实验一 茶多酚总量的测定
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实验一茶多酚总量的测定
一实验目的
茶多酚是茶叶中多元酚物质的总量，具有苦涩味，对茶汤的滋味和茶叶的保健功能有非常重要的影响。
药理学研究表明，茶多酚对心血管系统疾病、癌症等具有一定的防治效果。
因此，检测茶多酚总量对评价茶叶品质具有非常重要的作用，同时对于茶叶深加工产品如茶饮料、茶叶提取物、速溶茶等的品质评判也有重要作用。
福林酚法由于采用没食子酸为标准品，因而其适用范围较宽，不仅可以用于茶叶，而且还可适用于茶叶提取物、茶叶深加工制品等。
而酒石酸亚铁法由于采用经验系数1.957，因而仅适用于茶叶中多酚总量测定，而不适于茶叶提取物制品等其他产品中多酚总量测定。
二实验原理
本实验引用国家标准方法《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》（GB/T 8313-2008）中的“方法二茶叶中茶多酚的检测”的方法。
茶叶磨碎样中茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚试剂（主要成分为磷钨酸和磷钼酸）在碱性条件下氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色，最大吸收波长为765 nm，用没食子酸作校正标准，根据标准曲线定量茶多酚。
三实验材料、仪器与试剂
1 实验材料：均匀磨碎茶样。
2 仪器：电子天平（感量分别为0.000 1g和0.01g）、分光光度计、恒温水浴锅、低速离心机、移液管、容量瓶（10、100、250、500mL）、10mL离心管、10mL具塞刻度试管。
3 10%福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂：将25mL福林酚试剂转移到250mL容量瓶中，用水定容并摇匀，避光储存，现配现用。
4 Na2CO3溶液：按质量浓度7.5%配置，即称取37.50g Na2CO3，加适量水溶解，转移到500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
该试剂在室温下可保存30天。
5 没食子酸标准储备溶液：按1mg/mL（1 000 μg/mL）的浓度现配，即称取0.110g没食子酸（GA，相对分子质量188.14）于100mL容量瓶中溶解，并定容至刻度，摇匀，避光保存。
6 没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的没食子酸标准储备溶液于100mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为10、20、30、40、50μg/mL。
四实验步骤
1 茶样含水率测定按GB/T 8303-2002进行。
2 供试液的制备
（1）母液制备称取0.2g（精确至0.000 1g）茶样于10 mL离心管中，加入在70℃水浴锅
中预热过的70%的甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70℃水浴锅中，
浸提10 min，期间搅拌两次，浸提后冷却至室温，转入离心机在3 500r/min转速下离心10 min，将上清转移至10 mL 容量瓶。
残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。
合并提取液定容至10mL，摇匀备用。
此提取液在4℃下至多可保存24 h。
（2）测试液制备移取母液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。
3 测定
（1）测定用移液管分别移取系列没食子酸工作液、水（作空白对照用）及测试液各1.0 mL 于10 mL具塞刻度试管内，在每个试管内分别加入5.0 mL10%福林酚试剂，摇匀。
反应
3~8 min内，加入4.0mL 7.5% Na2CO3溶液，摇匀。
室温下放置60 min。
用10 mm比色皿，在765 nm波长条件下用分光广度计测定吸光度（A）。
（2）标准曲线制作根据没食子酸工作液的吸光度（A）与各工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线。
以没食子酸浓度（μg/mL）为横坐标，对应的吸光度（A）为纵坐标，求得线性回归方程和相关系数。
五数据处理
1 计算方法比较试样和标准工作液的吸光度，按下式计算。
茶多酚含量（%）=[（A×V×d）×100]÷( SLOPE Std×m×106×w)
式中 A----样品测试液吸光度；
V----样品提取液体积（10 mL）；
d----稀释因子（通常为1 mL稀释成100 mL，则其稀释因子为100）；
SLOPE Std----没食子酸标准曲线的斜率；
w----样品干物质含量（%）；
m----样品质量（g）。
2 重复性同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g，若测定值相对误差
在此范围内，则取两次测定值的算术平均值为结果，保留小数点后一位。
3 注意事项样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于50μg/mL浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配置高浓度没食子酸标准工作
液进行校准。
六实验准备物品清单
每个标准班按30人计算，两人一组，共15组。
本次实验需实验室准备物品及数量如表
1-3所示。
表2 需准备仪器
表3 需准备玻璃器皿。
