6分子生物学基本研究法(下)

分子生物学研究引言分子生物学是现代生物学的一个重要分支，主要关注生物体内的分子机制。

通过研究核酸、蛋白质等大分子的结构和功能，科学家们能够揭示生命的奥秘。

本文将简要介绍分子生物学的研究内容、方法以及一些重要的研究成果。

研究内容1. 核酸研究核酸包括DNA和RNA，是遗传信息的载体。

分子生物学的重要任务之一就是研究核酸的结构与功能。

例如，DNA双螺旋结构的发现为理解遗传信息的存储和传递奠定了基础。

此外，RNA在基因表达调控中的作用也是研究的重点之一。

2. 蛋白质研究蛋白质是生命活动的主要执行者。

分子生物学研究蛋白质的合成、折叠、功能及其与其他分子的相互作用。

通过了解蛋白质的功能，可以更好地理解细胞的生理过程。

3. 酶学研究酶是一类具有催化作用的蛋白质，能加速生物化学反应。

分子生物学研究酶的结构、催化机制及应用，如在医药和工业上的应用。

4. 信号传导研究细胞通过复杂的信号传导网络进行通信。

分子生物学研究这些信号通路的组成、调控及功能，以揭示细胞间的信息交流机制。

研究方法1. 分子克隆技术分子克隆技术是分子生物学的基本工具，用于获取、扩增和改造特定基因。

常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）和质粒构建。

2. 基因编辑技术CRISPR-Cas9等基因编辑技术的发展，使科学家能够精确地修改基因序列，从而研究基因的功能和治疗遗传疾病。

3. 高通量测序技术高通量测序技术（如NGS）能够快速测定大量DNA或RNA序列，极大地推动了基因组学和转录组学的发展。

4. 结构生物学方法X射线晶体学、核磁共振（NMR）和冷冻电镜（Cryo-EM）等技术用于解析蛋白质和其他生物大分子的三维结构，为理解其功能提供重要信息。

重要研究成果1. DNA双螺旋结构的发现沃森和克里克于1953年提出DNA双螺旋结构模型，这一发现奠定了现代分子生物学的基础。

2. RNA世界假说RNA世界假说认为早期生命形式主要以RNA为基础，RNA既是遗传物质又具有催化功能，为理解生命起源提供了新的视角。

分子生物学课程教学大纲课程名称：分子生物学（Molecular Biology）课程编号：1313072215课程类别：专业课总学时数：68 课内实验时数：18学分：3.5开课单位：生命科学学院生物技术教研室适用专业：生物技术适用对象：本科（四年）一、课程的性质、类型、目的和任务分子生物学为高等学校生物技术专业学生必修的一门专业基础课，是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，主要研究核酸、蛋白质等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。

通过分子生物学的教学，应使学生了解分子生物学的发展历史以及最新研究成果；熟练掌握DNA的结构与功能、RNA在蛋白质合成中的功能、蛋白质的结构与功能、遗传密码及基因表达调控的本质；了解现代分子生物学基本研究方法，并能运用分子生物学的理论知识分析、研究和解决问题，为进一步学习有关专业课程及从事基因工程领域的研究工作奠定基础。

二、本课程与其它课程的联系与分工从学科角度来讲，分子生物学涵盖面非常广，与生物学、生物化学和细胞生物学、遗传学等生命科学课程有交叉，《生物化学》是先修课程。

三、教学内容及教学基本要求[1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；△表示自学内容；○表示略讲内容；第一章绪论第一节引言创世说与进化论[1]；细胞学说[2]；经典的生物化学和遗传学[3]；DNA的发现[2]第二节分子生物学简史[1]第三节分子生物学研究的主要内容分子生物学的含义[3]；DNA重组技术、基因工程技术概念[3]；分子生物学研究的主要内容[3]第四节展望分子生物学的一些分支学科[1]；分子生物学发展的趋势[1]重点：分子生物学的含义和研究内容难点：分子生物学的研究内容教学手段：多媒体教学教学方法：讲授法作业：1．简述阵德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献。

