植物激素的高效液相色谱

植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。

因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。

本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。

一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。

该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。

高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。

二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。

该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。

气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。

该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。

酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。

四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。

该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。

放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。

五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。

该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。

质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。

植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。

摘要植物激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的几类微量有机物质。

也被称为植物天然激素或植物内源激素。

它们在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长、发育与分化。

由于它在植物体内含量甚微，一般水平为1000 ng/g鲜重，建立一种有效，简便的检测方法对于研究植物激素具有指导性意义。

目前植物激素的定性和定量分析主要以理化方法为主，理化测试法包括气相色谱法、液相色谱法、气象－质谱联用等。

本次研究是利用高效液相色谱法来检测植物体内的酸性激素，即吲哚乙酸IAA,吲哚三丁酸IBA，赤霉素GA3,以及脱落酸ABA。

以HPLC进行分析测试，非常适合用于分析那些不能汽化或者在易于裂解不稳定的物质，用HPLC分析植物激素（IAA、IBA、GA3、ABA），采用二极管阵列检测器检测，本次研究的前处理方法为固相萃取法。

通过本次实验，得到了一种简便易操作的前处理方法，找到了液相色谱的最佳工作条件，并通过检测实际样品，证明了该方法是一种有效可行的植物酸性激素的定性定量分析方法。

关键字：植物激素，提取，高效液相色谱。

AbstractPlant hormone is several kinds of trace of organic matter that synthesized in the plant,and it have significant effect on plant growth. They separately or coordinatively regulate of plant growth, development and differentiation. Because it is a trace contect in plants and general level, 1000 ng / g in fresh weight. Therefore, the establishment of an effective and simple detection method for the study of plant hormones is very significant.Present plant hormones qualitative and quantitative analysis mainly based on physical and chemical methods, physical and chemical testing methods including GC, HPLC, GC-MS.with high performance liquid chromatography, the acidic hormones of IAA, indole-3 butyric IBA, gibberellic acid GA3, and ABA in plants are detected. It is suitable for the analysis of those which do not vaporize easily at high temperatures by HPLC. Analysis of plant hormones (IAA, IBA, GA3, ABA), usually use UV monitor testing, and this study of pre-treatment method for solid phase extraction.A simple and easy pre-treatment methods was established, and found the best conditions for liquid chromatography.With detecting the actual samples, Iit shows that it is the feasible and effective method of the acidic hormones analysis .Key words: plant hormones, extraction, detection, HPLC.目 录第一章 前 言 (1)1.1 植物激素的研究背景与意义 (1)1.2 植物激素的种类及性质 (1)1.2.1植物激素概述 (1)1.2.2植物激素——生长素 (2)1.2.3植物素——赤霉素 (3)1.2.4植物激素——细胞分裂素 (4)1.2.5植物激素——脱落酸 (4)1.2.6植物激素——乙烯 (4)1.3液相色谱法的研究 (5)1.3.1液相色谱仪 (5)1.3.2 液相色谱法的主要类型 (8)第二章 实验材料与方法 (11)2.1仪器与试剂 (11)2.2 实验方法 (11)2.2.1 芽样品激素含量的测定 (12)2.2.2种子样品激素含量的测定 (12)2.2.3 C18柱系统的处理及使用（需临时处理） (12)2.2.4 高效液相色谱分析 (12)2.2.5溶液的配制 (13)2.2.6 标准曲线的测定 (14)2.2.7 稳定性实验 (15)2.2.8回收率的测定 (16)2.2.9 检出限的测定 (16)第三章 实验结果与讨 (17)3.1标准曲线的绘制 (17)3.1.1 IAA标准曲线的绘制 (17)3.1.2 IBA标准曲线的绘制 (17)3.1.3 ABA标准曲线的绘制 (18)3.1.4 GA3标准曲线的绘制 (19)3.2稳定性实验 (20)3.3 实际样品激素含量测定 (21)3.4回收率的测定 (22)3.4.1 GA3回收率谱图 (22)3.4.2 IAA回收率谱图 (23)3.4.3 ABA回收率谱图 (24)3.4.4 IBA回收率谱图 (24)3.5 检出限的测定 (25)第四章 结论 (27)参考文献 (28)致谢 (30)第一章前言1.1 植物激素的研究背景与意义植物激素是存在于植物体内的具有调节植物生长发育作用的微量元素。

