太子参中环肽Pseudostellarin A的超声提取工艺研究

太子参多糖超声提取工艺优化薛骏轶1，2史辉1，2*（1宁德师范学院生命科学学院，福建宁德352100；2福建省特色药用植物工程技术研究中心，福建宁德352100）摘要通过单因子试验和正交试验，研究了太子参多糖超声提取最佳工艺。

结果表明：超声波法提取太子参多糖的最佳工艺是料液比1∶40（g/mL），提取温度70℃，超声功率500W，浸提次数4次，提取时间30min。

优化后的多糖提取得率为6.77%，是优化前的3.7倍。

优化后的提取工艺简单高效、成本低、稳定性好，可作为太子参多糖提取的理想方法。

关键词太子参；多糖；超声波；提取工艺中图分类号S375文献标识码A文章编号1007-5739（2023）06-0189-04DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.06.049开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Optimization of Ultrasonic Extraction Process of Polysaccharides fromPseudostellaria heterophyllaXUE Junyi1,2SHI Hui1,2*(1Academy of Life Science,Ningde Normal University,Ningde Fujian352100;2Fujian Engineering Technology Research Center of Characteristic Medicinal Plants,Ningde Fujian352100) Abstract The optimum ultrasonic extraction process of polysaccharides from Pseudostellaria heterophylla was studied by single factor test and orthogonal test.The results showed that the optimum extraction process was that the solid-liquid ratio was1∶40(g/mL),the extraction temperature was70℃,the ultrasonic power was500W,the extraction time was4and extraction time was30min.The extraction yield of polysaccharide after optimization was 6.77%,3.7times of that before optimization.The optimized extraction process was simple,efficient,low cost and good stability,which could be used as an ideal method for the extraction of polysaccharides from Pseudostellaria heterophylla.Keywords Pseudostellaria heterophylla;polysaccharide;ultrasonic;extraction process太子参为石竹科孩儿参属植物孩儿参（Pseudostel-laria heterophylla）的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效[1]，现已被卫健委列入“可用于保健食品的中药材名单”，是中草药及保健食品研发的重要资源[2]。

第36卷第4期 2018年8月四川农业大学学报Journal of Sichuan Agricultural UniversityVol.36 No.4Aug. 2018doi： 10. 16036/j. issn. 1000-2650. 2018. 04. 012太子参蛋白提取工艺优化及SDS-PAGE分析晋海军，王海霞，张涛，向守艳(贵阳中医学院，贵阳550025)摘要：【目的】研究太子参的最佳蛋白提取工艺和不同参形太子参蛋白条带差异。

【方法】选取3种蛋白提取方法 (T ris-H C l法、TCA-丙酮法、饱和酚法)对贵州施秉县牛大场太子参种植基地的3种参形太子参进行蛋白提取及SDS-PAGE分析，利用响应面分析法对筛选出的最佳蛋白提取方法的提取工艺进行优化。

【结果】3种蛋白提取方法中 Tris-H C l法提取的蛋白含量较高，经SDS-PAGE分析，太子参蛋白条带大致分布在10kDa耀90k D a之间，15k D a处一等参的蛋白表达量明显高于二等参和统货。

利用响应面优化法获得提取太子参蛋白的最佳工艺。

【结论】获得太子参蛋白的最佳提取工艺：料液比1:1.32、提取温度25益、p H值7.47、提取时间1.5h，还发现不同参形太子参蛋白在15k D a处的表达量存在明显差异，这可为今后利用蛋白质组学技术进一步揭示不同参形太子参形成的分子机制提供理论依据。

关键词：太子参;参形；D S-PAG E分析；响应面优化中图分类号:R282.6 文献标志码:A 文章编号：1000-2650(2018)04-0500-07Optimization of Extraction Process of Pseudostellariae RadixProtein and SDS-PAGE AnalysisJIN Hai-jun,WANG Hai-xia,ZHANG Too,XIANG Shou-Yan(Guiyang University of Chinese Medicine, Guiyang 550025, China)Abstract:【O bjective】T h is e x p e r im e n tw a s to s tu d y th e p r o te in e x tr a c tio n m e th o d s a n d p r o te in b a n d s differences o f different param eters from P seudostellaria e R ad ix【M ethod】T h r e e k in d s o f p r o t e in e x-traction m ethods (T ris-H C l m eth o d/T C A-a ceto n e m ethod and Saturated p henol m ethod) w ere u sed to extract proteions of three different param eters of P seud ostellariae R a d ix from the plantation area of N iu-dachang in Shibing? G uizhou. The extracted proteins w ere analyzed by S D S-P A G E electrophoresis. R e­sponse surface analysis w as u sed to optim ize the extraction process of the best protein extraction m ethod.【R esult】T h e c o n te n to fp r o te in e x tr a c te d b y T r is-H C lw a sh ig h e stin th e th r e e p r o te in e x tr a c tio n m e th o d s.S D S-P A G E analysis show ed that the protein bands w ere distributed betw een 10 kD a and 90kD a in P seudostellariae R a d ix^and the protein exp ression o f first class at 15 kD a w as significantly higher than that o f the other two grades. The optim um process for extracting the P seudostellariae R a d ix protein w as o b ta in e d b y r e s p o n se su r fa c e o p tim iz a tio n.【C onclusion】T h e b e s te x tr a c tio n te c h n o lo g y o fP s e u d o s te l-lariae R adix proteins w ere as fo llow：the m aterial liqu id ratio 1 ：1.32,extraction tem perature 25益^pH7.47 ^ extraction tim e 1.5 h. It w as also found that there w as a significant difference in the expressionlevel o f P seudostellariae R a d ix proteins at 15 kD a in different param etersrw hich could provide a th eo­retical basis for further revealing the m olecular m echanism o f the form ation for different param eters in P seudostellaria e R a d ix w ith proteom ics technology in the future.Keywords：P seud ostella ria e R a d ix；param eter；S D S-P A G E a n a ly sis；response surface optim ization收稿日期：2017-12-28基金项目：贵州省国内一流学科建设项目（GNYL(2017)008);贵州省科技计划项目（齡科合L H字[2016]7117)。

