微生物综合实验指导书

实验一普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察一、实验目的1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。

2．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。

3．通过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物的一般形态。

二、实验原理普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。

图1-1 双目生物显微镜1．机械部分：（1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。

镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。

（2）转换器：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。

有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。

（3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。

（4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调节物镜和标本之间的距离。

2．光学部分：（1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。

（2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是显微镜中最主要的部分。

各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（AN ）及所要求盖玻片厚度等主要参数。

物镜的性能由数值孔径决定，并且还依赖于物镜的分辨率。

（3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。

聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。

孔径光阑是用来调节对比度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。

当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时，就可以得到足够对比度的良好图象。

如果开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；如果开得太小，则分辨率下降，降低物像的清晰度。

（4）电光源：在显微镜的下部，提供观察标本时所用光源。

三、实验器材1．普通光学显微镜（双目生物显微镜）2．载玻片、盖玻片若干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培养液，新鲜活性污泥四、实验方法１．低倍镜的操作（１）首先把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。

微⽣物实验指导书-教材微⽣物学实验指导书⽬录实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术 (3)实验⼆培养基的配制 (8)实验三从⼟壤中分离微⽣物及纯化 (11)实验四微⽣物的接种技术 (14)试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 (17)实验六细菌的简单染⾊和⾰兰⽒染⾊ (20)实验七⼤肠杆菌⽣长曲线的测定 (23)实验⼋实验室环境和⼈体表⾯微⽣物的检查 (25)实验九乳酸菌的检测 (28)实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术【⽬的要求】1. 学习并掌握棉塞制作的⽬的、原理及⽅法；2. 学习并掌握玻璃器⽫清洗及包扎⽅法；3.掌握⾼压蒸汽灭菌的基本原理及操作⽅法。

4.了解其它常⽤消毒灭菌技术原理及技术【基本原理】棉塞的作⽤有⼆：⼀是防⽌杂菌污染，⼆是保证通⽓良好。

因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较⼤的影响。

微⽣物学实验所⽤的器⽫，⼤多数要进⾏清洗、消毒、灭菌，才能⽤来培养微⽣物。

玻璃器⽫的包扎⽅法正确合理，在使⽤过程中才能有效防⽌杂菌的污染。

玻璃器⽫包扎好后，⼀般⽤⾼压蒸⽓灭菌法进⾏灭菌。

⾼压蒸⽓灭菌是将待灭菌的物品放在⼀个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的⽔沸腾⽽产⽣蒸⽓。

待⽔蒸⽓急剧地将锅内的冷空⽓从排⽓阀中驱尽，然后关闭排⽓阀，继续加热，此时由于蒸⽓不能溢出，⽽增加了灭菌锅内的压⼒，从⽽使沸点增⾼，得到100℃以上的⾼温，导致菌体蛋⽩质凝固变性⽽达到灭菌的⽬的。

此外，常见灭菌⽅法还有⼲热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。

对空间灭菌常使⽤甲醛加⾼锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌⽅法。

【实验⽤品】棉花，试管，培养⽫，纱布，三⾓瓶，棉线，量筒，⽜⽪纸（或旧报纸），LDZX-50KBS ⽴式⾼压蒸⽓灭菌锅，常⽤灭菌⽤具、药剂等等。

【⽅法步骤】⼀、棉塞的制作正确的棉塞要求形状，⼤⼩，松紧与试管⼝（或三⾓瓶⼝）完全适合，过紧妨碍空⽓流通，操作不便；过松则达不到滤菌的⽬的。

制作过程见图1，包括取棉花、整理、折⾓、卷紧、成形、塞试管等步骤。

微⽣物实验指导书（1）范⽂《微⽣物学实验》实验⼀显微镜的使⽤、细菌⾰兰⽒染⾊法及细菌特殊结构的观察（⼀）实验⽬的1.了解普通光学显微镜的基本构造和⼯作原理2.学习并掌握油镜的原理和使⽤⽅法。