植物激素的高效液相色谱高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。

分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。

（二）塔板理论：塔板理论方程式（高斯方程式）：理论塔板式数：理论塔板高度：（三）速率理论： h=a+b/u+cu影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗二、气相色谱仪：（1）色谱柱：固定相与柱管组成。

填充柱、毛细管柱；分配柱、吸附柱（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。

甲基硅油、聚乙二醇等选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。

（3）载体：化学惰性的多孔性微粒（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器2、质量型检测器：氢焰离子化检测器中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。

第四节高效液相色谱法1、基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。

分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。

2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。

按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。

用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。

极性强组分先流入反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物2、高效率液相色谱仪：1、高压输液泵2、色谱柱3、进样阀4、检测器：紫外稀释检测器、荧光检测器、热法折光检测器、电化学检测中国药典对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。

四川农业大学学报　1997年　15　(3):297—299J .Sichuan Agric.Univ. 1997-01-24收稿。

高效液相色谱测定多种植物内源激素方法研究 谢　君 (四川农业大学分析测试中心/雅安市625014)摘 要　研究高效液相色谱法测定赤霉素(GA 3)、3-吲哚乙酸(IAA )、脱落酸(ABA )、玉米素(ZT )和激动素(KT )等五种植物激素的条件;采用Spherso rbC 18柱,乙腈-甲醇-0.6%乙酸流动相,检测波长254nm;建立了一种从植物中提取五种激素的样品处理方法,实际分析了植物样。

关　键　词　植物激素[45N D,49LD]　高效液相色谱中图分类号　O657.72;Q946.885引　言 植物内源激素的研究是植物生理学领域中的重要内容之一,植物的内源激素与植物生长发育的基本规律和代谢过程的调节控制都密切相关。

因此植物内源激素的准确测定,对植物生命活动和作物遗传育种栽培领域的研究具有重要的意义。

高效液相色谱(HPLC)是较理想的植物内源激素分析方法,由于在联合测定植物组织抽提液中的多种内源激素时,经常见到分离差、峰型不良及严重拖尾现象,因此选择合适的内源激素提取方法和色谱条件较为重要。

本研究采用反相HPLC 法探讨了GA 3、IAA 、ZT 和K T 等五种植物内源激素联合测定的色谱分析条件,并获得满意的分离结果。

有关HPLC 分析植物内源激素,多见于GA 3、IAA 、ABA 的联合测定[1-4],而五种激素的联合分析尚未见报道。

1实验部分1.1仪器与试剂 日本岛津LC -6A HPLC 系统,包括LC-6A 高压溶剂输送泵;SPD-6AV 紫外可见检测器;LC-6A 系统控制器;C-R3A 色谱处理器;C TO-6A 柱温箱;旋转蒸发器;0.3μm 超微滤膜;萃取装置;直型层析柱等。

GA 3、IAA 、ABA 标准品均由FLUK A 公司提供;ZT 、K T 由中国科学院上海生物化学研究所提供;石油醚(30-60℃)、Ca-CO 3为优级纯;其它试剂均为分析纯;乙腈为色谱纯,甲醇为AR 重蒸;实验用水均为二次蒸馏水。