太子参中环肽Pseudostellarin天然产物研究与开发NatProdResDev2007,19:206-210,239文章编号:1001-6880(2007)02-0206-06太子参中环肽PseudostellarinB含量HPCE测定及其指纹图谱研究李文龙,陈军辉,韩超.,王小如¨国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛266061;中国海洋大学化学化工学院,青岛266003;厦门大学化学化工学院化学系现代分析科学教育部重点实验室,厦门361005摘要:建立了测定太子参中环肽PseudostellarinB含量的高效毛细管电泳(HPCE)分析方法,对lO种不同产地太子参中环肽PseudostellarinB的含量进行了测定.HPCE工作条件:采用未涂层熔融石英毛细管(内径75txra,有效长度50cm),分离电压为l5kV,柱温2O℃,二极管阵列检测器(DAD)检测波长为203nm,缓冲液为2Ommol/L.硼砂(pH=9.3)溶液.在选定的工作条件下,环肽PseudostellarinB浓度与其响应信号值之间具有较好的线性相关性(Y=0.6357X+2.546,R=O.9985),加标回收率在93.8%一105.6%之间.在此基础上进行了太子参HPCE指纹图谱研究,采用中药指纹图谱相似度计算软件对不同太子参样品的HPcE指纹图谱进行相似度计算,以系统生成的对照指纹图谱为对照模板,lO份样品中有8份的相似度在0.90以上,说明该方法可用于太子参质量控制.关键词:太子参;环肽PseudostellarinB;高效毛细管电泳法;指纹图谱中图分类号:R284.2文献标识码:A DeterminationofPseudostellarinBinPseudostellariaheterophyllaby HPCEandStudyonItsFingerprintsAnalysisLIWen—long,CHENJun—hui一,HANChao,W ANGXiao2ru' QingdnoKeyLaboratoryofAnalyticalTechnologyDevelopmentandStandardizationofCh ineseMedicines,FirstInstituteOceanographyofSOA,Qingdao266061,China;CollegeD,ChemistryandCh emicalEngineering,OceanUnive~i@ofChina,Qinadao266006,China;DepartmentofChemistryandtheKeyL aboratoryofAnalyticalScienceoft^eMOE.CollegeofChemistryandChemicalEngineering,XiamenU niversity,Xiamen361005,ChinaAbstract:AmodemHPCEanalysismethodwasdevelopedfordeterminatingcychcpepfideP seudostellarlnBinPseudos~llariaheterophylla(Miq.)Pax.SeparationanddeterminationwerecarriedoutbyH PCEunderthefollowingconditions:baredfusedsilicacapillary(50amX75txrai.d.),20mmoL/Lborate(pH=9.3)asb uffer,thelUllvoltageis+15kV.detectionlengthofUV at203am,andcolumntemperatureof20℃.There8ultsindic atedthattlledevelopedmethodwassimple.accurateandreliableforthedeterminationofPseudostellarinBwithagoo dlinearlty(Y=0.6357X+2.546,R=0.9985),andtherecoveryrangesof93.8%一105.6%.Basedonthismethod,n1eHPCEfingerprintsof Pseudastellariaheterophylla(Miq.)Paxwereestablished.ThefingerprintsWerecomparedb ythesoftwareofthesimilar- ityevaluationsystemforchromatographicfingerprint.Thefingerprintcongruencecoefficie ntsof8electmphemgramsin10wereabove0.90.ThemethodofHPCEfingerprintisreliableandaccurate.Keywords:Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax;PseudostellarlnB;HPCE;fingerprint太子参又名孩儿参,童参,为双子叶植物药石竹科(Caryophyllaceae)植物异叶假繁缕属植物Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax的块根.具有收稿13期:2006-08—16接受13期:2006-09-30基金项目:国家自然科学基金项目(20235020);国家科技部攻关项目(2003BA759C)+通讯作者Tel:86_532.88963253;E—mail:***************.ca补益脾肺,益气生津的功效,主治肺虚咳嗽,脾虚食少,心悸,怔忡等¨J.环肽是指氨基酸以酰胺键互相连接而形成的环状化合物,生物活性环肽能形成限制性构象,与相应线性肽相比在生物体内具有更好的抗酶解和抗化学降解的能力.最近几年发现石竹科环肽有较广泛的生物活性驯.2005版《中国药典》中还没有明确太子参的指标性成分以及太子李文龙等:太子参中环肽PseudostellarinB含量HPCE测定及其指纹图谱研究参质量控制方法.中药色谱指纹图谱是一种综合的,可量化的色谱鉴定手段.借以鉴别真伪,评价原料药材,半成品和成品质量均一性和稳定性.其基本属性是"整体性"和"模糊性".在有效成分不完全明确的前提下,制定中药材的指纹图谱,对有效控制中药材的质量,具有重要意义'.目前国内仅有一篇文献利用HPLC对太子参进行指纹图谱研究J,但是该文对各指纹峰均未进行定性定量分析.HPCE是一种基于不同质荷比的离子在同一电场下迁移速度不同的分离手段,具有分离效率高,分析速度快等特点,已成为除GC,HPLC之外进行复杂样品分离分析的一种新的选择,目前广泛用于中药中有效成分的测定及中药材指纹图谱研究..国内外利用HPCE定量测定太子参环肽Pseudostel- latinB及太子参HPCE指纹图谱研究尚未见有文献报道.本文探索采用HPCE对太子参药材进行活性成分测定及其指纹图谱研究,以本实验室分离,纯化所得的环肽PseudostellarinB纯品为对照品,建立了高效毛细管电泳法测定太子参中环肽Pseudostella- nB的方法;并在此基础上得到了太子参的HPCE指纹图谱,对所得指纹图谱进行了相似度计算,结果满意.1实验部分1.1仪器与试剂美国Agilent公司G1062A型HPCE仪(配有二极管阵列检测器(DAD)),未涂层熔融石英毛细管(内径75Ixm,有效长度50cm),SK200LH型超声波仪(上海科导超声仪器有限公司),旋转蒸发仪R201(上海申生科技有限公司).