非洲猪瘟研究进展.docx

非洲猪瘟实验室检测技术研究进展1. 引言1.1 引言概述非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的猪类传染病，具有高度致命性和传染性，严重危害猪类养殖业的健康发展。

为了及时、准确地检测和控制非洲猪瘟病毒的传播，研究人员不断努力开发和改进实验室检测技术。

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2. 正文2.1 非洲猪瘟实验室检测技术研究现状非洲猪瘟是一种严重传染的动物疾病，对养猪业造成了巨大的经济损失。

对非洲猪瘟实验室检测技术的研究一直备受关注。

目前，非洲猪瘟实验室检测技术的研究现状主要包括以下几个方面。

目前常用的非洲猪瘟实验室检测技术主要包括PCR技术、酶联免疫吸附试验、免疫组化等。

这些技术能够对非洲猪瘟病毒进行准确快速的检测，为非洲猪瘟的防控提供了重要的技术支持。

随着科技的发展，一些新型的非洲猪瘟实验室检测技术也不断涌现。

基于纳米技术的磁珠分离法、高通量测序技术等，这些新技术能够更加灵敏、高效地检测非洲猪瘟病毒，为疾病的早期发现提供了可能。

目前非洲猪瘟实验室检测技术在技术水平和应用范围上都已经取得了较大进展。

还有一些挑战需要克服，比如技术的标准化、设备的普及等。

希望未来能够通过持续不断的研究，进一步提升非洲猪瘟实验室检测技术的水平，为疫情的控制做出更大的贡献。

2.2 非洲猪瘟实验室检测技术主要方法:非洲猪瘟实验室检测技术主要方法包括传统方法和现代方法两大类。

传统方法主要包括病毒分离、血清学检测和组织病理学检测。

病毒分离是最直接的方法，通过将样品接种在合适的培养基中，观察细胞发生变化以确认是否存在非洲猪瘟病毒。

血清学检测则是通过检测猪血清中的抗体来确认是否感染了非洲猪瘟病毒。

组织病理学检测则是通过镜检组织标本来确认是否存在非洲猪瘟病毒感染。

现代方法则主要包括PCR技术、ELISA技术和免疫荧光技术。

PCR技术是一种高度敏感的检测方法，能够快速准确地检测出非洲猪瘟病毒的存在。

ELISA技术则是一种高通量的检测方法，能够同时检测多个样本，提高检测效率。

非洲猪瘟的现状及研究进展1. 引言1.1 非洲猪瘟简介非洲猪瘟，又称非洲疫黄热病，是由非洲猪瘟病毒引起的高度接触性、急性传染病，主要传染猪科动物，对猪的危害性极大。

该病最早在非洲被描述，后经过传播到欧洲、亚洲及其他地区。

非洲猪瘟病毒在环境中的存活力较强，能通过感染病猪、瘟疫鼠和野猪等作为媒介而传播扩散，对养猪业造成严重危害。

该病的高死亡率和易传播性使得防控工作面临着极大挑战，也成为全球猪业发展的重要隐患之一。

非洲猪瘟对于疫苗的免疫效果依然不明确，在疫情爆发后有效的防治手段显得尤为重要。

当前各国都在加大防控力度，同时也在不断进行相关的研究工作，希望能够尽快找到有效的防治措施，控制病情的蔓延。

1.2 非洲猪瘟疫情扩散情况非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病，主要感染猪科动物。

自2018年以来，非洲猪瘟在全球范围内迅速蔓延，造成了严重的经济损失和养猪业的重大影响。

非洲猪瘟疫情呈现出迅速扩散的特点，主要通过直接接触病猪、病死猪及其排泄物、兽医设备工具等传播途径进行传播。

疫情扩散的速度和范围让人担忧，不仅在非洲地区造成了巨大影响，而且近年来还在亚洲地区出现了多起非洲猪瘟疫情，引起了国际社会的高度关注。

疫情的扩散给养猪业带来了严重的危机，造成了养猪户的巨大经济损失，影响了猪肉供应和市场价格。

由于非洲猪瘟的高度致病性和容易传播性，养猪业也面临着严峻的挑战和困难。

在这种情况下，加强国际合作、加大科研投入、采取有效的防控措施是非常重要的，只有通过合作努力，才能更好地控制和预防非洲猪瘟的蔓延，保障养猪业的发展和猪肉供应的稳定。

2. 正文2.1 非洲猪瘟的传播途径非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病，其传播途径主要包括以下几种：1. 直接接触感染：非洲猪瘟病毒可以通过病猪的呼吸道分泌物、血液、粪便等直接传播给健康猪只。

