中国畜牧兽医 2024,51(3):1267-1276C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &Ve t e r i n a r y Me d i c i n e 不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较杨慧明1,蒲 兴2,党海斌2,孙 璐1,张国中1(1.中国农业大学动物医学院,北京100193;2.南昌勃林格殷格翰动物保健有限公司,南昌330096)摘 要:ʌ目的ɔ对国内外共7个批次/品种(A~D ,F ~H )的C V I 988或C V I 988+HV T 商品疫苗进行免疫保护分析,以期了解不同马立克病(M D )疫苗的保护效果,为该病的防控提供参考㊂ʌ方法ɔ将140只1日龄S P F 鸡随机分为9组,G 01~G 09组,其中G 01~G 07组(15只/组)分别按推荐剂量免疫A~D 及F ~H 马立克病疫苗,G 08(攻毒对照组,15只)和G 09(空白对照组,20只)组不免疫,7日龄时G 01~G 08组分别经腹腔注射马立克病病毒(M D V )超强毒M d 5株(1000P F U /只),所有鸡隔离饲养120d ㊂通过检测疫苗毒蚀斑数㊁疫苗毒复制情况㊁攻毒后体重差异㊁临床表现和病理变化综合评估各疫苗的保护力㊂ʌ结果ɔ7个批次疫苗的病毒蚀斑数均符合国家标准(2000P F U /羽份),疫苗F 的病毒蚀斑数最高(6467P F U /羽份)㊂以1羽份剂量免疫1日龄S P F 鸡后,疫苗F 的复制速率相对较快㊂用M d 5株攻毒后,攻毒对照组鸡体重减轻,且有93.3%(14/15)的鸡死亡,100%(15/15)剖检出现M D 典型病变;G 01~G 07各免疫组鸡体重与空白对照组鸡相比,均无显著差异(P >0.05),死亡比例分别为0/14㊁3/15㊁5/15㊁0/14㊁0/13㊁0/15和1/15,剖检出现M D 典型病理变化的比例为5/14㊁8/15㊁7/15㊁5/14㊁3/13㊁3/15和5/15,攻毒保护试验结果显示,7个批次的马立克病疫苗对鸡均具有一定保护力,保护指数为45.7%~73.3%㊂ʌ结论ɔ不同厂家生产的鸡马立克病疫苗对M D V 超强毒M d 5株的攻击具有相似的保护效果,二价苗的保护力(73.3%)高于单价疫苗㊂关键词:马立克病;商品化疫苗;攻毒保护试验;保护指数中图分类号:S 859.79+7文献标识码:AD o i :10.16431/j.c n k i .1671-7236.2024.03.039 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-09-06基金项目:中国农业大学2115人才工程(00109023)联系方式:杨慧明,E -m a i l :y a n g h u i m i n g 12@126.c o m ㊂通信作者张国中,E -m a i l :z h a n g gz @c a u .e d u .c n C o m p a r a t i v eE v a l u a t i o no f I m m u n o l o g i c a l P r o t e c t i v eE f f i c a c yA m o n g Va r i o u sM a r e k sD i s e a s eV a c c i n e s i nC h i c k e n s Y A N G H u i m i n g 1,P U Xi n g 2,D A N G H a i b i n 2,S U N L u 1,Z H A N G G u o z h o n g1(1.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,C h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g 100193,C h i n a ;2.N a n c h a n g B o e h r i n g e r I n g e l h e i m A n i m a lH e a l t hC o .,L t d .,N a n c h a n g 330096,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b je c t i v e ɔT o u n d e r s t a n dt h ei m m u n e p r o t e c t i o n ef f e c t so fd i f f e r e n tc o m m e r c i a l M a r e k s d i s e a s e v a c c i n e s ,a n d p r o v i d ev a l u a b l ed a t a f o rM a r e k sd i s e a s e p r e v e n t i o na n dc o n t r o l,t h i ss t u d y a n a l yz e dt h ei m m u n e p r o t e c t i o no f7b a t c h e s /v a r i e t i e s (A -D ,F -H )o fC V 1988o r C V I 988+H V T c o m m e r c i a lv a c c i n e .ʌM e t h o d ɔA t o t a lo f1401-d a y-o l d S P F c h i c k e n s w e r e r a n d o m l y d i v i d e di n t o9g r o u p s ,g r o u p s G 01t o G 07.G 01t o G 07(15c h i c k e n s /g r o u p )we r e i m m u n i z e d w i t h M a r e k s d i s e a s e v a c c i n e A -D a n d F -H a c c o r d i n g to t h e m a n u f a c t u r e r s r e c o m m e n d e dd o s e ,r e s p e c t i v e l y ,w h i l e g r o u p s G 08(c h a l l e n g ec o n t r o l g r o u p,15c h i c k e n s )a n d G 09(b l a n kc o n t r o l g r o u p ,20c h i c k e n s )w e r en o t i m m u n i z e d .A t7d a y so fa ge ,t h ec h i c k e n sofg r o u p sG 01t o G 08w e r ei n t r a p e r i t o n e a l l y i n je c t e d w i t h M d 5s t r a i n (1000P F U /b i r d ).A l l c h i c k e n sw e r er a i s e dt o120d a y so fa ge .T h e p r o t e c t i v eef f e c to fe a c hv a c c i n e w a se v a l u a t e d t h r o ug hth ee x a mi n a t i o no fv i r u s p l a q u en u m b e r s ,v a c c i n er e p l i c a t i o n ,w e i gh td i f f e r e n c e s p o s t -中国畜牧兽医51卷c h a l l e n g e,c l i n i c a lm a n i f e s t a t i o n s,a n d p a t h o l o g i c a l c h a n g e s.