硼砂(分析纯),1mol/LY aOH溶液,甲醇(优级纯),乙酸乙酯(优级纯),实验用水为Milli-Q超纯水. 太子参环肽PseudostellatinB对照品由本实验室分离纯化所得(含量测定用).所有试剂溶液及试样进入HPCE系统前均经过0.2m微孔滤膜过滤.本文所采用的太子参样品:福建,江苏,贵州,湖南产太子参由厦门倍尔思生化科技有限公司提供; 山东,浙江,安徽产太子参购于药材公司.1.2HPCE工作条件采用压力进样方式,压力50bar,进样时间5S,分离电压15kV,紫外检测波长203nm,带宽8nm,参比波长450nm,带宽20nm.运行缓冲液为2O mmol/L的硼砂溶液(用1mol/L的NaOH溶液调pH值至9.3),试样进入毛细管前,均需过0.2微孔滤膜过滤,分析开始前,依次用1mol/LNaOH, 超纯水和缓冲液冲洗毛细管各20min,分析过程中, 及时更换缓冲液瓶中的缓冲溶液,以保证两缓冲液瓶中缓冲液组分一致,保证分析精度.1.3对照品及供试品溶液制备准确称取10.0mg环肽PseudostellatinB对照品,放入10mL容量瓶中,用超纯水溶解定容,制成1g/L的储备液.供试样品(粉碎,过6O目筛)在5O℃烘箱中干燥12h,准确称取1.0g,以甲醇为溶剂,超声辅助提取3次(3×10mE),每次提取60min.合并各次提取液过滤,滤液经旋转蒸发仪浓缩至干,用超纯水溶解定容到10mL容量瓶中,过0.20Ixm滤膜后作为供试品溶液.2结果与讨论2.1提取方法及HPCE分离条件优化2.1.1不同提取方法对提取效率的影响本文采用了回流法和超声辅助提取两种方法对样品进行提取,结果显示,回流法提取效率稍高于超声法,后者约为前者的95%,相差不大.回流法操作复杂,且加热过程可能会引起其它组分的变化,而超声法方便快速,因而选用超声法进行提取.以PseudostellarinB的提取率为指标,检验了3种提取溶剂:超纯水,乙酸乙酯和甲醇的提取效率(因后两者在环肽PseudostellatinB的检测波长203 nm处有吸收,干扰了其测定,因此必须将其提取液旋转蒸干后用超纯水重新溶解进行进样测定),结果表明,甲醇的提取效率最高,超纯水和乙酸乙酯的提取效率分别为甲醇的55%和7l%,故本文采用甲醇作为提取溶剂.2.1.2缓冲液浓度及pH值和分离电压对分离过程的影响对HPCE分离过程的中的三个参数缓冲液浓度及pH值和分离电压进行正交实验设计,结果表明: 随着硼砂溶液浓度的升高,样品中各峰的保留时间差别逐渐增大,分离效果也越好,但浓度过高, 噪音也明显增大,电流显着增加,产生热量较多,不利于分离,因此选择20mmol/L的硼砂溶液作为缓冲液,各峰得到较好的分离.太子参环肽PseudostellatinB在较高pH值的缓冲溶液中完全电离成阴离子,能够有效抑制管壁吸天然产物研究与开发附,离子在分离过程中由正极向负极泳动,与电渗流速度相同,其表观速度为电泳速度与电渗流速度的矢量和,二者方向相同,有利于增加分析速度,缩短每次进样分析的周期,pH为9.3时,分离效果较好, 且分析时间较短.在1O一30kV的范围内,电压越高,分析速度越快,但在较高电压下,分离效果及峰形较差,且噪音明显增大,不利于分析,因而选用较为适中的15kV 作为分离电压,效果较好.2.I.3检测波长的选择由于太子参环肽PseudostellarinB中不存在发色团,只是在紫外末端有较大吸收,且随着检测吸收波长的增大,样品吸收急剧下降,见图1,本文选用203 nm作为检测波长,仪器易于稳定,基线平稳,噪音较小,有利于太子参环肽PseudostellarinB的检测.20o250300350400图1太子参环肽PseudostellarinB的DAD扫描光谱图Fig1DADscanspectrumofPseudostellarinBpeak2.1.4样品分离效果采用优化后的提取方法和HPCE工作条件,测定对照品溶液和供试品溶液,比较太子参环肽PseudosteUarinB对照品溶液及供试品溶液液相色谱图(见图2),可以看出在1.2所述的仪器工作条件下色谱峰峰形较好,可准确测定其峰面积及峰高并进行定量分析.24681012时间Time(rain)图2对照品和供试品的HPCE色谱图Fig.2EleetropherogramofPseudostellarlnBstandardand extractofPseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax2.2标准曲线的绘制吸取一定量的对照品储备液,用超纯水稀释,配制成1,5,1O,15,2O,25,30mg/L的标准溶液.按照1.2所述工作条件分别进样分析,测定太子参环肽PseudostellarinB的峰面积,以峰面积为横坐标,对照品浓度(mg/L)为纵坐标,绘制标准曲线.环肽PseudostellarinB的线性回归方程及相关系数为:y=O.6357X+2.546,R=0.9985.结果表明,在1—30mg/L范围内,浓度与峰面积呈良好线性关系.2.3方法学考察2.3.1精密度试验按照1.2HPCE工作条件,对环肽Pseudostella—rinB对照品溶液进行6次重复进样分析,测得其峰面积和保留时间,分别计算其标准偏差,峰面积和保留时间RSD值分别为0.32%和0.18%,表明仪器精密度良好.2.3.2稳定性试验将供试品溶液按照1.2HPCE工作条件,分别在O,2,4,8,12,24,36,48h时进样测定,结果显示供试品溶液中环肽PseudostellarinB在48h内峰面积和保留时间无明显变化,峰面积和保留时间的RSD值分别为1.21%和0.46%,说明供试品溶液在48h内化学性质稳定.2.3.3重现性试验精密称取同一样品五份,按1.3处理方法制成供试品溶液,按照1.2的HPCE工作条件进样测定, 测得环肽PseudostellarinB峰面积和保留时间,并计算其标准偏差,峰面积和保留时间的RSD值分别为2.55%和0.62%,表明该方法重现性良好.2.3.4回收率试验精密称取1.0g已知环肽PseudostellarinB含量的太子参样品5份,定量加人对照品,按1.3处理方法将其制成供试品溶液,按1.2的HPCE工作条件测定加标回收率,每份样品平行进样3次,结果取平均值,并计算RSD%,结果见表1.结果表明,本法回收率高,测定结果准确,方法可行.2.3.5色谱峰的定位本文主要根据对照品的保留时间对样品进行色谱峰定性,实验中以适量的标准储备液加人样品溶液中,通过对比各峰的吸光度,确认吸光度明显增大的峰为对照品峰,并将其uV谱图与相应已知标准品图谱进行比较印证,以确定与对照品相应的峰位.