在养殖密集的环境中，病毒很容易在猪圈、运输工具等场所传播，因此直接接触感染是主要的传播途径之一。

非洲猪瘟疫苗的研究进展非洲猪瘟是一种严重威胁猪养殖业的传染病。

由于该病毒的高度致死性和易传播性，非洲猪瘟给全球畜牧业带来了巨大的经济损失。

为了控制该病的传播，研究人员们一直努力寻找有效的疫苗。

在这篇文章中，我们将介绍非洲猪瘟疫苗的研究进展。

1. 传统非洲猪瘟疫苗传统非洲猪瘟疫苗一般使用活疫苗，如经过弱化的非洲猪瘟病毒。

这些疫苗可以激发猪体免疫系统产生抗体，但也存在一些问题。

首先，活疫苗的生产和使用需要高度的专业技术，可能在制备和传递过程中带来潜在的风险。

其次，这种疫苗无法区分感染病毒和疫苗接种引起的免疫反应，给疾病的监测和控制带来困难。

2. 重组非洲猪瘟疫苗为了克服传统非洲猪瘟疫苗的局限性，研究人员们开始探索重组疫苗的开发。

重组非洲猪瘟疫苗通过将非洲猪瘟病毒的相关基因与其他病毒或载体结合，实现基因重组并产生新的疫苗。

这种疫苗在引起免疫反应的同时，不会导致非洲猪瘟的严重症状。

3. DNA疫苗DNA疫苗是近年来非洲猪瘟研究领域的热点之一。

DNA疫苗通过将非洲猪瘟病毒的基因片段注入猪体，使其自身产生相关抗体。

这种疫苗的优势在于可以针对不同的亚型病毒进行定制，提供更广泛的保护。

4. 合成疫苗合成疫苗是近年来研究的新兴方向。

通过使用生物技术手段，研究人员可以人工合成非洲猪瘟病毒的关键蛋白质，使用这些合成的蛋白质制备疫苗。

合成疫苗不需要使用活病毒，避免了传统疫苗中存在的风险。

5. 基因编辑技术基因编辑技术为非洲猪瘟疫苗的研发提供了新的思路。

通过编辑非洲猪瘟病毒的基因，研究人员可以减弱其致病性，同时保留其免疫原性。

这种方法可以获得更安全和有效的疫苗，有望在猪瘟的控制方面发挥重要作用。

总之，非洲猪瘟疫苗的研究一直在不断取得进展。

传统疫苗的使用虽然能够提供一定的保护，但仍然存在一些限制。

近年来，基因重组、DNA疫苗、合成疫苗和基因编辑技术等新兴技术为非洲猪瘟的控制和预防提供了更多选择。

随着科学技术的发展和研究的深入，相信我们能够找到更加安全、有效的疫苗来控制非洲猪瘟的传播。

非洲猪瘟防控措施研究进展非洲猪瘟是一种严重威胁猪类健康的传染病，主要通过接触感染的猪或猪产品而传播。

非洲猪瘟的爆发会给养猪业造成巨大损失，因此各国政府和科研机构一直在努力研究非洲猪瘟的防控措施。

本文将对非洲猪瘟防控措施的研究进展进行探讨，并就防控措施的实施提出建议。

一、疫苗研发目前，研发非洲猪瘟疫苗是防控非洲猪瘟的主要手段之一。

近年来，许多国家的科研机构都在加紧研发非洲猪瘟疫苗，并取得了一定的进展。

中国在非洲猪瘟疫苗研发方面做出了重大突破，已经研制出了一种高效的非洲猪瘟疫苗，并在实际养猪场中进行了试验，取得了良好的防控效果。

美国、欧洲等国家和地区也在积极研发非洲猪瘟疫苗，取得了一些进展。

在疫苗研发方面，我们建议各国加大投入，加强合作，共同推动疫苗的研发和生产。

要加强对疫苗的临床试验，确保疫苗的安全性和有效性。

二、加强检疫和监管非洲猪瘟的传播主要是通过接触感染的猪或猪产品，因此加强检疫和监管是非常重要的防控措施。

各国政府应加大对生猪进口的检疫力度，严格把关进口猪和猪产品的质量和健康状况。

要加强对禽畜交易市场和养猪场的监管，建立健全的防疫措施，及时发现和隔离疫情，防止疫情扩散。

针对检疫和监管工作，我们建议各国政府加大投入，提高检疫和监管人员的素质和技术水平，确保检疫和监管工作的有效性和可靠性。

三、加强宣传教育加强对养猪户和养殖场主的宣传教育，提高他们的防疫意识和技术水平，也是非常重要的防控措施。

通过宣传教育，让养猪户和养殖场主了解非洲猪瘟的传播途径和特点，学会正确的防疫措施，做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。

在宣传教育方面，我们建议各国政府加大宣传力度，采取多种宣传手段，向养猪户和养殖场主普及防疫知识，提高他们的防疫意识。

要加强对养猪户和养殖场主的技术培训，提高他们的防疫技术水平。

四、加强国际合作非洲猪瘟是一种全球性的传染病，需要国际社会的共同努力来进行防控。

各国政府和科研机构应加强国际合作，共同研究非洲猪瘟的防控策略和技术，交流经验，共享信息，共同推动非洲猪瘟的防控工作。

非洲猪瘟的现状及研究进展非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的严重传染性疾病，主要危害猪类动物。