ʌR e s u l tɔT h ev i r u s p l a q u en u m b e ro f a l l7v a c c i n eb a t c h e sc o n f i r m e dt on a t i o n a l s t a n d a r d(2000P F U/f e a t h e r),a n dt h ev i r u s p l a q u e n u m b e r o f v a c c i n eF(6467P F U/f e a t h e r)w a s t h eh i g h e s t.T h e r e p l i c a t i o n r a t eo f v a c c i n eFw a sf a s t e r t h a no t h e r v a c c i n e s.A f t e r c h a l l e ng e dw i th M d5s t r ai n,t h ew e i g h t o f t h e c h a l l e n g e c o n t r o lg r o u p c h i c k e n sw e r ed e c r e a s e d,a n dt h eu n v a c c i n a t e dc h i c k e n sc h a l l e n g e dw i t h M d5h a d93.3% (14/15)m o r t a l i t y,a n d100%(15/15)M D l e s i o n s.C o m p a r e dw i t hb l a n k c o n t r o l g r o u p,t h e r ew a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i nb o d y w e i g h t i n g r o u p sG01t o G07(P>0.05).T h e m o r t a l i t y o f v a c c i n a t e dc h i c k e n si n g r o u p s G01-G07w e r e0/14,3/15,5/15,0/14,0/13,0/15a n d1/15, r e s p e c t i v e l y.T h e M Dl e s i o n p r o p o r t i o no fv a c c i n a t e dc h i c k e n si n g r o u p s G01-G07w e r e5/14, 8/15,7/15,5/14,3/13,3/15a n d5/15,r e s p e c t i v e l y.T h e r e s u l t s o f i m m u n e c h a l l e n g e p r o t e c t i o n t e s t s h o w e d t h a t7b a t c h e s o fM a r e k s d i s e a s e v a c c i n e h a d a c e r t a i n p r o t e c t i v e e f f e c t o n c h i c k e n s,a n d t h e p r o t e c t i o n i n d e xo f t h e s ev a c c i n e sw e r e45.7%-73.3%.ʌC o n c l u s i o nɔD i f f e r e n tm a n u f a c t u r e r s M a r e k s d i s e a s e v a c c i n ed e m o n s t r a t e dc o m p a r a b l e p r o t e c t i v e e f f e c t a g a i n s tM d5s t r a i no fM D V.F u r t h e r m o r e,t h e b i v a l e n t v a c c i n e e x h i b i t e d h i g h e r p r o t e c t i o n(73.3%)c o m p a r e d t o t h e m o n o v a l e n t v a c c i n e.K e y w o r d s:M a r e k s d i s e a s e;c o m m e r c i a l v a c c i n e;c h a l l e n g e p r o t e c t i o n t e s t;p r o t e c t i o n i n d e x鸡马立克病(M a r e k sd i s e a s e,M D)是由疱疹病毒科㊁α疱疹病毒亚科的马立克病病毒(M a r e k s d i s e a s e v i r u s,M D V)引起的鸡的一种高度接触性传染性淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及各种脏器㊁组织肿瘤病灶[1]㊂此外,该病还会造成免疫抑制,是危害世界养禽业健康发展的一种主要疫病㊂当前,选择优质疫苗㊁切实做好免疫接种是预防和控制该病最有效的措施之一[1-2]㊂为了解不同商品化M D液氮疫苗的免疫保护效果,为家禽生产提供参考,本研究系统评估了国内外4个供应商共7个批次/品种的C V1988或C V I988+H V T疫苗的免疫保护效果㊂1材料与方法1.1材料1.1.1疫苗及来源不同供应商生产的M D液氮疫苗,疫苗A(C V I988,国内某疫苗厂家生产)㊁疫苗B(C V I988,某进口企业国内生产)㊁疫苗C (C V I988,某进口疫苗厂家1生产)㊁疫苗D (C V I988,某进口疫苗厂家2生产),疫苗F (C V I988,某进口企业国内生产),疫苗G(C V I988+ H V T,某进口企业国内生产)和疫苗H(C V I988,国内某疫苗厂家生产),其中,疫苗A㊁B㊁C㊁D由某农业科技有限公司孵化场提供;疫苗F㊁G㊁H由勃林格殷格翰动物保健有限公司提供㊂1.1.2试验动物1日龄S P F白来航雏鸡,购自北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司㊂1.1.3攻毒毒株M D V超强毒M d5株,由山东农业大学动物医学院提供,液氮保存㊂批号为M D5P0802,2m L/支㊂1.1.4隔离器由中国农业大学畜禽疫病诊断研究中心提供㊂实验动物使用许可证号为S X K Y (京)2018 0038㊂1.2方法1.2.1疫苗效价测定免疫前,取不同供应商的M D活疫苗,快速解冻后分别用D M E M培养液进行系列稀释后如下操作:取适宜稀释度,每个稀释度接种3个已长成良好单层鸡胚成纤维细胞的6孔板中,每孔接种1m L,另设2孔接种等量稀释液作为空白对照㊂37ħ吸附1h后,每孔加入2m L维持液㊂置37ħ㊁5%C