3. 在油镜下观察细菌⼏种基本形态4．掌握细菌⾰兰⽒染⾊法（⼆）实验原理1．显微镜的基本结构及油镜的⼯作原理现代普通光学显微镜利⽤⽬镜和物镜两组透镜系统来放⼤成像，故⼜常被称为复式显微镜。

它们由机械装置和光学系统两⼤部分组成。

在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。

⽽在普通光学显微镜通常配置的⼏种物镜中，油镜的放⼤倍数最⼤，对微⽣物学研究最为重要。

与其他物镜相⽐，油镜的使⽤⽐较特殊，需在载玻⽚与镜头之间加滴镜油，这主要有如下⼆⽅⾯的原因：1. 增加照明亮度油镜的放⼤倍数可达100 Χ，放⼤倍数这样⼤的镜头，焦距很短，直径很⼩，但所需要的光照强度却最⼤。

从承载标本的玻⽚透过来的光线，因介质密度不同（从玻⽚进⼊空⽓，再进⼊镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进⼊镜头，致使在使⽤油镜时会因射⼊的光线较少，物像显现不清。

所以为了不使通过的光线有所损失，在使⽤油镜时须在油镜与玻⽚之间加⼊与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常⽤⾹柏油，其折射率n=1.5 2）。

2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨⼒(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最⼩距离的能⼒。

从物理学⾓度看，光学显微镜的分辨率受光的⼲涉现象及所⽤物镜性能的限制，分辨⼒D可表⽰为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。

光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7 µ m ），⽽数值孔径值则取决于物镜的镜⼝⾓和玻⽚与镜头间介质的折射率，可表⽰为：NA=n × sin α式中α为光线最⼤⼊射⾓的半数。

它取决于物镜的直径和焦距，⼀般来说在实际应⽤中最⼤只能达到120 O ，⽽n 为介质折射率。

微生物学实验指导书目录实验一实验室环境和人体表面微生物的检查 (2)实验二普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (5)实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色 (12)实验四放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 (16)实验五酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法 (20)生命科学学院微生物学教研室编写实验一实验室环境和人体表面微生物的检查微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。

在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。

只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。

由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。

一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。

不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。

不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。

本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落的形态和数量。

一、实验器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。

2.溶液和试剂无菌水。

3.仪器和其他用品灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。

二、目的要求1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。

2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。

一、实验方案
1. 实验现象与结果
2. 本实验的关键环节及改进措施
⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前, 直接在酒精灯上烧灼灭菌, 把环和金属丝烧红即可。

接种环使用后, 先在火焰周围把环上标本烤干, 再烧灼灭菌, 以免标本汽化, 爆烈四溅, 污染环境。

金属杆快速通过火焰2－3次, 杀灭表面微生物。

⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。

⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。

思考题
1.食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？
2.食品被微生物污染后有哪些危害？
3、检样稀释时, 每个稀释度都要更换刻度吸管, 为什么？
1.答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物, 且无机盐含量相对较低, 食品中含有一定的水分, 并且食品包装后容易使内部升温, 这些都是很适合微生物(细菌、原虫、病毒)生长繁殖的情况, 因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。

所以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等, 或者真空包装。

2.答:⑴、降低食品的营养；
⑵、引起食品腐败变质；
⑶、引起呕吐、中毒或者某些疾病(如痢疾、腹泻、呼吸道感染等)和潜在性的慢性危
害等。

3.答: 每个稀释度都要更换刻度吸管可以在一定程度上保证不会沾有上一个稀释度得溶液, 且减少污染, 使浓度稀释得更加准确, 增加实验结果的准确性。

指导教师评语及评分:
签名: 年月日。

实验须知普通微生物学实验课的目的是，训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基础知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。

同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严谨认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的作风。

为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。

2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。

3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。

4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。

5.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。

如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。

必要时用灭火器。

6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。

对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。

7.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石碳酸液覆盖0.5小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。

凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前需浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。

8.每次实验需进行培养的材料，应标明姓名、组别及处理方法，放于教师指定的仪器内培养。

实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。

9.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。

10.实验结束后，整理桌面，物归原处，留人打扫室内卫生。

11.离实验室前，将手洗净，注意关闭火、煤气、灯、水管等。

微生物学实验室常用器皿微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌后用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。

二零零六年十月目录实验一显微镜油浸系物镜的使用 ------------------------------------ 3实验二细菌形态的观察 ---------------------------------------------------- 4实验三细菌简单染色法及口腔微生物的观察 -------------------- 5实验四细菌的革兰氏染色------------------------------------------------- 7实验五细菌的芽胞染色 ---------------------------------------------------- 8实验六酵母菌的形态观察实验----------------------------------------- 10实验七霉菌的形态观察 --------------------------------------------------- 12实验八细菌大小的测定 --------------------------------------------------- 14实验九细菌数量的测定（血球板计数） -------------------------- 16实验十培养基的配制------------------------------------------------------- 19实验十一消毒与灭菌------------------------------------------------------- 21实验十二稀释平板计数及微生物菌落形态的观察 ------------ 27实验十三紫外线对微生物生长的影响 ------------------------------ 30实验十四抗生素对微生物的作用 ------------------------------------- 30实验十五比浊法测定大肠杆菌的生长曲线 --------------------- 31实验十六土壤中好气性细菌的分离与计数(附划线分离法)33实验十七土壤中放线菌的分离与计数 ---------------------------- 35实验十八土壤中真菌的分离与计数-------------------------------- 36实验十九纤维素分解试验 --------------------------------------------------- 37实验一显微镜油浸系物镜的使用一、实验目的和实验内容目的：复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法内容：1、学习油浸系物镜的使用方法2、用油镜观察细菌三型和放线菌染色装片二、实验材料和用具细菌三型、放线菌的染色装片，香柏油、二甲苯，显微镜、擦镜纸。

实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。

由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。

目前，能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。

通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。

1. 淀粉酶产生菌的分离与纯化1.1 实验目的学习从自然界中分离淀粉酶产生菌，并进行分离与纯化。

1.2 实验原理淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组成的。

按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。

产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。

利用淀粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判断淀粉酶活力的高低。

1.3实验仪器与材料土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。

1.4 实验方法与步骤1.4.1分离1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；2）取1：10土壤悬液5 ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80 ℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于30-32 ℃培养24-48 h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。

03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。

01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。

02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。

微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。

02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。

03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。

实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。

显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。

离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。

培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。

其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。

数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。

实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。

实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。

实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。

选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。

配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。

培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。

微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。

培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。

观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。

微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。

实验一土壤中微生物的分离一、实验目的：1、使学生熟悉土壤中微生物种类。

2、学会用稀释平板技术确定土壤样本中的细菌和真菌的数目。

二、实验原理：土壤中含有大量的微生物，包括、真菌、原生动物、藻类和病毒。

尽管有如此多样性，细菌，包括霉菌样防线菌和真菌乃是最占优势的。

必须记住，土壤环境随地点不同而不相同；同一地点，不同时期的土壤环境也不一样。

这样，像湿度、PH值、温度、氧气含量、土壤中有机和无机组成在确定特定样本的特定微生物中将是决定性的。

就像土壤不同一样，用于分析土壤的微生物学方法也不同。

一个单一的技术是不能用来对所给的土壤样本中不同类型的微生物进行分离计数的。

本实验中确定的仅仅是细菌、防线菌、和真菌的相对数目。

所用的方法是系列稀释平板法。

为培养这三类微生物的生长，采用了不同的培养基：甘油醇母琼脂培养基用于防线菌分离；Saboruaud 琼脂培养基用于真菌的分离；为了抑制细菌的生长，两种培养基都补以每毫升培养基10微克的金霉素。