自上世纪二十世纪初以来，非洲猪瘟就一直是全球范围内猪养殖业的重大威胁。

近年来，非洲猪瘟在全球范围内呈现出不断蔓延的趋势，对全球养猪业、经济和社会造成了严重影响。

本文将对非洲猪瘟的现状及研究进展进行介绍，并分析目前的防控措施和未来的挑战。

一、非洲猪瘟的现状1. 非洲猪瘟的传播和影响非洲猪瘟病毒主要通过直接接触受感染猪只或受感染的猪肉产品传播，也可以通过人为传播、野生动物传播和虫口传播等途径造成传播。

非洲猪瘟对猪只的感染率极高，且死亡率也很高，对养猪业造成了严重的经济损失。

非洲猪瘟对猪肉和猪肉产品的贸易带来了严重影响，给全球猪肉产业带来了极大的不利影响。

2. 非洲猪瘟的蔓延近年来，非洲猪瘟在全球范围内蔓延的速度越来越快，呈现出越来越严重的态势。

据世界动物卫生组织的统计数据显示，非洲猪瘟的疫情范围已经从非洲大陆扩散到了亚洲、欧洲和美洲等地区，而且呈现出逐年扩散的趋势，造成了严重的疫情危害。

3. 非洲猪瘟的研究现状针对非洲猪瘟的研究工作也在全球范围内得到了很大的重视，包括对非洲猪瘟病毒的研究、免疫机制的研究、疫苗的研制等。

目前已经取得了一些研究进展，但是对于如何有效地遏制非洲猪瘟的蔓延，目前还缺乏有效的防控手段。

二、非洲猪瘟的研究进展1. 非洲猪瘟病毒的研究非洲猪瘟病毒是一种复杂的病毒，对其基因组结构和传播途径等方面的研究一直是研究的重点。

近年来，随着生物技术的不断发展，科学家们对非洲猪瘟病毒的基因组结构、传播途径和进化规律等进行了深入研究，为非洲猪瘟的防控和疫苗的研制提供了重要的科学依据。

2. 非洲猪瘟的免疫机制研究非洲猪瘟病毒对猪只的感染率极高，但是并不是所有的猪只都会患上非洲猪瘟，这说明猪只自身可能具有某种免疫机制来抵抗非洲猪瘟的感染。

近年来，研究人员针对猪只的天然抗病力进行了深入研究，希望通过揭示猪只的免疫机制来研究非洲猪瘟的有力防控措施。

非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展中国兽医科学2008,38(06):544—548ChineseV eterinaryScience中图分类号:S852.659.1文献标识码:A文章编号:1673—4696(2008)06—0544—05 非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展王华,王君玮,徐天刚,王志亮(中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心ABSL一3实验室,山东青岛266114)摘要:概述了非洲猪瘟的病原学特性,流行病学以及诊断方法的最新研究进展,并对非洲猪瘟病毒的各种病原学检测技术,血清学检测技术等实验室检测技术的优缺点进行了比较.在预防控制非洲猪瘟方面,对上述检测技术和诊断方法的应用进行了讨论和展望,旨在为研究该病提供理论参考.关键词:非洲猪瘟;流行病学;诊断方法Advancesinstudiesofepidemiologyanddiagnostictechnologiesf0rAfricanswinefeverW ANGHua,WANGJun—wei,XUTian—gang,WANGZhi—liang(ABSL-3LaboratoryofNationalDiagnosticCenter/orExoticAnimalDiseases, ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter,Qingdao266114,China)Abstract:ResearchadvancesinAfricanswinefevervirus(ASFV)weresummarizedfromthe prespec-tivesofaetiology,epidemiologyanddiagnostictechnology.Theadvantagesanddisad vantag esofaetiological diagnostictechniquesandserologicaldiagnostictestsforASFVwerereviewed.Theprospec tsforresearchandapplicationofthediagnosticassayswerediscussed,whichhaveimplicationsforthedetectionandpre—ventionofASF.Keywords:Africanswinefever;epidemiology;diagnosticmethod 非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起猪的一种急性,高度接触性传染病.临床症状以高热,病程短,高死亡率,内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变为主要特征.