大肠杆菌培养基配制及培养方法

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

大肠杆菌培养操作规程一、目的及适用范围制订本规程的目的为规范大肠杆菌总RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质量可控的质控品及标准品基质。

本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总RNA的操作。

依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液2.7ml。

二、常规时间安排预计安排步骤耗材准备PBS储存液配置第一天培养基配制灭菌领取菌种菌种复苏第二天接种分装培养RNA完全提取根据需求，自行安排。

三、培养用耗材准备1、锥形瓶、双层铝箔、棉绳2、包扎一盒1ml的枪头，50ml康宁冻存管四、培养基配制(早上)培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。

1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：例如：配制350mlLB培养基配方如下：[配置双份]蛋白胨成分名称TRYPTONE称取质量3.5g钠3.5gYEAST某TRACT1.75g补足350ml氯化酵母提取物去离子水耗时评估20min40min20min3h10min9h40min13h2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、溶解。

待灭菌。

五、PBS溶液配制1、10某PBS不需要每次生产都配置，生产前跟检查PBS量是否充足，如充足则可跳过该步骤。

2、配制10某PBS缓冲液备用；例如配制1000L10某PBS储存液，取1000ml配液瓶，根据下表称取各物质。

用去离子水定容至1000ml。

名称浓度H2ONaClKClNa2HPO4KH2PO4称取量10某1000ml80.0g2.0g14.4g2.4g3、将PBS溶液混合均匀，包扎好，待灭菌。

六、灭菌1、将配置好的PBS溶液，培养基，1ml枪头准备好。

2、确认灭菌锅内水位是否达到标准水位，若未达到，则加入纯化水至标准水位。

3、将包扎好的培养基、PBS溶液和枪头盒一同放入灭菌锅。

注意PBS盖不可太紧，盖紧灭菌锅盖，须旋紧；设置各参数：121℃，20min。

4、灭菌结束后，待灭菌锅压力降至“0”，打开灭菌锅盖；取出灭好菌的培养基和枪头盒。

大肠杆菌培养引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性细菌。

它是一种常见的微生物实验室模型生物，在分子生物学研究、基因工程、生物技术等领域发挥着重要作用。

本文将介绍大肠杆菌的培养方法，包括培养基的配制、接种方法、培养条件的控制等。

培养基配制大肠杆菌培养基的配制是培养大肠杆菌的重要前提，不同的菌株和研究目的需要使用不同的培养基。

下面介绍两种常用的培养基配方：Luria-Bertani（LB）培养基LB培养基是最常用的大肠杆菌培养基之一，它是一种富含营养物质的培养基，适用于一般的大肠杆菌培养。

配方：•水：800 ml•Bacto-tryptone：10 g•Yeast extract：5 g•NaCl：10 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。

M9盐基培养基M9盐基培养基是一种缺乏有机碳源和氮源的无营养培养基，适用于研究大肠杆菌的生理特性或用于表达外源蛋白。

配方：•水：700 ml•Na2HPO4：12.8 g•KH2PO4：3 g•NH4Cl：1 g•NaCl：0.5 g•CaCl2：0.1 g•MgSO4：0.2 g•葡萄糖：2 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。

接种方法大肠杆菌的接种方法有多种，常见的有无菌接种环和无菌注射器接种法。

下面分别介绍这两种接种方法：无菌接种环接种法步骤：1.用火焰将无菌接种环烧红，冷却至适宜温度。

2.打开培养基瓶盖，用无菌接种环蘸取待接种的大肠杆菌菌株。

3.快速将无菌接种环插入含有培养基的琼脂平板（或试管）中，并迅速转动接种环1-2圈，使菌体均匀分布在琼脂平板（或液体培养基）表面。

4.关闭琼脂平板（或试管）盖子，使琼脂凝固后，将琼脂平板（或试管）置于适宜的培养条件下。

无菌注射器接种法步骤：1.用火焰将无菌注射器的针头烧红，冷却至适宜温度。

大肠杆菌培养基大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，是一种常见的肠道细菌，也是一种重要的实验室模式生物。

