蛋白电泳仪技术要求
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电泳仪电泳仪于1937年研发,常用支持物体有滤纸、醋酸纤维薄膜等。
电泳技术是分子生物学讨论不可缺少的紧要分析手段。
电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。
目录注意事项使用方法仪器原理注意事项1.电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电。
同时要求仪器必需有良好接地端,以防漏电。
2.仪器通电后,不要临时加添或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3.由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至尽头所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.在总电流不超过仪器额定电流时(电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则简单影响仪器寿命。
5.某些特别情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必需先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,简单造成不必要的人为机器损坏。
6.使用过程中发觉异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立刻切断电源,进行检修,以免发生意外事故。
研发背景1937年,瑞典生化学家Tiselius集前人百余年探究电泳现象之大成,创造了Tiselius电泳仪,在此基础上建立了讨论蛋白质的自由界面电泳方法,利用该法首次证明人血清是由白蛋白(A)、α、β、γ球蛋白构成,并因此于1948年获得阿果奖。
随后电泳技术的进展突飞猛进,1949年,RicketlsMarrack等人证明人血清蛋白质经电泳分别可依次分为白蛋白,α1、α2、β、γ球蛋白五个组分,1957年Reiner对人血清五个组分蛋白进行了定量分析。
但自由界面电泳没有固定支持介质,扩散和对流作用较强,影响分别效果,于是在50时代相继显现了固相支持介质电泳。
蛋白质差异双向电泳仪技术参数要求:第一向等电聚焦电泳系统1. 工作条件:温度:15 –32℃;相对湿度:0 - 70%;2. 应用范围:进行固相pH梯度等电聚焦分离,应用于蛋白质组研究中;3. 技术规格3.1 电极区:铜镀金表面;3.2 胶条槽容量:最多12 个相同长度的胶条槽;3.3 电泳平台温度:15 - 31℃±1℃;3.4 控制面板:7个触摸式按键和液晶显示器(LCD):4行,每行24个字符;3.5 程序参数:溶胀时间, 电泳平台温度, 每根胶条最大电流极限, 升压设定, 电压上升模式和电压持续时间;3.6 方法存储:主机可生成10个, 每个方法可以多达9步;通过电脑可以生成、存储和编辑任何数目的方法;3.7 电脑控制:电脑控制最多4台主机;3.8 控制软件3.8.1开始、暂停和终止主机运行, 针对每种胶条推荐优化的等电聚焦参数;3.8.2实时监控电泳时的电压、电流、伏小时,以图形方式显示,可存储或输出到其它应用程序如Excel中;3.8.3通过网络远程监控仪器;3.8.4输出、存储和打印专业的报告;3.9 水平调节:可调节水平的支脚;3.10 灵活的盖子,适合运行对光敏感的蛋白标记样品,并有开盖自动断电的高压保护装置;3.11 电源:内置电源3.11.1 电压:0 - 10000 V, 分辨率: 10 V;3.11.2 电流:0 - 1.5 mA, 分辨率:1 µA;3.11.3 功率:最大12 W ;3.12 胶条槽:3.12.1 材料:氧化铝陶瓷,导热性能高,避免出现热点(hot spot);3.12.2 涂层:表面疏水涂层,防止蛋白粘附;3.12.3胶条槽:13cm、24cm 陶瓷胶条槽各6根;3.13 固相pH梯度干胶条24cm pH3-10非线性干胶条,(12根/包)IMM. DRYSTRIP PH 3-10 NL, 24CM 5包;13cm pH3-10非线性干胶条,(12根/包)IMMOBILINE DRYSTRIP PH3-10NL 2包;4. 原装进口必备附件碘乙酰胺25g;IPG缓冲液PH 3-10NL 1ml;平衡管12根第二向中等通量高分辨率垂直电泳系统1. 工作条件温度:4 - 40℃;相对湿度:0 - 90%;2. 应用范围:中等通量分离生物分子,进行蛋白质组研究中的第二向SDS PAGE 分离蛋白;3. 技术规格3.1 凝胶容量:在一个电泳槽中同时运行1 到6 块胶,适合7-24cm任何长度的一向胶条;3.2 最大凝胶尺寸:26 x 20cm, 1.0mm 厚;3.3 电泳缓冲液体积:阳极:4.5 升;阴极:0.8升;3.4 内置缓冲液循环泵,流速10L/min;3.5 制冷:通过陶瓷热交换器;3.6 灌胶模具:一次同时灌1到6块胶,内含分隔片和填充片,方便卸胶,节省胶液;3.7 电源3.7.1输出电流:1-400mA,1mA递进;3.7.2输出电压:6-600V,1V 递进;3.7.3 输出功率:100W;3.7.4 输出类型:恒电压, 恒电流或恒功率,并自动切换;3.7.5 储存和调用最多3个方法;3.7.6 输出终端:并行两套;3.7.7 计时器:1min-500h, 1Vh-500kVh,连续可调;3.7.8 安全特性:超载/短路监测;3.8冷却水循环装置;3.8.1 工作温度范围:-10 到90℃;3.8.2 温度控制精度:< ± 0.1℃(在20℃);3.8.3 水浴体积:2.8升;3.8.4 泵容量, 流速17 L/min,压力0.3 bar;3.8.5 功率:1200W;4. 原装进口必备附件玻璃板(包括长板,短板和垫片):7对;空白板:5套;灌胶模具1个;胶盒支架:2个;5. 质量保证期:自仪器安装验收合格后,提供整机一年免费保修。