可编辑修改精选全文完整版•第九章分子生物学研究方法1．课程教学内容(1)核酸技术1—基本操作(2)核酸技术2—克隆技术(3)核酸技术3—测序(4)基因表达和表达分析基因定点诱变(5)蛋白质与核酸的相互作用(6)其他（热点）技术2．课程重点、难点基因克隆技术、杂交技术、测序技术、蛋白质与核酸的相互作用检测技术3．课程教学要求掌握基因克隆技术、杂交技术、测序技术、蛋白质与核酸的相互作用检测等各种技术的原理。

本章内容•核酸的凝胶电泳•DNA分子的酶切割•核酸的分子杂交•基因扩增•基因的克隆和表达•细菌的转化•DNA核苷酸序列分析•蛋白质的分离与纯化•研究DNA与蛋白质相互作用的方法一、核酸的凝胶电泳基本原理：当一种分子被放置在电场当中时，它们会以一定的速度移向适当的电极。

电泳的迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移速度，它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷成正比。

由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖和丙烯酰胺，从而降低了对流运动，故电泳的迁移率又同分子的摩擦系数成反比。

在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的。

从这个意义上讲，DNA和RNA的多核苷酸链可叫做多聚阴离子，因此，当核酸分子放置在电场中时，它就会向正极移动。

在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移率，取决于核酸分子本身大小和构型。

分子量较小的DNA 分子，比分子量较大的分子，具有较紧密的构型，所以其电泳迁移率也就比同等分子量的松散型的开环DNA分子或线性DNA分子要快些。

Gel matrix (胶支持物) is an inserted, jello-like porous material that supports and allows macromolecules to move through.Agarose (琼脂糖):(1) a much less resolving power than polyacrylamide,(2)but can separate DNA molecules of up to tens of kbDNA can be visualized by staining the gel with fluorescent dyes, such as ethidium bromide (EB 溴化乙锭)Polyacrylamide (聚丙稀酰胺):(1)has high resolving capability, and can resolve DNA that differfrom each other as little as a single base pair/nucleotide.(2)but can only separate DNA over a narrow size range (1 to a fewhundred bp).Pulsed-field gel electrophoresis (脉冲电泳)(1)The electric field is applied in pulses that are orientedorthogonally (直角地) to each other.(2)Separate DNA molecules according to their molecule weight, as wellas to their shape and topological properties.(3)Can effectively separate DNA molecules over 30-50 kb and up toseveral Mb in length.二、DNA分子的酶切割Restriction endonucleases (限制性内切酶) cleave DNA molecules at particular sitesRestriction endonucleases (RE) are the nucleases that cleave DNA at particular sites by the recognition of specific sequences.RE used in molecular biology typically recognize (识别) short (4-8bp) target sequences that are usually palindromic (回文结构), and cut (切割) at a defined sequence within those sequences. e.g. EcoRIThe random occurrence of the hexameric (六核苷酸的) sequence: 1/4096 (4-6=1/46)(1) Restriction enzymes differ in the recognition specificity: target sites are different.(2) Restriction enzymes differ in the length they recognized, and thus the frequencies differ.(3) Restriction enzymes differ in the nature of the DNA ends they generate: blunt/flush ends (平末端), sticky/staggered ends (粘性末端).(4) Restriction enzymes differ in the cleavage activity.三、核酸的分子杂交原理：带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构。

