黄芪多糖对猪免疫功能的影响
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南 放房廛 2014年第4期(总第182期) doi:lO.3969/j.issn.1006-4907.2014.04.003 黄芪多糖对猪免疫功能的影响 刘新义’,陈斌’,冯小花 ,蔡文杰 (1.湖南农业大学动物科技学院,湖南长沙410128;2.湖南省畜牧兽医研究所,湖南长沙410131) 摘 要:为了进一步考察黄芪多糖(黄芪提取物)对猪免疫功能的影响,本试验于猪瘟疫苗免疫前后15日,对5O头65 日龄的健康外三元杂交猪分组。按不同剂量添加饲喂黄芪多糖可溶性粉,饲喂时间为1个月:并于饲喂后分两 次进行耳静脉采血.采用猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测法检测猪体内抗体水平,得出了在日粮中添加黄芪多 糖的猪体内抗体水平明显高于空白对照组,且添加量为日粮0.2%的黄芪多糖可溶性粉的试验组抗体水平最 高。该试验证实了黄芪多糖对猪的免疫功能具有明显的增强效果。 关键词:黄芪多糖;抗体检测;免疫增强剂;猪 中图分类号:¥858.28 文献标识码:A 免疫增强剂是一类单独或与抗原同时使用通 过非特异性途径增强机体免疫应答的物质。它有 文章编号:1006-4907(2014)04—0007—04 利于加强机体的免疫功能,缓解由环境应激造成 的免疫功能紊乱,有利于预防和治疗传染性及条 螨虫成虫、幼虫有很好的杀灭效果,但是对于虫卵 却难以杀灭,7天后有大量虫卵孵化为成虫田j,因 此必须以1周为1疗程,重复用药3次以上才能 彻底消灭螨虫 ,中药虽然对螨虫成虫、幼虫、虫卵 都有杀灭作用嘲,这也是中药制剂比伊维菌素治愈 疗程短的主要原因,但由于试验时未进行全身药 浴和涂擦给药,只在患部及周围涂擦,这可能导致 无病变部位已有螨虫转移,故疗程在2周左右。 4讨论 4.1关于螨病的临床用药 在临床用药上,兔螨病要早诊断、早治疗,对 病兔给药治疗和兔舍等周围环境彻底消毒双管齐 下126],中药具有良好的杀螨效果和治疗作用 ,因 此用药时尽量选用高效低毒、无残留、不易产生耐 药性的中药制剂,如本试验已经证明的花椒制剂 就是较为理想的治疗药物;中药制剂杀虫药宜现 用现配,以免影响疗效;外用中药涂擦螨病患部 时,应先将患部被毛剪掉,用温肥皂水或O.5%来 苏儿等清洗患部以除去污垢和痂皮并消毒128],待患 部清洗药液风干后再涂治疗用中药制剂,使药液 能确实渗人与螨虫充分接触,以达到杀螨效果。 4.2关于中药的毒性反应 虽然伊维菌素是一种较为理想的螨病杀虫 剂,然而相比于中药制剂,其毒副作用更大,治疗 周期更长,中药制剂治疗螨病以被广泛应用,但必 须注意的是中药制剂虽然高效低毒,如果过量摄 入或蓄积仍然可以引起中毒,特别是消化道摄入 时更易引起。因此用药时要防止动物舔舐,最好佩 戴项圈,以防中毒。 4.3关于中西结合治疗螨病 为了提高治疗效果,在临床实践中可以用伊 维菌素等西药注射配合中药制剂外用进行中西结 合治疗,变单味中药人药为多味中药组方协同作 用治疗。 口 参考文献: [1】宋晓平,于三科,张为民,等.杀螨植物药及其有效部位 的离体筛选试验【J].西北农林科技大学学报(自然科学 版1,2002,f6):69—72. [2】田浪,王红宁,袁斌,等.长毛兔疾病流行病学调查及防 治建议[J1.中国养兔杂志,2005,f1):5—7. [3】法林荣.家兔疥癣病的防治【J】.云南畜牧兽医,2001,(4):40. 【4] Strong L.Overview:the impact of avermectins on pastureland ecologyO].Vet Parasitol,1993,48(1_4):3—17. 【5]巩忠福.博落回杀螨活性成分的研究[D].