营养琼脂培养基用于细菌的分离。

三、实验材料：土壤：1克充分碾碎的肥沃的花园土样本，放入装有99毫升无菌水的烧瓶中，标记为瓶1:1:100稀释度（10¯²）。

培养基：每个实验组：1瓶75毫升保持在45℃熔化的营养琼脂培养基；1瓶75毫升45℃甘油醇母琼脂培养基；1瓶75毫升45℃Sabouraud琼脂培养基。

2瓶99毫升无菌水。

器材：酒精灯，计数器，无菌1毫升吸管，无菌培养皿，记号笔。

四、实验步骤：1．按下法标记每组的四个培养基营养琼脂培养基：104-，105-，106-，107-（用于细菌计数）。

甘油醇母琼脂培养基：103-，104-，105-，106-（用于放线菌计数）。

Sabouraud琼脂培养基：102-，103-，104-，105-（用于真菌计数）。

2.用笔标记二瓶99毫升无菌水为瓶2和瓶3。

3.用力摇动1：100（102-）稀释度的土壤样本大约30分钟。

试验一培养基的配制及灭菌【目的要求】1.了解培养基的概念、种类及用途2.了解培养基的配制原理及其常规配制程序3.学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。

【棊本原理】培养基是指利用人工方法将适介微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混介配制而成的营养基质，主要用于微牛物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方而。

口然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加Z实验和研究的H的不同，所以培养基种类很多。

不同培养基一般都应含有微牛物牛长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、牛长因子和水等营养成分。

此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。

牛肉膏蛋白腺培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。

高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。

马丁氏培养基和豆芽汁葡萄糖培养基分别用于霉菌和酵母菌的分离培养。

【材料与川品】1.材料与试剂牛肉膏、蛋白腺、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl> KNO3、K2HPO4、MgSOx FeSCh、KH2PO4、\lgSOr7H2O、NaOH溶液（lmol/L）。

【仪器与用品】天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。

一、肉膏蛋白豚培养基的配制1 •培养基成分牛肉膏蛋白陈0. 3g lgNaCl 琼脂0.5g1.5g水100mlPH7.2 〜7.42.配制方法（1）称量及溶化：分别称取蛋白月东和NaCl的所需量，置于唐瓷缸屮，加入所需水量的2/3左右的蒸饰水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。

然后加入少量蒸懾水于小烧杯中，加热融化，倒入上述唐瓷缸中。

将唐瓷缸加热，用玻璃棒搅拌，使药殆全部溶化。

（2）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。

（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（4）调pH：待溶液冷至室温时,用1 mol/1 NaOH溶液调pH至7.2〜7.4。

一、引言微生物计数是实验工作中不可或缺的一环，其准确性直接影响到实验的可靠性和重复性。

为确保微生物计数的结果准确可靠，本实验指导书详细规定了从样品采集与处理到结果分析与报告的整个实验流程。

通过遵循这些步骤，我们将能够优化微生物计数的操作，提高实验的精确性和可重复性。

二、样品采集与处理●(1) 采集样品为了获取具有代表性的微生物样品，我们需要采取科学的方法进行采样。

在采样过程中，我们必须特别注意避免污染和交叉污染，因为这将会对后续的实验结果产生严重的影响。

为了实现这一目标，我们建议使用无菌技术进行操作，并详细记录样品的来源、采集日期和时间等信息。

●(2) 样品处理在样品采集后，我们需要对其进行适当的处理，以便进行后续的微生物计数。

处理过程包括样品稀释、均质化和过滤或离心等步骤。

样品稀释的目的是使微生物分布均匀，便于计数；样品均质化的目的是确保微生物在样品中的分布是随机的；而样品过滤或离心的目的是去除杂质，提高计数的准确性。

三、计数方法选择●(1) 直接计数法显微镜计数、菌落计数和流式细胞仪计数是直接计数法的三种主要方法。

显微镜计数是通过显微镜直接观察并计数微生物；菌落计数是通过培养微生物并在培养基上形成菌落来计数；流式细胞仪计数则是利用流式细胞仪对微生物进行快速、准确的计数。

●(2) 间接计数法间接计数法包括ATP生物发光法、酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR等。

