维生素C含量的测定实验报告
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维生素C含量测定
一、实验目的
掌握用2,6-二氯酚靛酚测定维生素C的原理和方法。
二、实验原理
1.维生素C有强的还原性,在中性和微酸中,呈蓝色的染料2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2,6-二氯酚靛酚,同时自身被氧化脱氢抗坏血酸。在维生素C全部氧化后,再滴下的2,6-二氯酚靛酚将立即使溶液呈粉红色。
2.本实验采用2,6-二氯酚靛酚滴定分析,由于提取液中的其他还原性物质还原2,6-二氯酚靛酚速度较慢,故可将滴定过程控制在2min之内,并判断终点以红色15~30S内消失为准。
三、仪器与试剂
维生素C标准液,维生素C样液,0.1mg/ml2,6-二氯酚靛酚溶液,1/1000mol/l碘酸钾,甲醛醋酸缓冲液,2%草酸溶液,1%淀粉,6%KI溶液
四、实验步骤
1.标准维生素C的标定:吸取标准维生素C溶液5ml放入三角瓶,加入6%KI溶液0.05mlt和1%淀粉5滴。用微量管以碘酸钾液进行滴定,每滴下1滴既充分摇匀,滴至出现微青蓝色为止,记下计数Vc1,求出标准维生素C的含量。
2.维生素C样液的滴定:取三个三角瓶标记为A,B和C。
编号 A B C
样品维生素C样液 10 10 -
维生素C标准液 - - 1 甲醛醋酸缓冲液 - 1 -
2%草酸溶液 - - 9
以标定的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定,并记录下所消耗的体积V1、V2、V3
V1——表示维生素C和非维生素C的其他还原性性质总共消耗
V2——表示非维生素C的还原性物质的消耗
五、实验结果与讨论
每100g样品还原型维生素C的量(mg)=((V1-V2)*C*V*100)/A
测得:V1=0.200ml V2=0.140ml Vc1=0.440ml Vc2=2.30ml
标准维生素C含量C1=(0.440*0.88)/5=0.0078mg/ml
分析:标准维生素C液中有部分氧化。
样品维生素C含量=(0.200-0.140)*5*100*C/3=0.078mg
1ml2,6-二氯酚靛酚溶液所能氧化维生素C的毫克数C=C1/Vc2=0.0339mg
分析:一般猪肉中,100g所含的维生素C约在0.1mg,本实验所求得的维生素C含量为0.0339,比正常水平明显要低,造成的原因可能是:1、吸取样品液前未对样液进行摇匀,造成吸取的样液局部浓度偏低,测出来的含量也就偏低;2、用2,6-二氯酚靛酚滴定标准维生素C溶液时,由于产生的粉红色难以判断出来,另外滴定过程中,仪器难以控制,造成2,6-二氯酚靛酚消耗量偏少,则计算C(1ml2,6-二氯酚靛酚溶液所能氧化维生素C的毫克数)偏低,造成所测量得的样液维生素C含量偏低。因此,为了能取得更好的实验结果,本实验应进行重复多次的平行实验。
六、思考题
1.2,6-二氯酚靛酚溶液滴定法测定维生素C含量有何优缺点?测定误差是否大? 答:2,6-二氯酚靛酚溶液滴定法是测定维生素C的经典方法,此法优点是简便,快速,准确地测量出维生素C的含量,但同样其存在很多缺点:1、生物组织中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸同样有维生素C的生理作用,用此法测不出来;2、生物材料提取液中含有其他还原性物质,也可使2,6-二氯酚靛酚溶液还原脱色而而引起误差;3、提取液中常存在的色素类物质干扰滴定终点观察,所以在选材时应选用无色,绿色或浅黄色等,当取材为紫色等时,可用活性炭,白陶土脱色处理。
实验应迅速滴定,防止维生素C被氧化。若不迅速,操作不当,都会使测定误差大,另外吸取维生素液时要适当,滴定的消耗液在0.3~1.60ml为最佳。总体而言,本实验误差不大。