下载文档原格式
附件1除菌过滤技术及应用指南1.目的为指导和规范除菌过滤技术在无菌药品生产中的应用，保证无菌药品的安全、有效和质量稳定，依据《药品生产质量管理规范（2019年修订）》及附录，制定本指南。
本指南不具有法律约束性，仅作为药品生产企业、工程设计、设备制造以及药品监管单位的人员参考使用。
本指南是基于目前的认知及科技水平起草的，并不限制新技术及新方法的引入。
企业可以采用经过验证的替代方法，达到本指南要求。
2.定义本指南中的除菌过滤是指采用物理截留的方法去除液体或气体中的微生物，以达到无菌药品相关质量要求的过程。
3.范围本指南包括除菌过滤系统的设计、选择、验证、使用等内容，适用于无菌药品从工艺开发到上市生产的整个生命周期。
4.过滤工艺及系统设计4.1过滤工艺的设计过滤工艺设计时，应根据待过滤介质属性及工艺目的，选择合适的过滤器并确定过程参数。
除菌过滤工艺应根据工艺目的，选用0.22微米（更小孔径或相同过滤效力）的除菌级过滤器。
0.1微米的除菌级过滤器通常用于支原体的去除。
对无菌药品生产的全过程进行微生物控制，第 1 页避免微生物污染。
最终除菌过滤前，待过滤介质的微生物污染水平一般小于等于10cfu/100ml。
选择过滤器材质时，应充分考察其及待过滤介质的兼容性。
过滤器不得因及产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量产生不利影响。
除菌过滤器不得脱落纤维，严禁使用含有石棉的过滤器。
合理的过滤膜面积需要经过科学的方法评估后得出。
面积过大可能导致产品收率下降、过滤成本上升；过滤面积过小可能导致过滤时间延长、中途堵塞甚至产品报废。
应注意过滤系统结构的合理性，避免存在卫生死角。
过滤器进出口存在一定的限流作用。
应根据工艺需要，选择合适的进出口大小。
选择过滤器时，应根据实际工艺要求，确定过滤温度范围、最长过滤时间、过滤流速、灭菌条件、进出口压差范围或过滤流速范围等工艺参数，并确认这些参数是否在可承受范围内。
药品生产企业在选择除菌过滤器供应商时，应审核供应商提供的验证文件和质量证书，确保选择的过滤器是除菌级过滤器。
・１５４・羧甲基几丁质的制备和性能研究蒋丽霞顾其胜王文斌【摘耍】目的制备羧甲基几丁质并对其性能进行研究。
方法以新鲜虾壳为原料制备几丁质，然后采用碱化和醚化反应以及提纯工艺制备羧甲基几丁质。
采用双突跃电位滴定法测定脱乙酰度、元素分析法测定取代度、傅立叶变换红外光谱仪和核磁共振仪分析羧甲基的取代位置，采用凝胶色谱结合多角激光光散射仪测定相对分子质量及其分布，并按照ＧＢ／Ｔ１６８８６医疗器械生物学评价对其生物学性能进行检测。
结果通过将新鲜虾壳进行脱钙和去除蛋白质后制备的几丁质进行碱化和醚化反应可成功制备羧甲基几丁质。
采用双突跃电位滴定法测得羧甲基几丁质的脱乙酰度为１３．７６％，采用元素分析法测得的脱乙酰度和取代度分别为１４．５３％和１．２３９０。
红外光谱图显示取代位置为Ｎ，Ｏ取代；”Ｃ—ＮＭＲ谱图显示羧甲基几丁质是以６位上的一级取代为主，各位置的取代大小依次为６位羟基、一ＮＨｚ和３位羟基。
凝胶色谱结合多角激光光散射仪测定结果显示羧甲基几丁质的重均相对分子质量和数均相对分子质量及其分布系霰分别为６．２５×１０５、５．６０×１０５和１．２２。
生物学性能检测结果显示羧甲基几丁质是一种无菌、无热原、无急性全身毒性、无细胞毒性、无皮内刺激、无皮肤致敏反应、无遗传毒性的生物材料，植入人体后对组织无毒副作用。
结论通过碱化和醚化反应从几丁质中制备的羧甲基几丁质是一种脱乙酰度较低、取代度高、生物相容性良好的高分子生物医用材料。
【关■词】几丁质羧甲基几丁质制备性能中田分类号：Ｒ３１８Ｑ６１文献标识码：ＡＰＲＥＰＡＲＡＴＩｏＮＯＦＣＡＲＢＯＸＹＭＥＴＨＹＬＣＨＩＴＩＮＡＮＤＳＴＵＤＩＥＳＯＮＩＴＳＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ／ＪＩＡＮＧＬｉｘｉａ，ＧＵＱｉｓｈｅｎｇ，ＷＡＮＧＷｅｎｂｉｎ．ＳｈａｎｇｈａｉＱｉｓｈｅｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０１１０６，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｘｉａｊｉａｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＪＩＡＮＧＬｉｘｉａ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｘｉａｊｉａｎ９１８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎ【Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｐｒｅｐａｒｅｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎａｎｄｓｔｕｄｙｉｔｓｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｈｉｔｉｎｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍｆｒｅｓｈｓｈｒｉｍｐｓｈｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｎｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆａｌｋａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｔｈｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｓｗｅｌｌａｓｂｙｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｏｆｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｄｏｕｂｌｅ—ｊｕｍｐｐｏｔｅｎｔｉｏｍｅｔｒｉｃｔｉｔｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ；ｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｅｌｅｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ；ｔｈｅｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｐｏｓｉｔｉｏｎｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔｈｅＦｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｐｐａｒａｔｕｓａｎｄｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｐｐａｒａｔｕｓ；ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔａｎｄｉｔｓｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｇｅｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅａｎｇｌｅｌａｓｅｒｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＧＢ／Ｔ１６８８６ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｎｍｅｄｉｃａｌｄｅｖｉｃｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＣａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎｃｏｕｌｄｂｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙａｌｋａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｔｈｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｒｏｍｃｈｉｔｉｎｗｈｉｃｈｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍｆｒｅｓｈｓｈｒｉｍｐｓｈｅｌｌｓｂｙｄｅｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｐｒｏｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅｏｆｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎｗａｓ１３．７６％ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｏｕｂｌｅ—ｊｕｍｐｐｏｔｅｎｔｉｏｍｅｔｒｉｃｔｉｔｒａｔｉｏｎ；ｔｈｅｄｅｇｒｅｅｓｏｆｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎａｎｄｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｗｅｒｅ１４．５３％ａｎｄ１．２３９０ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｅｌｅｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓ．ＴｈｅＩＲｓｐｅｃｔｒｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｖｅｐｏｓｉｔｉｏｎｗａｓＮ，Ｏ—ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ．ａｎｄｔｈｅ”Ｃ—ＮＭＲｓｐｅｃｔｒｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｖｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｉｎｗａｓｍｏｓｔｌｙｐｒｉｍａｒｙｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆ６－ＯＨ，ａｎｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｖｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ，ｔｈｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｖｅｔｕｒｎｓｗｅｒｅｉｎｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｏｒｄｅｒ：６－ＯＨ，ＮＨ２，ａｎｄ３－ＯＨ．Ｔｈｅｗｅｉｇｈｔ—ａｖｅｒａｇｅｄａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒ—ａｖｅｒａｇｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｓａｎｄｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙｗｅｒｅ６．２５×１０５。
如何去除注射液中的热原如何去除注射液中的热原，注射剂中原料、辅料、溶剂、容器具等由于各种原因均有可能被细菌污染，常用的热原去除方法如下。
(1)清洗与清洁容器可以通过充分清洗干净和灭菌，以减少微生物及热原的污染。
特别是暴露（开口）工序如配制、洗、灌、封等岗位，容器具清洁消毒不严格会产生热原。
(2)高温法凡能经受髙温加热处理的容器、管道、粗滤器、生产用具等可高温除去热原。
①针头、针筒或其他玻璃器皿，在洗净后，于250°C加热30min以上，可破坏热原。
②安瓿瓶一般红外加热300°C、15min以上，可破坏热原。
③粗滤器等及时洗净并煮沸灭菌，及时除去微生物，以防止热原的污染。
④不锈钢容器及管道可通入纯蒸汽消毒15～30min。
(3)酸碱法一些可拆卸的连接管道、针筒、活塞、器具药液冲净后，淋干，可用新鲜的重铬酸钾硫酸清洗液或强碱液浸泡0.5h以上，可将热原破坏。
重铬酸钾浓硫酸清洁液可以碳化一切有机物，所以热原亦能被强氧化剂破坏，但必须清洗干净，否则对易氧化药物容易引起色泽等方面的变化。
(4)吸附法活性炭具有吸附热原、脱色、助滤等作用。
配制时可加入0.1%～0.5%(质量分数）的活性炭，煮沸并搅拌15min左右，可去除大部分热原。
对于抗生素生产特别有用，因为发酵过程可以导致严重的热原污染。
但加人活性炭后吸附热原的同时也吸附注射剂中有效成分。
活性炭的加人量可根据注射剂中热原污染程度及其产品分子结构的不同酌情加入并且需延长活性炭吸附热原的时间、提高吸附热原的温度，吸附后必须根据检验的产品含量考虑投料量。
（5）离子交换法离子交换树脂可去除药液或溶剂中热原，热原大分子中含有磷酸根与羧酸根，带有负电荷，易被强碱性阴离子交换树脂交换吸附，吸附热原效果较好。
强酸性阳离子交换树脂除去热原的能力很弱。
因此常用强碱性阴离子交换树脂吸附热原。
此种方法必须具有离子交换柱、离子交换树脂，在应用过程中不方便，因此不常用。
ISPE制药工程基准指南系列《无菌生产设施》第2版读书笔记转自李永康老师1）当用无菌工艺生产无菌API或制剂时，在无菌性方面的要求是一致的，无任何变化。
2）如无菌活性成分(APIs)直接分装成制剂，则无菌制剂的GMP要求适用于APIs生产。
2.药品质量管理规范(GMP)在各国的习惯称呼有所不同。
美国使用缩写CGMP，而欧洲，日本和其他地区缩写成GMP。
3.有6个工艺步骤建议需要对时间进行控制:1）配制至灭菌的时间；2）过滤时间；3）生产线上产品暴露时间；4）设备部件灭菌后的存储期；5）胶塞清洗/干燥后至灭菌的时间；6）灭菌后的容器/胶塞的存储期。
4.无菌产品的风险评估：4.1早期需考虑的3个关键问题（l）剂型:液体，乳剂，粉末或半固体；2）产品是否促进微生物生长：3）产品是否有潜在毒性或毒性，生产时可能对人员造成伤害。
4.2无菌生产工艺的关键工艺步骤：1）包装(西林瓶，安凯等等)；2）规模或产量的要求；3）产品如何进出生产区域：4）是否有亚批或连续工艺(例如灭菌隧道)：5）潜在的交叉污染，对敏感成分需早期考虑；6）通过设计或其他控制方法降低风险。
4.3结合产能和规模设计时应考虑以下内容:1）批量；2）批或阶段性生产周期；3）灌装重量和体积；4）生产线转换频率；4）清洁；5）消毒；6）灭菌需求。
5.无菌产品生产的关键工艺步骤：1）配料；2）配制和无菌过滤；3）转运至冻干机；4）灌装和加塞(初级密封)：5）直接接触产品的容器和胶塞的准备，灭菌和除热原；6）已灭菌设备和部件的储存和转运；7）工艺储罐和直接接触产品设备的清洁和灭菌。
6.无菌产品保护和避免污染：1）通过人员，物料或设备污染（例如设备表面或内部残留物或清洁剂/物料转运至控制区时的污染/人员在不同生产区域移动造成的污染/人员产生的污染）；2造成化学和生物污染的其它物质有：灰尘/污垢/毛屑/有毒物质/内毒素/引发感染的物质/生物试剂。
7.大多数污染都可控制，可采取的措施包括有：选择密闭工艺/去除污染物来源/使用隔离技术/严格控制人流和物流/设计和执行有效的清洁和灭菌程序/人员着装/人员培训和生产环境控制。
通常去除热原质的方法有吸附法、蒸馏法、热破坏法、滤过法、强酸强碱处理法。
1. 吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。
