食品中合成着色剂的测定
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食品中合成着色剂的测定
食品安全检验手册33~35页
1.原理
食品中合成着色剂用聚酰胺粉吸附或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色
谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性与峰面积定量。
2.试剂
（1）正己烷 分析纯。
（2）盐酸 分析纯。
（3）甲醇 经滤膜（0.45µm）过滤。
（4）乙酸。
（5）聚酰胺粉（尼龙6） 80目。
（6）乙酸铵溶液（0.02mol/L） 称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，混匀后，
经滤膜（0.45µm）过滤。
（7）氨水 量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
（8）甲醇+甲酸（6+4）溶液 量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
（9）柠檬酸溶液 称取20g柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至100mL，溶解混匀。
（10）无水乙醇+氨水+水（7+2+1）溶液 量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，
混匀。
（11）三正辛胺正丁醇溶液（5%） 量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
（12）饱和硫酸钠溶液。
（13）pH6的水 水加柠檬酸溶液调pH值到6。
（14）合成着色剂标准溶液 准确称取柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓
红、诱惑红、亮蓝、靛蓝各0.1000g，置于100mL容量瓶中，加pH4水至刻度。此溶液含
着色剂1mg/mL。
（15）合成着色剂标准使用液：临用时取上述溶液2.0mL，加水稀释至100.0Ml，摇匀，
配成每毫升相当20.0µg的合成着色剂。然后稀释成2、4、6、8、10µg/ mL系列标准溶液。
3.仪器
高效液相色谱仪，带紫外检测器，500nm波长。
4.测定方法
（1）样品处理
①橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中。含二氧化
碳样品加热驱除二氧化碳。
②配制酒类：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，水浴加热驱除
乙醇、加水30mL，温热溶解，若样品溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到4左右。
③硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00～10.00g，放入100mL小烧杯中，加水30mL，
温热溶解，若样品溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到4左右。
④巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.00g～10.00g，放入100mL小烧杯中，用水反复洗
涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。
（2）色素提取
①聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH值到4，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加水
少许调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，倒入放有少许海沙的层析管中，用60℃pH=4
的水洗涤3～5次（含赤藓红的样品用液-液分配法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-
水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解析液，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜（0.45µm）过滤，取10µL进行HPLC分析。
②液-液分配法（适用于含赤藓红的样品）
将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺丁醇溶液（5%）10～20mL，
振摇提取，分取有机相，重复提取，直至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2
次，每次10mL，分取有机相，于蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL,转移至分液漏斗中，加60mL
正己烷，混匀，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用
正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜
（0.45µm）过滤，吸取10µL进行HPLC分析。
（3）高效液相色谱参考条件
①色谱柱：GreceSmartC18，5µm 4.6mm×250mm。
②流动相：梯度洗脱：A液：0.02mol/L乙酸铵溶液;B液:甲醇 时间min 0 3 5 7 8 13 15 22
%B 12 15 40 46 80 90 12 12
③流速：1mL/min.
④检测波长：500nm。
（4）测定
取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定
性，外标峰面积法定量。
5.分析结果的表述
1000×∨×=mXρ （1-28）
式中 X—样品中着色剂的含量，mg/g；
ρ—样品中着色剂的含量，µg/mL；
m—样品质量，g；
v—样品稀释总体积,mL；
6.其他
本方法能分离9种食用着色剂，依次排列（柠檬黄，新红，苋菜红，靛蓝，胭脂红，日
落黄，诱惑红，亮蓝，赤藓红）。
图1-23 9种食用着色剂色谱分离图
出峰顺序：1. 柠檬黄 Rt7.62；2. 新红Rt7.85;3. 苋菜红Rt8.45;4. 靛蓝Rt8.76
5. 胭脂红 Rt8.93;6. 日落黄Rt9.70 ;7.诱惑红Rt10.86;8. 亮蓝 Rt11.35;9. 赤藓红 Rt12.20.
