试管凝集试验报告

试管凝集试验报告

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试管凝集试验实验报告 试管凝集试验注意事项

篇一:直接凝集反应实验报告

免疫学?直接凝集反应实验报告

实验一:玻片凝集实验

1.实验原理:

颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应的抗体结合，在适量电解质(通常是0.85%NaCl)存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。凝集反应的方法有两种:?直接法;?间接法。颗粒性抗原(如完整的细菌或细胞)与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。如玻片凝集反应和试管凝集反应。将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。如RF因子检测

玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。

本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类ABO血型的鉴定。ABO血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。人类ABO血型抗原有两种:A抗原和B抗原。A型血红细胞表面具

有A型抗原，血液中具有抗B抗体;B型血红细胞表面具有B型抗原，血液中具有抗A抗体;AB型血红细胞表面具有A抗原和B抗原，血液中不具有抗A、B抗体;O型血红细胞表面不具有A、B抗体，但血液中含有抗A、B抗体。若用已知的抗A血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。 2.实验方法:

(1)取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明A、B分区。

(2)倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗A血清一滴，滴在A区内;同法在B区内滴加抗B血清一滴。

(3)使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。

(4)用木棒的两端取血，分别在抗A血清和抗B血清中搅拌均匀。

(5)用无菌棉棒压迫手指止血。

(6)静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。

3.实验结果:

4.结果分析:

实验二:试管凝集实验

1.实验原理:

试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出

现。如出现凝集块者为阳性反应。混合后仍均匀浑浊，无凝集块出现者为阴性反应。根据血清凝集效价判定待检血清中相应抗体的含量。即在试管内用已知颗粒性抗原检测未知抗体的相对含量的半定量试验。本次实验是以定量的伤寒杆菌为抗原，根据是否发生凝集反

应来检测血清中是否含有对应的抗体;根据各试管凝集程度的不同，来判断抗体的效价。

2.实验方法:

(1)取试管6支，用马克笔进行标记，依次放入试管架中。 (2)在第一支试管中加入生理盐水0.9ml，其余各管加生理盐水0.5ml。然后在第一只试管中加入伤寒免疫血清0.1ml，用吸管将它与生理盐水吹打混匀后，取出0.5ml加入第二支试管中;再将第二只试管的液体吹打混匀，取出0.5ml加入到第三支试管中，其余各管依次按照上述步骤将血清对倍稀释。至第五支试管时，将试剂混匀后，取出0.5ml弃之不用。是第六支试管不含伤寒免疫血清，作为实验的阴性对照管。最后在各管中都加入0.5ml伤寒杆菌菌液。

(3)轻摇试管架，混匀试管内液体，56?水浴1小时后，观察实验结果。

3.实验结果:

(1)对照组:即第六支试管，上清液浑浊，管底可有沉淀的细菌，轻摇后分散呈均匀浑浊。

(2)实验组:按1-5管依次观察。阳性者管底出现不规则凝集物，较松散。阴性者与对照组相同。

(3)凝集程度:

++++:液体澄清透明，细菌全部凝集于管底，轻摇可见大的凝集块。 +++:液体稍浑，细菌大多数凝集于管底，摇动后凝块较前者小。 ++:液体中等混浊，液体中有明显的凝集物，凝集块较小。 +:液体混浊，仔细观察可以看见液体中有很小的凝集颗粒。 -:与对照管相同。

(4

)凝集效价:出现明显可见凝集物(++)时的血清最高稀释度为血清效价。

篇二:布病试管凝集试验

布病试管凝集试验

一、 实验前准备

1、 试管的准备 ? 把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍。

? 试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160?干燥3个小时(整个干燥过程需要5~6个小时)。

? 实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水

配置方法:称取0.5克石炭酸，加入100ml的生理盐水中，配置后置高压锅中121?高压30分钟。

2、试剂的准备

?标准抗原:按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作1，20(工作浓度)稀释。

?标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 ?标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

3、被检血清

?按常规方法采血分离血清

血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。 ?运送和保存血清样品

防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。

二、试验操作过程

1、确定被检血清的稀释度

牛 、马 、 骆驼稀释用1:50,1:100,1:200,1:400(4个稀释度);猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,1:100,1:200(4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，即牛、马、骆驼用1:50,1:100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。 2、稀释被检血清--猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释

?每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加1.15 mL稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。

?取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。

?从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5 mL，稀释完毕。 ?从第1至第4管的血清稀释度分别为1:12.5,1:25,1:50,1:100。

3、加抗原

将 0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1 : 25,1 : 50,1 : 100,1:200，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1:50,1:100,1:200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。

4、设立对照--每次试验都应设立下列对照。

?阴性血清对照

阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同

?阳性血清对照

阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。 ?抗原对照

在0. 5mL稀释液中，加0.5 m L抗原(1:20)

5、比浊管的配置

每 次 试 验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将抗原(1: 2

0)用等量稀释液作一倍稀释，然后按表1配制比浊管。

表 1 比 浊 管 的 配 制

6、感作

所有试验管充分震荡后，置37?温箱感作20小时 7、结果判断

确定每份被检血清效价:比照比浊管判读，出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。

?结果判定

当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。

?牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度，猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。

三、试验后的处理

1、试管的处理

把所用试管必须高压处理(121?高压30分钟)，然后用自来水彻底洗涮干净，再用去离子水冲洗，后放置框中沥干，干燥(160?干燥3个小时)，保存备用。

2、 配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理

瓶子连其抗原一同高压灭菌(121?高压30分钟)，后清洗干净以备用。

3、 试管架的处理

把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉，后用自来水把试管架冲洗干净，晾干、保存备用

篇三:免疫学实验-凝集试验

实验一 凝集试验

颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination

reaction)或凝集试验。参与凝集反应的抗原称为凝集原(Agglutinogen)，抗体称为凝集素(Agglutinin)。 细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质(如生理盐水)参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。

凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。 [目的要求]

1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。 2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。

3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。 [材料与试剂]

1. 玻板，载玻片，试管(1cm x 8cm)，试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头(tip头)，牙签或火柴棒，记号笔。

2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。

3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清(牛、羊或猪)。

4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。

[实验内容及操作方法]

(一)试管凝集试验

以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。

1. 试管准备:每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试

管架上。如被检血清有多份，对照只需做1份。 2. 被检血清稀释:第1管加入2.3 ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水;然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2

ml ，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml 弃之，再吸取0.5 ml 加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml 加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5

ml (见表1-1)。该被检血清的稀释度分别是1:12.5、1:25、1:50、1:100。

3. 对照管制作:第5管中加0.5% 石炭酸生理盐水0.5 ml ，第6管加1:25稀释的布氏杆菌病阳性血清0.5 ml ，第7管加1:25稀释的布氏杆菌病阴性血清0.5

ml 。

4. 加抗原:将布氏杆菌病试管凝集抗原用0.5% 石炭酸生理盐水作1:20稀释，每支试管加0.5 ml 。

表1-1 布氏杆菌病试管凝集试验术式表(单位:ml)

5. 感作(反应):7支试管加完抗原后，充分混匀，置于37?温箱中4-10h，取出后置室温18-24h(或37?温箱12-14h，取出后置室温2-4h;或37?温箱中22-24 h取出)，然后观察并记录结果。