第九章分子生物学研究方法下自测题单选题）可用来检测选择性剪接的方法是A. RT-PCRB. NEST-PCRC. AP-PCRD. TAIL-PCR2.（单选题）不属于基因组编辑技术的是A. ZFNB. VIGSC. TALEND. CRISPR/Cas3.（单选题）荧光共振能量转移（FRET）实验中常用的探针不包括A. 荧光蛋白B. 青色染料Cy3C. 生物素D. 荧光素4.（单选题）真核细胞的蛋白质磷酸化位点主要发生在哪种氨基酸残基A. Ser，Tyr和ThrB. Met，Pro和ThrC. Ser，Cys和TrpD. Asp，Glu和Trp5.（单选题）在植物转化的双元载体系统中，外源基因位于A. 与vir基因相同的质粒上B. 任意一个质粒C. 两个质粒都有D. 与选择性标记基因相同的质粒上6.（单选题）关于RNAi，下列说法正确的是A. 在哺乳动物细胞内，用较长的dsRNA会引发非特异性基因沉默B. 非哺乳动物细胞利用较长的双链RNA合成siRNA，最后引发RNAiC. 植物细胞利用较长的双链RNA直接诱导产生RNAi，无须合成siRNAD. RISC复合体可切割靶mRNA中与siRNA正义链互补的区域7.（单选题）酵母双杂交体系用于A. 哺乳动物功能基因的表型分析B. 研究功能基因的亚细胞定位C. 检测细胞核内发生互作的蛋白质D. 研究RNA聚合酶对转录的激活作用8.（多选题）转录组测序的方法包括A. SAGE技术B. Edman降解法C. EST技术D. Long SAGE技术9.（多选题）RNA的选择性剪接包括哪几种类型A. 内含子保留B. 5'选择性剪接和3'选择性剪接C. 外显子遗漏型剪接D. 相互排斥性剪接10.（多选题）Ti质粒上除了介导DNA转移的T-DNA片段外，还有A. 致毒Vir（virulence region）基因B. 植物生长素和分裂素合成基因C. 乙酰丁香酮合成基因D. 冠瘿碱合成基因11.（多选题）凝胶滞缓实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）可以用来研究A. DNA与蛋白质相互作用B. RNA与蛋白质相互作用C. 蛋白质与蛋白质相互作用D. DNA与RNA相互作用12.（多选题）应用RNA原位杂交可显示A. 细胞内特定的mRNAB. 蛋白质的降解速率C. 基因在染色体上的定位D. 基因的转录活性13.（多选题）荧光共振能量转移（FRET）现象发生需满足的基本条件是A. 给体与受体在1～10nm的距离B. 给体的发射光谱与受体的吸收光谱没有重叠C. 给体的发射光谱与受体的发射光谱有部分重叠D. 给体与受体的偶极具有一定的空间取向14.（多选题）关于噬菌体的叙述正确的是A. 脱离宿主细胞后不能生长和复制B. 溶原周期噬菌体称为温和噬菌体，溶菌周期噬菌体称为烈性噬菌体C. 溶原周期噬菌体感染过程中可产生大量的子代噬菌体D. 溶菌周期噬菌体DNA可整合到宿主染色体DNA上，感染过程中不产生子代噬菌体15.（判断题）反向遗传学是从表型出发，研究其基因型，进而找出该基因的编码序列。