本病对养猪业危害甚大,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病之一,我国将其列为一类动物疫病.该病的高传染性,高死亡率一直严重危害和影响着畜牧业的健康发展.由于缺乏有效的疫苗进行免疫预防,对该病的防控面临着巨大的挑战.因此,对于该病流行病学的认识和诊断技术的研究具有十分重要的意义.l病原学特性ASFV最初分类归属于虹彩病毒科,之后历经痘病毒科的转变,DNA序列分析表明,ASFV具有介于痘病毒和虹彩病毒之间的特征,最终被国际病毒分类委员会(ICTV)单列为一个独立的非洲猪瘟病毒科,该科仅有ASFV一属.ASFV颗粒有囊膜,直径175～215nm,核衣壳蛋白呈2O面体对称,直径180nm,基因组由单分子线状双股DNA组成,长度为170～190kb.DNA分子具有共价的闭合末端,反转重复区和发夹结构,编码200多种蛋白质.ASFV基因组含有大量的毒力相关基因和宿主范围的相关基因,包括假定膜蛋白,分泌性蛋白,参与核苷酸和核酸代谢以及蛋白修饰的酶.这些基因位于基因组末端的不同区域,为ASFV特有的基因,或与其他微生物的某些基因功能相似.基因组长度的多样性是ASFV的重要特点之一,这种长度多样性不仅表现在不同分离毒株之间,也表现在同一来源病毒株的不同培养代次之间.其主要原因是该病毒基因组随意丢失或获得重收稿日期:2007—12-19;修回日期:2008-03-25基金项目:农业部国家引进国际先进农业科学技术计划(948)项目(2006一G57) 作者简介:王华(1977一),男,河南舞钢人,硕士.*通讯作者,Tel:0532—87839188,E-mail:*******************.cn第6期王华等:非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展545复序列所致.这也可能是该病毒进行免疫逃逸的原因之一.2流行病学ASFV是目前唯一已知核酸为DNA的虫媒病毒,是非洲大陆本土病原,猪是本病的自然宿主.该病自1921年在东部非洲国家肯尼亚首先被发现以来,一直存在于撒哈拉以南的中,南部,西部非洲国家[1].1957年ASF在葡萄牙被发现,之后逐渐侵入欧洲国家.1971年它被传人古巴等拉美国家.1978年它从西班牙扩散至意大利和马尔他岛,同年传人巴西和多美尼加共和国,为世界上危害养猪业最恐怖的疾病之一.目前证实该病有3种感染循环:(1)古老的森林患病动物循环.包括非洲软蜱和非洲野猪,疣猪(warthog),薮猪(bushpig).野猪对ASFV易感,表现与家猪相似的症状或呈亚临床症状,能直接把病毒传给家猪.非洲软蜱体内带毒,ASFV在非洲软蜱和有些野猪间形成循环感染,虽然在感染野猪的血液和组织中含毒量很低,却能使软蜱带毒传播,这为该病的防治和根除带来困难.在非洲大陆,放牧猪的发病通常和疣猪,薮猪,林猪(forestpig)等野生动物接触有关或者被软蜱叮咬而感染.此外,欧洲野猪,美洲野猪,林猪等动物也具有易感性,这些野生动物多是非洲猪瘟的阳性传人源.(2)蜱和家猪循环.在非洲和西班牙半岛有几种软蜱是ASFV的贮藏宿主和生物传播媒介,在南美洲地区广泛分布的蜱也可以传播ASFV.在蜱体内,病毒通过卵和交配等途径传播疾病.ASFV在软蜱组织内可存活长达几年之久.(3)家猪之间传播循环.此传播途径没有生物传播媒介参与.病死猪和亚临床症状感染带毒的猪群,尤其是地方流行的家猪携带病毒成为该病的主要传染源.患慢性病的带毒猪可终身带毒,并通过其排泄物而散播病毒. Lubisi等[2通过对16株ASFV基因型P72的C一端核苷酸序列进行比较分析,证实当前东部非洲国家分布有13个ASFV基因型,其中有8个基因型分布在不同的国家,具有地域特征.基因型I以前认为仅感染西部非洲国家地区的家猪,如今也首次从野生动物体内分离出ASFV基因型I.目前, ASFV在东部非洲国家传播途径的分散性以及多基因型性特点也分别证明了ASFV在这个地区流行病学的复杂性.本病经口和上呼吸道感染,短距离内经空气传播,污染的饲料,泔水,栏舍,车辆,器具和衣物可间接传播本病,发病猪和死猪的全血,组织,分泌物和排泄物中含有病毒.本病在发病初期的致死率非常高,扑灭延迟则病毒的致死性发生变化,病死率逐渐降低,康复猪数量增多,但康复猪可成为本病的长期传染源.非洲软蜱,野猪,疣猪,薮猪,林猪,患病猪,康复猪为本病的长期传染源.ASFV传人非疫区与来自国际机场和港口的,未经煮过的感染猪制品或残羹有关.非洲软蜱不仅长期携带ASFV,而且可将病原体垂直传播给子代.在欧洲,该病的发生主要是由进口携带病毒的肉和脏器等制品引起的.该病的传播途径主要是接触或采食污染物而经口传染或通过昆虫吸血而传染.