O2培养箱静置培养5~6d,显微镜下进行蚀斑计数㊂空白对照细胞应长势良好,细胞形态正常,无空斑化现象㊂病毒蚀斑应形态典型㊁明显㊁大小均匀一致㊂以最佳稀释倍数下3个孔的平均蚀斑数计算每羽份疫苗蚀斑数㊂最佳稀释倍数的确定原则:在该病毒液稀释倍数下,生成的蚀斑清晰㊁无融合重叠㊁蚀斑数在10~30个范围,判定为最佳稀释倍数[3]㊂1.2.2试验分组与攻毒140只1日龄S P F鸡随机分为9组,G01~G09组,其中G01~G07为免疫组,每组15只,分别在1日龄时经颈部皮下注射免疫不同供应商的M D活疫苗1羽份(0.2m L/羽),免疫操作遵循各厂家说明书;G08组15只,为攻毒对照组,不免疫M D疫苗(注射同等剂86213期杨慧明等:不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较量的稀释液),G01~G08组在7日龄时分别经腹腔注射M D V超强毒M d5株(1000P F U/只);G09组为空白对照组,20只,不免疫M D疫苗(注射同等剂量的稀释液)㊁不攻毒㊂具体分组处理见表1㊂表1试验分组及处理T a b l e1E x p e r i m e n t a l g r o u p i n g a n d p r o c e s s i n g组别G r o u p s数量N u m b e r/只疫苗V a c c i n e免疫日龄I m m u n i z a t i o na g e/d免疫途径I m m u n i z a t i o nr o u t e攻毒毒株C h a l l e n g i n gs t r a i n攻毒日龄A g e o fc h a l l e n g e/d攻毒剂量/途径C h a l l e n g ed o s e/r o u t eG0115A1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0215B1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0315C1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0415D1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0515F1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0615G1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0715H1颈部皮下M d571000P F U/腹腔注射G0815///M d571000P F U/腹腔注射G0920////// /,未进行此项操作/,T h i s o p e r a t i o n i sn o t p e r f o r m e d1.2.3羽毛囊M D V实时荧光定量P C R检测分别于14㊁28和60日龄,每组采集5只试验鸡的主羽髓(每只鸡采集3根主羽,混合,每只鸡的样品作为一个检测单位),提取D N A,利用实验室建立的C V I988特异性实时荧光定量P C R方法(未发表数据)检测羽髓中C V I988情况并计算阳性率,间接评估疫苗复制情况㊂1.2.4体重记录分别在60和90日龄时对各组存活鸡进行称重并记录㊂1.2.5临床观察及病理剖检试验鸡全程饲养在隔离器内,观察120d㊂每日观察试验鸡的临床表现,记录其发病和死亡情况(免疫后和攻毒后1周内死亡鸡视作非特异性死亡,不计入发病统计数)㊂对死亡鸡及时剖检,肉眼观察是否有可见病变;试验结束时安乐法处死存活鸡,剖检观察是否有可见病变㊂1.2.6组织病理学观察采集死亡鸡或处死的存活鸡疑似肿瘤病变的内脏组织(每只鸡采集一套组织样品,含法氏囊㊁胸腺㊁肝脏㊁脾脏㊁肾脏㊁肺脏等器官组织),置于10%中性福尔马林液中固定,制作石蜡切片,进行H E染色,于显微镜下观察组织病理变化,确定肿瘤类型㊂1.2.7疫苗免疫保护指数保护指数(%)=(攻毒对照组发病率-免疫组发病率)/攻毒对照组发病率ˑ100%㊂数值越小表示疫苗保护力越差㊂1.3数据统计分析试验数据用S P S S20.0软件进行卡方检验和单因素方差分析㊂体重以平均值ʃ标准差表示㊂P< 0.05表示差异显著;P<0.01表示差异极显著㊂2结果2.1疫苗效价测定M D活疫苗蚀斑测定结果显示,7个M D疫苗的抗原含量均符合国家标准(不低于2000P F U/羽份),其中,疫苗F的抗原含量最高,平均效价为6467P F U/羽份(表2)㊂表2各疫苗效价T a b l e2V i r u s t i t e r o f d i f f e r e n t v a c c i n e s疫苗编号V a c c i n e sN o.毒株V a c c i n e s t r a i n s效价T i t e r/(P F U/羽份)A C V I988株2100B C V I988株2400C C V I988株2100D C V I988株2000F C V I988株6467G C V I988株+HV T株5600H C V I988株24002.2免疫鸡羽毛囊M D V实时荧光定量P C R定量检测分别在14㊁28和60日龄各组随机取5只鸡的主羽髓,检测疫苗株复制情况并计算阳性率,结果见表3㊂由表3可知,不同厂家的疫苗复制速度存在9621中国畜牧兽医51卷差异,其中G04㊁G05㊁G06组在14日龄疫苗阳性率分别为80%㊁100%和80%,相对较高,说明其疫苗复制速度相对较快㊂G07仅在28日龄时有弱阳性检出㊂表3不同日龄鸡羽毛囊中疫苗毒C V I988的检出率T a b l e3D e t e c t i o n r a t e o f v a c c i n e s t r a i nC V I988i n t h e f e a t h e r s a c o f c h i c k e n s a t d i f f e r e n t a g e s%组别G r o u p s日龄A g e142860G0120(1/5)20(1/5)0(0/5) G0220(1/5)60(3/5)0(0/5) G0360(3/5)60(3/5)40(2/5) G0480(4/5)20(1/5)0(0/5) G05100(5/5)40(2/5)40(2/5) G0680(4/5)20(1/5)20(1/5) G070(0/5)20(1/5)0(0/5) G080(0/5)0(0/5)0(0/5) G090(0/5)0(0/5)0(0/5)2.3体重变化试验鸡在60和90日龄时的平均体重见表4㊂由表4可知,各免疫组(G01~G07组)组间无显著差异(P>0.05),与G09(空白对照组)之间也无显著差异(P>0.05)㊂60日龄时,各免疫组鸡体重与G08组(攻毒对照组)差异显著(P<0.05);90日龄时,G08组2只鸡存活,体重分别为1271和761g,个体差异较大,不参与统计分析㊂表4各组不同日龄鸡体重T a b l e4B o d y w e i g h t o f c h i c k e n s o f d i f f e r e n t a g e s i n e a c h g r o u p组别G r o u p s60日龄60d a y s o l d90日龄90d a y s o l d数量N u m b e r/只体重B o d y w e i g h t/g数量N u m b e r/只体重B o d y w e i g h