分子生物学基本技术一、引言分子生物学是研究生物体的分子结构、功能和相互关系的学科。

分子生物学基本技术是指在分子水平上进行研究的实验技术和方法。

本文将介绍几种常用的分子生物学基本技术。

二、聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应是一种用于扩增DNA片段的技术。

它可以从少量DNA样本中扩增出大量的目标DNA片段。

PCR的原理是通过不断重复DNA的变性、引物结合和DNA合成的过程，使目标DNA序列扩增到可检测的水平。

PCR广泛应用于基因克隆、基因检测、遗传学研究等领域。

三、DNA电泳DNA电泳是一种通过电场作用使DNA分子在凝胶中迁移的技术。

DNA的迁移速度与其分子大小成反比，因此可以根据DNA片段的大小进行分离和检测。

在DNA电泳中，DNA样品首先经过限制性内切酶切割，然后在凝胶电泳中进行分离。

最后，通过染色剂染色，可观察到DNA片段的分离结果。

四、基因克隆基因克隆是指将感兴趣的DNA片段插入到载体DNA中，形成重组DNA分子的过程。

常用的克隆载体包括质粒、噬菌体等。

基因克隆技术可以用于基因的定位、表达和功能研究。

克隆的基本步骤包括DNA片段的切割、载体与DNA片段的连接、转化等。

五、蛋白质表达与纯化蛋白质表达与纯化是研究蛋白质结构和功能的重要手段。

常用的表达系统包括原核表达系统（如大肠杆菌）和真核表达系统（如哺乳动物细胞）。

表达蛋白质的基本步骤包括构建表达载体、转化表达宿主细胞、诱导表达、蛋白质纯化等。

六、核酸杂交核酸杂交是一种通过DNA或RNA的互补碱基配对形成双链结构的技术。

核酸杂交可用于检测目标DNA或RNA的存在、定位和表达水平。

常用的核酸杂交技术包括Southern blotting、Northern blotting和in situ杂交等。

七、蛋白质相互作用研究蛋白质相互作用是细胞内发生的重要生物学过程。

研究蛋白质相互作用可以揭示蛋白质的功能和信号转导机制。

常用的蛋白质相互作用研究技术包括酵母双杂交、共免疫沉淀、荧光共振能量转移等。

分子生物学的研究方法分子生物学是生命科学领域中的重要分支，研究生物大分子（如DNA、RNA、蛋白质等）的结构、功能及其在生物体内的相互作用关系。

分子生物学的研究方法随着技术的不断进步，越来越高效、精准。

本文将介绍几种常见的分子生物学研究方法。

1. PCR技术PCR技术是分子生物学中最常用的研究方法之一。

PCR技术简单来说就是以DNA为模板，通过循环加热和降温的方式使DNA 分离成两条单链，并利用DNA聚合酶合成新的DNA分子。

通过PCR技术可以扩增目标DNA片段，为其他分子生物学研究提供了重要的基础。

PCR技术的具体操作是：首先选择适当的引物，引物是一段长度为15~30个核苷酸的单链DNA，与目标DNA上的两端互补，可用来定向扩增DNA。

然后将待扩增的DNA样品与引物混合，加入适当浓度的DNA聚合酶和反应缓冲液，反复加热降温，反应若干个周期后，就可以得到扩增的DNA产物。

近年来，PCR技术不断发展，出现了许多高级变体，如RT-PCR技术和qPCR技术等。

这些技术在分子生物学、医学以及疾病诊断等领域得到了越来越广泛的应用。

2. 质谱技术质谱技术是一种分析化学技术，用于测定化合物的分子量、化学式以及数量等信息。

在分子生物学中，质谱技术主要用于分析蛋白质和核酸的结构和功能。

质谱技术的基本原理是将待测样品中的分析物（如蛋白质、核酸等）转化成气态或溶液状态下的离子，并利用质谱仪测定离子的质荷比。

通过离子的质谷比可以确定分析物的分子量、化学式以及数量等信息。

质谱技术的应用范围非常广泛，包括蛋白质组学、代谢组学以及疾病诊断等领域。

随着技术的不断进步，质谱技术也变得更加高效、精准，未来将有更多的应用。

3. 基因编辑技术基因编辑技术近年来获得了长足发展，它可以通过将基因序列中的单个碱基替换、插入或删除，来打造定制化的基因组序列。

这种技术有巨大的应用潜力，可以用于人类基因疾病的治疗以及植物、动物品种改良等领域。

基因编辑技术最常用的手段是CRISPR-Cas9系统，它是一种通过结合RNAs和酶分子来定向剪切DNA的系统。

分子生物学的研究方法1. 基因克隆啊，这就好比是复制粘贴一样神奇！比如说我们要研究一个很重要的基因，那我们就可以通过基因克隆这个方法把它复制出来，然后好好研究它。

就像找到一把神奇的钥匙，打开我们了解生命奥秘的大门啊！2. 聚合酶链式反应，哇，这可是个厉害的家伙！你想想看，就像快速变魔术一样，能把少量的 DNA 迅速扩增好多倍。

比如要检测一个很微小的病原体，聚合酶链式反应就能大显身手啦！3. 核酸杂交，嘿，这不就像是在茫茫人海中寻找那个特别的人嘛！通过它可以找到特定的核酸序列哦。

比如说在基因诊断中，核酸杂交就能精准地找到出问题的地方，是不是超厉害呀！4. 基因测序就像在解读生命的密码本！我们可以知道基因的具体序列啦。

像破解一个神秘的代码一样，让我们对生命的了解深入到每一个碱基。

比如研究遗传病，基因测序就能告诉我们到底是哪里出了问题呀！5. 蛋白质印迹，这就像照妖镜一样，能让特定的蛋白质现形！当我们想知道某种蛋白质有没有表达或者表达量多少的时候，它就派上大用场了。