目前尚未见ASFV感染反刍动物,犬,猫和禽类动物的报道.3检测技术由于缺乏有效疫苗,检测技术是目前用以监测和控制非洲猪瘟暴发的有效方法.OIE规定,由试验得到的活病毒抗原,包括对传染源的操作,处理病原体等需要在ABL-3级实验室进行[3].3.1动物接种试验由于非洲猪瘟与猪瘟等其他出血性疾病很难区别,通过临床诊断鉴别猪瘟和非洲猪瘟比较困难,所以本病的确诊必须依靠实验室方法.为区分这两种疾病,可进行动物接种试验.将病料接种于猪瘟免疫猪与猪瘟易感猪.如果2组猪均不发病,则可排除猪瘟和非洲猪瘟;如果免疫猪不发病而易感染猪发病,则为猪瘟;如果猪瘟免疫猪与易感猪都发病, 则为非洲猪瘟.对可疑猪,必要时用敏感猪做第2次动物接种试验.本方法的特点是敏感,准确性较高,试验要求不高,适用于一般条件的实验室.它是oIE推荐的标准试验之一.3.2免疫组化法FerndndezdeMarco等[4建立了免疫组化法,用来检测急性感染ASFV猪的扁桃体组织病理学变化,通过检测发现感染ASFV猪有出血,单核细胞增多现象.通过对末端脱氧核苷酸转移酶进行dUTP标记,采用此技术研究细胞凋亡,结果显示,虽然试验动物感染疾病的途径不同,但扁桃体出现与其他淋巴样器官相似的病理变化.免疫组化法是通用的检测方法之一,但对于临床症状不明显的病例,确诊有一定难度,因此,该方法仅作为ASF的辅助诊断方法.3.3免疫酶技术Pan等[5应用免疫过氧化物酶噬斑染色技术,对接种ASFV的V ero细胞进行检测,3d后观察到噬斑,可对ASFV进行抗原定量分析.此方法快546中国兽医科学第38卷速,特异,不用借助其他仪器,肉眼便可观察结果.3.4血细胞吸附试验Malmquist等提出并建立了该试验方法,血细胞吸附是指猪的红细胞附着在感染ASFV的单核细胞或者巨噬细胞的表面.绝大多数从非洲分离的ASFV毒株以及最初从欧洲国家分离的ASFV毒株均产生猪红细胞吸附现象.据Botisa等报道, 1963～1964年在西班牙首次发现了不能吸附红细胞的ASFV,这些毒株能在白细胞培养物内产生细胞病变,但没有红细胞吸附能力.至1974年,分离的无红细胞吸附能力的ASFV毒株多达216株. CSFV没有吸附红细胞的作用,但也有报道称,从德国分离的某些CSFV毒株却有吸附猪红细胞的能力. 这使得猪瘟与非洲猪瘟的鉴别诊断更为复杂化.'当怀疑有ASF疫情发生时,应将抗凝全血,脾,扁桃体,肾和淋巴结等样品送实验室进行检测.同时做原代白细胞培养物血细胞吸附试验和用感染猪外周血白细胞做"自动玫瑰花环"血细胞吸附试验.3.5荧光抗体试验(FAT)通过FA T鉴定待检组织的压印涂片或者冰冻切片中的ASFV抗原].本法用于检测野外可疑猪或实验室接种猪的脾,淋巴结等组织压片和冰冻切片中的ASFV抗原.此外,它可用于检测无血细胞吸附现象的白细胞培养物中的ASFV抗原,能够鉴定没有血细胞吸附能力的病毒株,也可以区分由ASFV和伪狂犬病病毒在细胞上形成的细胞病变(CPE).该方法仅作为诊断ASFV的辅助检测方法,具有快速,经济,敏感性和特异性高等优点,但需要专业试验人员,同时需要荧光显微镜及高质量的荧光标记抗体.该方法对亚急性和慢性型ASF的检测敏感性仅为4O.实验室诊断必须进行病毒分离试验,同时,还需进行接种猪的白细胞或者骨髓培养试验,这些方法是OIE指定的诊断方法之一.3.6血清学试验检测ASFV抗体具有重要意义,因为它不存在疫苗抗体的干扰.因此,在该病的消灭过程中可用血清学试验检测亚急性和慢性型病例.目前,可用的检测方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA),间接荧光抗体试验,免疫印迹试验和对流免疫电泳试验(IEOP)等.3.6.1间接ELISAOIE将ELISA作为诊断ASF的首选血清学方法,它可检测血清和组织液. 1979年,Wardley等首次建立了该方法,其敏感性和特异性较好.之后,Pastor等利用ASFV主要结构蛋白VP73和在含有猪血清培养液中生长的感染细胞的高特异胞浆可溶性片段(CS-P)建立了检测ASFV的两种ELISA方法.这两种抗原用于IEOP与ELISA的特异性是一致的.通过比较这两种抗原的差异,发现二者均具有较高的特异性,敏感性试验发现,使用CS-P抗原比VP73抗原至少能提前2d检测出ASFV抗体.P垂rez—Filgueira等在杆状病毒载体中表达了ASFVP30蛋白,以重组蛋白P30为抗原建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过对采自西班牙和不同非洲地区的ASFV毒株的血清样品进行检测(共计672份),同时与OIE介绍的方法进行比较,结果发现,用以西班牙ASFV毒株P30重组蛋白为抗原建立的ELISA方法检测非洲血清样品时,与西部非洲血清样品完全符合,而与东部非洲血清样品不符合,说明分离株的主要功能蛋白发生了变异.由于分离株具有地域性,可影响其检测结果. 该方法比OIE推荐的方法特异性高,而敏感性一样. 因此,对发展中国家来说,血清学诊断方法既经济又适用.Gallardo等u..