李文龙等:太子参中环肽PseudostellarinB含量HPCE测定及其指纹图谱研究209 表1太子参环肽PseudostellarinB加样回收率实验结果(Tt=3)Table1RecoverytestoftheaddedPseudostellarinBstandard(Tt=3)2.3.6环肽PseudosteUarinB的检测限将样品逐级稀释进样,测定其峰高响应值及基线噪音强度,以3倍信噪比计算其检测限,结果表明,在选定的仪器工作条件下,环肽PseudostellarinB检测限达到0.6mg/L.2.4不同产地太子参样品中环肽PseudostellarinB的含量测定结果取不同产地太子参,按1.4处理方法将其制成供试品溶液,按1.2HPCE工作条件,测定其中太子参环肽PseudostellarinB的含量,每批样品进行了三次平行测定,结果见表2.可见不同产地太子参样品中环肽PseudostellarinB含量差异较大,5号太子参样品(安徽产)环肽PseudostellarinB含量最高,而湖南和山东产太子参中环肽PseudostellarinB含量较低,样品中环肽PseudostellarinB的平均含量为158.43g.表2不同太子参样品中环肽PseudostellarinB的含量(n=3)Table2COntentsofPsel】dostellarinBinPseudostellariahetero—phylla(Miq.)PaxcoHectedfromdifferentregions(n=3)2.5不同太子参样品指纹图谱的建立按照暂行的中药注射剂指纹图谱研究的技术要求,制定HPCE指纹图谱所需的技术参数主要有三个:一,必须根据参照物的迁移时间,计算指纹峰的相对保留时间,标定中药材的共有指纹峰;二,以参照物的峰面积作为1,计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值,各共有指纹峰面积比值必须相对固定;三,中药材供试品的图谱与指纹图谱比较,非共有峰总面积不得大于总峰面积的10%.本文对1O批次太子参甲醇提取物在1.2HPCE工作条件下进样分析,每个样品进行三次平行分析, 其色谱图共有l1个共有峰,其峰面积总和占总峰面积的98%以上,其中2号峰确认为太子参环肽PseudostellarinB,选择该峰作为参照峰,分别求出各特征峰的相对保留时间(仅)和相对峰面积.40302010***********时问Time(min)图3太子参甲醇提取物的共有指纹图谱Fig.3MutualfingerprintsofextractofPseudostellariahet—erophflla(Miq.)Pax2.6指纹图谱相似度分析在化学计量学中,常采用相关系数和相合系数(矢量间的夹角余弦)作为评价指纹图谱相似度的度量l1引,浙江大学制药工程研究所计算机辅助中药分析实验室研发的"中药指纹图谱相似度计算软件"采用夹角余弦作为相似度的评价指标,是国家药典委员会推荐使用的指纹图谱相似度计算软件引.本文采用该软件对测定结果进行图谱比对,评价供试样品指纹图谱与系统生成的对照指纹图谱(各样品谱图峰面积的平均值)的相似性,对照共有图计算得到1O批太子参药材提取物的相似度,结果见表4.从表4可见,除8号样品与1O号样品外,其他8批样品色谱图的相似度均在0.90以上,从太子参环肽PseudostellarinB的测试结果来看,8号样品与1O号样品的含量也较低,这在相似度的计算结果中得到了反映.210天然产物研究与开发V o1.190.83911.1351.21.4161.6461.7531.871.9562.2l12.320.340.0oO.62O.730.84O.89 1.61 1.64 1.15 1.36 O.85 1 O.O7 0.22 O.2 O.240.271.45 O.8l 0.15 O.11 0.71 1 O.O8 0.41 O.24 0.77 0.34 O.93 O.76 0.14 O.12 O.33 1O.55 O.11 O.2 O.27 0.46 0.22 O O.16 O.33 1 0.11 O.55 O.12 O.25 O.27 0.48 0.15 O.13 O.15 O.33 1 O.15 O.6 0.19 O.29 O.33 0.46 0.18 O.190.52 1 O.O5 O.69 O.36 0.09 O.16 1.o6 1.04 0.54 0.o6 O.31 1 O.16 0.22 O.36 O.36 O 1.27 l O.25 O.23 O.58 1 0.05 O.59 O.38 0.09 O.191.I1O.59O.o71.0910.153.1O.33O.29O.31.480.94O.19O.25O.291O0.10.09O.730.262.170.3l0.16O.22表41O批太子参样品提取物指纹图谱相似性分析结果Table4Similarityanalysisresultofextractsof10Pseudostel—lariaheterophylla(Miq.)PaxN0.12345678910似度o.9230.951o.9240.9480.9330.9820.9170.7760.9400.829~imflanty 目前,中药材的分类及鉴别在很大程度上仍依赖于经验和表观分析,缺乏从定性定量分析数据中获取评价依据的统一,实用的方法.相似度计算方法数学概念简单,数据处理过程简便,快速,在定量计算色谱指纹图谱相似度方面有其优势.在指纹图谱相似度计算中,一般将所选取的色谱峰同时作比较计算,反映指纹图谱的整体相似性,可对中药产品质量做出较全面,准确的评价.本文以不同太子参样品的平均峰面积作为对照模板,进行相似度计算,优点是能较全面反映不同太子参样品的整体特征.如果利用多种道地药材的标准提取物建立了标准谱图,则通过计算待测样品与标准谱图的相似度,可以对样品质量进行正确评价,这也是今后进一步研究的目标.3结论本文所建立的太子参中环肽PseudostellarinB含量HPCE测定的方法前处理便易操作,分析速度快,具有良好的重珊陛,稳定性,可作为太子参中环肽PseudostellarinB含量的检测方法及用于太子参产品的质量控制.在此基础上所建立的太子参中环肽PseudostellarinBHPCE指纹图谱研究方法分析时间短,提取物中共有峰数目较少,便于进行质量控制,将其用于实际的提取物鉴定工作中,方法快捷,结果可靠.参考文献1LiSH(李仕海),LiuXH(刘训红).Analysisofaminoacid andtraceelementinradixpseudostellariaegrowninJiangsuprovince.LishizhenMedMaterMedRes(时珍国医国药),2001,12:199-20o.2I(irkRG,RaymondCS,JrLewisKP,eta1.CirculinsAandB.Novelhumanimmunndeficiencyvires(HIV).inhibitory macrocyclicpeptidesfromthetropicaltreeClm~aliap口【n7 f.JAmChemSoc,1994,116:9337-9338.3Y aharaS,ShigeyamaC,NoharaT.Structuresofanti—aceand renninpepfidesfromLyciiradicisCOl'reX..TetrahedronLett, 1989,30:6041-6042.4MoritaH,YunYS,TakeyaK,eta1.Conformationalanalysis ofacyclehexapeptide,segetalinAfromV