t/gG0114799.36ʃ111.89a141235.68ʃ228.66aG0213850.42ʃ157.86a121315.42ʃ246.89aG0311820.23ʃ149.69a101303.70ʃ213.04aG0414852.46ʃ100.73a141274.68ʃ204.69aG0513860.88ʃ117.40a131229.15ʃ201.28aG0615839.13ʃ106.81a151260.80ʃ203.07aG0714895.96ʃ145.51a141239.71ʃ305.05aG085475.60ʃ301.37b21016.00ʃ360.62G0911950.86ʃ156.23a81269.00ʃ252.35a同列数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05);肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05);无字母标注表示未参与统计分析I n t h e s a m e c o l u m n,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P<0.05);A n dw i t ht h e s a m e l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a nn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P>0.05);W h i l ew i t hn ol e t t e rs u p e r s c r i p t s m e a nn o p a r t i c i p a t i o ni ns t a t i s t i c a l a n a l y s i s2.4临床症状观察观察期120d内,G01㊁G04和G05组分别有1㊁1和2只鸡出现非特异性死亡,相关统计不计入内㊂G09组(空白对照组)鸡在观察期内表现正常,无鸡死亡㊂G08组(攻毒对照组)鸡在20日龄(即攻毒后2周)开始出现厌食㊁精神不佳㊁矮小消瘦,初期可见关节肿大,步态不稳,后期可观察到M D比较典型的劈叉症状(图1),最早于39日龄发生死亡,死亡高峰期集中在39~69日龄,病死率为93.3%(14/ 15)㊂各免疫攻毒组(G01~G07组)鸡均出现不同程度的关节肿大㊁鸡爪弯曲㊁步态不稳,严重者可见劈叉症状(图1),甚至死亡㊂其中G03组的死亡比例(33.3%)高于G02(20.0%)和G07组(6.7%),3组之间的死亡率差异不显著(P>0.05),但与攻毒对照组(G09组)差异显著(P<0.05)㊂各组鸡发病和死亡数见表5㊂07213期杨慧明等:不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较图1 各攻毒组鸡典型临床表现F i g .1 C l i n i c a l s y m p t o m s o f c h i c k e n s i n c h a l l e n g e g r o u p s 表5 各组鸡临床观察结果T a b l e 5 C l i n i c a l o b s e r v a t i o no f c h i c k e n s i n e a c h g r o u p 组别G r o u p s 鸡总数T o t a l n u m b e r o fc h i c k e n s/只出现临床症状的鸡数量N u m b e r o f c h i c k e n ss h o w i n g c l i n i c a l s i gn s /只死亡鸡数量N u m b e r o f d i e dc h i c k e n s/只死亡率M o r t a l i t y/%G 0114200G 02155320.0G 03156533.3G 0414100G 0513200G 0615200G 0715416.7G 0815141493.3G 09200002.5 病理剖检观察对攻毒后死亡的鸡进行剖检㊂攻毒对照组(G 08组)39~40日龄死亡鸡可见肝脏㊁脾脏和肾脏不同程度肿大,胸腺㊁法氏囊萎缩,未见明显的眼观肿瘤病变㊂47~100日龄死亡鸡可见肝脏㊁脾脏㊁肾脏等肿大,胸腺㊁法氏囊萎缩,肝脏和脾脏表面出现多个白色结节灶,肌胃角质膜易剥离㊂免疫攻毒组(G 02㊁G 03和G 07组)死亡鸡剖检可见不同程度的肝脏㊁脾脏肿大,法氏囊㊁胸腺萎缩,个别鸡肝脾表面可见白色结节灶㊂120日龄时对所有存活鸡安乐死后进行剖检,攻毒对照组(G 08组)鸡肝脏表面可见白色结节状肿瘤㊂各免疫攻毒组鸡均未见明显肿瘤病变,多为肝脏㊁脾脏㊁肾脏的轻微肿大㊂剖检统计结果见表6㊂2.6 病理组织学变化组织病理学观察结果显示,试验鸡各内脏器官病变区的组织学变化均以淋巴组织增生和形成肿瘤性病变为主要特征,主要表现为淋巴样细胞的弥漫性或局灶性增生与浸润,免疫攻毒鸡和攻毒对照鸡不同内脏器官的典型病理组织学变化见图2㊂增生与浸润的肿瘤细胞均由多形态的淋巴样细胞组成,受侵害的组织还伴有淤血㊁出血㊁细胞变性或坏死等变化㊂这些都是典型的M D 感染导致的肿瘤细胞类型㊂1721中 国 畜 牧 兽 医51卷表6 各组鸡剖检出现病变的比例T a b l e 6 T h e p r o p o r t i o no f c h i c k e n sw i t h p a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n e a c h g r o u p 组别G r o u p s 死亡鸡剖检存在病变P r o po r t i o no f d e a d c h i c k e n s w i t h l e s i o n s a t n e c r o p s y存活鸡剖检存在病变P r o p o r t i o no f l i v i n g ch i c k e n s w i t h p a t h o l o g i c a l c h a n ge s 剖检病变合计P r o po r t i o no f c h i c k e n sw i t h p a t h o l o g i c a l c h a n ge s G 0105/145/14G 023/35/128/15G 035/52/107/15G 0405/145/14G 0503/133/13G 0603/153/15G 071/14/145/15G 0814/141/115/15G 09///病变统计原则:出现任一M D 典型病变(胸腺㊁法氏囊萎缩;坐骨神经肿大;内脏组织器官肿大或肿瘤发生等)即统计在内;数据表示剖检存在病变的鸡数/剖检鸡数;/表示无此项数据S t a t i s t i c a l p r i n c i p l e o f l e s i o n s :A n y M Dt y p i c a l l e s i o n s (A t r o p h y o f t h y m u s ,b u r s ao fF a b r i c i u s ;E n l a r ge m e n tof s c i a t i cn e r v e ;E n l a rg e m e n t o f i n t e r n a l o r ga n s o r t u m o r s ,e t c .)w e r e c o u n t e d ;T h ev a l u e i n d i c a t e dt h en u mb e ro fc h i c k e n sw i t h l e s i o n s i nt h e a u t o p s y /t h en u m b e r o f c h i c k e n s i n t h e a u t o p s y;/i n d i c a t e d t h a t n o s u c hd a t a e x i s ts ①A ,肝脏;B ,脾脏;C ,法氏囊;D ,胸腺;E ,肺脏;F ,肾脏㊂②ә表示淋巴细胞浸润;⇨表示淤血㊁出血①A ,L i v e r ;B ,S p l e e n ;C ,B u r s a o fF a b r i c i u s ;D ,T h y m u s ;E ,L u n g ;F ,K i d n e y .