分别以ASFV多聚蛋白PP62,P32和P54为研究对象,以在杆状病毒表达系统中表达的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,敏感性和特异性试验结果显示,重组蛋白PP62比P32和P54的检测结果更准确,重复性好,不需要免疫印迹法证实.3.6.2夹心ELISAVidal等u于1997年建立了用单克隆抗体检测非洲猪瘟VP73蛋白的夹心ELISA诊断方法.用该方法检测VP73抗原的最小浓度为0.05t~g/mL,用此方法检测整个病毒粒子量最低为2.3×10PFU/mL.3.6.3问接免疫荧光试验(IFA)IFA可用于检测感染ASFV的猪血清样品【l.将感染ASFV的猪肾细胞固定到载玻片上,使被检血清与载玻片上的抗原结合,将已结合的抗体与荧光素标记的猪免疫球蛋白抗体结合,然后在荧光显微镜下观察结果.该方法的优点是当ELISA检测结果不确定或制备抗原困难或复杂时,可选用此法.另外,用IEOP检测抗体,特异性强,快速电泳30min即可完成,此方法灵敏度低,适合感染猪群的筛选,但不能确诊.免疫印迹技术虽然能够确诊病例,但敏感性不如IFA.有文献报道称,用免疫印迹检测ASFV阴性的血清通过放射性免疫沉淀分析(RIPA)呈阳性,说明RIPA有较好的灵敏度和特异性【l.可见,对某一疾病的确诊需要结合多种诊断方法的试验结果.第6期王华等:非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展547 总之,血清学方法适于大规模流行病学普查,操作简单,重复性好,但往往存在假阳性偏高的问题,同时在操作过程中要接触具有毒害和致癌作用的试剂.3.7病毒核酸检测3.7.1荧光定量PCR技术Sdmi等口选择特异性引物,建立了同时检测3种主要猪病病毒的多重PCR方法,这3种病毒是猪伪狂犬病病毒(Aujesz—ky'Sdiseasevirus,ADV),猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)和猪生殖与呼吸综合征病毒(por—cinerespiratoryandreproductivesyndromevirus,PRRSV).运用该多重PCR方法使检测这些病原的时间缩短,准备好样品后1h内即可检测出结果. 具有高效,特异和敏感的优点.McKillen等建立的实时荧光定量PCR分子信标(molecularbeacon)技术具有快速,特异性强,灵敏性和准确性高的特点.该检测方法可快速鉴别ADV,ASFV,猪圆环病毒2型(PCV2)和PPV.该方法能够最低检测到2×1O拷贝,变化范围在2×10.～2×10拷贝.用此方法检测临床样品如抗凝血,血清和组织中的病毒具有特异性,与普通PCR相比更敏感.Zsak等口建立了TaqMan探针荧光实时定量PCR检测ASFV技术,其敏感性和特异性试验仅需一步且在1个管子里进行,整个反应在2h内完成.可以从病猪出现临床症状前的扁桃体样品中检测到病毒DNA.此方法可用于诊断和监测ASF或者作为疾病暴发时的应急检测措施.King等将P72基因的5核苷酸序列设计为探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法,该方法可避免PCR产物发生交叉污染.运用基因工程技术人工合成一段与P72基因不相关的核酸序列,用它代替TaqMan探针位点的核酸序列,即用已报道的两种颜色的TaqMan探针来鉴别ASFV.用该方法检测同一样品,结果,未扩增出人工合成片段,从而避免了产生假阳性.用此荧光定量PCR方法可鉴别诊断临床症状与非洲猪瘟相似的CSFV和PCV2感染病料,为实验室诊断提供了便利.3.7.2多重PCR技术Giammarioli等8_研究了一种新的热启动多重PCR(mPCR)方法,用此方法检测多重感染的猪病病原,以评价诊断效力.根据CSFV,ASFV,PCV2,PRRSV和PPV五种病毒的基因组序列设计合成了5对引物,运用商品化的RNA/DNA试剂盒提取和纯化核酸,此mPCR分反转录和PCR两个步骤.同时,运用单一PCR方法单独检测这5种病毒,并比较其敏感性.结果,与这5种病毒相应的单一PCR检测方法相比,该mPCR 能够检测出CSFV,PCV2和PPV,以及最低1lg的PRRSV和21g的ASFV.用该mPCR检测混有许多种DNA和RNA的病毒混合物,结果,这5种病毒的mPCR均没有假阳性产物出现.这种mPCR检测方法比普通PCR优越,可同时检测DNA和RNA病毒.Agtiero等u于2004年建立了一种新的,高敏感性和高特异性的一步法多重RT—PCR方法,能够鉴别诊断CSFV和ASFV,可以从临床样品如抗凝全血,细胞培养物和组织中检测到病毒,整个过程在5h内就可完成.这为早期快速,特异性诊断非洲猪瘟和猪瘟提供了可靠的方法.3.7.3巢式PCRBasto等叩建立了检测ASFVDNA的巢式PCR方法,采用内参对照,可以从非洲软蜱体内检测出ASFV.