accariasegetalis. Tetrahedron,1995,51:5987-6002.5HiroshiM,TakashiK,HideyukiK,eta1.PseudostellarinsA—C,newtyrosinaseinhibitorycycHcpeptidesfromPseudostel- lariaheterophylla.Tetrahedron,1994,50:6797-68046XiePS(谢培山).Afeasiblestrategyforapplyingchromatog- raphyfingerprinttoassessqualityofChineseherbalmedi—cine.Gil,~lgzholl:TheProceedingsofInternationalSymposi一啪ofHerbalDrugQualityAssessmentbyChromatographic Fingerprint,2001.7GongF,LiangYZ,XiePS,rmationtheoryapplied tochromatographicfingerprintofherbalmedicineforquality contro1.JChromatogrA,2003,1002:25-40.(下转第239页)123456789加nV0L19LI13netal:IndoleAlkaloidsfromRauwolfiavomitoria239 2.90(1H,m,H-5),2.17(1H,m,H-6a),1.88—1.92(2H,m,H-6flandH?14a),6.64(1H,d,J=6.4Hz,H.9),6.56(1H,dd,J=8.0,6.4Hz,H一10),6.60(1H,d,J=8.0Hz,H一11),1.26(1H,d,J=12.0Hz,H一14),3.15(1H,m,H一15),1.88(1H,s,H一16),4.36(1H,s,H一17),1.66(3H,d,J=6.4Hz,H一18),5.28(1H,brd,J=6.4Hz,H一19),3.41—3.58(2H,m,H-21otandH一213),3.01(3H,s,N—CH3).The"pound15wasdeterminedtobe12.hydroxymauiensine[,. AcknowledgementsTheau~lol'$aregratefultotheir colleaguesinthegroupofAnalyticalInstrumentinthe StateKeyLaboratoryofPhytoehemistryandPlantRe—sourcesinWestChina,KunmingInstituteofBotany, ChineseAcademyofSciences,formeasuringNMRand MSdata.References1YingXX,YuHA,HuaYQ,eto2.ChineseBencao.Shanghai: ScienceandTechnologyPress,1999,6,302.3o7.2MauriceMI,WilliamEC.RootAlkalodisofRauwolfiavomi? wriaMz.ntaMed.1977,32:88.98.3YuDQ,Y angJS.AnalyticChemistryHandbook,2e?d.Beijing:ChemicalIndustryPress,1999.256-258,703-704. 4ReijaJ,MauriL.AHand"CNMRstudyofsevenAjms?line-typealkaloids.P/antaMed,1996,62:577-579.5BrunoD.GiovanniP,GiulianaSR"CNMRofsomeajma.1inealkaloids.TetrahedronLetters,1981,22:4007-4008.6DanS,ElseL,JetteC,eta1.Leishmanicidal,anfiplasmodial andcytotoxicactivityofindolealkaloidsfromCorynanthe pachyceras.PlarttaMet/,2000,66:531-536.7AttaUR,AbidaS,FarzanaN,eta1.AlkaloidsfromVincaMa. 』Dr.Phytochemistry,1995,38:1057-1061.8LuciliaK,RaquelMB,IndK,eta1.IndolealkaloidsfromRauvolfiabahiensis丸DC.(Apoeynaceae).Phytochemistry, 2002,60:315-320.9ChristianeK,PierreP,SiewKK,et口Z.Indolealkaloidsfrom Rauvolfiamedia.Phytochemistry,1986,25:1783?1784.1OI{irokoS,瞄himH.TohruH.TheH.and"C.Nuclear magnetic/~sonancespectraofHarman.Reinvestigationofthe assignmentsbyone—andtwo-dimensionalmethods.ChemP肌,1993,41:1169.1172.(上接第210页)8TangBL(唐宝莲),XinSQ(辛绍祺),CaiBC(蔡宝昌),eta1.HPLCfingerprintchromatographystudyofrad/xpseudoste- llariaeheterophfllae.JNanjingUnwTradtChinMed,NatSci(南京中医药大学,自科版),2005,21:171—172.9LiuHQ(刘慧琼),GuoSH(郭书好).Modernapparatusand fingerprintoftraditionalchinesemedicine.ActaChinMed Pharmacol(中医药),2002,30:35-38.10SunY(孙沂),SuiY(隋因),GuoT(郭涛),eta1.Studyon thefingerprintsoffloscarthamifromfifferentsourcesby HPCE.ChinPharmJ(中国药学杂志),2003,38:176-178.11WangGL(王钢力),DaiZ(戴忠),LuJ(鲁静),eta/. HPCEFingerprintsof11speciesofplantsformedicinaluse ofselaginella.ChinTraditPatMed(中成药),2002,24:137? 139.12XiePS(谢培山).ChromatographicFingerprintsofTradition- alChineseMedicine(中药色谱指纹图谱).Beijing:People's MedicalPublishshingHouse,2004.131.13LiuYs(刘永锁),MengQH(孟庆华),JiangSM(蒋淑敏), eta1.Similaritysystemtheorytoevaluatesimilarityofchrom- atographicfingerprintsoftraditionalChinesemedicine.ChinJChromatogr(色谱),2005,23:158-163.。