②әi n d i c a t e d l y m p h o c y t e i n f i l t r a t i o n ;⇨i n d i c a t e d c o n g e s t i o na n db l e e d i n g图2 免疫攻毒组及攻毒对照组病变组织病理学观察(H E ,400ˑ)F i g .2 P a t h o l o g i c a l o b s e r v a t i o no f d i s e a s e d t i s s u e s i n i m m u n e c h a l l e n g e g r o u p a n d c h a l l e n g e c o n t r o l g r o u p (H E ,400ˑ)27213期杨慧明等:不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较2.7免疫保护结果结合临床症状㊁死亡及剖检病变(非重复计数),综合评估M D V导致的发病率并计算各组的保护指数㊂结果显示,各疫苗组(G01~G07组)抵抗超强毒M d5株攻击的保护指数分别为64.3%㊁46.7%㊁46.7%㊁64.3%㊁69.2%㊁73.3%和66.7%(表7)㊂表7不同疫苗的免疫保护指数T a b l e7I m m u n e p r o t e c t i o n i n d e x o f d i f f e r e n t v a c c i n e s组别G r o u p s鸡总数T o t a l n u m b e r o fc h i c k e n s/只出现临床症状的鸡数量N u m b e r o f c h i c k e n ss h o w i n g c l i n i c a ls i g n s/只死亡鸡数量N u m b e r o f d i e dc h i c k e n s/只出现剖检变化的鸡数量N u m b e r o f c h i c k e n ss h o w i n gg r o s sl e s i o n s发病率M o r t a l i t y/%保护指数P r o t e c t i o ni n d e x/%G011420535.764.3 G021553853.346.7 G031565753.346.7 G041410535.764.3 G051320330.869.2 G061520326.773.3 G071541533.366.7 G08151414151000 G0*******/3讨论科学合理使用疫苗是预防M D最有效的手段之一,选择优质疫苗㊁切实做好免疫接种可使疫苗发挥最大保护作用㊂M D疫苗是非清除性免疫,疫苗接种后不能完全阻止M D V的感染和传播[4-5],因此实施良好的生物安全措施防止M D V野毒的早期感染在防控M D中也至关重要㊂M D V是细胞结合性病毒,一般情况下只能存在于细胞中㊂羽囊是唯一可以产生具有感染性完整病毒粒子的部位,羽囊中M D V的病毒载量变化情况对于M D防控具有重要意义㊂已有研究表明, C V I988株在鸡体内的复制不受强毒感染的影响[6],实时荧光定量P C R方法可检测羽囊中的病毒载量,区分疫苗株和野毒株,常被用于免疫情况的监测[7-11]㊂本研究中利用实验室建立的C V I988特异性实时荧光定量P C R方法(数据未发表)对不同日龄试验鸡羽囊中的疫苗毒进行检测,结果显示,不同厂家疫苗免疫后在鸡体内的复制速度存在差异,这可能与毒株间的差异及每羽份疫苗的效价不同有关,效价较高的疫苗免疫后在羽囊中的检出率较高㊂研究表明,M D疫苗免疫后鸡体内的病毒载量在免疫后7或14d达到高峰,随后逐渐降低[12-13]㊂本试验结果与此基本一致㊂M D V超强毒株的感染可造成严重的免疫器官衰竭和明显的免疫抑制,通过反复发生溶细胞性感染引发淋巴器官受损,产生转化感染并诱发肿瘤形成[1]㊂由于肿瘤形成需要一定时间,感染鸡群通常先出现与M D相关的临床症状,如厌食消瘦㊁精神沉郁㊁劈叉等,接着开始出现死亡,有时不表现任何症状而突然死亡,在后期死亡或存活鸡中出现肿瘤[1,14-16]㊂G08组(攻毒对照组)鸡在试验期内的表现与此相符,于20日龄开始出现M D相关临床表现,39日龄开始出现死亡,死亡高峰为39~69日龄,死亡率为93.3%,后期(47~100日龄)死亡鸡剖检可见明显肿瘤,病变部位病理切片可见淋巴细胞增生浸润㊂疫苗免疫可在一定程度上保护鸡免于M D V感染导致的消瘦㊁死亡或肿瘤形成㊂本试验中,免疫鸡的平均体重显著高于攻毒对照组,死亡率和肿瘤形成率显著低于攻毒对照组,这与李慧娇等[17]㊁孙玉章等[18]㊁李向超等[19]的结果一致㊂攻毒保护试验是评价疫苗保护效果的标准方法㊂为了解不同厂家M D疫苗(国内外4个供应商共7个批次/品种)对免疫鸡的保护效果差异,本试验选择标准超强毒M d5株作为攻毒株,攻毒剂量为1000P F U/只,攻毒日龄为7日龄㊂结果显示,G06组G疫苗样品(C V I988+H V T)和G05组F疫苗3721中国畜牧兽医51卷样品(C V I988)的相对保护指数较高,分别为73.3%和69.2%,G02组B疫苗样品(C V I988)和G03组C疫苗样品(C V I988)的相对保护指数较低,均为46.7%㊂这一结果与疫苗抗原含量有直接关系,抗原含量较高时,对鸡的保护率较高,特别是同一供应商的产品,如G02组B疫苗(2400P F U/羽份, 46.7%保护)和G05组F疫苗(6467P F U/羽份, 69.2%保护)㊁G01组A疫苗(2100P F U/羽份, 64.3%保护)和G07组H疫苗(2400P F U/羽份,66.7%保护)㊂这与G i m e n o等[20]对火鸡疱疹病毒(H V T)疫苗的研究结果一致,疫苗接种剂量对疫苗效果有较大影响㊂这提示在选择疫苗时,应选择抗原含量较高的产品㊂通常每只雏鸡使用2000~ 6000P F U的疫苗剂量即可[1],更高剂量对免疫水平提高的作用甚微[7,21]㊂研究表明,联合使用H V T 与C V I988疫苗的免疫方式可形成协同抗病毒作用[22-23],发挥更好的免疫效果[19],本试验结果也证实了这一点,二价疫苗(C V I988+H V T)的保护效果优于单价苗㊂本研究中,7批疫苗均未对试验鸡提供100%保护,部分免疫攻毒鸡出现了与攻毒对照组相似的病变,应该意识到,尽管疫苗可有效预防M D发生,但仅依靠疫苗的使用不能从根本上阻断M D V的感染和传播,必须辅以品种遗传抗性[5]和生物安全等综合措施来控制M D的发生和流行㊂已有研究表明,中国鸡群M D V野生毒株的毒力在不断增强,现有疫苗呈现不能完全保护的趋势[24-28],这提示在做好生物安全㊁品种筛选的同时,应当着手开发免疫效果更好的疫苗,以应对新出现的高致病性M D V毒株,实现M D的可持续控制㊂4结论不同厂家生产的鸡马立克病疫苗对超强毒M d5株的攻击具有相似的保护效果㊂与单价疫苗相比,二价疫苗(C V I988+H V T)1日龄免疫S P F 鸡后能提供更好的保护㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] S WA Y N EDE.