西北农林科技 大学,2002. (6】阮娜.杀螨中药筛选与丁香杀螨活性成分研究[D】.西北 农林科技大学,2005. [7】贺俊平.中草药狼毒药浴治疗猪螨病试验观察[J].中国 兽医寄生虫病,2000,8f21:11. 【8]刘俊华,董文其,孙恩贵,等.桔皮提取物一灭螨灵用于 绵羊螨病治疗的研究进展[J】.畜牧与兽医,1996,(5): 232-233. 『9]宗泽君,宗喜福.苦参碱植物杀虫剂防治猪疥癣试验[J]. 中兽医医药杂志,1999,18(5):8—9. 【1o】贾英科,王海利,王福生,等.中草药苦参碱水剂治疗猪 外寄生虫的试验[J】.中兽医医药杂志,2005,(5):27—29. 磊百 丽 面葡亏 Hunan Animal science and Veterinary Medicine,No.4,2014.(Total No.182)
7 .喇南亩放兽廛 2014年第4期(总第182期) 件性疾病。随着现代医学科学研究的深入发展,人 们对免疫增强剂的医疗、保健作用越来越重视,高 效、稳定、毒副作用小的中药免疫增强剂将是未来 抗御疾病的主要物质。 黄芪多糖(Astragalus polysaccharme,APS)是黄 芪中最重要的天然有效成分,是黄芪药理作用中 起决定性因素的一类化合物。黄芪多糖能提高机 体免疫功能,增强细胞生理代谢,提高巨噬细胞活 性,是理想的免疫增强剂,它能促进T细胞、B细 胞、NK细胞等免疫细胞的功能,对多种免疫缺陷 症均有良好的防治作用,同时具有抗病毒、抗衰 老、抗应激、抗氧化等作用。笔者通过检测黄芪多 糖对猪瘟免疫抗体的影响,为黄芪多糖的合理临 床应用提供了可靠的试验数据。 1试验材料 1.1主要试剂 猪瘟兔化弱毒活疫苗(细胞源,由湖南省涟源 市畜牧水产局提供);黄芪多糖可溶性粉可溶性粉 (10%,湖南广大傲农畜牧兽医研发有限公司);猪 瘟抗体检测试剂(美国EDEXX:13—43220一Y241) 1.2主要仪器 高速离心机(上海耐圣卡兰实业有限公司); 微量移液枪(上海荣泰生化工程有限公司);全自 动酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限责任 公司);微量振荡器(长沙永乐康医疗设备有限公 司);生化培养箱(上海精密仪器有限公司);优普 纯水机(广州市授科仪器科技有限公司)。 1I3试验动物 根据试验要求,选择未经过猪瘟疫苗免疫的 涟源市蓝田办事处某猪场(200头母猪),自繁自 养,饲养管理水平适中,挑选 5O头65日龄左 右,体重相近、健康壮实的“杜长大”三元杂交猪。 2试验方法 2.1动物分组 共分为I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和空白对照组五组,基础 日粮为玉米一豆粕型,对照组与试验组均每天饲 喂2次,饲喂时间为1个月。 (1)空白对照组:饲喂基础日粮,耳标编号为 1~10号;(2)试验I组:基础日粮,另添加饲料量 0.05%黄芪多糖可溶性粉,耳标编号为1 l 20号; (3)试验Ⅱ组:基础日粮,另添加饲料量0.1%黄芪 多糖可溶性粉,耳标编号为21 30号;(4)试验Ⅲ 组:基础日粮,另添加饲料量0.2%黄芪多糖可溶性 粉,耳标编号为31—4O号;(5)试验Ⅳ组:基础日 粮,另添加饲料量0.3%黄芪多糖可溶性粉,耳标编 号为4l~50号。 2.2注射免疫疫苗 在免疫疫苗前后15天,除空白对照组外,试 验组按试验要求在基础食粮中添加了不同量黄芪 多糖可溶性粉。在猪群无异常状况下,2013年4月 25日,按照疫苗使用说明,用专用疫苗稀释液稀释 猪瘟冻干疫苗,严格按免疫要求进行消毒和一个 针头免疫一头猪标准,在猪颈部后侧肌注猪瘟疫 苗1头份/头。观察免疫副反应及应激情况。 