哎呀，简直太妙了！6. 细胞培养，哇塞，这就如同给细胞安个家呀！我们可以让细胞在特定的环境中生长繁殖。

比如想研究某种药物对细胞的影响，细胞培养不就正好嘛，多有趣呀！7. 基因编辑，这可是能直接修改生命蓝图的神技啊！就像我们拿着笔可以随心所欲地修改一样。

像要治疗一些基因导致的疾病，基因编辑没准就是未来的希望呢！8. 免疫印迹，嗯，这有点像侦探在找线索呢！通过它可以检测特定的蛋白质和抗体。

比如说研究自身免疫性疾病，免疫印迹就能帮忙找出那些捣乱的家伙呀！9. 实时荧光定量 PCR，嘿，这绝对是个精确的计量器呀！能实时检测DNA 的变化呢。

在监测基因表达的动态过程中，它可太有用啦，厉害不厉害！我觉得分子生物学的这些研究方法真的超级神奇，它们让我们对生命的探索不断深入，有着无比广阔的前景和重要性啊！。

分子生物学6251-3001. 确切地讲，cDNA文库包括含: （） [单选题] *A．一个物种的全部基因信息B．一个物种的全部mRNA信息C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息D．一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息(正确答案)2. 基因打靶技术是一项研究（） [单选题] *A.基因功能的技术(正确答案)B.基因大小的技术C.基因诊断的技术D.基因序列的技术E.基因结构的技术3. 应用基因工程技术在基因组中定向敲除或灭活内源的某个特定基因，从而在生物活体内研究此基因功能的方法为（） [单选题] *A.基因敲入B.基因重组C.基因打靶D.基因敲除(正确答案)E.基因克隆4. 转基因动物时，整合到动物细胞基因组内的是（） [单选题] *A.细菌DNAB.病毒DNAC.目的基因(正确答案)D.rRNAE.蛋白质5. 反义RNA是指（） [单选题] *A.DNA中有意义链转录生成的RNAB.将mRNA的5’→3’方向反写成的RNA分子C.与mRNA互补的RNA分子(正确答案)D.自然界不存在的人工分子E.无意义RNA6. 胚胎干细胞是取自小鼠胚胎早期的（） [单选题] *A.组织B.细胞C.内细胞团(正确答案)D.异常细胞E.器官7. 关于DNA双螺旋结构模型的叙述中，除了哪一项外其余都是正确的（） [单选题] *A．两股核苷酸链呈反向平行B．两股链间有严格的碱基配对关系C．为右手螺旋，每个螺距含10对碱基D．极性磷酸二酯键位于双螺旋内侧(正确答案)E. 螺旋直径为2nm8. 属于核糖核酸二级结构的描述是（） [单选题] *A．核苷酸在核酸长链上的排列顺序B．tRNA的三叶草结构(正确答案)C．DNA双螺旋结构D．DNA的超螺旋结构E．DNA的核小体结构9. DNA碱基组成的规律是（） [单选题] *A．[[A]=[[C]，[[T]=[[C]B．[[A]+[[T]=[[C]+[[G]C．[[A]=[[T]；[[C]=[[G](正确答案)D. ( [[A] + [[T])／([[C] + [[G]) = 1E． [[A] = [[C] = [[T] = [[G]10. 关于DNA双螺旋结构模型的叙述正确的是（） [单选题] *A. 由两条完全相同的多核苷酸链绕同一中心轴盘旋成双螺旋B．一条链是左手螺旋，另一条链为右手螺旋C．A+G与C+T的比值为1(正确答案)D．A+T与G+C的比值为111. 关于DNA双螺旋结构模型的叙述中，除了哪一项外其余都是正确的（） [单选题] *A. 两股核苷酸链呈反向平行B．两股链间有严格的碱基配对关系C．为右手螺旋，每个螺距含10对碱基D．极性磷酸二酯键位于双螺旋内侧(正确答案)E．螺旋直径为2nm12. 下列关于DNA双螺旋结构模型的叙述，不正确的是（） [单选题] *A. 两股脱氧核苷酸链呈反向平行B．两股链间存在碱基配对关系C．螺旋每周包含10对碱基D．螺旋的螺距为3.4nmE．DNA形成的均是左手螺旋结构(正确答案)13. 