太子参多糖提取方法对比研究及工艺优化作者：刘东张春红陈鑫凌秋嫣韩邦兴陈乃富来源：《安徽农业科学》2014年第35期摘要 [目的]太子参多糖提取工艺对比研究得出最优方案，并对最优工艺进行优选。

[方法]分别采用水提醇沉法、超声波法、微波辅助热水提取法提取太子参多糖，对比得出最优方法，且对最优提取法的工艺参数进行优化。

[结果]最优提取方法为超声波法；超声波提取法的最佳工艺参数为料液比1∶30、提取温度40 ℃、提取时间20 min、提取次数3次。

[结论]优化后的工艺简单易行，此条件下多糖含量达23.8%。

关键词太子参；多糖；提取工艺；工艺优化中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）35-12469-03太子参为常用中药，属石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla （Miq.） Pax ex Pax et Hoffm的干燥块根。

味甘、微苦，性平，具有益气健脾、生津润肺的功效。

研究证明太子参含皂苷（saponin）、多糖（polysaccharide）、挥发油（essential oil）、脂肪酸（fatty acid）、油脂（oil）、甾醇（sterols）、磷脂（phospholipid）、氨基酸（amino acid）、微量元素等多种化学成分[1]。

近年来太子参在治疗肝炎、糖尿病、冠心病等病症方面取得了新的进展[2-4]。

多糖组分是太子参活性成分之一。

多糖是所有生命有机体的重要组成部分，存在于一切细胞膜结构中，参与多种生命功能活动，其作用主要有增强免疫、抗疲劳、活血抗栓、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、增强骨髓造血机能、抗辐射等，与人参功用相仿[5]。

目前关于传统中药材的研究再次成为热点，太子参组分提取工艺虽有相关报道[6-7]，但缺乏系统性，且太子参多糖提取方法相对比较单一，不利于太子参这一传统中药资源的开发与利用。

该试验分别采用水提醇沉法、超声波法[8]、微波辅助热水提取法[9-10]对太子参多糖组分进行提取，并对3种方法最优条件提取的多糖组分进行含量对比，得出最优提取方法，然后对最优提取法进行正交优化试验，得最优提取参数，为太子参多糖提取工艺提供参考。

太子参中环肽Pseudostellarin B含量HPCE测定及其指纹图谱研究李文龙;陈军辉;韩超;王小如【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2007(19)2【摘要】建立了测定太子参中环肽Pseudostellarin B含量的高效毛细管电泳(HPCE)分析方法,对10种不同产地太子参中环肽Pseudostellarin B的含量进行了测定.HPCE工作条件:采用未涂层熔融石英毛细管(内径75 μm,有效长度50 cm),分离电压为15 kV,柱温20℃,二极管阵列检测器(DAD)检测波长为203 nm,缓冲液为20mmol/L硼砂(pH=9.3)溶液.在选定的工作条件下,环肽Pseudostellarin B浓度与其响应信号值之间具有较好的线性相关性(Y=0.6357X+2.546,R=0.9985),加标回收率在93.8%～105.6%之间.在此基础上进行了太子参HPCE指纹图谱研究,采用中药指纹图谱相似度计算软件对不同太子参样品的HPCE指纹图谱进行相似度计算,以系统生成的对照指纹图谱为对照模板,10份样品中有8份的相似度在0.90以上,说明该方法可用于太子参质量控制.【总页数】6页(P206-210,239)【作者】李文龙;陈军辉;韩超;王小如【作者单位】国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛,266061;国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛,266061;中国海洋大学化学化工学院,青岛,266003;厦门大学化学化工学院化学系现代分析科学教育部重点实验室,厦门,361005;国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室,青岛,266061;厦门大学化学化工学院化学系现代分析科学教育部重点实验室,厦门,361005【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.太子参中环肽Pseudostellarin A的超声提取工艺研究 [J], 吴兵;陈新;何超;寇芸芸;周艳2.安徽与其它主产区地产太子参药材中太子参环肽B的含量比较研究 [J], 龙全江;王晓阁;徐雪琴3.高效液相色谱法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果 [J], 王长琴4.不同品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B含量的比较 [J], 韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春5.反相高效液相色谱法测定太子参中的环肽Pseudostellarin B [J], 韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

