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TaKaRa 一步法荧光定量PCR试剂盒 说明书

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天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书

天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书

通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。

用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。

一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。

由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。

规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。

试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。

PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。

结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。

保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。

注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。

2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。

3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。

4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。

5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。

6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。

生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。

宝生物PCR试剂盒说明书

宝生物PCR试剂盒说明书
图 2. RNA PCR 原理
-2-
mRNA
使用 AMV 反转录酶，配制反转录反应液合成 cDNA 的第一条链。
按以下条件进行反转录反应：
（ 30℃
10 min.）*
42℃～60℃ 15～30 min. 1 Cycle95℃5 min.
5℃
5 min.
* 使用 Random 9 mers 进行反转录时，首先在 30℃下保温 10 min，使 Random
1 ml
1 ml 150 μl
1 ml 25 μl
25 μl
25 μl
【各种引物序列】
引物名称 Random 9 mers Oligo dT-Adaptor Primer Control F-1 Primer Control R-1 Primer M13 Primer M4
各引物序列 5′-（P）NNNNNNNNN-3′ 包含 dT 区域及 M13 Primer M4 序列。 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ 5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
-4-
●引物选择
用于反转录的引物可视实验具体情况选择 Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer 或特异性下游引 物。对于不具有 Hairpin 构造的短链 mRNA，3 种引物中的任何一种都可以使用，但一般应按以下方法进 行选择。
Random 9 mers
Oligo dT-Adaptor Primer
-3-
●RNA 样品制备
本试剂盒是把 RNA 合成 cDNA，然后再对此 cDNA 进行扩增的试剂盒。RNA 的纯度会影响 cDNA 的合成 量，而制备 RNA 的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因 此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用 RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话 等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。

从培养细胞中制备品质良好的RNA模板-Takara试剂盒

从培养细胞中制备品质良好的RNA模板-Takara试剂盒

Code No. 3732 研究用CellAmp™Direct RNA Prep Kitfor RT-PCR (Real Time)说明书目录内容页码●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 1 ●试剂盒外必备主要试剂 1 ●使用注意 1 ●操作方法 2 ●附录 3 ●实验例9 ● Troubleshooting 10 ●关联产品10●制品说明本制品是从96孔板或其他各种培养板中培养的动物细胞中提取One Step或Two Step Real Time RT-PCR （又称qRT-PCR或RT-qPCR）反应用的RNA模板的试剂盒。

本试剂盒由三种溶液组成，快捷方便，操作简单，可在10分钟内完成从培养细胞中制备品质良好的RNA模板。

使用本试剂盒制备的RNA模板可与One Step TB Green® PrimeScript™RT-PCR Kit (Code No. RR066A/B) 等One Step Real Time RT-PCR试剂组合使用，2小时内便可完成基因表达分析。

本试剂盒与反转录试剂PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）组合使用，可在30分钟内制备出用于Real Time PCR (qPCR) 的cDNA模板。

本试剂盒可以从微量的细胞中提取RNA模板，并用于基因解析和Real Time RT-PCR的高灵敏度检出。

在对无法设计跨内含子引物的基因或低表达量的基因进行分析时，基因组DNA的混入对实验结果影响很大。

本试剂盒可以有效去除基因组DNA，大大提高了实验结果的准确性。

●制品内容（200次量）*CellAmp Washing Buffer 12.5 ml×2CellAmp Processing Buffer 10 mlDNase I for Direct RNA Prep 200 μl*使用96孔板时，200孔培养细胞的反应次数。

TaKaRa一步法RT-PCR提取法

TaKaRa一步法RT-PCR提取法
Mix；其中包括 RNase Free dH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使 所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验 样品之间产生的误差。 2） 使用 TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要 小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有 50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 3） 2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ融解后如有不溶物请充分混合。 配制 Real Time One Step RT-PCR 反应液时应避免强光照射。 4） 反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。 5） 本制品只能使用特异性反转录引物，不能使用 Random Primer 和 Oligo dT Primer 等进行反转录反 应。
0.5 μl
PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ
0.5 μl
PCR Forward Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
PCR Reverse Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
TaqMan® Probe
1 μl*2
Total RNA
2 μl*3
独自开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度之特点。 3. One Step RT-PCR Buffer III 是一种 2×浓度的 Premix Type 试剂，操作简单，能有效避免污染。
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前请一定认真阅读。 1） 当同时需要进行数次 Real Time One Step RT-PCR 反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master

一步法RT-PCR试剂盒使用说明书

一步法RT-PCR试剂盒使用说明书

一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。

本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。

经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。

该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。

SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。

PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。

独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。

使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。

2. 耐热性及稳定性强。

3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。

4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

使用方法1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30s。

3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。

宝生物荧光定量PCR使用说明

宝生物荧光定量PCR使用说明
请按照Thermal Cycler DiceTM Real Time System（TaKaRa Code：TP800）的使用说明书要求 进行实验操作。
① 按下列组份配制 PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行）。
试剂 SYBR® Premix Ex TaqTM（2×） PCR Forward Primer（10 µM） PCR Reverse Primer（10 µM） DNA 模板 dH2O（灭菌蒸馏水） Total
司独自开发的Buffer系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度，高扩增特异性之特点。
●操作注意 以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。
1． 本制品请于 4℃避光保存，避免冻结制品。实验证明，4℃保存一年半制品性能稳定，反复冻融制品性 能可能下降。
2． 使用时请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。 3． 本制品中含有荧光染料SYBR® Green I，保存制品或配制PCR反应液时应避免强光照射。 4． 反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。
1．热变性
Primer
荧光物质
2．引物退火
Polymerase
3．延伸反应
●试剂盒特长
1． 适用于 Real Time PCR 反应，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。 2． 在 2×浓度的Premix中，预先混有SYBR® Green I，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌
蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。 3． DNA聚合酶使用了改良后的TaKaRa Ex TaqTM HS，可以进行Hot Start法PCR反应，再与TaKaRa公
*3 建议反应液体积为 25 ～ 50 µl。