某DNA分子中腺嘌呤的含量为15％，则胞嘧啶的含量应为（） [单选题] * A．30％B．15％C．40％D．35％(正确答案)E．25%14. 下列对DNA分子组成的叙述不正确的是（） [单选题] *A．分子中A+T=(正确答案)C+CB．分子中A=TC．分子中A+G=C+TD．分子中C=GE．以上都不正确15. DNA碱基构成的Chargaff规则是（） [单选题] *A．A=T，(正确答案)C=G；A+G=T+CB．A>T，G=C；A+C>T+CC．A>T，G>C；A+G>T+CD．A=T，G>C；A+G>T+CD．A=T，G>C；A+G>T+CE．A16. DNA的超螺旋结构是（） [单选题] *A. 二级结构的一种形式B．三级结构(正确答案)C. 四级结构D．一级结构E．只存在于真核生物DNA分子中17. 下列有关RNA的叙述错误的是（） [单选题] * A．主要有mRNA，tRNA和rRNA三类B．胞质中只有mRNA和tRNA(正确答案)C．tRNA是细胞内分子量较小的一种RNAD．rRNA可与蛋白质结合E. RNA并不全是单链结构18. 下列有关mRNA的叙述，正确的是（） [单选题] * A．为线状单链结构，5’端有多聚腺苷酸帽子结构B．可作为蛋白质合成的模板(正确答案)C．链的局部不可形成双链结构D．3’末端特殊结构与mRNA的稳定无关E．三个相连核苷酸组成一个反密码子19. 下列关于RNA的说法哪项是不正确的（） [单选题] * A．有rRNA、mRNA和tRNA三种B．mRNA中含有遗传密码C．tRNA是最小的一种RNAD．胞浆中只有mRNA(正确答案)E．rRNA是合成蛋白质的场所20. 绝大多数真核生物mRNA 5’末端有（） [单选题] * A．PolyAB．帽子结构(正确答案)C．终止密码D．起始密码E．CCA-OH21. 绝大多数真核生物mRNA 3’末端有（） [单选题] * A．PolyA(正确答案)B．帽子结构C．终止密码D．起始密码E．CCA-OH22. 下列有关mRNA结构的叙述，正确的是（） [单选题] * A．5’端有多聚腺苷酸帽子结构B．3’端有甲基化鸟嘌呤尾结构C．链的二级结构为单链卷曲和单链螺旋D．链的局部可形成双链结构(正确答案)E．三个相连核苷酸组成一个反密码子23. RNA的核苷酸间由哪种键相连接（） [单选题] *A．疏水键B．磷酸酯键C．糖苷键D．磷酸二酯键(正确答案)E．氢键24. RNA和DNA彻底水解后的产物（） [单选题] *A. 核糖相同，部分碱基不同B．碱基相同，核糖不同C．碱基不同，核糖不同D．碱基不同，核糖相同E．部分碱基不同，核糖不同(正确答案)25. 既含内含子又含外显子的RNA是（） [单选题] *A．rRNAB．mRNAC．tRNAD．hnRNA(正确答案)E．snRNA26. 三种RNA中，种类最多、分子量最不均一、代谢上最活跃的是（） [单选题] * A．mRNA(正确答案)B．tRNAC．28S rRNAD．18S rRNAE．snRNA27. 真核生物的mRNA （） [单选题] *A．帽子结构是一系列的腺苷酸B．在胞质内合成和发挥其功能C．有帽子结构和多聚A的尾结构(正确答案) D．mRNA因能携带遗传信息，所以可以长期存在E．以上均不正确28. 下述有关RNA的叙述中，不正确的是（） [单选题] * A．tRNA分子中含较多的稀有碱基D．通常是单链分子C．mRNA中含有遗传密码D．rRNA是合成蛋白质的场所(正确答案)E．以上都不正确29. 含稀有碱基最多的RNA是（） [单选题] *A．rRNAB．mRNAC．tRNA(正确答案)D．hnRNAE．snRNA30. 反密码子位于（） [单选题] *A．mRNAB．DNAC．rRNAD．tRNA(正确答案)E．snRNA31. 与mRNA中的5’ACG密码相对应的tRNA反密码子是（） [单选题] * A．5’TGCB．