敏感性试验结果表明,该方法比病毒分离和OIE推荐的方法更敏感.该方法能够用于田间筛选蜱体内含有的ASFV.3.7.4普通PCRAgfiero等妇建立了快速检测ASFV的PCR方法,经限制性内切酶法证实,该方法具有良好的特异性.Bastos等]采用PCR方法扩增P72基因的C一端478bp片段,通过进化树分析核酸序列.运用此方法分析了以前用限制性多态性分析的55个ASFV毒株,这些毒株来自欧洲疫区,南美洲,加勒比海地区和西部非洲国家.结果证实了P72基因同源性高且高度保守.与此相反,从南部和东部非洲国家分离的ASFV中扩增的P72基因则出现异质性.该方法可用于非洲猪瘟的分子流行病学调查.Gonzague等.]为了检测临床样品中的ASFV,建立了一种PCR方法,并采用阳性内参法防止假阴性结果.通过用同一对引物扩增内控片段和目的DNA来区分它们的大小.内控片段的最小检测量为3O个DNA拷贝,目的片段为5O拷贝.总之,PCR方法敏感,特异,结果可靠,节省时间,适用于临床确诊.但操作费用相对较高,对人员的操作技能也有一定的要求.4展望近年来,随着世界经济全球化趋势的发展,自然生态环境的改变,一些严重危害动物和人类健康的跨国疫病接连发生.亚洲I型口蹄疫,小反刍兽疫等动物疫病相继传人我国,使我国现代农业,养殖产业蒙受了沉重打击,严重影响了我国的经济和国际贸易发展.非洲猪瘟虽然尚没有在我国发现,但从548中国兽医科学第38卷西非至东非,欧洲,亚洲传播的态势已经形成,非洲猪瘟对我国的潜在威胁也越来越大.因此,对该病的流行病学和诊断技术的研究贮备具有重要意义. ASFV的检测方法多种多样,各有优缺点,ASFV的实验室诊断结果要求准确,快速,敏感,这不仅对感染ASFV的动物治疗非常重要,而且对未感染的动物及时采取有效的预防措施同样具有重要的意义.随着分子生物学技术的不断发展,两种或多种技术的联合应用,将为ASFV的分子流行病学调查提供更加准确的试验数据.参考文献(References)r1]PENRITHML,TH0MS0NGR,BAST0SASS.African swinefever[M]//COETZERJAW,TUSTINRC.Jctious DiseasesofLivestock.SouthernAfrica:OxfordUniversity Press,2005:1087—1119.E2]LUBISIBA,BAST0SAD,DW ARKARM,eta1.Molecular epidemiologyofAfricanswinefeverinEastAfrica[J].ArchⅥrol,2005,150(12):2439—2452.[3]worldOrganizationforAnimalHealth.Manualofdiagnostic testsandvaccines[online].Paris:OIE,2004.Africanswine fever.Availableat:http://www.oie.int/eng/normes/mma—nual/A一00035.htm.Accessed4Dec.2006.[4]FERNANDEZDEMARCOM,SALGUEROFJ,BAUTISTA MJ,eta1.Animmunohistochemicalstudyofthetonsilsinpigs withacuteAfricanswinefevervirusinfection[J].ResVSc1. 2007,83(2):198—203.E5]PANIC,SHIMIZUM,HESSWR.Africanswinefever:mi—croplaqueass'aybyanimmunoperoxidasemethod[J].AmJV Res,1978,39(3):491-497.[6]MALMQUISTW A,HAYD.Haemadsorptionandcytopathic effectproducedbyAfricanswinefevervirusinswinebone marrowandbuffycoatcultures[J].AmJVRes,1960,21: 104—1O8.[7]BOOLPH,ORDASA,SANCHEZBC.E1diagnosticodelapesteporcinaafricanaporinmunofluorescencia(Thediagnosis ofAfricanswinefeverbyimmunofluorescence)[J].BullOIE, 1969,72:819—839.[8]WARDLEYRC,ABUELZEINEE,CROWTHERJR,eta1. 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非洲猪瘟的现状及研究进展1. 引言1.1 非洲猪瘟简介非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病，主要影响猪只。