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量摘要:利用超高效液相色谱法同时测定柑橘(Citrus reticulate Bance)果肉中的玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸的含量｡以C8色谱柱,甲醇-0.1%冰乙酸为流动相梯度洗脱,检测波长为262 nm,流速0.22 mL/min｡结果表明, 玉米素含量在0.14~0.38 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 5,平均回收率为98.7%,RSD为0.99%;赤霉素含量在0.67~1.79 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 3,平均回收率为98.6% ,RSD 为0.70%;吲哚乙酸含量在0.25~0.67 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 6,平均回收率为99.0% ,RSD为0.68%;脱落酸含量在0.036~0.096 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 9,平均回收率为99.1% ,RSD为0.61%｡该方法简便､快速､精密度高､准确性好,可用于植物样品中激素含量的测定｡关键词:柑橘(Citrus reticulate Bance);植物激素;超高效液相色谱法Determination of Four Endogenous Hormones in Orange Pulp by UPLC Abstract: Determination of four endogenous hormones such as zeatin (ZT), gibberellin (GA), indole acetic acid (IAA) and abscisic acid (ABA) was proceeded by UPLC. The method used a C8 column, and adopted the gradient elution method with methanol-0.1% acetic acid as mobile phase and the UV detection wavelength was 262 nm, and flow rate was 0.22 mL/min. The calibration curve of ZT was linear between 0.14 μg/mL and 0.38 μg/mL, R2 was 0.999 5, the average recovery was 98.7%, and RSD was 0.99%.The calibration curve of GA was linear between 0.67 μg/mL and 1.79 μg/mL, R2 was 0.999 3, the average recovery was 98.6%, and RSD was 0.70%.The calibration curve of IAA was linear between 0.25 μg/mL and 0.67 μg/mL, R2 was 0.999 6, the average recovery was 99.0%, and RSD was 0.68%. The calibration curve of ABA was linear between 0.036 μg/mL~0.096 μg/mL, R2 was 0.999 9, the average recovery was 99.1%, and RSD was 0.61%. This method was proved to be simple, precise, accurate and could be used for the quality control of hormone content in the plant samples.Key words: Orange pulp(Citrus reticulate Bance); plant hormone; UPLC植物性内源激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的微量有机物,其生理效应复杂多样,对植物生长发育有重要的调节控制作用[1,2]｡