抗菌药物筛选的实验方法与技术教案ppt课件

抗菌药物筛选的实验方法与技术博哥(中山大学化学与化学工程学院，广州510275)摘要为了筛选出活性更好的抗菌药物，本实验采用微量稀释法通过体外实验对44种化合物进行了筛选，测定其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度或IC50来评定药物活性。

结果显示，样品1（环丙沙星）对二者有杀菌作用，最小抗菌浓度都为1.56 μmol·L-1。

样品30仅对大肠杆菌有杀菌作用，最小抗菌浓度为1.56 μmol·L-1。

样品17、19、20、24、26、28，表现出对大肠杆菌较好的抑制作用，其中抑制活性最好的为样品28(2,5-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺)，IC50值为1.72 μmol·L-1。

样品31、42表现出对金黄色葡萄球菌较好的抑制活性，IC50值分别为11.04 μmol·L-1和24.44 μmol·L-1。

关键词抗菌药物筛选体外实验微量稀释法1 引言一个新的化合物或分离提取的有效成分是否有抗菌作用，需要药理实验来证实。

一般采用体外实验方法，观察试验物对细菌有无杀灭作用或抑制作用。

药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。

因此，体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。

体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判断药物抗菌的广度和强度，为深入体外实验和体内药效研究提供数据。

但是，体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。

本实验进行微生物培养基的配置、灭菌与接种等操作，以熟悉细菌培养的过程，并采用微量稀释法通过体外实验对44种化合物进行了筛选，测定其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度或IC50来评定药物活性。

2实验部分2.1药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、胰蛋白胨、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl溶液、DMSO以44种化合物(见表1)。

抗菌药物筛选的实验方法与技术教案第一章：抗菌药物筛选概述1.1 抗菌药物的概念与作用1.2 抗菌药物的分类及代表药物1.3 抗菌药物筛选的重要性1.4 抗菌药物筛选的发展历程及趋势第二章：抗菌药物筛选实验方法2.1 纸片扩散法2.1.1 原理及操作步骤2.1.2 结果判定与分析2.2 微量肉汤稀释法2.2.1 原理及操作步骤2.2.2 结果判定与分析2.3 微量棋盘法2.3.1 原理及操作步骤2.3.2 结果判定与分析2.4 时间耐药法2.4.1 原理及操作步骤2.4.2 结果判定与分析第三章：抗菌药物筛选实验技术3.1 菌株的准备与鉴定3.1.1 菌株的来源与保存3.1.2 菌株的纯化与鉴定3.2 抗菌药物的准备与应用3.2.1 抗菌药物的来源与储存3.2.2 抗菌药物的应用方法3.3 实验数据的统计分析3.3.1 实验数据的收集与整理3.3.2 实验数据的统计方法及应用第四章：抗菌药物筛选实验中的常见问题及解决办法4.1 菌株的选择与鉴定问题4.2 抗菌药物的应用与浓度选择问题4.3 实验操作过程中的技术问题4.4 实验结果的判定与分析问题第五章：抗菌药物筛选实验的应用与实践5.1 临床抗菌药物筛选与应用5.1.1 临床抗菌药物筛选的流程与要求5.1.2 临床抗菌药物的应用原则与策略5.2 抗菌药物的研究与开发5.2.1 抗菌药物研究的基本方法与技术5.2.2 抗菌药物研发的趋势与挑战5.3 抗菌药物筛选实验在疫苗研究中的应用5.3.1 疫苗研究中的抗菌药物筛选问题5.3.2 抗菌药物在疫苗研究中的应用实例第六章：抗菌药物筛选实验的案例分析6.1 案例一：医院感染病原菌的抗菌药物筛选6.1.1 案例背景与目的6.1.2 实验方法与步骤6.1.3 结果分析与讨论6.2 案例二：新型抗菌药物的研究与筛选6.2.1 案例背景与目的6.2.2 实验方法与步骤6.2.3 结果分析与讨论第七章：抗菌药物耐药机制7.1 细菌耐药机制概述7.1.1 细菌耐药的定义与分类7.1.2 细菌耐药机制的主要类型7.2 常见的细菌耐药机制7.2.1 酶抑制剂的产生与作用7.2.2 药物靶点的改变与适应7.2.3 药物外排系统的功能与调控7.3 抗菌药物耐药机制的研究方法7.3.1 耐药机制研究的实验方法7.3.2 耐药机制研究的生物信息学方法第八章：抗菌药物筛选实验的优化与改进8.1 抗菌药物筛选实验的优化策略8.1.1 实验条件的优化8.1.2 实验方法的改进与创新8.2 实验技术的更新与发展8.2.1 自动化与智能化技术在抗菌药物筛选中的应用8.2.2 微流控技术在抗菌药物筛选中的优势与挑战8.3 抗菌药物筛选实验的未来发展趋势8.3.1 个性化医疗与精准抗菌治疗8.3.2 抗菌药物筛选与合成生物学的结合第九章：抗菌药物筛选实验在疫苗研究中的应用9.1 疫苗研究中的抗菌药物筛选问题9.1.1 疫苗与抗菌药物筛选的关系9.1.2 疫苗研究中的抗菌药物筛选挑战9.2 抗菌药物在疫苗研究中的应用实例9.2.1 抗菌药物在疫苗保护效果评估中的应用9.2.2 抗菌药物在疫苗载体研究中的应用第十章：总结与展望10.1 抗菌药物筛选实验方法的优缺点分析10.1.1 各种实验方法的优缺点对比10.1.2 实验方法选择与应用的建议10.2 抗菌药物筛选实验技术的发展趋势10.2.1 实验技术的创新与改进10.2.2 抗菌药物筛选实验在多领域的应用扩展10.3 对抗菌药物筛选实验的展望10.3.1 提高抗菌药物筛选的准确性与效率10.3.2 为抗菌药物的研究与临床应用提供有力支持重点和难点解析重点环节一：抗菌药物筛选的实验方法与技术补充和说明：在这一部分，学生需要理解并掌握各种抗菌药物筛选实验方法的原理、操作步骤和结果判定与分析。

抗菌药物筛选的实验方法与技术一、实验原理体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。

药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。

培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖成积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。

主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。

培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。

此外，为了满有微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。

按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。

固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂(常加1.5%-2%的琼脂)经融化冷凝而成。

半固体培养这是指在液体培养基中加入0.8％-1％左右的琼脂，经融化冷凝而成。

液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。

正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。

由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。

但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及接菌等基本环节大致相同。

微量稀释法常用于测定细菌对药物敏感性或新药对细菌的抗菌活性试验。

一般应用96孔微量稀释板，孔底呈U型，每孔容量为0.20-0.30ml。

本法操作较便，用培养基量少，可作大批量药敏试验。

二、材料与方法1，药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、胰蛋白胨、琼脂等。

1mol/L NaOH、1mol/L HCl溶液。

2，材料与仪器天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、超净工作台、酒精灯、移液器、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗、药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管、报纸、96孔板等。