2 2 氨基酸态氮的测定:茚三酮比色法〔4〕1 2 3 全氮利用率=水解液含氮量×100 原料含氮量1 2 4 氨基酸生成率的计算:氨基酸生成率=水解液总氨基酸态氮×100 原料含氮量1 3 水解液制备蚝干水解液→加盐→30℃保温4~5天→过滤(100目)→滤液调配→分装→巴氏杀菌→成品利用蛋白酶,使水解液中的氨基酸生成率有所提高,为进一步提高氨基酸生成率,充分利用原料中的蛋白质,选择酸性蛋白酶作了加盐保存实验,即在酸性蛋白酶的适宜酶解条件下,制备水解液(渣与水的混合物),分装在250ml三角瓶中,分别添加不同的食盐量,用塑料封口,于30℃下保存,定期取样测定氨基酸态氮含量,检查风味变化情况。
得到如下结果(表1)。
除用氨基酸生成率为指标外,还采用全氮利用率为指标,更明了地表现出变化情况(表2)。
从表2看出,酶水解全氮利用率达到50 31%,加盐保存5天,全氮利用率可提高到85%~90%,其中以加盐9%~13%最好。
二1.1原料牡蛎:市售枯草杆菌AS1.391中性蛋白酶(AS1.391,Subtrilisin):酶活力50,000U/g,无锡酶制剂厂。
木瓜蛋白酶(Papain):酶活力 60000U/g,上海生化所。
胰蛋白酶(Trypsim):酶活力 70000U/g,上海生物化学试剂公司。
1.2试验仪器JB-90-2 恒温磁力搅拌器,上海天平仪器厂。
DS-200 高速组织捣碎机,江苏江阴科研器械厂。
MA-110 分析天平,上海天平仪器厂。
常规实验设备。
1.3试验方法1.3.1原料处理取鲜活带壳牡蛎,先将壳剥去,肉放入洁净容器中,加入清水轻轻搅动洗净。
洗净后将牡蛎肉捞起,放入绞肉机中绞碎。
1.3.2水解牡蛎的方法称取绞碎牡蛎肉 10 g,加入 50mL水,倒入组织捣碎机中捣碎 5min。
将捣碎后的牡蛎肉分别加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶,(各酶浓度相同,均为600U/mL),控制反应条件进行水解。
1.3.3酶失活将已水解的肉液加入少量水,加热至沸,保持20min,灭酶同时去掉部分腥味。
1.3.4过滤、浓缩过滤分 2次进行,第一次用 40目筛粗滤,去掉碎壳及杂质;第二次用200目筛精滤,分离出未被水解的碎肉,重新水解。
滤液放入夹层锅中,加热浓缩至氨基态氮含量为 0.4g/100mL左右为止。
浓缩液可做蚝油或喷雾干燥,制成水解牡蛎粉,做汤料用。
表3各种蛋白酶的水解条件对比酶种酶量(U/g) 水解温度(℃) 水解时间(h) pH 水解率(%) 木瓜蛋白酶 600 68~70 5 6.0 40.3枯草杆菌酶 600 50 5 7.0 48.6胰蛋白酶 600 50 5 7.5 52.3枯草杆菌蛋白酶:木瓜蛋白酶=1:1 600 55 5 7.0 58.1 从表 3 可以看出,在酶量相同、各种蛋白酶分别在各自最佳温度、最佳酸碱度,作用时间相同的情况下,水解效果各不相同。
木瓜蛋白酶与胰蛋白酶、AS1.391 枯草杆菌中性蛋白酶相比,水解牡蛎的结果,无论牡蛎的消化率还是氨基态氮含量都比较低;胰蛋白酶与 AS1.391 枯草杆菌中性蛋白酶比,水解率比较高,并且其水解液带有较强的碱味,但水解液的氨基态氮含量却较低;与胰蛋白酶作用结果相反,水解结果生成游离氨基酸总量较高,但牡蛎消化率却较低。
说明其选择性各不相同,可按不同目的选用或混合使用。
木瓜蛋白酶与 AS1.391 枯草杆菌中性蛋白酶混合使用,其水解效果比单酶水解效果要好。
这与蛋白酶水解专业性强有关,对不同种水解底物作用效力各异,不同的寡肽、多肽、月示、胨,需要不同的蛋白酶。
木瓜蛋白酶与枯草杆菌中性蛋白酶适宜的酸碱度及温度相近,两者共同作用可形成互补,因而效果更好。
1.4检验方法总氮:凯氏定氮法;氨基态氮:甲醛滴定法;水分:常压 105℃直接干燥法;粗脂肪:索氏抽提法。
Umetsu[6]指出,随着酶用量的增加,会使产品中分子量八百左右的肽比例上升,这种肽多具苦味。
苦味与水解产物中的疏水性氨基酸在肽链中的位置及含量有关。
当疏水性氨基酸位于肽链末端位置,表现出苦味最大。
酶水解蛋白质破坏了原有蛋白结构,使原来隐藏于分子内部的疏水性氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸等露于分子表面,因而几种酶的水解产物都有不同程度的苦味产生。
