高效液相色谱法

高效液相色谱法在药物分析中的应用与进展

摘要：主要介绍了高效液相色谱法在药物鉴别、药物杂质检查、药物含量测定等方面具体应用以及展望了高效液相色谱法在药物分析中的应用前景。

关键词：高效液相色谱法；HPLC；药物分析；联用技术

Abstract: Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug

discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete

application and the prospect of the high performance liquid chromatography in

pharmaceutical analysis application prospect.

Keywords: high performance liquid chromatography，HPLC ,pharmaceutical

analysis，hyphenated techniques

引言：

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。HPLC

仪器分析练习题（二）——高效液相色谱法部分

一、选择题

1. 分离一组高聚物（分子量>2000）时最宜采用的色谱方法是（ D ）

A. 气固色谱 B. 反相键合相色谱

C. 离子交换色谱 D. 凝胶色谱

2. Si-O-Si-C型的18烷基固定相可用于（ B ）

A. 正相色谱 B. 反相色谱

C．离子交换色谱 D. 空间排阻色谱

3. 反相离子对色谱法分离试样组分时，随着对离子浓度的增大，组分的保留时间（ A ）。

A. 增大 B. 减小

C. 不变 D. 不能确定

4. 下列试剂中可作为正相色谱流动相的是（ C D ）。

A. 水 B. 甲醇

C．乙腈 D. 正已烷

5. 在惰性担体表面健合上基团－SO3ˉ后的离子交换树脂称为（ B ）。

A．强碱性阳离子交换树脂 B. 强酸性阳离子交换树脂

C．强碱性阴离子交换树脂 D. 强酸性阴离子交换树脂

6. 分离一组高沸点的物质时最宜而是采用的色谱方法是（ D ）。

A. 气液色谱 B. 气固色谱

C. 毛细管气相色谱 D. 液相色谱

7. 应用正相色谱法分析一组组分时，组分的出峰顺序为（ A ）。

A. 极性小的组分先出峰 B. 极性大的组分先出峰

C. 分子量小的先出峰 D. 分子量大的先出峰

高效液相色谱法

高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。

1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱的内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10um。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2um）填充剂的耐超高压、小进样器、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

（1）色谱柱

反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的内径与长度，填充剂的性状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值得检验操作规程 - 2 -

流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

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高效液相色谱法的应用

高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。一.在食品分析中的应用

1．食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；

2．食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；

食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。

二.在环境分析中的应用

多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。

三.在生命科学中的应用

HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：

1.低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。

2.高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。 2

过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术，但都有一定的局限性，远远不能满足生物化学研究的需要。因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质，如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离，通常要求检测限达ng级或pg级，或pmol，fmol，并要求重复性好、快速、自动检测；制备分离、回收率高且不失活。在这些方面，HPLC具有明显的优势。

四.在医学检验中的应用

体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：

1.合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。

2.天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等

五．在无机分析中的应用