吲哚乙酸､赤霉素､脱落酸､玉米素是植物体广泛存在的植物激素,本研究运用超高效液相色谱(UPLC)法同时测定柑橘中这4种内源激素,利用UPLC超高分离度､快速､超高灵敏度的优点,解决传统HPLC在植物激素分析中存在的分离度差,分析时间较长的缺点｡本研究建立了植物内源激素高效､稳定､准确的分离和测定方法,为植物内源激素调节其营养生理与生长的研究提供支撑｡吲哚乙酸(IAA)是一种植物体内普遍存在的含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素,属吲哚类化合物,又名生长素,其基本作用在于调节植物生长;赤霉素(GA)是一类属于双萜类化合物的植物激素,典型生理作用是能促进枝条的生长,尤其是能促进无伤害植物的整体生长;脱落酸(ABA)是一种具有倍半萜结构的抑制生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,具有加速植物器官脱落,抑制整株植物或离体器官的生长,并对细胞的分裂与生长起抑制等作用;玉米素(Zeatin)是一种天然的细胞分裂素,化学名称为6-(4羟基-3-甲基-2-反丁烯基)氨基嘌呤,它是从甜玉米灌浆期的子粒中提取并结晶出的第一个天然细胞分裂素,能刺激植物细胞分裂,促进叶绿素形成,加速植物新陈代谢和蛋白质的合成,从而达到有机体迅速增长,促使作物早熟丰产,提高植物抗病抗衰抗寒能力｡1 材料与方法1.1 仪器和试剂ACQUITY Uitra Performance LC超高效液相色谱系统,Empower色谱工作站,检测器:PDA eλ Detector紫外检测器(Waters公司);台式系列数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)｡玉米素标准品(Sigma公司,纯度87.0%);赤霉素标准品(SUPELCO公司,纯度96.5%);吲哚乙酸(Riedel-de Haen公司,纯度99.0%);脱落酸(Sigma公司,纯度99.0%);甲醇(色谱纯);冰乙酸(分析纯);超纯水;C18柱(500 mg/6 mL,美国赛分科技公司)｡1.2 实验方法1.2.1 样品采集实验所用的柑橘样品均采自广西全州｡在不同时间共采集6组样品｡摘取生长中的柑橘果实,迅速放入冰盒中带回实验室,-20℃保存备用｡1.2.2 色谱条件色谱柱:ACQUITYUPLCRBEH130 C8,1.7 μm(2.1×50 mm);流动相:甲醇-0.1%冰乙酸梯度洗脱;流速0.22 mL/min;检测波长为262 nm;柱温为25 ℃｡1.2.3 标准溶液的制备分别精密称取玉米素､赤霉素､吲哚乙酸､脱落酸标准对照品0.12､0.28､0.21､0.15 mg置于50 mL容量瓶中,50%甲醇溶解定容,配制浓度分别为2.4､5.6､4.2､3.0 μg/mL的标准储备溶液｡1.2.4 样品溶液的制备称取已匀浆的柑橘果肉5.000 0 g置于25 mL容量瓶中,用80%甲醇溶解,冰水浴超声45 min,取出恢复常温后,80%甲醇定容,过滤,取过滤液10 mL于10 mL分度比色管,氮吹去除甲醇,残留液于C18柱中脱色,用6.0 mL 流动相分3次洗脱,用10 mL分度比色管收集所有从C18柱的流出液,流动相定容至8.0 mL,用0.22 μm有机滤膜过滤,滤液即为待测液｡1.2.5 四种植物激素混合标准曲线的制备分别吸取玉米素､赤霉素､吲哚乙酸及脱落酸标准储备溶液0.6､0.8､1.0､1.2､1.4､1.6 mL于6个10 mL容量瓶中,流动相定容至刻度,依次进样,进样体积为5.0 μL｡2 结果与分析2.1 提取方法的确定据文献报道,玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸4种激素可采用67%的丙酮水溶液[1]､0.5 moL/L NaOH溶液[3]､80%甲醇水溶液[4]等溶剂提取,石油醚､乙酸乙酯､PVP和C18柱等方式净化,根据4种激素对时间和热不稳定[4],易发生降解反应,所以在实验操作过程中应注意控制时间及温度,本试验通过对不同的提取溶剂,提取方式(超声提取､过夜浸提)､提取时间､提取次数分别做单因素考察实验,最终确定以80%甲醇为提取剂,冰水浴超声提取45 min,C18柱净化为最佳实验条件｡2.2 色谱条件的选择2.2.1 色谱柱的选择植物样品中含杂质量较多,分离难度较大｡UPLC选用粒径低于2 μm的小颗粒作为填料,比普通HPLC有更高的分离度､灵敏度和分析速度,因此对分离测定植物样品中的4种激素具有较大的优势｡