双向扩散试验
双向扩散试验：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体作出定性分析。双向扩散试验也分为试管法和平板法。
1、试管法：
在含有抗原的溶液和含有抗体琼脂中间，加一层普通琼脂，让下层抗体和上层抗原向中间自由扩散，在抗原、抗体浓度最适时形成沉淀线。
2、平板法：
是在琼脂板上相距3～5mm打一对孔，或者梅花孔、双排孔、三角孔等。在相应孔中加入抗原或抗体，待其自由扩散后，抗原、抗体形成可见的沉淀线。根据沉淀线的位置可作如下分析：
①抗原、抗体是否存在及其相对含量。一般沉淀线靠近抗原孔，提示抗体量大，沉淀线靠近抗体孔，提示抗原量大。
②抗原、抗体相对分子量的分析;抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量影响。分子量小者，扩散快，反之较慢。由于慢者扩散圈小，局部浓度较大，形成沉淀线弯向分子量大的一方。如若两者分子量相等，则形成直线。
③抗原性质的分析，受检的抗原性质可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分别出现完全融合、部分融合、不融合三种情况;
④抗体效价的滴定。抗体效价是抗原、抗体经过自由扩散形成沉淀线，出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。
琼脂扩散试验
利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散，若抗原与抗体对应,并且比例适当，就会出现白色沉淀线,此为阳性反应。琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。又可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类.
单向琼脂扩散试验 是一种常用的定量检测抗原的方法.将适量抗体与琼脂混匀,浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散,边扩散边与琼脂中的抗体结合.一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环.沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。
双向琼脂扩散试验 是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上，待其凝固后，在琼脂板上打孔,将抗原、抗体分别注入小孔内，使两者相互扩散。如果抗原、抗体相互对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线，不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同，可在琼脂中形成不同的沉淀线。本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等.缺点是需要时间过长，灵敏度不高.
琼脂免疫扩散试验
材料与试剂
1．琼脂粉
2．平皿
3．打孔器
4．生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。
操作方法
1．称取一定量的琼脂粉，按1％左右（0。8%～1。5％)的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。
2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。
3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径）按模板打孔.也可直接用组合打孔器打孔.现在一般多打成梅花形孔图。
4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。
5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。
双向琼脂扩散试验
一、实验目的
1、掌握双向琼扩试验的原理和用途
2、掌握双向琼扩试验操作方法
3、观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线
二、原理
血清学反应：
• 凝集反应
• 沉淀反应
• 补体参与的反应
• 中和反应
凝集反应： 颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性性抗原，与相应抗体结合， 在有适当电解质存在，经过一定时间，成肉眼可见的凝集团块 参与凝集反应的抗原称凝集原，抗体称为凝集素
沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在电解质存在条件下，即可形成肉眼可见的沉淀物 沉淀物只在抗原抗体比例合适时才出现
补体参与的反应： 补体结合试验是根据补体能与任何抗原抗体复合物结合，但不能单独同抗原或 抗体结合的特性，用特定的补体来检测抗原抗体间有无特异性结合
中和反应：针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性（ 病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或 动物上进行，一般将抗体作稀释，与一定量的病毒混合，然后检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残余感染性）• 终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或
病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀释度来表示。 （ 中和试验具有很强的特异性，是检测病中和试验具有很强的特异性， 毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法，也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体） 双向琼脂扩散试验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。
两者相互扩散，当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时，就会形成抗原抗体复合物的沉淀【可溶性抗原（如蛋白质、多糖、脂多糖、病毒的可溶性抗原、结合蛋白等）与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线，若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度的不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。且根据沉淀线融合情况，还可鉴定两种抗原是完全相同还是部分相同。所以，可用此法来分析和鉴定标本中多种抗原或抗体成份，并用以测定抗原或抗体的效价。】
双向琼脂扩散试验
一、实验目的
1、掌握双向琼扩试验的原理和用途
2、掌握双向琼扩试验操作方法
3、观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线
二、原理
血清学反应：
•凝集反应
•沉淀反应
•补体参与的反应
•中和反应
凝集反应
：颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在，经过一定时间，成肉眼可见的凝集团块参与凝集反应的抗原称凝集原，抗体称为凝集素
沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在电解质存在条件下，即可形成肉眼可见的沉淀物沉淀物只在抗原抗体比例合适时才出现
补体参与的反应
：补体结合试验是根据补体能与任何抗原抗体复合物结合，但不能单独同抗原或抗体结合的特性，用特定的补体来检测抗原抗体间有无特异性结合
中和反应：针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性（病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或动物上进行，一般将抗体作稀释，与一定量的病毒混合，然后检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残余感染性）
•终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀释度来表示。（中和试验具有很强的特异性，是检测病中和试验具有很强的特异性，毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法，也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体）双向琼脂扩散试验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散，当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时，就会形成抗原抗体复合物的沉淀【可溶性抗原（如蛋白质、多糖、脂多糖、病毒的可溶性抗原、结合蛋白等）与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。
抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。每一抗原与其相对应抗体只能形成一条沉淀线，若同时含有若干对抗原抗体系统，因其扩散速度的不同，可在琼脂中出现多条沉淀线。且根据沉淀线融合情况，还可鉴定两种抗原是完全相同还是部分相同。所以，可用此法来分析和鉴定标本中多种抗原或抗体成份，并用以测定抗原或抗体的效价。】
