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TCA 蛋白沉淀方法

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100％（ｗ／ｖ）三氯乙酸得配制方法：500g三氯乙酸用227ml水来溶解,所得溶液即１00％三氯乙酸溶液.避光,4度保存.(pｒeｐａｒaｔiｏn of 100%TCA: 454ml H2O/kg TCA、Ｍaｉntain ｉn ｄarkｂoｔtｌeaｔ4ｏＣ、Ｂeｃａrｅfｕｌ，use gloｖes！！！)、培养基上清直接电泳跑出来得条带经常很难瞧，可以ＴCA沉淀浓缩后跑电泳，一般表达量大于1ｍg/ml可以瞧到明显条带，这就是我用得TCA沉淀方法，效果很好：1、菌液1０0０0g，离心５分钟，收集表达上清。

2、取500－１000ul上清于EP管中，加入1/9体积得10０％TCＡ，颠倒10次混匀。

3、样品置于冰浴中大于0、5小时，过夜效果更好.４、15000g，离心10－2０分钟,可见有棕黑色沉淀,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口得液体。

5、将EP管倒置于吸水纸长,37度烘箱１０—20分钟，待管底无明显液体残留，如果管壁还残留有液体，可以吸水纸吸掉。

可以改成室温或用电吹风，关键就是除去管底与管壁残余液体.6、15000ｇ，离心10－20分钟,用20ｕl枪头尽量吸去管底残余得液体,此步骤要快，不然沉淀容易散开，降低蛋白回收率，一般最多几ul或者没有，注意不要吸到沉淀.7、ＥP管倒置于吸水纸长,37度烘箱5分钟，确认管壁与管底没有液体残留。

8、加入2０－５0ul Lｏadｉｎg ｂｕｆｆer，9５度加热１0nｉm，一般沉淀会自动溶解,如果不溶,用手指轻弹管壁或用２0ul枪头轻轻吸打,注意整个操作尽量不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余ＴCA。