超高压技术提取太子参多糖的工艺研究潘兴桥;李建萍;荆旭慧;李力;李珊【摘要】Extraction of polysaccharide from Radix Pseudostellariae using ultra high pressure (UHP) was studied. The extraction yield of polysaccharide was taken as investigation target and the polysaccharide content was determined by spectrophotometry. Based on the results of single factor experiments, the optimum extraction technique of polysaccharide was optimized by L9 (34)orthogonal test. The optimized extraction technique was as follows: UHP pressure 350 MPa, temperature 55 ℃, UHP time 6 min, solid to liquid ratio 1 : 60(g/mL). The extraction yield of polysaccharide was 37.56%. The results showed that UHP extraction technique is rational, stable and feasible.%利用超高压技术提取太子参多糖。

以多糖的提取率为考察指标，用分光光度法测定其含量，在单因素试验的基础上，采用L9（3^4）正交试验得出太子参多糖的最佳提取工艺为：提取温度55℃、保压时间6min、超高压力350MPa、料液比1：60（g／mL）。

一种适于ISSR分析的太子参DNA提取方法目的获得能用于中药太子参简单序列重复区间DNA标记技术等分析研究的高质量DNA。

方法以太子参为材料，采用改良CTAB法提取太子参DNA，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测。

结果改良的CTAB法能获得高质量的太子参DNA，OD260/OD280＞1.8，蛋白质、多糖、RNA等去除较彻底，适于简单序列重复区间分析。

结论改良的CTAB法所提取太子参DNA适于简单序列重复区间分析。

标签：太子参；DNA；OD值An extraction method of genome DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm. scape for ISSR analysisWANG?Xiaoduo1??WANG?Xiaoli21.Huaxi Agricultural Bureau of Guiyang City, Guiyang 550025,China;2.Wudang Agricultural Technique Service Center of Guiyang City,Guiyang 550018,China [Abstract] Objective To extract high quality DNA from Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR and other molecular biological analysis. Methods It was examined with ultraviolet spectrophotometer and agarose electrophoresis that the DNA was extractied by improved CTAB. Results The improved CTAB method was used to extract DNA. The purity of the extracted DNA was very high with OD260/OD280 values ＞1.8.The protein,polyhexose and RNAwere elminated completely. Conclusion The improved CTAB method was suitable for extracting DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR analysis.[Key words] Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.;DNA;OD value简单序列重复区间（ISSR）分子标记技术具有多态性高，可重复性和稳定性好的特点[1]。

太子参的化学成分及药理作用的研究进展摘要】对近年太子参的化学成分、药理作用等方面的研究进展作一综述。

【关键词】太子参化学成分药理作用研究进展太子参为石竹科孩儿属植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm的干燥根，别名孩儿参、童参、双批七、四叶参或米参，为常用中药。

全国各地都有分布，主产于江苏、安徽、山东、福建等省。

具有益气生津、补肺健脾的功效，与人参功用相仿，但以“补肺”见长，特点为益气但不提升，生津但不助湿，扶正但不恋邪，补虚又不峻猛。

主治心悸自汗，疲倦乏力，脾虚食少，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳等症。

由于近年来太子参的需求量不断增加，需对太子参作进一步的研究，笔者从化学成分、药理作用等方面对太子参近年的研究成果作一综述，为该药的研究开发提供资料。

1 化学成分20世纪90年代以前，对太子参成分的报道较少，90年代后，国内外的学者对太子参的化学成分进行了较系统的研究，但其成分与功效之间的关系至今尚不明确。

现对太子参的各成分归纳如下。

1.1微量元素太子参含Fe、Cu、Zn、Cr、Ni、Co、Sr、Mn、Pb、Li、Na、B、Be、Ti、Al、Ca、Mg、K、P、Se等丰富的微量元素，其中Fe、Cu、Zn、Cr、Ni、Co、Sr、Mn为人体的必须元素，据分析以Fe、Cu、Zn、Mn的含量较高，Mn含量为13.4ug/g[1]。

1.2氨基酸太子参含有大量的氨基酸，包括组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸等8种人体必需氨基酸[2]，其组成中以精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸含量较高[1]。

1.3糖类从太子参中分离得太子参多糖PHP-A和PHP-B，平均分子量分别3.2×104和4.6×104[3]。

此外，还分离得蔗糖(sucrose)、麦芽糖(maltose)[4,5]及a-槐糖（a-kojibiose）[6]。

(10)申请公布号 CN 102293810 A(43)申请公布日 2011.12.28C N 102293810 A*CN102293810A*(21)申请号 201110185905.7(22)申请日 2011.07.05A61K 36/36(2006.01)A61P 37/04(2006.01)A61P 39/00(2006.01)A61P 11/14(2006.01)A61K 125/00(2006.01)(71)申请人食品行业生产力促进中心地址100062 北京市东城区崇文门外大街9号正仁大厦8层(72)发明人程伟 孙丽娟 屠振华(54)发明名称超声提取太子参功能成分的方法(57)摘要本发明涉及超声提取太子参药材中功能成分的方法，包括以下步骤：(1)将太子参根茎粉碎或切粒后，加入适量的乙醇溶液；(2)将步骤(1)处理好的太子参在水浴下超声强化提取；(3)将步骤(2)得到的提取液过滤，并减压回收溶剂，浓缩至稠膏状，得到太子参提取物。