★电热恒温水浴锅1.带定时功能键的数显微电脑温度控制;2.不锈钢内胆;3.超温声光跟踪报警;4.电源电压:220V 50Hz,功率:2000W;5.控温范围:RT+5℃~99℃;6.温度分辨率:0.1℃,恒温波动度:±0.5℃;7.工作室尺寸(mm):≥600*300*200;8.定时范围:1~9999分钟。
★凝胶成像仪1适用不同样品来源:不透光样品(如照片、纸张、杂交膜等);荧光样品(如EB 染色的DNA凝胶、SYBR:Safe荧光染色DNA凝胶、Radiant:Red荧光染色的RNA凝胶等)及各种染色的蛋白质凝胶(如考染、银染、SYPRO:Ruby或Oriole荧光染色等);2CCD分辨率:1360×1024;3动力学范围>3个数量级,12bit灰度级(非插值);4CCD控制:马达自动控制;5镜头缩放:8.5-51mm镜头;F1.2;6暗箱:密封暗箱可用于化学发光检测;7滤光片:标配2个,3个可选;8备有校正镜头曲面度的专用滤光片;9自动对焦校正板,确保成像过程无需再次调节;10灵敏度:0.1ngEB染色的DNA;11信噪比:≥56dB;12曝光时间:最短0.001s,每0.001s步进;13激发光源:透射紫外和反射白光;反射蓝光、透射白光(可选);14紫外光源:302nm标配;254nm和365nm选配;15紫外自动光闭保护;16UV防护板:方便直接用紫外平台进行样品肉眼观察;17切胶尺:切割凝胶;18荧光尺:系统检测并用于测量长度;19具体应用范围:核酸凝胶、蛋白凝胶、印迹膜;20软件功能:20.1全自动专业成像及分析软件对系统进行自动控制,包括采集、优化、定量、分析图像及报告输出。
20.2其他配置:品牌电脑(双核处理器、19寸液晶显示器、2G内存、500G硬盘)1台,激光打印机1台。
★PCR仪1.具有温度梯度功能;2.具有半导体加热制冷方式;3.反应模块:96孔;4.最大升降温速率≥3.5℃/秒;5.温度范围0-100℃;6.温控准确度±0.25℃;温控均一性±0.5℃;★电泳仪1.输出范围:电压10–500 V;电流0.01–2.5 A;功率1–500 W2.输出类型:恒流、恒压、恒功率、伏特小时控制(99000 V-hr)3.可1分钟到99小时59分钟区间定时4.具有暂停/继续功能功能5.可进行编程6.具有断电后自动恢复功能7.安全性能:空载监测;荷载突变监测;过载/短路监测;地面漏电保护;过压保护过载/短路监测8.输出插孔:4对并联。
SDS—PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量实验目的了解SDS—PAGE垂直板型电泳法的基本原理及操作技术.学习并掌握SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。
实验原理SDS—PAGE电泳法,即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法,。
1.在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。
2.在聚丙烯酰胺凝胶系统中,加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS),SDS是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开,并结合到蛋白质分子上(在一定条件下,大多数蛋白质与SDS的结合比为1。
4gSDS/1g蛋白质),使各种蛋白质—SDS 复合物都带上相同密度的负电荷,其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量,从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
此时,蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小,而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。
3。
当蛋白质的分子量在15000~200000之间时,电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系,符合下列方程:1gMr =K―bm R式中:Mr为蛋白质的分子量;K为常数;b为斜率;mR为相对迁移率。
在条件一定时,b 和K均为常数。
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图,可获得一条标准曲线。