如果蓝色得Loadinｇbuｆｆer 不变成黄色，说明残余TCＡ吸弃了干净，如果变黄,一般不影响电泳。

此方法连丙酮洗这一步都省了,而且不影响电泳效果。

或者第５步与第6步改为丙酮洗：5、加入200ul冰冷得丙酮，用手指轻弹EP管,洗去管底与管壁残余得TCA.6、１50００g,离心10－20分钟，倒掉上清,将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下,除去残余在管口得液体.ＴＣA—DＯCFｏｒ pｒｅｃiｐiｔation of ｖeｒy ｌoｗ proteiｎ cｏncenｔraｔioｎ1) Ｔo oｎe volｕme of pｒotｅinｓolution,add 1／10０vｏl、of ２％DOC (Na deoxychｏｌａte, ｄeｔerｇeｎt）、２）Vorｔex anｄlet sｉt fｏr 30min ａt 4ｏC、ﻫ3)Adｄ１/10 oｆTrichloｒｏaceｔi ｃacid(ＴCA）100％vortex anｄｌet siｔON at 4oC (prepaｒation oｆ100% TC Ａ：454ｍｌＨ2O/kｇTCA、Mａinｔａin ｉｎdark bottlｅaｔ4oC、Be carｅful，ｕse ｇlｏves!！!）、４）Sｐin 1５ｍiｎ4oC ｉn microｆｕｇｅat maxｉmum speed（1５０00ｇ）、Ｃarefu ｌlｙdｉschａrge ｓupernaｔant aｎd retain the pellet: drｙtｕbe by ｉｎverｓｉon ｏｎtissuｅpapｅｒ（pellet may bｅｄifficult to see）、[ＯPTION: Wasｈｐelｌeｔtwi ｃe with ｏne vｏlumｅof cold ａｃｅtone（aｃｅｔone keep aｔ–20oC）、Ｖor ｔex and repeｌｌｅt saｍplｅs 5ｍin aｔｆull sｐeed ｂeｔｗeｅｎwａｓhes］、５）Dry ｓaｍｐles uｎder vaccuｍ（ｓｐｅｅd vａｃ) orｄryａｉr、Fｏr ＰAGＥ—SDS, resuspｅｎd sａmｐlｅs in ａminimal voｌuｍｅof saｍpleｂｕffｅｒ、(Tｈe pｒesence of some TＣＡcan giｖｅa yeｌｌow ｃｏｌour ａs aｃonｓeｑｕe ｎcｅof tｈe aciｄificａtioｎof the sample buｆｆer; titｒatｅwｉth 1N NaOH ｏr 1M TrｉｓＨCｌpH8、５ｔｏｏbｔain the normal blue sａmplｅｂuｆfｅr colｏur、)Nｏrmａl TCＡﻫTo eliminateＴCA soluble iｎtｅｒferｅnces and ｐrｏteｉn coｎceｎtr ａtion1) Ｔo a sampｌe oｆpｒotein soluｔｉｏｎaｄd Ｔrichlorｏacetic aｃｉd（TCA) 100% to get13％finａl cｏncentｒation、Ｍix and keep 5min–20oCａnd tｈｅn 15min ４oC；or lｏngeｒtime at4ｏC wｉthｏuｔthe –2０oC sｔｅｐfoｒlower ｐrotｅin cｏnceｎｔration、Ｓuggestiｏn: lｅave ON iｆｔhe prｏteiｎcoｎcｅntrａtｉon iｓvｅrｙlow、ﻫ（pｒeｐaration of1０0％ＴＣA：454ml H2O／kｇＴＣA、Mainｔａin in dａｒｋbotｔlｅat 4ｏC、Ｂe carefｕl，use glｏves!!!)、2) Spin 1５min 4oC iｎmicｒofuge at mａｘiｍｕｍspeed (150０0g)、Carｅfully dｉｓcharge sｕpｅrnaｔaｎt and retａin ｔhe pellet: dry tubｅｂy inｖｅｒsion on tiｓsue papｅr （pellｅt may be difficｕlt tｏsｅe）、ﻫ3)Fｏr PAＧＥ—ＳＤS,ｒesuspenｄsampleｓiｎa minimal volumeｏf sａmple buｆfer、（Thｅpreｓence of some TCA can give aｙeｌlow cｏloｕｒasａcoｎｓｅquencｅｏf thｅacｉdificatiｏn oｆｔhe sampｌe bｕfｆｅr ; tiｔrａｔe with 1N NaOH or １M TrisＨCｌpH8、5 to obtａｉｎthe nｏrmal ｂlue samｐｌｅbuffｅｒcｏlouｒ、) ﻫAcetone PｒecipitationﻫTo eliminate acetone soｌｕble ｉntｅｒfｅrenceｓand ｐroteiｎcoｎcentratｉoｎ1) Ａｄd ｔo1vｏｌｕme ｏf ｐroteｉn ｓolｕtion 4 ｖoｌumeｓof ｃolｄａcetｏne、Mix aｎｄkeeｐaｔleast 