由试验得知,采用枯草杆菌中性蛋白酶和木瓜蛋白酶混合加入的方法对牡蛎肉进行水解,比传统单一酶解的水解率增加了 8%。
其工艺条件为 pH7.0,温度50℃,加酶量 600U/g,时间 5h,水解效率较好。
水解液经浓缩、配制,可能制作出色、香、味俱佳的海鲜调味汁。
1材料近江牡蛎、翡翠贻贝:均购于湛江市场;枯草杆菌中性蛋白酶:活力为100000u的酶制剂;酱油曲精:上海淘大食品有限公司出品;食盐、砂糖:优质;饮用水:符合GB10791 89标准。
2 生产工艺流程及操作要点2 1 水解蚝汁的制取2 1 1 工艺流程近江牡蛎翡翠贻贝→清洗→打浆→保温酶解→煮沸→冷却→曲精酿造→过滤→水解蚝汁2 1 2 操作要点2 1 2 1 原料的处理近江牡蛎和翡翠贻贝经清洗,去掉翡翠贻贝的触须后备用。
2 1 2 2 破碎打浆两种原料的配比为1∶1,加入原料的1/5水,用组织破碎机打浆1min。
2 1 23 保温酶解将原料浆泵入反应罐,加入原料1%的枯草杆菌中性蛋白酶混匀,55~60℃保温酶解2h,并不断搅拌以充分酶解。
2 1 2 4 酿造前处理保温酶解后的蚝汁加热煮沸以使蛋白质轻微变性、同时除去部分腥味,冷却至40℃左右。
2 1 2 5 曲精酿造冷却后的蚝汁泵入反应罐,加入10%的食盐、0 5%的酱油曲精和适量的米香曲酒,混匀后40℃保温24h、46℃保温48h。
保温过程中每天搅拌一次。
2 1 2 6 过滤用100~120目的沙布过滤料液,除去未清洗干净的泥沙和未反应的残渣,滤液泵入罐中冷却备用。
2 2 出口蚝汁的制备2 2 1 工艺流程水解蚝汁→预热→调配→均质→杀菌→装罐→封盖→成品→入库空罐→清洗→消毒↑2 2 2 操作要点2 2 2 1 调配水解蚝汁预热至80~85℃,加入预先溶化的明胶、CMC和粟粉(三者的用量分别为2%、0 2%和0 5%),边加边搅拌促使混合均匀。
再加入酱色,煮沸10min以使淀粉充分糊化。
2 2 2 2 均质将混匀的料液泵入高压均质机经30~40MPa的压力均质,使体态均一、口感细腻,同时避免产生沉淀。
2 2 23 杀菌、罐装将均质后的蚝汁进行巴氏杀菌,并立即在无菌条件下装入洗净并消毒的储罐中封好罐,贴好商标,入库。
1.1 实验材料牡蛎为从江苏连云港市场上购得的太平洋牡蛎。
胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性Alcalase分别由上海生化制剂厂、广西大学研究所和丹麦NOVONORDISH公司提供,A.S.1398中性蛋白酶和537酸性蛋白酶由无锡酶制剂厂提供,其它试剂均为分析纯或试剂纯。
1.2 实验方法 1.2.1 酶解工艺过程将新鲜牡蛎肉洗净后用组织捣碎机捣成匀浆。
取一定量的牡蛎肉匀浆,以1∶1的比例加水,加入适量的酶后在合适条件下恒温水解,在水解过程中不断加酸或碱以保持pH恒定。
水解一定时间后,加热至90~100℃灭酶10min,然后将水解液以3000r·min-1离心15min得到清液。
1.2.2 各项成分的测定方法水分:干燥法[5];灰分:灼烧法[5];粗蛋白质:半微量凯氏定氮法[5];粗脂肪:氯仿-甲醇提取法[5];糖原:蒽酮比色法[6],取牡蛎肉三氯醋酸(TCA)提取液或水解液,加蒽酮试剂并在沸水浴中显色15min,冷却后于620nm比色;无机质:铁、锌、锰和钙采用火焰原子吸收分光光度法测定,铅和砷采用石墨炉原子吸收分光光度法测定,汞采用氢化物原子吸收分光光度法测定,硒采用荧光分光光度法测定;游离氨基酸:茚三酮比色法[5];氨基酸:日立式氨基酸分析仪测定[5]。
DHA、EPA:GC/MS色谱法。
取上述过程中所得的脂肪0.1g于25mL的容量瓶中,加乙醚-正己烷(2∶1)2.5mL,甲醇2.5mL,0.8mol·L-1氢氧化钾-甲醇溶液2.5mL,摇匀,静置10min,定容,取上层脂肪酸甲酯,用无水硫酸钠干燥,进样分析。
水解度:三硝基苯磺酸(TNBS)法[7]。