大肠杆菌培养基是一种用于培养和繁殖大肠杆菌的营养培养基，它提供了大肠杆菌所需的营养物质和生长条件，使其能够在实验室中进行研究和应用。

大肠杆菌培养基的组成。

大肠杆菌培养基的组成通常包括以下成分：1. 碳源，大肠杆菌需要碳源来进行能量代谢和生长。

常见的碳源包括葡萄糖、蔗糖、乳糖等。

2. 氮源，氮源是大肠杆菌合成蛋白质和核酸的重要原料。

常见的氮源包括氨基酸、氨基酸盐、蛋白胨等。

3. 矿物盐，矿物盐是细胞生长和代谢所必需的微量元素，如钙、镁、钾、磷等。

4. 生长因子，大肠杆菌培养基中通常还添加了一些生长因子，如维生素、核酸、辅酶等，以促进大肠杆菌的生长和繁殖。

5. pH调节剂，培养基的pH值对大肠杆菌的生长有重要影响，通常需要添加pH调节剂来保持培养基的适宜pH范围。

根据不同的研究目的和实验条件，大肠杆菌培养基的配方会有所不同，可以根据实际需要进行调整和优化。

大肠杆菌培养基的制备方法。

大肠杆菌培养基的制备方法相对简单，一般包括以下步骤：1. 称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等成分，加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀。

2. 调节pH值至适宜范围，通常大肠杆菌培养基的pH范围为7.0-7.4。

3. 加热蒸馏水，使培养基成分充分溶解。

4. 经过高温高压灭菌，使培养基无菌。

5. 分装培养基到适量的培养皿或试管中，待凝固后即可使用。

根据实验需求，可以添加抗生素、染色剂等成分，以实现对大肠杆菌的选择性培养。

大肠杆菌培养基的应用。

大肠杆菌培养基在科研和实验室应用中具有广泛的用途，主要包括以下几个方面：1. 细菌学研究，大肠杆菌培养基常用于大肠杆菌的分离、鉴定和培养，用于研究其生长特性、代谢途径、致病机制等。

2. 分子生物学实验，大肠杆菌是常用的重组DNA宿主细胞，大肠杆菌培养基可用于大肠杆菌的转化、表达、筛选等实验。

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

大肠杆菌自动诱导培养基配方及操作方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是实验室中常用的菌种之一、下面是大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。

一、自动诱导培养基配方：1.碳源：-葡萄糖（10g/L）：作为主要的碳源供给菌体能量。

-乳糖（5g/L）：用于诱导乳糖酶的表达。

2.氮源：-酵母粉（5g/L）：提供菌体生长所需的氮源。

3.盐类：-氯化钠（5g/L）：维持培养基的渗透压和离子平衡。

4.调节剂：-草酸二钠（1.36g/L）：调节培养基的pH值，保持适宜的生长环境。

5.其他添加剂：-磷酸二氢钾（5g/L）：提供磷酸盐的源，促进菌体生长。

-氯化钾（0.25g/L）：提供钾盐的源，满足菌体对钾的需求。

-氯化镁（0.5g/L）：提供镁盐的源，满足菌体对镁的需求。

配方中的所有化学品都可以在实验室常见试剂供应商处购买得到。

二、自动诱导培养基操作方法：1.准备培养基：a.根据配方将所需的化学品称量并溶解在适量的去离子水中。

b.用自动滤器（pH7.0）滤过溶液以去除可能存在的微生物污染。

c.调节培养基的pH至7.0，再用去离子水补足总体积至所需浓度。

2.灭菌：a.将调好pH的培养基倒入适量的培养瓶中。

b.放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌。

3.菌种接种：a.选取一株适宜的大肠杆菌菌株，用无菌技术将其接种至培养基中。

b. 将接种好的培养基培养瓶放入恒温摇床中，以28°C恒温、200 rpm的条件下培养。

4.观察生长：a.在培养过程中，定期取一部分培养基进行测量分析。

b.测量菌液的光密度（OD值），以评估菌体生长情况。

5.收获细胞：a.在菌液达到一定浓度后，用无菌操作将菌液转移到离心管中。

c.将沉淀用缓冲液重悬。

6.文库构建：a.从收获的菌体中提取DNA，并使用合适的方法构建文库。

以上即为大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。

在实验过程中，要注意使用无菌技术，尽量避免微生物污染。

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入 2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

