副溶血性弧菌成套生化鉴定管使用说明书（SHBG02）
1、 实验准备：从包装盒中取出安瓿瓶，用砂轮在瓶颈上划一圈，朝易折点（瓶颈上方蓝点），反方
向用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶试管架中。如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。
2、 接种方法：
从选择性琼脂平板（TCBS琼脂或副溶血性弧菌显色培养基）上至少选取3个典型菌落或可疑菌落，
划线接种到3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板进行纯化培养（36±1°C培养18-24h），取纯化菌落做 氧化酶试验和接种3%氯化钠三糖铁琼脂、嗜盐性试验、3%氯化钠甘露醇、3%氯化钠赖氨酸脱羧酶、 3%氯化钠氨基酸脱羧酶对照、3%氯化钠V-P半固体和3%氯化钠0NPG。本成套生化鉴定管不含3% 氯化钠三糖铁琼脂。请参照GB/T4789. 7-2008标准判断结果。
直接接种：用接种针从平板上挑取已纯化培养的同一菌落接种于需要试验的生化管中。
菌悬液法：取一内盛2ml无菌水或无菌生理盐水试管，用接种针从纯化培养的平板上挑取单个菌
落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，滴入需要试验的试管中，每管3滴。 其中固体和半固体生化管采用穿剌接种。
3、 接种完后放37C培养。（用封口膜封口，封口膜应用75%酒精擦拭灭菌，成套生化管中附带有）
产品名称 结果判断 培养时
间（h） 备注 阳性 阴性
氧化酶试验 蓝色 不变色
将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿，用铂丝接种环或灭菌竹签挑 纯培养物，涂抹于试验纸上。蓝色为阳性，2min内不变 色为阴性。
3%氯化钠赖氨酸 脱羧酶肉汤 紫色 黄色 24-48 每个被检菌应同时接3%氯化钠氨基酸脱羧酶对照管一支， 并加灭菌石蜡覆盖培养基液面。本管变紫色，对照管变黄 色，为阳性；本管与对照管均变黄色为阴性。
3%氯化钠氨基酸 脱羧酶对照 黄色 黄色 18-24 并加灭菌石蜡覆盖培养基液面。
无盐胰胨水 生长旺盛、
溶液变混 不生长或 微弱生长 24
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。
第一节 副溶血性弧菌标准的检验方法
一、检验方法
（一）操作步骤
1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。
2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。
3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。
4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。
5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。
（二）检验程序
图6-1 副溶血性弧菌检验程序
二、结果分析判定及注意事项
山药质量标准及检验标准操作程序（TS-ZL-0128-01） 第 1 页 共 5 页
1 目的
建立山药及其饮片的质量标准及检验标准操作程序，使山药的“采购、检验、验收、使用、保管”等工作有标准可依。
2 适用范围
适于山药及其饮片的采购、检验和复检。
3 责任人
山药质量标准及检验标准操作程序的编订、审批及使用人员。
4 物料信息
品 名：山药
汉语拼音：Shanyao
拉 丁 名：DIOSCOREAE RHIZOMA
来 源：本品为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，除去外皮及须根，干燥，或趁鲜切片，干燥；也有选择肥大顺直的干燥山药，置清水中，浸至无心，闷透，切齐两端，用木板搓成圆柱状，晒干，打光，习称“光山药”。
物料代码：见《物料代码表》
5 标准依据
《中国药典》2010年版第二增补本 山药
6 山药质量标准
项目 《中国药典》2010年版第二增补本 公司内控质量标准
性状 本品略呈圆柱形，弯曲而稍扁，长15～30㎝，直径1.5～6㎝。表面黄白色或淡黄色，有纵沟、纵皱纹及须根痕，偶有浅棕色外皮残留，体重，质坚实，不易折断，断面白色，粉性。气微，味淡、微酸，嚼之发黏。光山药呈圆柱形，两端平齐，长9～18㎝，直径1.5~3cm。表面光滑，白色或黄白色。 本品略呈圆柱形，弯曲而稍扁，长15～30㎝，直径1.5～6㎝。表面黄白色或淡黄色，有纵沟、纵皱纹及须根痕，偶有浅棕色外皮残留，体重，质坚实，不易折断，断面白色，粉性。气微，味淡、微酸，嚼之发黏。光山药呈圆柱形，两端平齐，长9～18㎝，直径1.5~3cm。表面光滑，白色或黄白色。
鉴别 应具规定的微鉴别特征 应具规定的微鉴别特征
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3年第期（总第6期）免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究
免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的
初步研究*
1.厦门出入境检验检疫局；2.福建农林大学动物科学学院孔繁德1刘阳1，2徐淑菲1彭小莉1吴德峰2林立1
[摘要]本研究应用兔抗V.parahaemolyticusIgG-2包被硝酸纤维素膜检测线，羊抗兔IgG包被对照线，胶体金标记兔抗
V.parahaemolyticusIgG-1，建立了检测副溶血弧菌（V.parahaemolyticus）的免疫金层析试纸条法（IGCA）。结果表明，阳性
者试纸条检测线和对照线均出现红色线，实验过程仅需5～15min即可判断结果，该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60×104cfu/mL，与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应。
将试纸条4℃存放6个月、常温存放3个月，37℃存放1个月，检测结果无差异。说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好，结果容易观察和判断，非常适于基层养殖部门应用。
[关键词]副溶血弧菌胶体金免疫层析
副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus，简称V.parahaemo-lyticus)最早是由Fujino等[1]于1953年从日本一个食物中毒患
者身上初次分离得到的，是一种革兰氏阴性嗜盐菌，常呈多态性，有鞭毛，无荚膜和芽孢。在含3%～5%的食盐培养基中，
pH7.5-8.5及37℃条件下，生长最为良好并且对酸敏感。该菌
分布于世界各地，通常广泛分布于近海区域、盐湖及鱼、贝类等海产品中，是沿海地区引起食物中毒的重要病原菌，在食物
中的数量超过106即可导致患者出现腹泻、肠痉挛、恶心、呕吐和头疼等典型胃肠炎反应，严重者可引起败血症甚至死亡，
也曾有发烧和发冷的报道，但较少。我国沿海地区每年都有因
副溶血性弧菌引起食物中毒的报道。1998年以来的资料显示，副溶血弧菌引发食物中毒的规模呈明显的上升趋势，已超过沙