ATP生物发光法是通过测量微生物体内ATP的含量来间接计数；酶联免疫吸附法是利用特异性抗体与微生物抗原结合来计数；实时荧光定量PCR则是通过PCR扩增特定基因片段来计数微生物。

四、培养基选择与制备●(1) 培养基选择为了确保目标微生物能够在培养基上良好地生长和繁殖，我们需要根据微生物的种类和生长需求选择合适的培养基。

在选择培养基时，我们还需要考虑培养基的营养成分和pH值，以确保培养基能够满足目标微生物的生长需求。

此外，我们还应选择具有选择性和抑制性的培养基，以减少非目标微生物的干扰。

环境工程微生物实验指导书-图文实验一光学显微镜的操作及细菌形态观察1.1实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。

(2)观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。

1.2实验器材显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。

1.3显微镜的结构及其操作方法1.3.1普通光学显微镜(LightMicrocope)1.3.1.1光学显微镜的结构和各部件作用观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机械装置和光学系统两部分。

一机械装置(1)镜筒：镜筒长度一般是160cm。

它的上端装目镜，下端装物镜回转板。

回转板上一般有三个物镜。

(2)转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个孔或5个孔。

不同规格的物镜分别安装在各孔上。

(3)载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。

两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。

有的载物台上装有自动推物器。

(4)调节器：镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。

二光学光学系统（1）目镜：一般使用的显微镜具有2—3个目镜，其上刻有“5某”、“10某”、“15某”(或“16某”)等数字及符号，意即放大5倍、10倍、15倍(16倍)。

这三种透镜的焦距分别为50mm、25nn、16mm，线视场分别为20mm、14mm、10mm。

（2）物镜：物镜装在回转板上，可分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三种。

相应的放大倍数是10某（5某）、40某（50某）、100某（90某），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm，物镜上常标注数值孔径（N.A）。

使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体观察，不进行染色。

在观察原生动物时，低倍镜主要用来观察全部原生动物的种类和观察它的活动状态，而高倍镜则可以看清楚微生物的结构特征。

实验一微生物的分离和纯化本实验以微生物的分离和纯化为主线，综合包括了培养基的配制、消毒灭菌、微生物的分离等内容,在给定的时间内由学生自主完成。

包括以下知识内容。

学生书写实验报告的时候,不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述实验过程，在别人看完你的实验报告后,能够知道你是怎样做的，能够重复你的实验过程。

一、目的要求1．了解培养基的配制原理，掌握常用培养基的配制方法.2．掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。

3 学习、掌握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术.4 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。

5 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术,了解培养细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培养条件.二、原理培养基是将微生物生长繁殖所需要各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。

其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。

此外，微生物还必须在最合适的酸碱度范围的培养基上生长繁殖，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的PH值范围.根据研究目的不同,可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。

固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2％的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5～0.8％的琼脂.有时为了特殊目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。

由于微生物营养类型不同，应提供不同种类的培养基。

在分离、培养异样微生物时，对一般细菌常用肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏合成1号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培养基，有时也常用马丁培养基分离霉菌。

马丁培养基除含有霉菌所含需的各种营养物外,还有孟加拉红染料，能抑制放线菌和细菌，链霉素可杀死或抑制细菌，但对霉菌均无害，所以这种培养基具有选择作用。

灭菌的方法很多，最常用的是加压蒸汽灭菌法。

此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。

在每平方厘米为一个大气压（即15磅/时2）的压力下，温度可达121℃，一般只要持续15～20分钟后，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子.由于加压蒸汽灭菌是通过提高蒸汽压力而使其升高温度以杀死微生物的，所以，该法只有当灭菌锅内的空气完全排尽后，才能达到最佳效果。