该病毒对猪的感染率极高，病死率也较高，给养猪业造成了严重的经济损失。

非洲猪瘟的传播速度很快，往往可以在短时间内蔓延到整个养猪场或周围地区。

目前，非洲猪瘟已经成为全球猪业发展的重要障碍之一。

非洲猪瘟的症状主要包括高烧、食欲下降、呕吐、腹泻等，病猪会出现运动障碍、呼吸困难等症状。

由于病毒高度传染性，一旦有猪只感染，往往会导致整个养猪场的疫情爆发，造成大量猪只死亡。

为了遏制非洲猪瘟的传播，各国政府和兽医部门纷纷采取了一系列措施，包括加强疫情监测、严格管控猪只流通、加强生物安全等。

科研人员也在不断探索新的防控方法，希望能够有效控制这一疾病的传播。

2. 正文2.1 非洲猪瘟的传播途径非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的急性、高度传染性的病原体，对猪的威胁极大。

非洲猪瘟主要通过直接接触感染源或受污染的物品传播。

传播途径主要包括以下几种：1. 直接接触：病毒可通过猪之间的密切接触传播，包括嗅、舔、咀嚼和接吻等方式。

感染的猪体内分泌物或排泄物中含有病毒，接触这些物质会导致健康猪感染。

2. 食用感染源：病毒存在于感染猪的血液、组织和排泄物中，如果没有经过严格的处理和检疫，这些食品和饲料都可能成为传播媒介。

3. 虫媒传播：某些昆虫也可能传播非洲猪瘟病毒，如蜱、苍蝇等。

病毒可在这些昆虫体内繁殖，然后通过叮咬健康猪传播病原体。

4. 人为传播：人类在处理感染猪或污染物时未采取适当的防护措施，会把病毒带入其他猪群。

要遏制非洲猪瘟的传播，需要加强对感染猪群的隔离管理，加强饲养环境的清洁和消毒，避免食用来源不明的猪肉制品，并严格实施检疫措施，阻断病毒传播链。

2.2 非洲猪瘟的症状和影响非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引起的急性危害性传染病，对猪群的健康和养殖业产生了严重影响。

该病主要通过受感染的猪或病毒携带者传播，病毒在环境中可以存活较长时间，因此传播速度较快。

摘要：2018年8月，中国首次报道发生非洲猪瘟（ASF ）疫情，非洲猪瘟疫情由东欧跨洲际传播至亚洲。

本文就非洲猪瘟的病原、宿主范围、发病机制、传播方式、全球流行病学、疫苗防控和药物治疗方式等进行了简要综述，以期为非洲猪瘟的防控提供理论支持。

非洲猪瘟在非洲以外的欧洲、俄罗斯及中国、越南等地持续蔓延，非洲猪瘟病毒（ASFV ）感染后会造成易感动物大面积死亡，其疫苗还处于研发阶段，使得目前的防控前景更加艰难，关键词：非洲猪瘟病毒；流行病学；疫苗；传播非洲猪瘟的研究进展华冰洁（山东省临沂市平邑县畜牧发展促进中心山东临沂276399）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.02.004收稿日期：2023-05-14非洲猪瘟（african swine fever ，ASF ）是由非洲猪瘟病毒（african swine fever virus ，ASFV ）引起的家猪、野猪的一种急性、热性、高度致死性传染病，其强毒株可致仔猪高热、食欲不振、全身器官衰竭及出血等，发病率和死亡率可达100%[1]。

俗话讲，猪粮安天下。

由于目前非洲猪瘟在全球范围内普遍存在且无有效的治疗方法以及疫苗等药物可以防治，对全球养猪业和粮食安全构成了重大威胁，被列为世界动物卫生组织（WOAH ）报告的法定传染病，我国也将其规定为一类动物疫病。

猪作为优质蛋白质的重要来源，养猪业在全球养殖业中占据重要地位，特别是拥有世界一半生猪存栏量的中国。

然而，ASF 对于猪肉的稳定供应造成了极大威胁[2]。

猪和野猪感染ASFV 可导致几乎所有受感染动物迅速死亡。

对全球养猪业和食品安全构成了严重威胁。

ASFV 的及时检疫和迅速控制是保护养猪业免受ASFV 感染的关键。

1非洲猪瘟全球流行概况自1921年首次发现非洲猪瘟疫情，它首先在肯尼亚被描述为家猪的急性出血热，病死率接近100%。

随后通过大多数撒哈拉以南国家的家养猪群传播，并于1950年代传播到西非，对养殖业造成严重的影响。