宝生物荧光定量PCR使用说明

Code No.：DRR041ASYBR® Premix Ex TaqTM （Perfect Real Time） (200 次量)目内 容●制品说明 ●制品内容 ●适用的 Real Time PCR 扩增仪 ●保 存录页 码1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3●TaKaRa Ex TaqTM HS活性定义 ●纯 度●Real Time PCR 性能检测 ●试剂盒原理 ●试剂盒特长 ●操作注意 ●Real Time PCR 操作顺序 ●操作方法 ◆应用 Thermal Cycler Dice Real Time System 扩增仪的操作方法 ◆应用 ABI PRISM 7000/7700/7900 HT， 7300/7500/7500 Fast Real - Time PCR 的操作方法 ◆应用 Light Cycler Real Time PCR 扩增仪的操作方法 ◆应用 Smart Cycler II System Real Time PCR 扩增仪的操作方法 ◆应用 Mx3000P Real Time PCR 扩增仪的操作方法 ●PCR 反应条件说明 ●实验例 ●进行 RT-PCR 反应时的实验方法 ●引物设计说明 ●引物设计服务说明： 本公司提供用于基因表达定量分析的引物设计及合成服务 ●问 答4 5 7 8 9 9 11 1314 14◆特别提示： 本制品请于 4℃避光保存，避免冻结制品！●制品说明本制品是采用SYBR® Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。

制品中已经将DNA聚合酶、反 应用Buffer、dNTP、SYBR® Green I等试剂预混在一起，是一种 2×浓度的Premix Type试剂，进行实验 时，PCR反应液的配制十分方便简单。

制品中的DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex TaqTM HS，与TaKaRa精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的扩增效率，进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。

1一步法荧光定量反转录PCR试剂盒

适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高 GC 含量或具有复杂二级结构的 RNA 模板。
注意事项：
●当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（M aster M ix；其中 包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确， 减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 ●使用Enzyme M ix和TRUEscript RTase时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含 有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 ●2×qRT-PCR M ix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。 ●为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。 ●不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。 ●只能使用特异性引物，不能使用 Oligo(dT) 和 Random Primer 进行反应。
TUREscript One Step qRT-PCR Kit
包 装 量：
目录编号 154101 154102
包装单位 25次 50次
使用说明书
组成
2×qRT-PCR M ix(Contains Sybr Green) Enzyme M ix (Contains HotM aster DNA Polymerase and RNasin) TRUEscript RTase
反应体系（50 μl）：
注意：2×qRT-PCR Buffer 低温时可能有结晶析出，应手心加热或者涡旋振荡恢复融解后使用。短期使用可放 4℃ 冰箱。

Lenti-X qRT-PCR Titration Kit 用户说明书

Product Components List Takara Bio USA, Inc.1290 Terra Bella Avenue, Mountain View, CA 94043, USA U.S. Technical Support: ********************United States/Canada 800.662.2566 Asia Pacific+1.650.919.7300Europe+33.(0)1.3904.6880Japan+81.(0)77.565.6999Page 1 of 1(050319) Lenti-X™ qRT-PCR Titration KitCatalog No. Amount631235 200 rxnsDescriptionThis Lenti-X qRT-PCR Titration Kit and a real-time PCR instrument can be used to rapidly quantify the virion content of HIV-1-based lentiviral supernatants. The viral genome copy number in a supernatant sample is determined by first purifying the viral RNA, and then comparing the RT-PCR threshold cycle (C t) of an appropriate dilution of purified viral RNA to sample curve C t values that are derived from a calibrated, serially diluted control viral RNA template.Package Contents•Lenti-X qRT-PCR Titration Components (Cat. No. 631236; Not sold separately) >>View Components•NucleoSpin RNA Virus Kit (Cat. No. 740956.10)•Quant-X™ One-Step qRT-PCR TB Green® Kit (200 rxns) (Cat. No. 638317; Not sold separately) >>View ComponentsFor storage conditions, please see the Certificate of Analysis supplied with each component.Product DocumentsDocuments for our products are available for download at /manualsThe following documents apply to this product:•Lenti-X qRT-PCR Titration Kit User Manual•Lenti-X qRT-PCR Titration Kit Protocol-at-a-Glance•Viral RNA Isolation User Manual•Quant-X One-Step qRT-PCR TB Green Kit User Manual•Quant-X One-Step qRT-PCR TB Green Kit Protocol-at-a-GlanceNotice to PurchaserOur products are to be used for research purposes only. They may not be used for any other purpose, including, but not limited to, use in drugs, in vitro diagnostic purposes, therapeutics, or in humans. Our products may not be transferred to third parties, resold, modified for resale, or used to manufacture commercial products or to provide a service to third parties without prior written approval of Takara Bio USA, Inc.Your use of this product is also subject to compliance with any applicable licensing requirements described on the product’s web page at . It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements.© 2009 Takara Bio Inc. All Rights Reserved.All trademarks are the property of Takara Bio Inc. or its affiliate(s) in the U.S. and/or other countries or their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions. Additional product, intellectual property, and restricted use information is available at .This document has been reviewed and approved by the Quality Department.。

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

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