禽病学[M].14版.沈阳:辽宁科学技术出版社,2022.S WA Y N E D E.D i s e a s eo f P o u l t r y[M].14t h e d.S h e n y a n g:L i a o n i n g S c i e n c e a n d T e c h n o l o g yP u b l i s h i n g H o u s e,2022.(i nC h i n e s e)[2] R E D D Y S M,I Z UM I Y A Y,L U P I A N IB.M a r e k sd i se a s e v a c c i n e s:C u r r e n ts t a t u s,a n d s t r a t e g i e sf o ri m p r o v e m e n t a n dd e v e l o p m e n t o f v e c t o rv a c c i n e s[J].V e t e r i n a r y M i c r o b i o l o g y,2017,206:113-120. [3]刘涛,马明,梁武,等.鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测方法的建立[J].中国家禽,2015.37(13):60-62.L I U T,MA M,L I A N G W,e t a l.E s t a b l i s h m e n to fv i r u s-t i t e r d e t e c t i o n m e t h o d f o r l i v e T u r k e yh e r p e s v i r u s v a c c i n e o fM a r e k s d i s e a s e i n c h i c k e n[J].C h i n aP o u l t r y,2015,37(13):60-62.(i nC h i n e s e)[4] T E N G M,Z H E N G L P,L IH Z,e t a l.P a t h o g e n i c i t ya n d p a t h o t y p e a n a l y s i so fH e n a n i s o l a t e so fM a r e k sd i se a s ev i r u sr e v e a ll o n g-t e r m c i r c u l a t i o n o fh i g h l yv i r u l e n t M D V v a r i a n ti n C h i n a[J].V i r u s e s,2022,14(8):1651.[5]蔡文博,牛成明,高彩霞,等.不同M D免疫抗性鸡羽髓中疫苗毒与超强毒的复制动力学及相关性研究[J].中国预防兽医学报,2011,33(3):194-198.C A I W B,N I U C M,G A O C X,e t a l.R e p l i c a t i o nd y n a m i c s a n d c o r re l a t i o nof v a c c i n e v i r u s a n dv v M D Vi n f e a t h e r f o l l i c l ee p i t h e l i u m o f g e n e t i cr e s i s t a n ta n ds u s c e p t i b l ec h i c k e nl i n e st o M D[J].C h i n e s eJ o u r n a lo f P r e v e n t i v eV e t e r i n a r y M e d i c i n e,2011,33(3):194-198.(i nC h i n e s e)[6] HA Q K,F E A RT,I B R A H E E M A,e t a l.I n f l u e n c eo fv a c c i n a t i o n w i t h C V I988/R i s p e n s o n l o a d a n dr e p l i c a t i o no fav e r y v i r u l e n t M a r e k sd i s e a s ev i r u ss t r a i ni nf e a t h e r so fc h i c k e n s[J].A v i a nP a t h o l o g y,2012,41(1):69-75.[7] G I M E N OI M,D U N N J R,C O R T E S A L,e t a l.D e t e c t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f C V I988(R i s p e n sv a c c i n e)f r o m o t h e r s e r o t y p e1M a r e k s d i s e a s ev i r u s e s[J].A v i a nD i s e a s e,2014,58(2):232-243.[8] G I M E N OI M,C O R T E S A L,F A I Z N M,e t a l.E v a l u a t i o no ff a c t o r si n f l u e n c i n g e f f i c a c y o fv a c c i n es t r a i nC V I988a g a i n s t M a r e k sd i s e a s ei n m e a t-t y p ec h i c k e n s[J].A v i a nD i s e a s e,2015,59(3):400-409.[9] B A I G E N T SJ,N A I R V K,L E G A L L U D E C H.R e a l-t i m e P C R f o r d i f f e r e n t i a l q u a n t i f i c a t i o n o fC V I988v a c c i n e v i r u s a n dv i r u l e n t s t r a i n so fM a r e k sd i se a s ev i r u s[J].J o u r n a lof V i r o l og i c a l M e th o d s,2016,233:23-36.[10]兰兴鸽,张艳萍,于正浩,等.荧光定量P C R方法在鸡马立克氏病疫苗免疫监测中的应用分析[J].