本实验选用ACQUIY UPLC BEH130 C18 1.7 μm(2.1×100 mm)､ACQUIY UPLC BEH C8 1.7 μm(2.1×50 mm)和ACQUIY UPLC BEH C18 1.7 μm(2.1×50 mm)分别对样品进行分离测定,结果显示用ACQUIY UPLC BEH C8 1.7 μm(2.1×50 mm)能够对样品进行很好的分离｡2.2.2 波长的选择将4种激素的混合标准溶液于ACQUITY超高效液相色谱系统上进行测定,PDA紫外检测器对其进行光谱扫描,最大吸收光谱的波长分别为:玉米素(ZT)在204 nm和271 nm有吸收峰,赤霉素(GA)在192 nm和252 nm有吸收峰,吲哚乙酸(IAA)在218 nm和279 nm有吸收峰,脱落酸(ABA)在194 nm和261 nm有吸收峰｡将4种激素的混合标准液分别在以上多个波长下进行测定,发现在波长为262 nm下标准混合液出峰基线毛刺少且峰形较好,玉米素､吲哚乙酸和脱落酸的峰面积为最高,赤霉素峰面积也变化较少,所以本实验采用262 nm为4种激素的检测波长｡4种激素的吸收光谱图见图1｡2.2.3 流动相的选择根据4种激素的特性及植物样品所含的杂质量,通过对各种流动相如甲醇-水､乙腈-水､甲醇-乙酸-水､乙腈-乙酸-水等不同溶液系统的尝试,最终选用甲醇和0.1%冰乙酸-水溶液为流动相｡经反复试验后,发现甲醇和0.1%冰乙酸-水溶液在梯度洗脱的条件下,各组分分离较好,且各峰峰型较好,分析时间也较短｡4种激素保留时间合适,色谱图见图2;流动相比例见表1｡2.3 线性关系以对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,将所得数据绘成标准曲线,玉米素线性方程为:Y=593.810X-43.469,R2=0.999 5,线性范围0.14~0.38 μg/mL;赤霉素线性方程为:Y=48.948X-19.105,R2=0.999 3,线性范围0.67 ~1.79 μg/mL;吲哚乙酸线性方程为:Y=315.500X-43.471,R2=0.999 6,线性范围0.25~0.67 μg/mL;脱落酸线性方程为:Y=6 481.000X-136.610,R2=0.999 9,线性范围0.036~0.096 μg/mL｡结果见图3-图6｡2.4 精密度试验精密吸取玉米素､赤霉素､脱落酸和吲哚乙酸混合标准溶液各5.0 μL,重复进样5次,测定峰面积,玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸标准溶液峰面积的RSD分别为0.39%､0.47%､0.29%､0.25%｡表明方法精密度良好｡2.5 重复性试验同一批柑橘样品取样5份,按1.2.4操作,依法测定,计算玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸的含量,RSD分别为3.64%､2.48%､2.78%､3.15%｡表明方法重复性良好｡2.6 回收率试验称取已知含量的样品9份,加入玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸标准溶液5.0､7.5､10.0 mL各3份,按1.2.4进行操作测定,计算回收率,结果(表2-表5)表明,回收率在98.6%~99.1%,RSD在0.61%~0.99%,表明方法回收率较好｡3 小结与讨论以80%甲醇为提取剂,冰水浴超声提取45 min,C18柱净化为最佳实验条件,甲醇和0.1%冰乙酸为流动相,流速0.22 mL/min梯度洗脱,UPLC系统对样品进行测定,样品中4种激素能在7 min之内达到较好的分离｡充分利用了超高效液相色谱的优点与有利条件,建立的方法简单可靠,进一步拓宽了液相色谱在植物激素测定方面的应用｡参考文献:[1] 刘贤明,梁锦添,秦绪雄.用高效液相色谱分析植物内源激素吲哚-3-乙酸､脱落酸和玉米素[J].色谱,1996,8(1):340-341.[2] 陈小鹏,王秀峰,孙小镭,等.高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素和脱落酸含量[J].山东农业科学,2005(1):65-67.[3] 郑春霞,王强,阮晓.HPLC分离测定香梨三种植物激素[J].新疆农业大学学报,2000,23(1):54-56.[4] 陈波浪,郑春霞,盛建东,等. HPLC分离和测定棉花中3种植物激素[J].新疆农业大学学报,2006,29(1):28-30.。

