下载文档原格式
可编辑修改精选全文完整版常用的临床免疫学检测技术第一讲免疫浊度技术一、免疫浊度法基本原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
二、免疫比浊法的特点：1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。
2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。
3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
三、免疫浊度法分类（一）透射光免疫浊度法透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。
（二）散射比浊法散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。
散射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。
当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。
1、终点散射比浊法2、速率散射比浊法速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。
所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。
速率散射比浊法有三大特点：1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试；2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，速率快；3、节省试剂。
免疫学检测技术及应用概述免疫学检测技术的原理是利用机体产生的特异性抗体与抗原之间的特异性结合反应。
当机体感染病原体或注射外源性抗原后，免疫系统将识别并生成相应的抗体。
免疫学检测技术通过将已知的抗原与待测物进行结合，利用特异性抗体识别和测定待测物的存在与含量。
常见的免疫学检测技术包括免疫荧光、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、免疫电泳、免疫印迹等。
其中，免疫荧光是一种通过将荧光标记的抗体与待检测物结合后，利用荧光显微镜观察来检测抗原或抗体的存在。
ELISA是一种通过将待检测物与酶标记的抗体结合，再利用底物与酶反应来产生颜色变化，通过光密度计读取颜色变化程度来测定待检测物的含量。
RIA则是通过将放射性同位素标记的抗体与待检测物结合，再通过放射性测定来确定待测物的含量。
免疫学检测技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，通过检测病毒或细菌感染所产生的特异性抗体，可以确定患者是否感染此病原体。
免疫学检测还广泛用于肿瘤标志物的检测，根据肿瘤细胞产生的特异性抗原来判断肿瘤的存在与发展程度。
此外，免疫学检测还可用于血型鉴定、妊娠检测、自身免疫性疾病等多个方面的诊断。
免疫学检测技术在生物学研究中也发挥着重要作用。
例如，在分子生物学研究中，通过检测特定的抗体可以确定蛋白质的表达和定位，从而理解其功能。
免疫学检测还可以用于研究免疫系统的功能和异常情况，为疾病的治疗和预防提供参考。
在药物研发中，免疫学检测技术可以用于药物的安全性和有效性评估。
例如，通过检测特定抗体的产生，可以评估疫苗的免疫效果。
免疫学检测技术还可以用于药物代谢和药物动力学研究，为药物的合理应用提供依据。
总之，免疫学检测技术是一项重要的分析和检测技术，广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物研发等领域。
随着技术的不断发展，免疫学检测技术将继续发挥其在疾病诊断、药物研发和生物学研究中的重要作用。
免疫学检测技术大纲要求一、抗体的检测及应用抗体进行的检测二、免疫细胞的分离三、免疫细胞的特异性、数量和功能检测一、抗体的检测及应用抗体进行的检测（一）概念利用抗原和抗体特异性结合的特性，对抗原或抗体进行定性、定量检测。
（二）血凝抑制试验可定量检测流感病毒中和抗体。
流感病毒包膜上血凝集素可凝集红细胞，血凝集素中和抗体可抑制这种凝集。
（三）凝集反应和血型鉴定颗粒性抗原 + 相应抗体→ 凝集1.直接凝集反应：玻片法：抗体→抗原？（如：人类ABO血型鉴定；菌种鉴定）定性实验试管法：抗原→ 抗体？（如：肥达反应（诊断伤寒、副伤寒）半定量实验2.间接凝集反应：将可溶性抗原/抗体吸附于载体（红细胞或乳胶颗粒）+ 相应抗体/抗原→间接凝集如：将人IgG吸附在乳胶颗粒上的类风湿因子检测。
反向间接凝集：已知抗体吸附在载体上的凝集。
如Rh血型不符时检测患者抗红细胞Rh抗原IgG。
（四）免疫荧光用荧光素标记的抗体/抗原分子检测相对应的抗原/抗体分子的技术。
用于CD分子鉴定、细胞蛋白定位等。
常用荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）（五）放射免疫放射性核素标记进行的抗原抗体反应，用于激素等微量物质的检测。
（六）酶免疫1.酶联免疫吸附实验（ELISA）将抗原或抗体与固相载体（常为聚苯乙烯板）结合，然后加入待测抗体或抗原，最后以酶标抗体和底物进行检测的技术。
用于抗原或血清抗体的定量检测。
2.免疫组化：用标记特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和酶-底物的显色反应，对细胞中的抗原进行定位、定性检测的方法。
（七）免疫电镜免疫化学技术与电镜技术结合，在超微结构水平观察抗原、抗体结合定位的方法。
（八）免疫沉淀用特异性抗体自细胞裂解液中分离特异性蛋白抗原的方法。
（九）免疫印迹：Western blotting用抗体检测蛋白质的分子量和抗原特异性的方法。
免疫印迹二、免疫细胞的分离（一）Ficoll-hypaque离心法：即葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法。
医学检验技术中的免疫学方法分析医学检验技术是临床医生确定诊断、治疗、监测疾病过程的重要手段。
其中免疫学检验方法是临床医学检验中应用最广泛的一种方法，它是应用免疫学理论和技术手段对人体内有害物质或病原体进行诊断、治疗、监测的一种方法。
一、免疫学基础免疫学的基础在于我们身体里的免疫系统：免疫细胞和免疫分子。
免疫细胞包括：吞噬细胞和T、B淋巴细胞。
免疫分子包括：免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgE、IgD）、亚细胞因子、淋巴因子。
在正常情况下，我们的免疫系统可以识别和清除人体内的感染病原体，保证身体健康。
而当外来病原体不断入侵时，免疫系统需要不断地升级自身的防御能力。
这时候我们的免疫系统会产生高亲合力的抗体和记忆淋巴细胞，以应对下一次的病原体侵袭。
二、免疫学检验方法1. 免疫荧光法免疫荧光法是一种利用荧光染料标记特定物质，通过荧光显微镜观察而检测其分布或数量的方法。
临床常用的是免疫荧光方法对患者的免疫球蛋白或抗原进行检测。
免疫荧光法具有简单、灵敏、特异性和快速的优点，可用于细胞和组织的检测。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种将试验物质固定在微孔板上，与酶标记的抗体或抗原经特异性反应后，用底物转化酶底物被测物质后，生成一种可视的产物，如颜色的强度与被测物质的浓度成正比。
ELISA技术具有灵敏度高、检测范围宽、反应时间短、适用性广、定量准确的优点。
常用于检测患者血清中的肝炎、艾滋病、乙型脑炎、卡氏肺囊虫病、疟原虫病等多种传染病。
3. 免疫电泳法免疫电泳法是利用电泳的原理检测抗体和它所结合的抗原的反应特异性。
通过不同的电泳技术将血清蛋白分离成几个基本蛋白家族，然后涂覆在制备好的凝胶电泳板上，再在每条凝胶片上用电穿孔开一个滴洞，滴入被检物，待反应完毕后将电泳板用染色剂染色，用各种电子眼扫描，接收后显示结果。
免疫电泳法可检测多种抗体、聚合物和是否存在异常免疫球蛋白。
4. 免疫学实时荧光定量PCR技术（qPCR）该技术通过检测特定分子的特异性荧光信号来定量PCR反应的DNA产物或RNA转录产物。