中国预47213期杨慧明等:不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较防兽医学报,2021,43(7):727-733.L A N X G,Z HA N G Y P,Y U Z H,e t a l.A p p l i c a t i o na n a l y s i s o f f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C R i nm o n i t o r i n g i m m u n i z a t i o no f M D v a c c i n e[J].C h i n e s eJ o u r n a lo f P r e v e n t i v e V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2021,43(7):727-733.(i nC h i n e s e)[11] B A I G E N TSJ,S M I T H LP,P E T H E R B R I D G ELJ,e t a l.D if f e r e n t i a l q u a n t i f i c a t i o n o f c l o n e d C V I988v a c c i n e s t r a i na n dv i r u l e n tR B-1Bs t r a i no f M a r e k sd i se a s ev i r u s e si n c h i c k e n t i s s u e s,u s i n g R e a l-t i m eP C R[J].R e s e a r c h i n V e t e r i n a r y S c i e n c e,2011,91(1):167-174.[12] B A I G E N T SJ,S M I T H L P,C U R R I E R J,e t a l.R e p l i c a t i o nk i n e t i c s o f M a r e k sd i s e a s ev a c c i n ev i r u si n f e a t h e r s a n d l y m p h o i d t i s s u e su s i n g P C Ra n dv i r u si s o l a t i o n[J].J o u r n a lo f G e n e r a l V i r o l o g y,2005,86(11):2989-2998.[13]I S L AM T,R E N Z K G,S T E P H E N W,e t a l.V i r a lk i n e t i c s,s h e d d i n gp r o f i l e a n d t r a n s m i s s i o n o f s e r o t y p e1M a r e k s d i s e a s e v a c c i n e R i s p e n s/C V I988i nm a t e r n a l a n t i b o d y-n e g a t i v e c h i c k e n s[J].A v i a nD i s e a s e,2013,57(2):454-463.[14]甘军纪,刘秀梵,吴长新.马立克病毒超强毒株(M d5㊁R B1B)毒力试验[A].中国畜牧兽医学会禽病学分会.中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C].2002.G A NJJ,L I U X F,WU C X.T h ev i r u l e n c et e s to fv e r y v i r u l e n t M a r e k s d i s e a s e v i r u ss t r a i n(M d5,R B1B)[A].P o u l t r y H e a l t h B r a n c h,C h i n e s eA s s o c i a t i o n o f A n i m a l a n d V e t e r i n a r y S c i e n c e.P r o c e e d i n g so ft h e11t h S y m p o s i u m o ft h e C h i n e s eA s s o c i a t i o no f A n i m a la n d V e t e r i n a r y S c i e n c e[C].2002.(i nC h i n e s e)[15]陈展鸿,罗琼,杨洁,等.广西玉林地区M D V强毒Y L2002株的分离鉴定[J].中国兽医科学,2021,51(2):193-201.C H E N Z H,L U O Q,Y A N G J,e t a l.I s o l a t i o na n di d e n t i f i c a t i o n o f M D V w i l d s t r a i n s i nY u l i n,G u a n g x i[J].C h i n e s e V e t e r i n a r y S c i e n c e,2021,51(2):193-201.(i nC h i n e s e)[16]龚振华,张康,王丽萍,等.超强马立克病病毒株的致病性研究[J].畜牧兽医学报,2015,46(7):1191-1200.G O N GZH,Z HA N GK,WA N GLP,e t a l.S t u d i e s o np a t h o g e n i c i t y o f a v e r y v i r u l e n tM a r e k s d i s e a s e v i r u ss t r a i n[J].A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c a,2015,46(7):1191-1200.(i nC h i n e s e) [17]李慧姣,李启红,吴涛.血清3型火鸡疱疹病毒疫苗与血清1型C V I988疫苗的效力比较[J].中国兽药杂志,2002,36(11):32-34.L I H J,L I Q H,WU T.C o m p a r a t i v ee f f i c a c y o fT u r k e y h e r p e s v i r u s(s e r o t y p e3)a n d M D C V I988(s e r o t y p e1)v a c c i n ev i r u s e s[J].C h i n e s eJ o u r n a lo fV e t e r i n a r y D r u g,2002,36(11):32-34.(i nC h i n e s e) [18]孙玉章,代永联,吴光玉,等.三种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究[J].中国动物检疫,2015,32(11):87-90.S U N Y Z,D A IY L,WU G Y,e t a l.C o m p a r i s o no fv a c c i n e e f f i c a c y i n c h i c k e n s c h a l l e n g e s w i t h v e r yv i r u l e n tM D Vs t r a i n M d5[J].C h i n aA n i m a l H e a l t hI n s p e c t i o n,2015,32(11):87-90.(i nC h i n e s e)[19]李向超,赵丽霞,刘浩,等.不同马立克氏病疫苗攻毒保护试验[J].