5’UGCC．5’GCAD．5’CGU(正确答案)E．5’UAU32. 转运特异氨基酸的RNA是（） [单选题] *A．hnRNAB．始终与核糖体蛋白结合的RNAC．tRNA(正确答案)D．具有多聚腺苷酸结构的RNAE．SnRNA33. 稀有核苷酸存在于下列哪一类核酸中（） [单选题] *A．rRNAB. mRNAC．tRNA(正确答案)D．核仁DNAE．线粒体DNA34. 通常不存在RNA中，也不存在DNA中的碱基是（） [单选题] * A．腺嘌呤B．黄嘌呤(正确答案)C．鸟嘌呤D．胸腺嘧啶E．尿嘧啶35. 组成核酸分子的碱基主要有（） [单选题] *A. 2种B．3种C. 4种D．5种(正确答案)E．6种36. DNA与RNA水解的产物中（） [单选题] *A. 部分碱基相同，戊糖相同B．部分碱基不同，戊糖不同(正确答案)C. 碱基不同，戊糖不同D．碱基相同，戊糖相同E．以上都不是37. 下列关于DNA碱基组成的的叙述正确的是（） [单选题] *A. DNA分子中A与T的含量不同B．同一个体成年期与少儿期碱基组成不同C．同一个体在不同营养状态下碱基组成不同D．同一个体不同组织碱基组成不同E．不同生物来源的DNA碱基组成不同(正确答案)38. 下述哪一种碱基存在于RNA不存在于DNA中（） [单选题] *A．GB．CD．U(正确答案)E．以上都不是39. 构成核酸的基本单位是（） [单选题] *A．磷酸戊糖B．核苷C．核苷酸(正确答案)D．多核苷酸E．环核苷酸40. 核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是（） [单选题] * A．核苷B．碱基序列(正确答案)C．磷酸二酯键D．磷酸戊糖E．以上都不是41. DNA携带生物遗传信息意味着（） [单选题] *A．病毒的侵染是靠蛋白质转移至宿主细胞来实现的B．不论哪一物种碱基组成均应相同C．同一生物不同组织的DNA，其碱基组成相同(正确答案) D．DNA碱基组成随机体年龄及营养状况而改变E．同一物种碱基组成不同42. 通过基因座位连锁的RFLP分析法诊断遗传病（） [单选题] *A.通过群体研究即可B.必须通过个体研究(正确答案)C.通过个体研究即可D.直接应用疾病基因的特异性探针E.间接检测这一RFLP的特异性探针43. β－地中海贫血患者的基因缺陷主要有（） [单选题] *A.大片段丢失或插入B.少数核苷酸的缺失或插人C.基因重排或染色体易位D.点突变或阅读框易位(正确答案)E.大片断丢失或染色体异位44. 判定基因序列异常最直接的方法是：（） [单选题] *A． PCR法B．核酸分子杂交C． DNA序列测定(正确答案)D． RFLP分析E． SSCP分析45. 利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是：（） [单选题] *A ．基因疫苗B ．基因矫正C ．基因置换D ．基因增补E ．基因失活(正确答案)46. 将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是：（） [单选题] *A ．基因疫苗B ．基因矫正(正确答案)C ．基因置换D ．基因增补E ．基因失活47. 基因增强疗法是指（） [单选题] *A.用正常基因替换致病基因B.用分子生物学方法修复缺陷基因C.用反义技术封闭基因D.向有缺陷基因的细胞内再送入野生型基因(正确答案)E.转入免疫调节基因48. 腺嘌呤脱氨酶严重缺乏时，可引起（） [单选题] *A.痛风B.Lesch-Nyhan综合症(自毁容貌综合症)C.SCID(严重免疫缺陷症)(正确答案)D.肾石病E.黄嘌呤尿症49. 目前基因治疗多采用的方法是：（） [单选题] *A．基因增补(正确答案)B．基因置换C．基因矫正D．基因灭活E．基因疫苗50. 基因直接注射法简单快捷，一旦被证明有效可行，则十分有利于产业化。