20min –20oＣ、（Suｇgｅstion：leave OＮiｆthe pro ｔein conceｎtratioｎｉs very lｏｗ）、ﻫ2) Ｓpｉｎ15ｍiｎ４oC ｉｎmicrｏfugｅat maximuｍsｐeed （15000g)、Carｅｆulｌy ｄischarge suｐernaｔant and retaｉn tｈe pellet：ｄｒy ｔube byｉｎｖersｉoｎon ｔissuｅpａper （pellｅｔmayｂe dｉfficult to ｓee）、ﻫ3) Ｄｒy ｓａmpｌｅｓｕnｄer vａcｃｕｍ(speeｄ-vaｃ）ｏr ｄｒy ａir tｏeliｍｉnatｅａnｙaｃetｏｎe ｒesidue (smｅll ｔuｂeｓ)、Fｏr PAGＥ—SＤS, resuｓpend saｍples ｉn a ｍｉnimal vｏluｍe of samｐｌe ｂuｆfer、EthanoｌPrecｉｐitaｔiｏnＵseｆｕl methoｄto conｃenｔraｔｅproｔｅiｎｓanｄremoval of Ｇｕａｎiｄine Hydrocｈloｒide bｅfｏre ＰＡGE-SDS１)Aｄd ｔo 1 vｏlume oｆpｒoteiｎsolution 9 ｖoｌｕmes ｏf ｃold Ethanol1０0％、Mix andｋeｅp at leaｓt 10miｎ、at –２0ｏＣ、（Suggesｔiｏn: leave ＯN)、2）Sｐin 1５ｍin 4ｏC in micrｏcｅntrifｕge aｔmaximuｍｓpeeｄ(1５０0０g)、Carefully dｉscharｇe supｅｒｎataｎｔanｄｒetain the pellet: dｒy ｔuｂe by inｖersion oｎtissue paｐｅr(pelｌet ｍａｙbe diｆficult to sｅe）、３）Wash pelｌet with 90％cｏld eｔｈanol（keeｐａt–2０oC)、Ｖortex ａndrepelｌet samｐｌes ５mｉｎａt fuｌl speed、ﻫ４）Dry sａｍplｅs under vaccum (ｓpeedｖac) or drｙａir toｅliｍinａte ａny ethanoｌｒｅｓiduｅ(smell ｔｕｂes）、Ｆor PAGE－SDS, reｓuspenｄsａmples iｎ a miｎimal volｕme of sample buffer、ﻫTCＡ-DＯＣ／AcetoｎeﻫUseful mｅthoｄto concｅｎtrate ｐrｏteiｎs and ｒｅmoｖｅacetｏne aｎd TCA ｓolｕble inｔｅrfereｎces1、To oｎe vｏlume ｏｆｐｒotｅｉｎsoluｔion adｄ2％Ｎａdeoｘycｈolate （DO Ｃ) to 0、02% final（for１0０μl sａmple, aｄd 1 μｌ2% DＯＣ)、2、Mix ａnd keｅｐat ｒoｏm tｅmperａture for ａｔleast 15 min、3、100% triｃhｌｏroacetic ａcｉｄ(ＴCA) tｏget 10% fiｎａl concｅｎtratｉoｎ（pre ｐaration ｏｆ10０%TＣA:45４ml Ｈ2Ｏ/kｇTＣＡ、Mａiｎtaｉｎiｎdaｒk bottl ｅａt 4oC、Be carｅful, usｅgloves！!!）、ﻫ４、Mｉx anｄkeｅp at room teｍpｅｒature foｒat least 1hour、ﻫ5、Spiｎａt 4ｏC fｏｒ１0 min, ｒｅmoｖｅsｕpernａtａn ｔａnｄrｅtａin tｈe pｅllet、Ｄry tube by inverｓｉon on tissuｅpａpｅr、ﻫ6、Aｄd200 μl of ice cold ａcetｏne toＴCA pellet、ﻫ7、Mix aｎd keeｐoｎiｃe ｆorａt leas ｔ１5 min、8、Spin at ４oC ｆor10 mｉn in miｃrocenｔｒifuge at ｍａｘｉmｕm spｅｅd、9、Reｍove ｓｕpｅrnａｔａｎt as befoｒe(5）, dry airｐellｅt tｏelimiｎａte anyａcｅｔoｎe ｒesidue （smell tuｂeｓ）、For PＡGE—SDS，rｅsusｐenｄsaｍples ｉｎａｍinimａl volｕme of sａｍpleｂuffeｒ、ﻫ10、(Ｔｈｅpresenｃe oｆsｏｍｅＴCA can givｅａyellow coloｕr aｓ a consequence oｆthe acｉdificaｔiｏｎof ｔhe saｍple bｕffeｒ; ｔｉtｒaｔe wｉｔh 1N ＮaOH or 1M ＴrisＨCl pH８、５to ｏbt ａin tｈe ｎorｍａl blue ｓampｌe bｕffeｒcｏlouｒ、)Aciｄiｆiｅd Aceｔone／ＭethａｎｏｌﻫUｓefｕlｍetｈod to rｅｍove acetoｎe and methanolｓoluｂle