2.3采血及检测判定方法 于5月25日和6月25日,在猪耳静脉进行 采血,每头猪采血量为2.5mL,按操作规程要求采 集猪全血样品100个,用保温箱冷藏,在试验室用 离心机处理得到检测用血清。采用猪瘟病毒抗体 阻断ELISA检测法。判定标准:阻断率>t40%,抗 体阳性(+);阻断率≤30%,抗体阻性(一);40%> 阻断率>30%,为可疑(±),可疑血清样品在下次 采血时以下次抗体效价作为最终结果判定。 3试验结果 3.1免疫副反应及应激情况 4月25日免疫后,空白组的3、7号猪,试验I 组的l8号猪,出现了免疫应激反应,具体表现为 精神萎靡不振、呼吸略为急促,观察1h后,免疫应 激反应症状消失,逐步恢复正常。 3.2抗体检测对照 5月27 13免疫抗体检测其阴性对照0D45o= 0.131,阳性对照OD4 ̄o=1.633;6月27日免疫抗体 检测其阴性对照OD45o=0.147,阳性对照OD45o= 1.735。 3.3各组抗体检测结果 3.3.1空白对照组的抗体检测结果。具体结果见表1。 表1 空白对照组的抗体检测判定结果 编OD 。值结OD 值结编OD45o值结OD 值结 号(5.27)果(6.27)果号(5.27)果(6.27)果 O1 o.566+0.575 +06 0.287 —0.246— 02 0.645 +0.668 +07 0.238 —0.227 ~ 03 0.573 +0.612 +08 0.743 +0.765 + 04 0.275 —0.224 —09 0.684 +0.689 + 05 0.690 +0.672 + 10 0.586 + 0 623 + 从表1中可看出,5月27日检测4、6、7号猪 抗体结果为阴性,其它为阳性,抗体阳性率为 70%;7个抗体阳性OD450值平均为0.641。6月27 8 Hunan Animal science and Veterinary Medicine,No.4,2014.(Total No.182)
南亩放虏廛 2014年第4期(总第182期)
试验I组添加黄芪多糖可溶性粉的量为 0.05%。从表2中显示5月27 13检测l8号猪免疫 抗体结果为阴性,其它9个猪瘟免疫抗体阳性,抗 体阳性率为90%,抗体效价OD伽值平均为0.761。 6月27 13检测18号猪免疫抗体阴性,其它9个猪 瘟免疫抗体阳性,抗体阳性率为90%,抗体效价 OD450值平均为0.761。 3.3.3试验Ⅱ组抗体检测结果。具体结果见表3。 表3试验II组抗体检测结果
试验Ⅱ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为 0.1%。从表3可看出,5月27 13检测27号猪免疫 抗体为可疑,28号为免疫抗体阴性,其它8个猪瘟 免疫抗体阳性,抗体阳性率为80%,OD伽值平均 为0.818。6月27日检测28号猪为免疫抗体阴性, 其它9个猪瘟免疫抗体阳性,抗体阳性率为90%, OD45o值平均为0.892。 3.3.4试验Ⅲ组抗体检测结果。具体结果见表4。 试验Ⅲ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为 0.2%,表4中显示5月27日检测免疫抗体结果全 部为阳性,抗体阳性率为100%,0D45o值平均为 0.857。6月27日检测免疫抗体结果全部为阳性, 抗体阳性率为100%,0D45o值平均为0.975。 3.3.5试验Ⅳ组抗体检测结果。 表4试验III组抗体检测判定结果 编OD 。值结OD 值结编OD 值结OD 值结 号(5.27)果(6.27)果号(5.27) 果(6.27)果
试验Ⅳ组黄芪多糖可溶性粉的添加量为 0.3%,从表5看出,5月27日检测Ⅳ组免疫抗体结 果全部为阳性,抗体阳性率为100%,0D45o值平均 为O.813;6月27 13检测免疫抗体全部为阳性,抗 体阳性率为100%,0D45o值平均为0.904。 表5试验Ⅳ组抗体检测判定结果