未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量.仪器、原料和试剂仪器:垂直板型电泳槽;直流稳压电源;50或100μl微量注射器、玻璃板、水浴锅,染色槽;烧杯;吸量管;常头滴管等。
原料:低分子量标准蛋白质按照每种蛋白0。
5~1mg·ml-1样品溶解液配制。
可配制成单一蛋白质标准液,也可配成混合蛋白质标准液.试剂:(1)分离胶缓冲液(Tris-HCl缓冲液PH8。
9):取1mol/L盐酸48mL,Tris 36。
3g,用无离子水溶解后定容至100mL。
(2)浓缩胶缓冲液(Tris-HCl缓冲液PH6.7):取1mol/L盐酸48mL, Tris 5。
竭诚为您提供优质文档/双击可除电泳分离血清蛋白实验报告篇一:醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告前言血清蛋白:血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。
当身体需要能量或者需要建造材料时,脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中,脂肪酸被血清蛋白获取,并被运送到需要的部位。
牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别,它不是一定的,是多聚物,有的地方测的70000,这就是一个数据了。
在做pcR的时候会用到它。
牛血清蛋白是血液的主要成分,分子量68kD。
等电点4.8。
含氮量16%,含糖量0.08%。
仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。
白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。
白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。
血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、ph缓冲作用、载体作用和营养作用。
在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。
醋酸纤维薄膜电泳:醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。
它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。
它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15mm为宜。
太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。
已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,类固醇激素及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。
特点:1.(1)醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了测定的精确性。
(2)快速省时。
由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45—60min即可,加上染色,脱色,整个电泳完成仅需90min左右。
蛋白电泳梯度胶-概述说明以及解释1.引言1.1 概述蛋白电泳是一种常用的实验技术,用于分离和分析蛋白质混合物。
蛋白电泳梯度胶是蛋白电泳中常用的胶体介质,它通过控制胶的成分和结构,能够提供不同浓度的梯度,从而实现对蛋白质的高效分离。
蛋白电泳梯度胶的制备方法主要包括两种,一种是梯度洗脱法,另一种是梯度聚合法。
梯度洗脱法是通过在胶中添加成分不同的溶液,在电泳过程中逐渐改变胶的成分浓度来实现梯度效应。
梯度聚合法则是通过在胶中同时聚合两种不同浓度的单体,通过混合单体的比例来得到梯度胶。
蛋白电泳梯度胶具有广泛的应用领域。
首先,在蛋白质分离中,梯度胶可以提供更高的分辨率和更好的色谱性能,从而实现更好的蛋白质分离效果。
其次,在研究蛋白质的组成和结构方面,梯度胶可以用于蛋白质的分级分离,从而得到不同分子量的蛋白质组分,方便进行后续的分析。
此外,蛋白电泳梯度胶还可以应用于蛋白质相互作用的研究,例如蛋白质的相互结合和复合物的形成等。
总之,蛋白电泳梯度胶作为一种重要的分离技术,在蛋白质研究领域具有广泛的应用前景。
本文将从蛋白电泳原理、制备方法和应用领域等方面对蛋白电泳梯度胶进行深入探讨,以期能够为相关研究提供一定的参考和启示。
1.2 文章结构文章结构是指文章中不同部分的组织和排列顺序,它是确保文章逻辑清晰、层次分明的关键要素。
本文的结构主要包括引言、正文和结论三个部分。
引言部分主要包括概述、文章结构和目的三个方面的内容。
首先,文章会对蛋白电泳梯度胶进行概述,介绍其基本概念、原理和应用领域。
然后,文章会详细说明本文的结构安排,包括各个章节的主题和内容。
最后,文章会明确说明本文的目的,即通过对蛋白电泳梯度胶的介绍和分析,探讨其在科研领域中的应用前景和发展趋势。
正文部分主要包括蛋白电泳的原理、蛋白电泳梯度胶的制备方法和蛋白电泳梯度胶的应用领域三个方面的内容。
首先,文章会详细介绍蛋白电泳的原理,包括电泳梯度胶在蛋白质分离中的作用、蛋白质电泳迁移的原理等。