高效液相色谱法同时分离测定仁用杏花芽中8种植物激素杨途熙　魏安智*　郑元　杨恒　杨向娜　张睿(西北农林科技大学林学院,杨凌712100)摘　要　采用Shi m -Pa rk C 18V P -ODS 色谱柱(150mm ×4.6mm ,5μm )、岛津SPD -10A VP UV -检测器,以V (甲醇)∶V (0.075%冰乙酸水溶液)=45∶55为流动相,在流速0.7mL /m in 、柱温30℃、检测波长254n m 的条件下,同时分离测定了仁用杏花芽中的腺素、玉米素、赤霉素、生长素、6-苄氨基嘌呤、秋水仙素、脱落酸和吲哚-3-丁酸8种植物激素。

各峰的分离效果理想,加标回收率达到95.41%～103.48%;测量灵敏度达0.0001vo lt ;精密度RSD %<0.1。

关键词　高效液相色谱,仁用杏,花芽,植物激素　2006-12-29收稿;2007-04-28接受本文系陕西省重大科技专项计划(No .2006k z 09-G6)资助项目*E -m ail :w eianzhi @126.co m1　引　言植物激素调控着植物的萌发、生长、分化、发育、开花、果实成熟和器官老化等生活周期的各个方面[1,2]。

用H PLC 法测定植物多种内源激素时经常发生分离差、峰型不良及严重拖尾现象[3]。

因此,选择合适的植物激素提取方法和色谱条件尤为重要。

目前大多H PLC 法只能同时测定3～5种植物激素[4,5]。

本研究建立了同时分离测定仁用杏花芽中8种激素含量的高效液相色谱方法。

2　实验部分2.1　实验材料仁用杏花芽于2006年3月采自陕西省岐山县仁用杏试验园中,采集后立即在液氮中冷冻保存。

2.2　仪器和试剂SCL -10A VP 高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括SPD -10A VP UV -检测器、C lass -VP 液相色谱工作站、KQ -100DE 型超声波脱气机、pHS -3B 型精密pH 计和SE NCO R 系列旋转蒸发器。

橡胶树胶乳中几种植物激素的提取及其高效液相色谱测定法王斌１　，２褚君强１，２史发猛１，２，林位夫２１海南大学农学院，海南儋州５７１７３７２中国热带农业科学院橡胶研究所，海南儋州５７１７３７对胶乳中玉米素（ＺＴ）、赤霉素（ＧＡ）、生长素（ＩＡＡ）和脱落酸（ＡＢＡ）等４种植物激素进行分离和纯化，用８０％预冷甲醇浸提，离心，离心后的上清液减压蒸发至水相，调节ｐＨ后用固相萃取柱进一步纯化，首先洗脱下ＧＡ、ＩＡＡ和ＡＢＡ，再洗脱下ＺＴ。

对ＺＴ采用等度洗脱，流动相为甲醇和０．５％的乙酸（２０／８０　ｖ／ｖ），分析时间为１０　ｍｉｎ，ＺＴ在等度洗脱条件下的出峰时间（ｍｉｎ）是５．４２６，回收率是８７％；对ＧＡ、ＩＡＡ和ＡＢＡ采用梯度洗脱，流动相为甲醇和０．５％的乙酸（２０／８０ｖ／ｖ），分析时间为３４　ｍｉｎ，ＧＡ、ＩＡＡ和ＡＢＡ在梯度洗脱条件下的出峰时间（ｍｉｎ）分别为：１３．３７７、１６．５８１和１８．９８８，回收率分别为７０％、８２％和９２％。

由于对这４种激素分别检测，从而降低了每份样品中杂质的浓度，取得了良好的分离、检测效果。

研究结果表明，试验重现性好，整个提取流程简便，适合胶乳中内源激素的分离与测定。

橡胶树；胶乳；植物激素；ＨＰＬＣＳ７９４．１ＡＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　４　Ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｉｎ　Ｌａｔｅｘ　ｏｆ　 Ｈｅｖｅａ　ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ　ｂｖ　ＨＰＬＣＷＡＮＧ　ＢｉｎＺＨＵ　ＪｕｎｑｉａｎｇＳＨＩ　ＦａｍｅｎｇＬＩＮ　Ｗｅｉｆｕ１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．　１０００－２５６１　．２０１２．０１．０３０２０１１－１１－２０２０１２－０１－０７国家自然科学基金（橡胶树胶乳中植物激素平衡与橡胶树死皮发生的关系研究Ｎｏ３０７６０１０７）。