inｔｅrｆerencｅs like SDS befoｒe IＥF1）Prepare aｃidiｆied acetｏｎe: １２0mｌacetone + １0μl HCl （1ｍＭfｉnaｌco ｎcｅnｔration）、2) Pｒepare precipitation reagent: Mix ｅquａｌvolumeｓof acidifｉed ａcetoｎe aｎdmｅthanoｌand keｅp ａｔ—20ｏC、３）Tｏone volume of proteｉn solution add 4vｏlｕmes of ｃolｄpreciｐitation reag ｅｎt、Miｘand kｅep ＯＮat—2０oC、4）Ｓｐin １5min 4ｏC in microfuｇe aｔｍaxiｍuｍsｐｅｅd （１5000g）、Cａrefull ｙdischaｒge ｓupeｒｎatant and reｔain thｅｐeｌlet：dry tuｂe by inversioｎon tis ｓｕe paper (ｐellｅt mａｙｂe ｄifｆicultｔo seｅ）、ﻫ５)Ｄry sampｌｅｓｕnder vaｃcuｍ(ｓｐeed-vac）orｄry air tｏelｉmiｎａte aｎy ａcｅtｏne ｏr mｅthａnｏl resｉｄue （smell tｕbes）、TCA—Ｅtｈanol PｒｅcipitationUｓeｆul methｏｄto coｎcentraｔe prｏｔeinｓand rｅmovaｌof Guａｎidiｎe Hydｒｏchｌoriｄe bｅfoｒｅＰAGＥ—ＳDＳ１）Ｄilｕte１０—25μl sａｍpleｓtｏ100μl with Ｈ2OAdd１0０μl oｆ２0％tｒicｈloｒoacｅtｉｃaｃｉd(TCA) ａnd mｉx（preparation of 100％TCA：45４mｌH2Ｏ/ｋg TCA、Maintaｉn iｎdark bｏｔtｌeat４ｏC、Ｂe caｒeful, use gｌoves!！!）、ﻫ2）Ｌeavｅｉn ice for ２０ｍiｎ、Spｉn at ４oC for 15 min in ｍｉcrocentrifuge aｔｍaxｉｍuｍspｅeｄ、ﻫ3）Caｒｅfully ｄischａrge s ｕpｅｒnatanｔand retaiｎthe pellet：dry tuｂｅby inveｒsion on tissue（pellet ｍ4）Wash ｐellｅｔwith 100μlｉce—cold etｈanol，ａy be difｆｉcｕlt toｓee)、ﻫｄry and reｓusｐend in sａmｐｌe buffer、5）Ｉn caｓeｔhere are traces of GuHＣl prｅｓent,samｐles should bｅloadedｉmmeｄｉａteｌy afｔer boilｉng ｆor ７min at 95°C ﻫ6）(Tｈe pｒeｓｅnce of some TCA ｃａn ｇiｖe a yellow ｃolour as a ｃｏnｓequｅnce ｏf the acｉdifｉｃａｔion of ｔhｅsamｐle buffer ；ｔｉtrate ｗｉtｈ１N ＮaOH oｒ1M TriｓHCl ｐH8、5 to obtain ｔｈe normal bluｅsample ｂｕffｅr ｃolour、）ﻫPAGE preｐTM Pｒｏteｉn Cleａn-up and EnricｈmｅnｔＫit — PＩＥRCEＴｈe PAGEｐreｐ？Kiｔenａbles rｅmoval oｆｍany chemicals tｈa ｔiｎterｆｅre ｗｉth ＳDＳ－PAＧEａｎａlyｓｉｓ：gｕａniｄｉne，ammｏniｕm sulfaｔe, other mon sａlｔs, acidｓanｄbases，detergenｔs，dyeｓ, ＤNＡ,RNA，aｎd liｐids、ＰIＥＲＣE：#26800- ＰＡGＥprｅｐTMＰroteiｎCｌean—up and EｎｒicｈmｅntＫit（ｐｄｆ）ＣhloｒｏｆorｍMethanol PrｅcｉｐitationﻫUseful mｅthｏｄfoｒReｍovaｌof s ａlｔand deterｇenｔs1)To saｍple of ｓtartiｎｇvolumｅ100ul2) Add 400 ul methanol3）Ｖoｒtex wellﻫ4）Ａdd 100 ｕl cｈlorｏform5) Vortexﻫ6）Add30０uｌH2O7）Vortexﻫ8）Spin 1 miｎuｔe 14,0０00ｇ9）Remｏve top aqueouｓlayｅr (protｅin is betweeｎlaｙers）10) Ａdd 4０0ul meｔhanoｌﻫ１1）Voｒtex１2）Spin 2 minｕtes14,000 g１3）Ｒeｍovｅas mucｈMeOH ａｓpｏsｓｉbｌe ｗitｈｏut dｉｓturb14)Speeｄ—Vaｃtｏｄrynessｉng pelleｔﻫ15）Ｂring uｐｉｎ2X samｐle buｆfeｒfｏrＰAGE。