大肠杆菌培植之阳早格格创做一、菌种冻存液的造备含有脚量细菌的液体培植基离心后正在重淀中加进等量40%苦油，-80o C冻存.两、培植基造备LB培植基配圆（胰化蛋黑胨（Trypton）：10 g/L；酵母提与物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH ）液体培植基胰化蛋黑胨氯化钠 10.0g火 1000mlpH固体培植基正在液体培植基的前提上再加进％－％的琼脂三、仄板的造备1）称与胰化蛋黑胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加进800mL两次火溶解，并用玻璃棒搅拌匀称，安排，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）.2）分拆正在锥形瓶中，每瓶量出有宜太多，出过瓶底一指安排.如需固体培植基正在分拆后的液体培植基内加进约2%的琼脂（150mL液体培植基加进2.5g琼脂）.3）正在锥形瓶心依次覆盖戴滤纸通气小孔的塑料膜战硬量纸，用皮筋捆佳.所有锥形瓶如上述支配.用暗号笔证明培植基称呼、配造日期.4）下压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min.5）灭菌后的培植基与出置电热饱风搞燥器内60oC烘搞，待锥形瓶的启心纸搞燥后与出.液体培植基可曲交保存或者使用，此时加有琼脂的培植基出有会凝固，可正在预先紫中杀菌30min以上的无菌支配台上，将培植基倒进培植皿内，每个培植皿培植基约10-15mL（曲径90mm），正在培植皿中薄度约莫4mm安排.将仄皿叠搁正在无菌支配台上，搁置10min安排，待琼脂基原凝固可涂仄板. 6）若仄板出有曲交使用，灭菌后将培植基正在锥形瓶中保存，待需造备仄板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温热却20min至出有烫脚可造备仄板.四、交种大肠杆菌1）与真验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管心用酒粗灯灼烧，挨启离心管.2）交种要领一：用灭菌枪头蘸与冻存液正在仄板边沿上划横条，每三讲为一组，转动仄皿一圈，末尾中间划之字；交种要领两：用移液枪吸与100uL溶液于仄板上，用酒粗灯灭菌薄的涂抹棒划十字，涂布仄板.3）果真验普遍皆央供挑与单菌降，故涂仄板符合思量冻存液内细菌数量，若菌量过大应适合密释.普遍要领一赢得单菌降的大概性比较大.涂仄板应正在酒粗灯附近举止，若冻存液涂完的仄板应倒置，预防仄皿盖上爆收火蒸气.五、大肠杆菌的培植1）将交种佳的仄皿倒置搁进37℃的恒温培植箱中培植，约莫十几小时后少出菌降.2）挑与死少状态佳，特性明隐的单个菌降，交种于新陈灭菌的LB液体培植基中37℃，220rpm/min恒温振荡培植9-12h.菌降特性：乳红色，圆形，菌降边沿整齐，表面光润，表面战反里颜色普遍.。

大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。

下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。

2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。

3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。

4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。

5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。

6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。

7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。

8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。

9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。

10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。

11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。

12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。

13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。

14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。

15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。

16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。

17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。

18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。

19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。

20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。

大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是生物学研究中最常用的模式菌株之一、大肠杆菌具有广泛的分布范围，可以在许多环境中生存和繁殖。

本文将介绍大肠杆菌的一般培养方法。

一、培养基的制备大肠杆菌的培养基通常包括两个主要组分：固体培养基和液体培养基。

固体培养基用于菌落计数和细菌分离，并可用于培养单个菌落。

液体培养基则可用于扩大菌种和进行大规模的培养。

1.固体培养基的制备最常用的固体培养基为琼脂培养基。

制备过程如下：（1）称取所需琼脂，加入适量的蒸馏水中，进行均匀搅拌。

（2）加热至100摄氏度，溶解琼脂。

（3）煮沸1-2分钟，消毒琼脂。

（4）冷却至约50摄氏度。

（5）加入所需的培养基成分，如营养物质和抗生素等。

（6）倒入培养皿中，待凝固后即可使用。

2.液体培养基的制备最常用的液体培养基包括LB培养基（Lysogeny Broth）和TB培养基（Terrific Broth）。

制备过程如下：（1）称取所需培养基成分，加入适量蒸馏水中。

（2）加入琼脂和洗涤剂等成分，以调整液体的黏度和表面张力。

（3）调整pH值。

（4）加热并搅拌溶解，待溶解后冷却。

（5）过滤培养基，以去除不溶性杂质。

（6）分装到培养瓶中。

二、大肠杆菌的预培养将保存的大肠杆菌菌种(如冻存菌)挑取一高洁净的培养皿上贴菌，通常可采用菌板上交叉涂布法，用三角稀菌棒反复涂抹菌落。

之后用无菌瓷珠轻压菌落，使其均匀分散于培养皿上。

贴菌后将培养皿倒置，避免水分凝结在盖子上。

培养皿翻转的目的是避免水珠滴入培养基内，影响气体交换。

然后将培养皿放入培养箱中，37℃保温，24小时后进行预培养。

三、大肠杆菌的正式培养预培养后，取适量的大肠杆菌菌落液，加入培养基中，并进行摇床培养。

有时候，还需要在培养基中添加相应的抗生素，以筛选具有特定基因或表现的菌株。

培养条件一般为37摄氏度、摇床转速为200-250转/分钟。

培养时间根据需要和实验目的而定。