取用十二烷基磺酸钠(SDS)稀释了的水解液0.1mL,加2mL0.2125mol·L-1、pH为8.2的磷酸盐缓冲溶液和1mL0.1%的TNBS溶液,放入50℃的恒温水浴锅,用黑布蒙起反应1h,加4mL0.1N的盐酸终止反应,室温放置30min,340nm比色;537酸性蛋白酶酶活:取不同量的酶液(0.1~1.0mL)并用0.1mol·L-1醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH4.0)补足体积到1.0mL,然后在每个管中再加入1mL预先在40℃保温的1%酪蛋白溶液,在40℃保温10min,立即各加入2mL5%三氯醋酸,迅速摇匀,于室温放置30min。
过滤后收集滤液,在1mL滤液中加5mL的0.4mol·L-1碳酸钠溶液和1mL福林试剂,在40℃中显色20min,680nm下比色。
1 材料与方法1.1实验材料新鲜无壳牡蛎:市售;SephadexG 15(葡聚糖凝胶):sigma公司产品;碱性蛋白酶(Alcalase):Novo公司生产;血管紧张素转化酶(ACE)和马尿酰组氨酰亮氨酸(hippurylLHisLLeu):sigma公司产;其他试剂均为分析纯.1.2 实验方法1.2.1 脱脂牡蛎粉的制备1)牡蛎干粉的制备新鲜牡蛎→打浆→冷冻干燥→磨碎→牡蛎干粉2)牡蛎脱脂工艺[4,5]最终得到脱脂牡蛎粉.1.2.2 牡蛎肽的制备取80g脱脂牡蛎粉,加800mL水,加碱性蛋白酶Alcalase,于60℃,pH8.5下恒温水解一定时间.在水解过程中不断加NaOH以保持反应液pH值恒定.牡蛎蛋白的水解度(DH)可以根据消耗的碱量进行控制.DH=水解肽键数/总肽键数根据下式计算DH[6]:DH%=VB×Mb×1/α×1/mp×1/ntot式中:VB为滴定所消耗的碱体积(mL);M为碱液浓度(mol/L);mp为水解反应中蛋白质总质量(g);α为氨基的解离度;ntot为每克底物蛋白质中的肽键总数,取8.0.本实验通过pHstat法控制DH为20%,酶解完成后,将水解液加热至90~100℃灭酶10min,然后将其离心(3000r/min)15min得到上清液,将上清液喷雾干燥后得到黄色粉末.1.2.3 牡蛎肽的分离纯化选择 1.6cm×100cm的SephadexG 15凝胶柱,加2mL样液,用0.1mol/L,pH4.0的醋酸醋酸钠缓冲液进行洗脱,保持洗脱液体积流量为21.3mL/h,用FH8802 2紫外检测仪在220nm检测吸收物质,用3057型便携式记录仪记录检测结果.1.2.4 牡蛎功能短肽的ACE抑制活性的测定实验方法见参考文献[7,9].1.2.5 牡蛎功能短肽的相对分子质量分布测定在柱温30℃,体积流量为0.5mL/min下用TSKge12000SWXL300mm×7.8mm色谱柱,在检测波长220nm下测定,其中流动相为V(乙腈)∶V(水)∶V(三氟乙酸)=45∶55∶0.1样品制备:吸取样品2mL置于10mL容量瓶中,用流动相稀释至刻度,用微孔过滤膜过滤后供进样.摘要:以牡蛎为原料,利用多种蛋白酶对牡蛎蛋白质进行水解,挑选中性蛋白酶1398和Flavourzyme蛋白酶进行复合酶解,得出酶解的最佳工艺参数为:时间16h,中性蛋白酶1398与Flavourzyme作用的时间比为16∶15,中性蛋白酶1398酶与底物比为300U/g,Flavourzyme酶与底物比为1200U/g.水解后,氨基态氮质量分数为0.469%,总氮回收率为91%.1 材料与方法1.1 原料与试剂牡蛎:浙江海通食品集团提供;酸性蛋白酶:无锡酶制剂厂产品;中性蛋白酶1398:无锡酶制剂厂产品;Protamex:丹麦诺维信公司产品;Flavourzyme:丹麦诺维信公司产品;其他试剂均为分析纯.1.2 主要仪器DS 1高速组织捣碎机;FA1104电子天平;HH 2数显恒温水浴锅;DELTA320 S数显PH计;HJ 3恒温磁力搅拌器等.1.3 制备水解液的工艺流程新鲜牡蛎→去壳→洗净→打浆→热处理→酶解→灭酶→离心1.4测试指标和分析测定方法总氮回收率=酶解液中的氮含量/原料中总氮含量氨基态氮质量分数用甲醛滴定法测定[3].酶解液和原料中的氮质量分数用微量凯氏滴定法测定[4].以总氮回收率作为评价指标能够反映出蛋白酶对于蛋白质的水解效果,总氮回收率越高,说明蛋白质被有效地分解了,此时的蛋白酶的水解能力最强;反之亦然.酸性蛋白酶(黑曲霉3 4130):食用级,由无锡星达生物工程公司提供枯草杆菌AS1.391中性蛋白酶(AS1.391,Subtrilisin):酶活力50,000U/g,无锡酶制剂厂。