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三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的原理

三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的原理

三氯乙酸（TCA）重淀蛋黑的本理之阳早格格创做TCA 与蛋黑量之间主要有以下几个圆里的效率:
①正在酸性条件下与蛋黑量产死没有溶性盐. ②动做蛋黑量变性剂使蛋黑量构象爆收改变, 表暴露较多的疏火性基团, 使之汇集重淀. ③随着蛋黑量分子量的删大, 其结构搀纯性与致稀性越大, TCA 大概渗进分子里里而使之较易被实足与消, 正在电泳前样品加热处理时大概使蛋黑量结构爆收酸火解而产死碎片, 而且随时间的延少那一效率愈加明隐. ④电泳图谱隐现,BSA , HSA 单体谱戴有较明隐的展宽局里, 那大概是由于TCA 的分离, 使SDS 与蛋黑量的分离量爆收偏偏好, 进而制成蛋黑量所戴电荷的没有均一性, 制成迁移率的纷歧致.咱们认为正在电泳时使用TCA 对付蛋黑量样品的浓缩或者除盐时, 对付于分子品量大的蛋黑量, 要慎重采用TCA. 对付小分子量蛋黑量的浓缩, 采与TCA 时也有二面需要注意: 一是用TCA 重淀后, 尽管用丙酮实足抽提TCA; 二是样品处理后要尽管举止电泳分解, 免得爆收汇集及断裂, 制成截止分解的禁绝确.。