分子生物学的研究方法例题和知识点总结分子生物学作为一门研究生物大分子结构与功能的学科，对于理解生命现象的本质具有至关重要的意义。

其研究方法多种多样，涵盖了从分子水平到细胞水平，再到整体生物个体水平的多个层次。

下面我们将通过一些具体的例题来深入探讨分子生物学的研究方法，并对相关知识点进行总结。

一、分子克隆技术分子克隆技术是分子生物学研究中最常用的方法之一，它能够实现特定 DNA 片段的复制和扩增。

例题：假设我们需要从一个复杂的基因组中克隆出编码某种特定蛋白质的基因。

首先，我们通过设计特异性引物，利用 PCR（聚合酶链式反应）技术扩增出目标基因片段。

然后，将这个片段插入到合适的载体（如质粒）中，转化到宿主细胞（如大肠杆菌）中进行扩增和表达。

知识点：1、 PCR 技术的原理：基于 DNA 半保留复制的原理，通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，实现 DNA 片段的指数级扩增。

2、载体的选择：常见的载体有质粒、噬菌体和病毒等，需要根据实验目的和宿主细胞的特性来选择。

3、转化方法：包括化学转化法、电穿孔法等，目的是将重组载体导入宿主细胞。

二、核酸杂交技术核酸杂交技术是基于核酸分子的碱基互补配对原则，用于检测特定核酸序列的存在。

例题：为了检测某一细胞样本中是否存在特定的 mRNA 分子，我们可以设计与之互补的 DNA 探针，进行 Northern 杂交实验。

知识点：1、 Southern 杂交：用于检测 DNA 分子。

2、 Northern 杂交：用于检测 RNA 分子。

3、探针的标记：可以采用放射性同位素标记或非放射性标记（如荧光标记、生物素标记等）。

4、杂交条件的优化：包括温度、离子强度等，以保证特异性杂交的发生。

三、基因测序技术基因测序技术能够确定 DNA 或 RNA 分子的核苷酸序列。

例题：对一个未知基因进行测序，以确定其碱基组成和排列顺序。

知识点：1、 Sanger 测序法：通过双脱氧核苷酸终止法进行测序。

分子生物学中的基本方法与技术分子生物学是研究生命分子机制及其调控的一门学科。

基因作为生命的基本单位，从宏观上影响着生命的大小和形态，而分子生物学则通过一系列基本方法和技术，从微观层面研究基因的结构和功能，揭示生命现象的本质。

1. DNA的提取和纯化DNA是生命的重要分子，其结构和功能的研究是分子生物学的主要研究方向之一。

DNA的提取和纯化是DNA研究的第一步，常用的方法有基于盐、有机溶剂和柱层析等。

其中最常用的方法是盐提取法。

将细胞或组织破碎并混合盐水或Tris缓冲液，将其中的DNA片段与蛋白质分开，使DNA从物质混合物中分离出来。

接下来再用乙醇沉淀、柱层析或电泳等方法进行纯化。

2. PCR技术PCR技术是分子生物学最重要的技术之一，也是分子生物学发展的重要里程碑。

PCR技术是将DNA进行扩增，可以在较短时间内大量获得需要研究的靶标DNA。

PCR技术在分子生物学研究中具有广泛的应用，如基因克隆、基因突变和DNA测序等。

PCR技术的基本原理是利用特异性引物和DNA聚合酶，在体外模拟DNA的复制过程，将模板DNA中的特异性片段扩增数百倍。

PCR技术具有高度灵敏性，只需要极少量的模板DNA就可以进行扩增。

3. 蛋白质的分离与纯化蛋白质是生命活动的重要组成部分，其结构和功能的研究是分子生物学的另一个重要研究方向。

蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质结构和功能的前提，常用的方法有电泳法、柱层析和亲和层析等。

其中最常用的方法是电泳法。

电泳法是利用蛋白质在电场中的电性差异性，经过电泳分离、浓缩和纯化的过程。

电泳法分为凝胶电泳和毛细管电泳两种，二者原理不同，但是都具有分离蛋白质的优点，可以同时分离多个样品中的蛋白质。

4. RNA的提取和分析RNA是通过DNA转录生成的，具有传递基因信息和参与细胞转录调控等重要功能。

RNA的提取和分析是研究基因表达和调控的重要方法。

RNA的提取方法有多种，包括直接裂解法、载体分离法和正离子交换柱等。