兽医导刊,2018,16:209-211.L I X Q,Z HA O L X,L I U H,e t a l.C h a l l e n g ep r o t e c t i o no fd i f f e r e n t M a r e k sd i s e a s ev a c c i n e s[J].V e t e r i n a r y O r i e n t a t i o n,2018,16:209-211.(i nC h i n e s e)[20] G I M E N OIM,C O R T E SA L,F A I ZN,e t a l.E f f i c a c yo f v a r i o u s HV T v a c c i n e s(c o n v e n t i o n a l a n dr e c o m b i n a n t)a g a i n s t M a r e k s d i s e a s e i n b r o i l e rc h i c k e n s:E f f e c to fd o s ea n da g eo fv a c c i n a t i o n[J].A v i a nD i s e a s e,2016,60(3):662-668.[21] E I D S O N C S,P A G E R K,K L E V E N S H.E f f e c t i v e n e s s o fc e l l-f r e e o r c e l l-a s s o c i a t e d T u r k e yh e r p e s v i r u s v a c c i n e a g a i n s t M a r e k s d i s e a s e i nc h i c k e n sa s i n f l u e n c e db y m a t e r n a la n t i b od y,v a c c i n ed o s e,a n d t i me of e x p o s u r e t o M a r e k s d i s e a s ev i r u s[J].A v i a nD i s e a s e,1978,22(4):583-597.[22] L E M I E R ES,WO N G S Y,S A I N T-G E R A N D A L,e t a l.C o m p a t i b i l i t y o fT u r k e y h e r p e s v i r u s-i nf e c t i o u sb u r s a ld i s e a s ev ec t o rv a c c i n e w i t h M a r e k sd i se a s eR i s p e n s v a c c i n e i n j e c t e d i n t o d a y-o l d p u l l e t s[J].A v i a nD i s e a s e,2011,55(1):113-118.[23] W I T T E R R L,N A Z E R I A N K,P U R C HA S E H G,e t a l.I s o l a t i o nf r o m t u r k e y s o f a c e l l-a s s o c i a t e dH e r p e s v i r u sa n t i g e n i c a l l y r e l a t e dt o M a r e k sd i s e a s ev i r u s[J].A m e r i c a n J o u r n a l o f V e t e r i n a r y R e s e a r c h,1970,31(3):525-538.[24] L I H,G E Z,L U O Q,e t a l.A h i g h l y p a t h o g e n i cM a r e k s d i s e a s e v i r u s i s o l a t e f r o m c h i c k e n s5721中国畜牧兽医51卷i m m u n i z e d w i t h a b i v a l e n t v a c c i n e i n C h i n a[J].A r c h i v e s o f V i r o l o g y,2022,167(3):861-870.[25] S U N P,C U I N,L I U L,e t a l.A t t e n u a t i o n o f ar e c o m b i n a n tM a r e k sd i s e a s ev i r u sl a c k i n g t h e m e qo n c o g e n e a n d e v a l u a t i o n o n i t s i m m u n e e f f i c a c ya g a i n s t M a r e k sd i s e a s ev i r u s[J].P o u l t r y S c i e n c e,2020,99(4):1939-1945.[26] D E N G Q,S H I M,L I Q,e t a l.A n a l y s i s o f t h ee v o l u t i o n a n d t r a n s m i s s i o n d y n a m i c s of t h e f i e l dM D Vi nC h i n ad u r i n g t h e y e a r s1995-2020,i n d i c a t i n g t h ee m e r g e n c eo fa u n i q u e c l u s t e r w i t h t h e m o l e c u l a rc h a r a c t e r i s t i c s o f v v+M D Vt h a t h a s b e c o m e e nde m i ci nS o u t h e r nC h i n a[J].T r a n s b o u n d a r y a n dE m e r g i n gD i s e a s e s,2021,68(6):3574-3587.[27] S H IM Y,L IM,WA N G W W,e t a l.T h ee m e r g e n c eo f av v+M D V c a nb r e a kt h r o u g ht h e p r o t e c t i o n sp r o v i d e db y t h ec u r r e n tv a c c i n e s[J].V i r u s e s,2020,12(9):1048.[28] L I U J L,T E N G M,Z H E N G L P,e t a l.E m e r g i n gh y p e r v i r u l e n t M a r e k s d i s e a s e v i r u s v a r i a n t ss i g n i f i c a n t l y o v e r c o m e p r o t e c t i o n c o n f e r r e d b yc o m m e r c i a l v a c c i n e s[J].V i r u s e s,2023,15(7):1434.(责任编辑董晓云)6721。