《环境工程微生物》实验指导书《环境工程微生物》实验指导书一、实验目的本实验指导书旨在让学生了解和掌握环境工程微生物实验的基本原理、实验方法、实验步骤和实验技巧，培养学生对环境工程微生物的观察、分析和解决问题的能力，提高学生的实践能力和综合素质。

二、实验原理环境工程微生物实验是环境工程学科中重要的实验课程之一，主要涉及微生物的生长、代谢、分离、鉴定等实验技术。

本实验指导书将涵盖以下内容：1.微生物的生长和繁殖：通过观察微生物的生长过程，掌握微生物的生长条件和繁殖规律。

2.微生物的分离与纯化：学习使用各种方法从环境中分离微生物，并进行纯化培养。

3.微生物的鉴定：学习使用形态学、生理学等方法对微生物进行鉴定。

4.微生物的代谢：通过测定微生物的代谢产物，了解微生物的代谢过程和代谢途径。

5.微生物的生长曲线：通过绘制生长曲线，掌握微生物的生长规律和生长动力学。

三、实验步骤与操作方法1.实验准备：进行实验前，需要准备好各种实验器材、试剂和培养基等。

2.样品采集：选择具有代表性的环境样品，如水样、土壤样、垃圾样等，进行采集。

3.样品处理：将采集的样品进行处理，以备后续实验使用。

4.微生物分离：采用适当的分离方法，将微生物从样品中分离出来。

5.微生物培养：将分离得到的微生物进行培养，观察其生长情况。

6.微生物鉴定：根据微生物的形态学和生理学特征，对分离得到的微生物进行鉴定。

7.数据分析：整理实验数据，进行统计分析，得出实验结论。

8.实验总结：对实验结果进行总结，分析实验中存在的问题和不足之处，提出改进措施。

四、注意事项1.实验过程中要保持实验室的清洁卫生，避免污染和交叉感染。

2.使用试剂和培养基时要严格按照规定进行配制和使用，确保实验结果的准确性和可靠性。

3.在进行实验操作时要注意安全问题，避免发生意外事故。

例如，在处理危险性化学品时要佩戴个人防护用品；在使用高压灭菌锅时要遵守操作规程，避免发生爆炸等事故。

4.实验结束后要及时清理实验场地和器材，保证实验室的整洁和卫生。

微生物实验指导书实验一普通光学显微镜的使用维护一、实验目的：1、掌握显微镜的构造原理及性能。

2、纯熟掌握显微镜的操作方法3、初步了解血球计数板的使用方法。

二、实验原理：1、显微镜的实验原理：普通光学显微镜运用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。

它们由机械装置和光学系统两大部分组成。

在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。

而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。

与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这重要有如下二方面的因素：①增长照明亮度②增长显微镜的分辨率。

2、血球计数板的构造原理：血球计数板是一块特制的厚的载玻片，其上由四条竖槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短的横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格为计数室。

计数室的刻度有两种规格即16×25或25×16的。

现在常用25×16的，即计数室（一个大方格）提成25个中方格，每个中方格由分为16个小方格。

1、仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、血球计数板2、材料：擦镜纸、元葱四、实验环节：（一）显微镜练习：1、制片：用牙签挑少许元葱表皮放在载玻片上，然后加盖盖玻片。

2、观测：低倍镜高倍镜（二）血球计数板的练习：先用低倍镜查找中方格，再用高倍镜查找小方格，按照左上、左下、右上、右下、中心格练习。

实验二革兰氏染色法一、目的规定了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。

二、基本原理革兰氏染色反映是细菌分类和鉴定的重要性状。

它是1884年由丹麦医师Gram创建的。

革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观测到细菌的形态并且还可将所有细菌区分为两大类：染色反映呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表达；染色反映呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表达。