常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的 0.1%-0.5% ，将溶液加热到70 ℃左右保温一定时间效果更好。
使用的活性炭应符合药典规定要求。
2. 蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。
因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。
毛行钟等 [6] 参照 1995 年版中国药典细菌内毒素检查方法，探讨多效蒸馏水器制备蒸馏水过程中出水温度与热原质之间的关系。
结果表明多效蒸馏水器制备蒸馏水过程中出水温度达到94 ℃以上时热原质检查合格。
3. 热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。
因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180 ℃干烤 3 小时，或250 ℃干烤 1 小时。
侯振清等 [7] 为消除成品大输液中的热原，对于热原不合格的成品大输液，依据内毒素限值范围，选择一定的时间，进行第二次115 ℃高温消毒以消除热原。
同时发现不同品种中的热原对热稳定性有差别。
10% 葡萄糖注射液中的热原比生理盐水中的热原，更易被第二次高温消除。
应用第二次115 ℃高温消毒法在不同的时间范围内，可以消除成品大输液中相应限值的热原。
龚正明等 [8] 根据热原和 DMSO （血细胞冰冻保护剂注射用二甲基亚砜）的性质，用不同温度和时间对 DMSO 进行加热实验，确定了除去热原的方法，结果是：以180 ℃干热灭菌 3 小时，可以除去热原，但 DMSO 含量下降，故不适宜 DMSO 除去热原。
以115 ℃ 30min 湿热灭菌，含量及各项理化指标不变，但不能除热原，故此法亦不适宜。
以126 ℃ 30min 湿热灭菌，既能除去热原，又能保证 DMSO 性质不变，各项检测指标合格，因此该法适宜 DMSO 除去热原。
4. 滤过法此法是利用热原的滤过性特性而达到去除热原的目的。
粉针剂一、概述二、无菌分装粉针剂三、冻干粉针剂二、无菌分装粉针剂（一）工艺流程（二）无菌分装粉针剂生产设备（三）分装粉针剂车间布置D级洁净区C 级洁净区工艺简介1. 玻璃瓶处理粉针剂用玻璃瓶采用超声波清洗、经纯水冲洗，最后一次用孔径0.22μm微孔滤膜滤过的注射用水冲洗。
洗净的玻璃瓶在4 h内灭菌和干燥，达到洁净、无菌、干燥、无热原。
粉针剂用玻璃瓶的清洗、灭菌和干燥分别在专用的清洗设备和灭菌干燥设备中进行。
5. 半成品检查方式：目测；内容：1) 玻璃瓶有无破损、裂纹;2) 胶塞是否盖好;3) 铝盖是否包封完好;4) 瓶内药粉剂量是否准确,有无异物等6. 粘贴标签、外包粉针剂的分装机粉针分装机是将无菌的粉状药品定量分装在经过灭菌干燥的玻璃瓶内，并盖紧胶塞密封的设备。
常用分装机：螺杆式分装机和气流分装机。
分装环境：灭菌室内：湿度45-60%恒温20±2℃洁净级别：B级下的局部A级1. 螺杆分装机原理：利用螺杆的间歇旋转将药物装入瓶内达到定量分装的目的优点：具有结构简单、无需净化压缩空气及真空系统等附属设备，使用中不会产生漏粉、喷粉，调节装量范围大以及原料药粉损耗小等优点，缺点：速度较慢，对原始药粉状态有一定要求(爽滑性)，螺杆式分装机主要部件：带搅拌的粉箱螺杆计量分装头胶塞振荡料斗真空吸、盖塞机构输塞机构玻璃瓶输送机构拨瓶盘传动系统控制系统床身搅拌桨粉斗计量螺杆落粉头2. 气流分装机工作原理利用真空吸取定量药粉，再通过净化干燥后的压缩空气药粉吹入玻璃瓶中。
特点在粉腔中形成的粉末块直径幅度较大，装填速度快，一般可达300～400瓶/分钟，装量精度高，自动化程度高。
但，粉尘较大，能耗较大，设备运行及维护费用较高。
粉剂分装系统盖胶塞机构真空系统压缩空气系统真空压缩空气②盖胶塞机构主要由供料漏斗、胶塞料斗、振荡器、垂直滑道、喂胶塞器、压胶塞头及其传动机构和升降机构组成。
喂塞器主要功用是将垂直滑道送过来的胶塞通过移位推杆进行真空定位，送到压胶塞头的爪扣中。
热原的去除方法
除去热原的方法有：
（1）高温法：凡能经受高温加热处理的容器与用具，如针头，针筒或其他玻璃器皿，在洗净后，于250℃加热30分钟以上，可破坏热原。
（2）酸碱法：玻璃容器、用具可用重铬酸钾硫酸清洗液或稀氢氧化钠液处理，可将热原破坏。
热原亦能被强氧化剂破坏。
（3）吸附法：注射液常用优质针剂用活性炭处理，用量为0.05%～0.5%（W/V）。
[医学教育网原创]此外，将0.2%活性炭与0.2%硅藻土合用于处理20%甘露醇注射液，除热原效果较好。
（4）离子交换法：国内有用#301弱碱性阴离子交换树脂10%与#122弱酸性阳离子交换树脂8%，成功地除去丙种胎盘球蛋白注射液中的热原。
（5）凝胶过滤法：用二乙氨基乙基葡聚糖凝胶（分子筛）制备无热原去离子水。
（6）反渗透法：用反渗透法通过三醋酸纤维膜除去热原，这是近几年发展起来的有使用价值的新方法。
（7）超滤法：一般用3～15nm超滤膜除去热原。
如超滤膜过滤10%～15%的葡萄糖注射液可除去热原。
（8）其他方法：采用二次以上湿热灭菌法，或适当提高灭菌温度和时间，处理含有热原的葡萄糖或甘露醇注射液亦能得到热原合格的产品。
微波也可破坏热原。