王斌（１９８４年－），男，硕士生。

研究方向：橡胶树栽培生理。

－　１４９　－第３３卷＠＠［１］范思伟，杨少琼．巴西橡胶的乙烯生理学［Ｊ］．热带农业科学， １９９１　（３）：　６９－７７．＠＠［２］范思伟，杨少琼．巴西橡胶的乙烯生理学（下）［Ｊ］．热带农业科 学，１９９１（４）：　７５～８５．＠＠［３］王国烘，陈定胜．关于使用乙烯利刺激采胶的几个问题［Ｊ］．福 建热作科技，１９９４，　１９（４）：　２４－２９．＠＠［４］刘惠芳，吴继林，郝秉中．茉莉酸和其它激素对巴西橡胶树乳 管分化的协同作用［Ｊ］．热带作物学报．２００１，２２（３）：　６－１５．＠＠［５］曾日中，白先权，黎瑜，等．外源茉莉酸诱导巴西橡胶树乳 管分化的酶学研究［Ｊ］．热带作物学报，２００１，　２２（３）：　１７－２３．＠＠［６］　Ｈａｏ　Ｂｉｎｇｚｈｏｎｇ，Ｗｕ　Ｊｉｌｉｎ．　Ｌａｔｉｃｉｆｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ．　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｊａｓｍｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ［Ｊ］．　Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ．　２０００（８３）：　３７－４３．＠＠［７］　Ｈａｆｓａｈ　Ｊａ＇ａｆａｒ．生长物质在橡胶栽培中的实际应用［Ｊ］．热带作 物译丛，１９８１（３）：　８－１０．＠＠［８］　Ｓｅｏｎｏｍａｒｔｏ．用激素处理橡胶芽接桩［Ｊ］．热带作物译丛，１９８４ （５）：１８．＠＠［９］马来西亚橡胶研究院．植物激素在控制橡胶树生长中的作 用［Ｊ］．热带作物译丛，１９８０（１）：　２０－２２．＠＠［１０］吴维林，谭海燕，田维敏，等．外施脱落酸和赤霉素对海南岛 落叶林木韧皮部的作用［Ｊ］．热带作物学报，１９９７，１８（２）：　１－９．＠＠［１１］曹建华，林位夫．巴西橡胶树砧木与接穗间的相互影响－内源激 素［Ｄ］．儋州：华南热带农业大学，２００３．＠＠［１２］　Ｚｈｅｎ　Ｍａ，　Ｌｉｙａ　Ｇｅ，　Ｓｗｅｅ　Ｎｇｉｎ　Ｔａｎ，　Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｌａｓｓｅｓ　ｏｆ　ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｉｎ　ｃｏｃｏｎｕｔ　（Ｃｏｃｏｓ　ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｌ）ｗａｔｅｒ　ｕｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｆｔｅｒ　ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．　ａｎａｌｙｔｉｃａ　ｃｈｉｍｉｃａ，　２００８（４）：　２３－２６．＠＠［１３］高桂枝，俆爱军，虞梅，等．高效液相色谱切变波长法测定 艾蒿中内源激素［Ｊ］．现代农业科技，２００７（３）：　９－１１．＠＠［１４］胡建斌，李建吾，孙守如．薯蓣中内源激素的提取及高效液相 色谱测定法［Ｊ］．植物生理学通讯，２００７（６）：　５２９－５３２．＠＠［１５］杨途熙，魏安智，郑元，等．高效液相色谱法同时分离测定 仁用杏花芽中８种植物激素［Ｊ］．分析化学研究简报，２００７（９）： １　３５９－１　３６１．＠＠［１６］陈建华，曹阳，李昌珠，等．板栗内源激素的高效液相色谱 测定方法［Ｊ］．中南林学院学报，２００４（１０）：　３９－４１．＠＠［１７］黄镜浩，马蔚红，武红霞，等．杧果无胚果实内源激素的分离 与测定［Ｊ］．