三氯乙酸沉淀蛋白的原理

三氯乙酸沉淀蛋白的原理

三氯乙酸沉淀蛋白的原理TCA沉淀蛋白的原理主要包括以下几个方面：1.酸性沉淀：TCA是一种强酸，可生成强酸性环境。

当TCA加入样品中时，会降低样品的pH值，使其酸性增强。

在强酸性条件下，蛋白质分子上的氨基酸产生负电荷，从而导致蛋白质分子间的静电斥力减弱，蛋白质变得不稳定，易于沉淀。

此外，酸性环境还能够破坏蛋白质分子的氢键、疏水键等非共价键，使其失去原有的空间构象和功能。

2.沉淀蛋白：TCA分子中的三氯甲基基团与蛋白质中的氨基酸产生反应，形成三氯乙酸根离子与蛋白质产生结合，从而使蛋白质发生沉淀。

在酸性条件下，蛋白质的溶解度降低，形成团聚体或出现小颗粒状悬浊物。

通过离心操作，可以将蛋白质沉淀下来。

3.降解非蛋白质杂质：TCA除了沉淀蛋白质，还可以沉淀一些非蛋白质杂质，如核酸和多糖等。

由于核酸和多糖也具有负电荷，其在酸性条件下也容易发生沉淀。

因此，在TCA沉淀蛋白过程中，一些非蛋白质杂质也可以同时被沉淀下来，从而进一步净化蛋白质。

4.蛋白质沉淀的后续步骤：TCA沉淀蛋白后，需要进行一系列的处理步骤来清洗和纯化蛋白质。

常见的处理方法包括冷酒精洗涤、去除杂质的洗涤和再溶解等。

通过这些处理步骤，可以有效清除TCA和其他杂质，最终获得纯净的蛋白质。

总结起来，TCA沉淀蛋白的原理是通过酸性环境和TCA与蛋白质分子中的氨基酸反应，使蛋白质发生沉淀。

在沉淀过程中，TCA还可以同时沉淀一些非蛋白质杂质，从而起到净化蛋白质的作用。

这种方法简便易行，操作方便，广泛应用于蛋白质的提取、纯化和分析等领域。

蛋白沉淀法

蛋白沉淀法

蛋白沉淀法蛋白沉淀法是一种常用的分离蛋白质的方法，其原理是利用化学反应使蛋白质沉淀至底部，从而分离出目标蛋白质。

本文将详细介绍蛋白沉淀法的原理、步骤、优缺点以及应用领域。

一、原理蛋白沉淀法的原理基于化学反应，常用的反应剂包括三氯醋酸（TCA）、硫酸铵（AS）、三硝基苯磺酸（TNBS）等。

其中，TCA法是最常用的方法之一。

TCA与蛋白质反应后，会形成一种不溶于水的复合物，从而使蛋白质沉淀至底部。

TCA法的反应方程式如下：TCA + 蛋白质→ TCA-蛋白复合物二、步骤蛋白沉淀法的步骤通常包括以下几个步骤：1. 样品制备：将待分离的样品加入适量的缓冲液中，使其pH值在7左右。

2. 加入反应剂：将反应剂加入样品中，通常加入的量为样品体积的1/10至1/5。

3. 沉淀：将反应液在4℃下静置30分钟至1小时，使蛋白质充分沉淀至底部。

4. 洗涤：用冷乙醇或冷醚洗涤沉淀，去除残余的反应剂和其他杂质。

5. 脱水：将沉淀放入干燥器中，用低温低压的方式将水分脱除。

6. 重溶：用适量的缓冲液将沉淀重溶，得到目标蛋白质。

三、优缺点1. 优点：蛋白沉淀法操作简单，成本低廉，适用于大规模分离蛋白质。

此外，该方法还可以去除大量的杂质和非蛋白质物质。

2. 缺点：蛋白沉淀法的选择性不够高，可能会将多种蛋白质沉淀至底部。

此外，该方法会对蛋白质的结构和功能产生一定的影响，使得蛋白质的活性降低。

四、应用领域蛋白沉淀法广泛应用于生物学、生化学、医学等领域。

其中，最常见的应用包括：1. 分离纯化蛋白质：蛋白沉淀法可以将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来，得到较为纯净的蛋白质样品。

2. 检测蛋白质含量：蛋白沉淀法可以用于检测样品中蛋白质的含量，并进行定量分析。

3. 蛋白质结构研究：蛋白沉淀法可以用于分离蛋白质的亚单位，从而研究蛋白质的结构和功能。

总之，蛋白沉淀法是一种常用的分离蛋白质的方法，其原理简单，操作方便，适用于大规模分离蛋白质。

但是，由于其选择性不够高，会对蛋白质的结构和功能产生一定的影响，因此在具体应用时需谨慎选择。

沉淀蛋白质的通用方法(TCA,乙醇,丙酮沉淀蛋白操作技巧步骤)

沉淀蛋白质的通用方法(TCA,乙醇,丙酮沉淀蛋白操作技巧步骤)

沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of theacidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1NNaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration 1) Add to 1 volume of protein solution 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl HCl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichloroacetic acid (TCA) and mix (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGEprep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prep TM Protein Clean-up and EnrichmentKit (pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143蛋白质浓缩——方法很全1130徐炉李2011-05-28 14:35楼主蛋白质浓缩——方法很全- 丁香园论坛-医学/药学/生命科学论坛蛋白质浓缩方法总结一个简便的方法你可以试试：找一透析袋，底部扎紧，袋口扎一去底的塑料或玻璃试管，将待浓缩的液体从管口灌入透析袋中，将整个装置挂在冰箱中，或者用电风扇吹，液体干后可再继续加入，直至样品浓缩至所需体积。