本发明方法简单，提取方便、快捷，提取时间短，功能成分的提取率可达70％以上，提取物中的太子参多糖含量可达到40％以上，皂甙含量可达到1.5％以上。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 2 页权 利 要 求 书CN 102293810 A1/1页1.一种超声提取太子参中功能成分的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将太子参根茎粉碎或切粒后，浸入乙醇溶液；(2)将步骤(1)的太子参溶液混合物在水浴下超声强化提取；(3)将步骤(2)超声得到的提取液过滤，并减压回收溶剂，浓缩至稠膏状，得到太子参提取物。

2.根据权利要求1所述的超声提取太子参中功能成分的方法，其特征在于，步骤(1)中，乙醇溶液的浓度为15％～95％，加入量为4～16 ml／g太子参。

3. 根据权利要求1或2所述的超声提取太子参中功能成分的方法，其特征在于：所述步骤(2)中超声频率为20kHZ～100kHz，强度为0.1～0.5W／cm2。

正交实验优化中药太子参氨基酸超声提取工艺
林文津;徐榕青;张亚敏
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2006(18)1
【摘要】目的确定太子参中总氨基酸的提取工艺条件.方法采用正交试验法,以总氨基酸含量和薄层色谱结果为考察指标,对超声提取太子参氨基酸的条件进行优选.结果所考察的因素中,氨基酸的提取工艺影响程度为:乙醇浓度＞提取次数＞乙醇用量＞提取时间.结论超声提取的最佳条件为:A1B3C3D3,优化的工艺条件稳定可行.【总页数】3页(P33-35)
【作者】林文津;徐榕青;张亚敏
【作者单位】福建省医学测试重点实验室,福州,350001;福建省医学测试重点实验室,福州,350001;福建省医学测试重点实验室,福州,350001
【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.4
【相关文献】
1.正交实验优化太子参须多糖的提取工艺研究 [J], 马世蓉;陈杰;曾忠良
2.响应面法优化太子参皂苷的超声提取工艺 [J], 冯务群
3.正交实验优化太子参须多糖的提取工艺研究 [J], 马世蓉;陈杰;曾忠良;
4.太子参总氨基酸超声提取工艺优化 [J], 董晓菲;李霖;阮少江;叶祖云;史辉
5.太子参总氨基酸超声提取工艺优化 [J], 董晓菲; 李霖; 阮少江; 叶祖云; 史辉
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不同品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B含量的比较韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2007(18)4【摘要】目的分析比较不同品种不同采收期太子参环肽Pseudostellarin B的含量,为合理开发利用太子参的植物资源提供参考。

方法不同品种不同采收期太子参经提取制备后,采用高效液相色谱测定太子参环肽Pseudostellarin B的含量。

结果一号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的平均含量为198.1μg/g,二号品种不同采收期太子参中Pseudostella-rin B的平均含量为105.8μg/g。

结论不同品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的含量有差异。

【总页数】2页(P824-825)【关键词】太子参;环肽Pseudostellarin;B【作者】韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春【作者单位】厦门大学化学化工学院.现代分析科学教育部重点实验室;国家海洋局第一海洋研究所.青岛现代分析技术及中药标准化重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.HPLC法测定太子参黄芪口服液中太子参环肽B的含量 [J], 庞永琴;瞿京红2.安徽与其它主产区地产太子参药材中太子参环肽B的含量比较研究 [J], 龙全江;王晓阁;徐雪琴3.不同种源太子参生物量与太子参环肽B含量的分析 [J], 杨昌贵;周涛;肖承鸿;艾强;陈传艺;熊厚溪;江维克4.太子参中环肽Pseudostellarin B含量HPCE测定及其指纹图谱研究 [J], 李文龙;陈军辉;韩超;王小如5.反相高效液相色谱法测定太子参中的环肽Pseudostellarin B [J], 韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

太子参药材中环肽A、B含量分析及其动态研究邹立思;傅兴圣;刘训红;巢建国;谷巍;马阳;侯娅;李艳蓉【期刊名称】《南京中医药大学学报》【年(卷),期】2013(029)002【摘要】OBJECTIVE To analyze the content changes of heterophyllin A (HA) and B (HB) in Radix Pseudostellariae from different habitats, regions and harvest time, and to provide the basic information for exploring the quality forming process of Radix Pseudostellariae. METHODS The content of HA and HB was determined by RP-HPLC. RESULTS The contents of HA and HB in Radix Pseudostellariae from different habitats, regions and harvest time were variable. Dynamic change of HA and HB in Radix Pseudostellariae in different harvest time showed a regular pattern. CONCLUSION There are correlative differences between the content and the ratio of HA and HB in Radix Pseudostellariae from different habitats. The total amount of HA and HB is the highest in the traditional harvest time.%目的分析不同产区、地域及采收时间太子参中环肽A(HA)、B(HB)含量变化,为探索太子参药材品质形成过程提供基础资料.方法用高效液相色谱法同时测定太子参中HA、HB含量.结果不同产区、同一产区不同地域及不同采收时间太子参中HA、HB的含量存在差异,HA、HB的动态积累具有一定规律.结论不同产区太子参中HA、HB的含量及其比值具有差异相关性,太子参中HA、HB的最高积累总值时间段与传统采收期基本一致.【总页数】4页(P175-178)【作者】邹立思;傅兴圣;刘训红;巢建国;谷巍;马阳;侯娅;李艳蓉【作者单位】南京中医药大学药学院,江苏南京210023【正文语种】中文【中图分类】R282.4【相关文献】1.乌当区太子参环肽B含量及其与元素含量的相关性 [J], 彭益书;陈蓉;杨瑞东;罗涯镕;李期佳;刘贤锋2.安徽与其它主产区地产太子参药材中太子参环肽B的含量比较研究 [J], 龙全江;王晓阁;徐雪琴3.对太子参环肽B含量分析及动态的相关研究 [J], 江冬英4.高效液相色谱法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果 [J], 王长琴5.不同品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B含量的比较 [J], 韩超;陈军辉;康海宁;王小如;黎先春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。