福建果树，２００８（１）：　１－４．＠＠［１８］王若仲，萧浪涛，蔺万煌，等．亚种间杂交稻内源激素的高效 液相色谱测定法［Ｊ］．色谱，２００２（３）：１４８－１５０．＠＠［１９］曾庆钱，陈厚彬，鲁才浩，等．ＨＰＬＣ测定荔枝不同器官中内 源激素流程的优化［Ｊ］．果树学报，２００６（２３）：　１４５－１４８．橡胶树胶乳中几种植物激素的提取及其高效液相色谱测定法作者：王斌， 褚君强， 史发猛， 林位夫， WANG Bin， ZHU Junqiang， SHI Fameng， LIN Weifu作者单位：王斌,褚君强,史发猛,WANG Bin,ZHU Junqiang,SHI Fameng(海南大学农学院,海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所,海南儋州571737)， 林位夫,LIN Weifu(中国热带农业科学院橡胶研究所,海南儋州,571737)刊名：热带作物学报英文刊名：Chinese Journal of Tropical Crops年，卷(期)：2012,33(1)1.范思伟;杨少琼巴西橡胶的乙烯生理学 1991(03)2.范思伟;杨少琼巴西橡胶的乙烯生理学,(下) 1991(04)3.王国烘;陈定胜关于使用乙烯利刺激采胶的几个问题 1994(04)4.刘惠芳;吴继林;郝秉中茉莉酸和其它激素对巴西橡胶树乳管分化的协同作用[期刊论文]-热带作物学报2001(03)5.曾日中;白先权;黎瑜外源茉莉酸诱导巴西橡胶树乳管分化的酶学研究 2001(03)6.Hao Bingzhong;Wu Jilin Laticifer differentiation in Hevea brasiliensis.induction by exogenous jasmonic acid and linolenic acid 2000(83)7.Hafsah Ja'afar生长物质在橡胶栽培中的实际应用 1981(03)8.Seonomarto用激素处理橡胶芽接桩 1984(05)9.马来西亚橡胶研究院植物激素在控制橡胶树生长中的作用 1980(01)10.吴维林;谭海燕;田维敏外施脱落酸和赤霉素对海南岛落叶林木韧皮部的作用 1997(02)11.曹建华;林位夫巴西橡胶树砧木与接穗间的相互影响-内源激素 200312.Zhen Ma;Liya Ge;Swee Ngin Tan Simultaneous analysis of different classes of phytohormones in coconut (Cocos nucifera L)water using high-performance liquid chromatography and liquid chromatography-tandem mass spectrometry after solidphase extraction 2008(04)13.高桂枝;俆爱军;虞梅高效液相色谱切变波长法测定艾蒿中内源激素[期刊论文]-现代农业科技 2007(03)14.胡建斌;李建吾;孙守如薯蓣中内源激素的提取及高效液相色谱测定法 2007(06)15.杨途熙;魏安智;郑元高效液相色谱法同时分离测定仁用杏花芽中8种植物激素[期刊论文]-分析化学 2007(09)16.陈建华;曹阳;李昌珠板栗内源激素的高效液相色谱测定方法 2004(10)17.黄镜浩;马蔚红;武红霞杧果无胚果实内源激素的分离与测定[期刊论文]-福建果树 2008(01)18.王若仲;萧浪涛;蔺万煌亚种间杂交稻内源激素的高效液相色谱测定法 2002(03)19.曾庆钱;陈厚彬;鲁才浩HPLC测定荔枝不同器官中内源激素流程的优化 2006(23)本文链接：/Periodical_rdzwxb201201030.aspx。