1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌） ：
马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。 用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌） ：
牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml，用于抑制真菌生长。115℃，20min灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨 10 g，酵母提取物 5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；
4、DSM1培养基：磷酸三钾 26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠 9.999 g，硫酸镁 0.2465 g，硫酸铵 19.821 g，牛肉膏 3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨 10 g，葡萄糖 1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；
5、DSM2培养基：磷酸三钾 26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠 9.999 g，硫酸镁 0.2465 g，硫酸铵 19.821 g，牛肉膏 3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨 10 g，葡萄糖 1 g 蒸馏水至1000
mL,pH=7.0；
6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 µM，FeCl3 50 µM，ZnCl2 1 µM，VB1 2 µM，甘油 0.5 %，谷氨酸 0.5 %，色氨酸 50 µg/mL，苯丙氨酸 50 µg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因
检测方法
根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。
组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。
CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium
Bromide）。 主要用于提取生物DNA
步骤（1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状；
（3） 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；
（4） 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二；
（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min后取出；
（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3
min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀；
（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中；
pda培养基结果讨论
PDA培养基结果讨论
引言：
PDA（Potato Dextrose Agar）培养基是一种常用的富含碳水化合物和氮源的培养基，广泛应用于真菌和霉菌的生长和研究中。本文将对PDA培养基的结果进行讨论。
样品来源：
本次实验使用了来自不同环境中的真菌和霉菌，包括从野外土壤、植物表面、室内空气等处采集到的样品。
实验方法：
1.制备PDA培养基：将500g马铃薯切成小块，加入1000ml蒸馏水中煮沸30分钟，过滤后加入20g葡萄糖、20g琼脂和适量蒸馏水至1000ml。pH值调整至5.6-5.8，压力灭菌15分钟。
2.接种：将不同来源的真菌和霉菌分别接种在PDA培养基上，并在恒温箱中以25℃孵育7天。
3.观察：观察各个接种点上是否有生长，并记录其形态特征。
结果：
经过7天孵育后，我们发现所有样品都在PDA培养基上生长了，其中有些生长得非常快，甚至在2-3天内就出现了大量菌落。以下是各个样品的观察结果：
1.来自野外土壤的真菌：该样品的生长速度较快，7天内形成了大量白色菌落。观察下来，这些菌落呈圆形或半圆形，表面光滑，质地柔软。
2.来自植物表面的霉菌：该样品在PDA培养基上生长得非常迅速，在3天内就出现了大量白色绒毛状的菌丝。观察下来，这些菌丝呈无规则分支状，并且很容易扩散到周围。
3.来自室内空气的真菌：该样品在PDA培养基上生长得比较缓慢，在7天内只有少量白色菌落出现。观察下来，这些菌落呈不规则形状，表面稍微粗糙。
讨论：
1.PDA培养基适合真菌和霉菌的生长
从我们实验结果可以看出，所有样品都在PDA培养基上成功地生长了。这说明PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基，其富含碳水化合物和氮源的成分可以提供这些微生物所需的营养。
2.不同来源的样品生长速度不同
我们发现，不同来源的样品在PDA培养基上生长速度有所不同。来自野外土壤的真菌生长得比较快，而来自室内空气的真菌则生长得比较缓慢。这可能与这些样品所处环境中微生物数量和种类有关。
PDA培养基的配制方法
PDA（Potato Dextrose Agar）是一种富含淀粉和葡萄糖的琼脂培养基，广泛用于真菌和霉菌的培养和鉴定。下面是PDA培养基的精确配制方法：
原料准备：
-250克马铃薯
-20克葡萄糖
-15克琼脂
工具准备：
-秤
-剪刀
-玻璃容器或烧杯
-培养瓶或琼脂培养皿
-灭菌器或压力锅
-pH计或pH试纸
-搅拌棒或吹球
步骤：
1.清洁工具：将玻璃容器、培养瓶、搅拌棒等工具用肥皂水洗净，并用自来水冲洗干净。 2.马铃薯的制备：先用清洁的剪刀将250克马铃薯去皮，然后切成均匀的小块。
3.煮马铃薯：将马铃薯块放入玻璃容器或烧杯中，并加入足够的自来水，使其覆盖马铃薯。然后将容器放入灭菌器或压力锅中，煮沸30分钟杀灭马铃薯中的微生物。
4.过滤溶液：将煮熟的马铃薯溶液用细网过滤器过滤出来，以去除固体残渣。
5.加入琼脂：将过滤后的马铃薯溶液重新倒回玻璃容器或烧杯中，随后加入15克的琼脂。将容器放入微波炉中，加热溶解至琼脂完全溶解为止。
6.加入葡萄糖：将20克葡萄糖加入琼脂溶液中，搅拌均匀。
7.均匀分配：将培养基溶液分装到培养瓶或琼脂培养皿中。每瓶或皿中的溶液量应根据需要进行调整，一般为20-25毫升。
8.pH调节：使用pH计或pH试纸检测培养基的酸碱度。PDA培养基的理想pH值为5.6、如果pH值高于或低于此值，则使用盐酸或碳酸氢钠溶液进行调节，直到达到理想的pH值。
9. 灭菌：将装有培养基的瓶或皿盖好，然后放入灭菌器或压力锅，进行高温高压灭菌。通常在121℃下压力为15磅（或1.05kg/cm²）下灭菌20分钟。
10.存储：在灭菌后的培养基冷却到接近室温后，将其存储在冰箱中，以防止微生物生长。
注意事项： -所有使用的工具和培养基都必须经过彻底的消毒。
-在煮马铃薯时，要确保马铃薯块完全煮熟，以确保有效杀灭微生物。
-在加入琼脂和葡萄糖时，要确保琼脂完全溶解，葡萄糖均匀分散。
